Xpert Manual

 

Xpert ® MTB / RIF GXMTB / RIF-US-10

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m   f  o   r r    i   n  f   a   r   a   p     o    l   ó   S

Diagnóstico in vitro de dispositivos médicos IVD

301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

 

De marcas, patentes y declaraciones de copyright Cepheid ®, el logo Cepheid, GeneXpert  ® y Xpert ® y Xpertise ™ s on marcas comerciales de Cepheid. ventanas ® es una marca comercial de Microsoft Corporation. Neo-Sinefrina ® es una marca registrada de Bayer HealthCare LLC. BACTEC MGIT ™ y ™ son marcas comerciales de Becton Dickinson. INTROL ™ es una marca c omercial de Controles de Calidad de Maine Molecular, Inc.

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La compra de este producto incluye una licencia limitada, no son transferibles bajo las Patentes de Estados Unidos Nº 6.787.338.; 6.503.720 y 6,303,305, y las reivindicaciones 9, 10, 11, 56, 76, 80 y 107 de la Patente de Estados Unidos número 6.174.670, y las reclamacione reclamacioness correspondientes en las patentes y solicitudes de patentes fuera de los Estados Unidos, propiedad de la Universidad de Utah y la Fundación de Investigación de la licencia a Idaho Tecnología , Inc., para uso exclusivo de esta cantidad de producto y sólo en un instrumento comercializado, distribuido, vendido, alquilar o transferir el uso de una marca Cepheid. Ningún derecho se transmite, de forma expresa, por implicación,

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m   f  o   r r    i   n  f   a   r   a   p     o    l   S  ó

alegación, en virtud de otras reivindicaciones de la patente o patentes propiedad de la Universidad de Utah Fundación de Investigación o Idaho Technology, Inc. Sin perjuicio de lo anterior, ningún derecho, título o licencia se otorgan en el presente documento con respecto a la los usos que son propiedad de Idaho Technology o la Universidad de Utah Fundación de Investigació ón n de la fluorescencia de doble cadena tintes de unión de ácidos nucleicos, incluyendo específicamente, pero no limitado a, SYBR Green I, LCGreen ® I, o LCGreen ® Más.

LA COMPRA DE ESTE PRODUC PRODUCTO TO transmite al comprador el derecho no transferible para utilizar de acuerdo con el texto del envase. Ningún otro derecho derecho se transmiten expresamente, expresamente, tácitamente o por preclusión. Además, no se DERECHOS comerciales se reunió con la compra de este PRODU PRODUCTO. CTO.

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Xpert ® MTB / RIF Ensayo

Sólo para uso diagnóstico in vitro.

Sólo Rx 1. Nombre de propiedad exclusiva

Xpert ® MTB / RIF

2. Nombre común o vulgar Xpert MTB / RIF Ensayo

3.

uso previsto

  a   d    l  a   o   r   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    ó  n    i   a  c   m   f  o   r r    i   n  f   a   r   a   p   o     l 4. Resumen   S  ó y explicación

el Xpert ® MTB / RIF ensayo, realizado en el GeneXpert ® Instrument Systems, es una reacción cualitativa, anidada en tiempo real cadena de la polimerasa (PCR) in vitro  prueba  prueba de diagnóstico para la detección de Tuberculosis micobacteriana  ADN  ADN compleja en el esputo en bruto o sedimento de esputo concentrado preparado a partir de esputo inducido o expectorado. En las muestras donde Tuberculosis micobacteriana 

compleja (MTB-complejo) ejo) se detecta, el MTB / RIF ensayo Xpert también detecta las mutaciones de la resistencia rifampicina-aso rifampicina-asociados ciados de la

rpoB  gene.  gene.

El MTB / RIF ensayo Xpert está destinado para su uso con muestras de pacientes en los que existe la sospecha clínica de la tuberculosis (TB) y que no han recibido tratamiento

antituberculoso,, o menos de tres días de tratamiento. Esta prueba está diseñada como una ayuda en el diagnóstico de tuberculosis pulmonar cuando se utiliza junto con los antituberculoso hallazgos clínicos y de laboratorio. Un resultado Xpert MTB / RIF ensayo de "NO MTB DETECTADO" de una o dos muestras de esputo es altamente predictivo de la ausencia de  M.  bacilos compleja serie de frotis de esputo ácido-alcohol resistentes fluorescentes de pacientes con sospecha de tuberculosis pulmonar activa y se puede utilizar tuberculosis  bacilos como una ayuda en la decisión de si el aislamiento continuo infecció infección n por el aire (AII) se justifica en pacientes con sospecha de tuberculosis pulmonar. La determinación de si la prueba de una o dos muestras de esputo es adecuada para las decisiones relativas a la eliminación de la AII debe basarse en las circunstancias clínicas específicas y directrices institucionales. Las decisiones clínicas en relación con la necesidad de mantener la AII siempre debe ocurrir en conjunto con otras evaluaciones clínicas y de laboratorio y los

resultados Xpert MTB / RIF ensayo no debe ser la única base para las prácticas de control de infecciones. El MTB / RIF ensayo Xpert siempre debe ser utilizado en conjunto con cultivo de micobacterias para controlar el riesgo de falsos negativos y recuperar los organismos cuando MTB-complejo está presente para su posterior caracterización y pruebas

de sensibilidad a los medicamentos. Sin embargo, las decisiones relativas a la extracción de los pacientes de AII no necesitan esperar los resultados del cultivo. muestras de esputo para cultivo de TB, la microscopía de frotis A FB, y la prueba Xpert MTB / RIF ensayo deben seguir las recomendaciones de los CDC con respecto a los métodos de

recolección y el marco de tiempo entre la recolección de la muestra.

El MTB / RIF ensayo Xpert no proporciona una confirmación de susceptibilidad rifampicina ya que pueden existir mecanismos de r esistencia a la rifampicina aparte de los detectados por este dispositivo, que puede estar asociada con la falta de respuesta clínica al tratamiento. Las m uestras que tienen ambas mutaciones del ADN y la rifampicina resistencia asociados MTB-complejo de la rpoB  gen  gen detectado por el ensayo de MTB Xpert / RIF debe haber resultados confirmados por un l aboratorio de referencia. Si la presencia de rifampicina-resistencia a las mutaciones del asociado  rpoB  gen  gen se confirma, las muestras también deben ser examinados para la presencia de mutaciones genéticas asociadas con la resistencia a otros medicamentos.

El MTB / RIF ensayo Xpert sólo debe realizarse en laboratorios que siguen las prácticas de seguridad de acuerdo con el CDC / NIH publicación Bioseguridad

en laboratorios microbiológicos y biomédicos y las regulaciones estatales o locales aplicables.

A nivel mundial, alrededor de 2 mil millones de personas están infectadas con el MTB.  1 En 2010, 8,8 millones de personas desarrollan la enfermedad activa y 1,4 millones de personas perdieron la vida a la enfermedad. 2 Había 9.951 nuevos casos de tuberculosis reportados en los Estados Unidos en 2012 (una tasa de 3,2 casos por 100.000). En 2011, 536 muertes en Estados Unidos se atribuyeron a las infecciones de tuberculosis.  3,4

Los regímenes de tratamiento estándar para la tuberculosis implican la administración prolongada de fármacos múltiples y suelen ser muy eficaz. Sin embargo, MTB-complejo de cepas que son resistentes a uno o más de los fármacos de primera l ínea requieren un tratamiento individualizado. resistencia rifampicina es a menudo una indicación de la resistencia a múltiples fármacos a la tuberculosis (MDR TB), que se define como la resistencia a al menos rifampicina (RIF) e isoniazida (INH). En l os Estados Unidos la resistencia RIF general es de aproximadamente 1,8%, con aproximadamente el 90% de estas cepas resistentes a al menos RIF e INH. 5

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

1

 

Xpert ® MTB / RIF

La tuberculosis pulmonar activa es una enfermedad altamente infecciosa en el aire. Todos los pacientes en centros de salud con sospecha de TB deben ser mantenidos en aislamiento infección por el aire (AII) de acuerdo con las directrices de control de infecciones recomendadas.  6 La prueba de una o dos muestras de esputo por el MTB Ensayo Xpert / RIF puede servir como una alternativa a los esputos manchados ácido-alcohol resistentes en serie como una ayuda en la decisión de si la continuación de las precauciones de control de infecciones están garantizados en pacientes con sospecha de tuberculosis pulmonar.

muestras de esputo que son AFB cultivo de TB con baciloscopia negativa, pero posteriormente positivas tienen menores cargas organismo MTB-compleja que las muestras que son AFB frotis positivo. Debido a la mayor sensibilidad del ensayo MTB Xpert / RIF para la detección de MTB-compleja que la de la microscopía de ácido-rápido, MTB-complejo puede ser detectado por el MTB Ensayo Xpert / RIF en muestras negativas AFB frotis.

Los pacientes con infección por el VIH y la tuberculosis pulmonar se sabe que tienen menores cargas organismo de MTB-compleja en sus muestras de esputo en relación con los pacientes no infectados por el VIH, a pesar de progresión de la enfermedad más rápido si no se trata. Como consecuencia de ello, las muestras de esputo de los pacientes infectados por VIH con tuberculosis pulmonar tienden a ser AFB negativa a la tinción con más frecuencia que los pacientes no infectados por VIH. En general las tasas de detección de MTB-complejo con el MTB Xpert Ensayo / RIF puede ser menor en entornos con un alto porcentaje de pacientes infectados por el VIH debido a que estos pacientes son más propensos a producir muestras con baciloscopia negativa AFB con cargas bajas organismo.

5. Principio del Procedimiento

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m   f  o   r r    i   n  f   a   r   a   p     o    l   ó   S

El MTB / RIF ensayo Xpert es una automatizado in vitro   prueba prueba de diagnóstico anidadas utilizando PCR en tiempo real para la detección cualitativa de la resistencia de MTB-compleja y RIF. Los cebadores en esta prueba amplifican una porción de la  rpoB  gen  gen que contiene la región del núcleo par 81 de base. Las sondas están diseñadas para diferenciar entre la secuencia

y las mutaciones de tipo salvaje conservadas en la región del núcleo que están asociados con la resistencia a RIF. Este ensayo se puede realizar en Cepheid GeneXpert  ® Sistemas de

instrumentos. GeneXpert Instrument Systems automatizar e integrar la purificación de la muestra, la amplificación de ácido nucleico, y la detección de la secuencia diana en tiempo real usando la transcriptasa inversa PCR (RT-PCR) y los ensayos de PCR en tiempo real. El sistema está compuesto de un instrumento, un ordenador personal y el software precargado para la realización de pruebas y la visualización de los resultados. Los sistemas requieren el uso de cartuchos de un solo uso GeneXpert desechables que contienen los reactivos de RT-PCR y PCR y alojan los procesos de RT-PCR y PCR. Debido a que los cartuchos son autónomos, la contaminación cruzada entre las muestras se reduce al mínimo. Para una descripción completa de los sistemas, consulte la apropiada Manual del Operador del Sistema GeneXpert Dx o GeneXpert Infinito Manual del Operador del Sistema.

El MTB / RIF Ensayo Xpert incluye reactivos para la detección de la resistencia MTB-complejo y RIF a partir de muestras de esputo primas y en los sedimentos de esputo concentradas. Un control de procesamiento de la muestra (SPC) y una comprobación de sonda de control (PCC) también se incluyen en el cartucho. El SPC está presente para controlar para el procesamiento adecuado de las bacterias diana y para controlar la presencia de los inhibidores en la reacción de PCR. La sonda Check Control (PCC) verifica la rehidratación del reactivo,

de llenado tubo de PCR en el cartucho, la sonda integridad, y teñir la estabilidad.

El MTB / RIF ensayo detecta simultáneamente Xpert MTB-complejo de la resistencia y RIF mediante la amplificación de una secuencia específica de MTB-complejo de la rpoB  gen,  gen,

que se sondeó con cinco balizas moleculares (sondas A - E) para las mutaciones dentro de la región determinante de la resistencia a rifampicina (RRDR). Cada baliza molecular se marca con un fluoróforo diferente. El umbral de validez máximo de ciclo (Ct) de 39,0 para las sondas A, B y C y 36,0 para las sondas D y E se fijan para el análisis de datos de MTB / RIF.

•

MTB DETECTADO se DETECTADO se informa cuando al menos dos sondas resultan en los valores de Ct dentro del rango válido y un min delta Ct (la diferencia Ct más pequeño entre cualquier par de sondas) de menos de 2,0.

•

La resistencia del Rif no se detecta se detecta se informa si el delta Ct máximo (la diferencia entre la sonda Ct adelantadas y más) es ≤4.0.

•

Resistencia Rif DETECTADO se DETECTADO se informa si el delta Ct máximo es> 4,0.

•

Resistencia Rif INDETERMINADO se INDETERMINADO se informa cuando se cumplen las dos condiciones siguientes siguientes::

1. el valor Ct de cualquier sonda excede el máximo válido Ct (o es cero, es decir, sin cruce de umbral); y

2. el primer rpoB Ct valor es mayor que:

[(Ct máximo válido de la sonda en la condición 1) - (delta Ct máximo de corte de 4.0)].

•

MTB NO DETECTADO se DETECTADO se informa cuando hay sólo una o ninguna sonda positiva.

Todos los ajustes de ensayo se incluyen como cálculos automáticos en el protocolo Xpert MTB / RIF y no pueden ser modificados por el usuario.

2

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

 

 XXpert pert  ® MTB / RIF

6. Los reactivos e instrumentos 6.1 Materiales suministrados suministrados El kit Xpert MTB / RIF ensayo contiene suficientes reactivos para procesar 10 muestras o muestras de control de calidad. El kit contiene lo siguiente:

Cartuchos / RIF ensayo Xpert MTB con Tubos de reacción integrados

•

•

1 del talón (liofilizada) • polimerasa

•

dN dNTP TP ((tr trif ifos osfa fato toss de de deso soxi xinu nucl cleó eósi sido do))

•

Sonda

•

BSA (albúmina de suero bovino)

Ta Taló lón n 2 (lio (liofi fililiza zada da)) •

10 2 de cada uno por cartucho

2 de cada uno por cartucho

cebadores

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S •

•

sondas

•

BSA (albúmina de suero bovino)

3 del talón (liofilizada)

•

1 por cartucho

Control de procesamiento de la muestra (SPC) ~ 6000 no infecciosa B. globigii esporas

•

•

Reactivo 1

•

tampón Tris

•

Los surfactantes

•

EDT EDTA A (áci (ácido do eti etile lend ndia iami mino note tetr traa aacé céti tico co))

Reactivo 2

•

tampón Tris

•

Los surfactantes

•

EDT EDTA A (áci (ácido do eti etile lend ndia iami mino note tetr traa aacé céti tico co))

Reactivo Muestra

•

Hidróxido de sodio

•

iso sopr pro opa pano noll

4 ml por cartucho

4 ml por cartucho

8 ml por botella

Pipetas de transferencia desechables

12

discos compactos

1 por kit

• •

Archivo ensayo de definición (ADF) - ADF para su uso tanto con el GeneXpert Dx e Infinity Sistemas

•

Insertar paquete

Instruccioness para importar ADF en el software GX Instruccione

Nota Reactivo muestra (SR) puede ser incoloro a amarillo a ámbar. El color puede intensificarse con el tiempo, pero el color no tiene ningún efecto sobre el rendimiento. www.cepheidinternational.com ional.com APOYO lengüeta. Nota Hojas de Datos de Seguridad (FDS) están disponibles en www.cepheid.com o bajo la www.cepheidinternat

origen ende lossuero Estados Unidos. Sinen proteínas dedentro rumiantes o deproducto otras proteínas animales se alimentaron a los animales; losde animales bovino (BSA) las perlas de este fue producido y fabricado exclusivamente a partir plasmapasaron bovino las pruebas ante mortem y post. Durante el Nota La albúmina procesamiento, procesamien to, no había commingling del material con otros materiales de origen animal.

Nota Las pipetas de transferencia tienen una sola marca que representa el volumen mínimo de la muestra necesario para transferir el cartucho de GeneXpert. Use solamente para este propósito. Todas las demás pipetas deben ser proporcionados por el laboratorio.

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Xpert ® MTB / RIF

6.2 Almacenamiento y manipulación + 28 + 2+ 2

+ 45 +2

•

Almacenar el Xpert MTB / RIF cartuchos de ensayo y los reactivos a 2 - 28 ° C.

•

No utilizar los reactivos o cartuchos que han superado la fecha de caducidad.

•

El cartucho es estable hasta 6 semanas a 2-45 ° C, después de abrir la bolsa. No abra un cartucho hasta que esté listo para probar.

•

Si se utiliza un instrumento GeneXpert GeneXpert Dx, iniciar la prueba dentro de las cuatro horas de la adición de la muestra Muestra tratadas con reactivo al cartucho.

•

Si se utiliza un sistema GeneXpert Infinity, asegúrese de comenzar la prueba y poner el cartucho en el transportador dentro de los 30 minutos después de añadir la muestra Muestra tratadas con reactivo al cartucho. Restante vida útil es rastreado por el sistema por el software Xpertise de manera que las pruebas se practican antes de la hora de caducidad de cuatro a bordo.

•

No utilice los reactivos que se han vuelto turbia o descolorida.

6.3 Materiales necesarios pero no suministrados

•

Instrument System GeneXpert (número de catálogo varía según la configuración): 6 colores instrumento GeneXpert, ordenador con patentada Versión de software GeneXpert 4.3 o superior, escáner superior, escáner de código de barras, y el manual del operador.

•

Impresora: Si se requiere una impresora, póngase en contacto con Cepheid El soporte técnico para arreglar la compra de una impresora recomendada.

•

A prueba de fugas,, contenedores de recogida de muestras estériles con tapón de rosca

•

Guantes desechables, protección ocular, batas de laboratorio, y las etiquetas o marcador permanente

•

Estériles, pipetas de un solo uso con barrera de extremo seco enchufes para el procesamiento de muestras

•

Minutero

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a 7. Advertencias y precauciones   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S

6.4 Materiales disponibles pero no suministrados

MMQCI (Controles de Calidad de Maine Molecular, Inc.) INTROL ™ de control externo Run (# 04 TBNEG-catálogo) como control negativo, y MMQCI INTROL ™ arranque externo Controles (catálogo # TBWT-04 y nº de catálogo) como TBMDR1-04 RIF susceptibles y resistentes RIF controles positivos.

•

Tratar todas las muestras biológicas, incluyendo los cartuchos usados, como si f ueran capaces de transmitir agentes infecciosos. Porque a menudo es imposible saber qué muestras pueden ser infecciosas, todas las muestras biológicas deben ser tratados con precauciones estándar. Directrices para la manipulación de muestras están disponibles en los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades 7 y el (ex Comité Nacional de Normas de Laboratorio Clínico) Clinical and Laboratory Standards Institute. 8

•

Use guantes protectores desechables, desechables, batas de laboratorio, y protección para los ojos al manipular muestras y reactivos. Lávese bien las manos después de manipular las muestras y

los reactivos de la prueba.

•

Siga los procedimientos de seguridad de su institución para trabajar con productos químicos y manejo de muestras biológicas.

•

Preparación de los sedimentos de esputo digeridos, descontaminados y se concentró y Xpert MTB / RIF procedimientos deben realizarse mediante Bioseguridad Nivel 2 prácticas. 9

•

Utilizar sólo para la detección de los miembros de la M. tuberculosis   complejos complejos utilizando sedimentos prepararon siguiendo los procedimientos NALC-NaOH o NaOH recomendados por los

Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC). 10 Esta prueba sólo se puede utilizar con muestras de esputo en bruto o sedimentos concentrados preparados a partir de

muestras de esputo inducido o expectorado.

•

Al procesar más de una muestra a la vez, abierto solo cartucho; añadir la muestra de muestra tratadas con reactivo y cerrar el cartucho antes de procesar la

siguiente muestra. Cambiar los guantes entre muestras.

2

•

No sustituya Xpert MTB / RIF reactivos de ensayo con otros reactivos.

•

No abra la tapa del cartucho Xpert MTB / RIF ensayo excepto cuando se añada la muestra tratada con el reactivo de la muestra.

•

No utilice un cartucho si aparece mojada o si la junta de la tapa parece haberse roto.

•

No utilice un cartucho que se ha caído o se ha sacudido.

•

No utilice un cartucho que tiene un t ubo de reacción dañado.

•

Cada cartucho de un solo uso Xpert MTB / RIF ensayo se usa para procesar una prueba. No vuelva a utilizar los cartuchos usados.

•

Consulte al personal de la basura ambientales de su institución en relación con la disposición adecuada de los cartuchos usados y los r eactivos no utilizados. Este material puede contener Recovery Act (RCRA) y Conservación de Recursos federales EPA residuos peligrosos que requieren eliminación específica. Comprobar el estado y regulacione regulacioness locales, ya que pueden diferir de las regulaciones federales de desecho. Las instituciones deben consultar los requisitos de eliminación de residuos peligrosos país.

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 XXpert pert  ® MTB / RIF

•

Reactivo muestra contiene hidróxido de sodio (pH> 12,5); (códigos internacionales peligro la seguridad química H303, H315, H318), que puede ser irritante para l os ojos y la piel y requiere protección para los ojos y la piel. reactivo de la muestra también contiene isopropanol (código de peligro de la seguridad química internacional H225), que es un líquido inflamable.

•

El / MTB coinfectados por el VIH población puede contener un mayor porcentaje de pacientes con muestras de frotis negativo con niveles de MTB-complejo por debajo del nivel de detección del ensayo.

•

, el estado y las regulaciones federales locales para la notificación de enfermedades de declaración obligatoria se actualizan continuamente y se compone de un número de organismos de vigilancia y las investigaciones de brotes.  11,12 Además, los Centros para el Control y Prevención de Enfermedades (CDC) recomiendan que cuando los agentes patógenos de enfermedades de notificación son detectados por un cultivo de prueba de diagnóstico independiente (TCID), el laboratorio debe facilitar la obtención de los materiales aislar o clínicos para su presentación al laboratorio de salud pública apropiada para ayudar del brote y las investigaciones epidemiológicas. Los laboratorios son responsables de seguir sus regulaciones estatales y locales y deben consultar a sus laboratorios de salud pública estatales y locales para las pautas de presentación de la muestra aislar y clínicos.

8. Recogida de muestras, transporte y almacenamiento 8.1 Colección Recoger el esputo en bruto o muestras de sedimento de esputo siguiendo los procedimientos estándar de su institución. El paciente debe estar sentado o de pie. Véase la Tabla 1 para

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S determinar el volumen de muestra de muestra adecuado. adecuado.

Tabla 1. Se requiere de muestras de volumen

El volumen total mínimo de prueba y prueba - Vea la Sección 11.2, Procedimiento Procedimiento Retest

El volumen mínimo para

Tipo de muestra

Una de las pruebas

sedimento de esputo esputo en bruto

0,5 ml

1 ml

1 ml

2 ml

8.2 Almacenamiento y Transporte +8 + 2+ 2

+8 + 2+ 2

sedimento de esputo: Tienda volvió a suspender los sedimentos a 2-8 ° C durante un máximo de siete días.

esputo prima: Las muestras de transportar y almacenar a 2-8 ° C antes de la transformación siempre que sea posible. Si es necesario, las muestras de esputo se pueden almacenar en un

máximo de 35 ° C durante un máximo de tres días y luego a 2-8 ° C durante otros siete días.

9. Procedimiento de Ensayo (s)

9.1 Las muestras de sedimento de esputo concentrados

Este procedimiento es para su uso con los sedimentos de esputo preparados a partir de muestras de esputo inducido o expectorado.

Nota Rechazar las muestras con partículas de alimentos obvios u otras partículas sólidas.

Requisitos de volumen:  El  El / RIF ensayo MTB requiere al menos 0,5 ml de sedimento de esputo se volvió a suspender después de la digestión, la descontaminación y concentración.  8

 2

Utilice el método de Kent y Kubica  y volver a suspender el sedimento en una mM de fosfato / H 67  tampón O. Después de la resuspensión, mantener al menos 0,5 ml del sedimento se volvió a suspender para el Ensayo de MTB Xpert / RIF.

1. Use guantes desechables de protección. 2.

Etiqueta de cada cartucho de Xpert MTB / RIF ensayo junto con la identific ación de la muestra.

Nota Escribir en los lados del cartucho o pegue una etiqueta de identificación. No ponga la etiqueta de la tapa del cartucho o cubrir el código de barras existente sobre el cartucho. 3.

Transferencia de al menos 0,5 ml del sedimento resuspendido total de a un tubo cónico, con tapón de rosca para el MTB Ensayo Xpert / RIF utilizando una pipeta de transferencia. Alternativamente, Alternativamente, todo el sedimento se puede procesar en el tubo inicial.

+8 + 2+ 2

Nota Tienda volvió a suspender los sedimentos a 2-8 ° C durante un máximo de siete días.

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Xpert ® MTB / RIF

4. Usando una pipeta de transferencia, transferir 1,5 ml de reactivo de la muestra de 0,5 ml de sedimento resuspendido. Para grandes cantidades de sedimento, añadir el reactivo de muestra igual a tres veces el volumen del sedimento resuspendido. 5. Vuelva a tapar el tubo y agitar vigorosamente 10 a 20 veces o vórtice durante al menos 10 segundos.

Nota Un movimiento hacia atrás y hacia adelante es una sola sacudida. 6.

Incubar la muestra para un total de 15 minutos a 20-30 ° C.

7. Entre 5 y 10 minutos en el período de incubación, agite vigorosamente de 10 a 20 veces o vórtice durante al menos 10 segundos.

9.2 Las muestras de esputo primas

Nota Rechazar las muestras con partículas de alimentos obvios u otras partículas sólidas. 1. Use guantes desechables de protección. 2.

Etiqueta de cada cartucho de Xpert MTB / RIF ensayo junto con la identific ación de la muestra. Ver Figura Figu ra 1.

  a   d    l  a   o   r   t   n   o   c    i   a   a      p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    ó  n    i   a  c   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p   o     l   S  ó

Nota Escribir en los lados del cartucho o pegue una etiqueta de identificación. No ponga la etiqueta de la tapa del cartucho o cubrir el código de barras existente sobre el cartucho.

Figura 1. La escritura en el cartucho con un marcador permanente

3. abrir con cuidado la tapa del recipiente de recogida de esputos. Vea la Figura 2.

Figura 2. La apertura del contenedor de muestras

4.

Verter o una pipeta (pipeta no incluido) aproximadamente 2 veces el volumen del reactivo de la muestra en el esputo (2: 1 dilución, el reactivo de l a muestra: esputo). Tenga cuidado

de no permitir que el Reactivo de ejemplo para tocar la piel desnuda. Vea la Figura 3.

6

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 XXpert pert  ® MTB / RIF

Ejemplo 1 8 ml de reactivo de la muestra; 4 ml de esputo

 

Ejemplo 2 2 ml de reactivo de la muestra; 1 ml de esputo Nota: Desechar el reactivo

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S

sobrante de la muestra y la botella en un contenedor para desechos

3 ml línea 1

químicos.

ml de esputo

Figura 3. Ejemplos de 2: 1 diluciones

5. Vuelva a colocar y asegurar la tapa. 6.

Agitar enérgicamente 10 a 20 veces o vortex durante al menos 10 segundos.

Nota Un movimiento hacia atrás y hacia adelante es una sola sacudida. 7.

Incubar la muestra para un total de 15 minutos a 20-30 ° C.

8.

Ser entre 5 y en el período de incubación de 10 minutos, agitar vigorosamente 10 a 20 veces o vórtice durante al menos 10 segundos.

9.3 Preparación del cartucho

Si se utiliza un instrumento GeneXpert Dx, iniciar la prueba dentro de las cuatro horas de la adición de la muestra Muestra tratadas con reactivo al cartucho. Si se utiliza un sistema GeneXpert Infinity, asegúrese de comenzar la prueba y poner el cartucho en el transportador dentro de los 30 minutos después de añadir la

Importante

muestra Muestra tratadas con reactivo al cartucho. Restante vida útil es rastreado por el sistema por el software Xpertise de manera que las pruebas se practican antes de los cuatro situ hora de caducidad bordo.

Nota Al procesar más de una muestra a la vez, abierto solo cartucho, añadir la muestra Muestra tratadas con reactivo y cerrar el cartucho antes de pasar a la siguiente muestra. Cambiar los guantes entre muestras.

Para añadir la muestra y los reactivos en el cartucho:

1. Abra la tapa del cartucho, y luego abrir el recipiente de la muestra.

2. El uso de l a pipeta de transferencia previsto, aspirar la muestra licuada cerca de la línea de la pipeta. Vea la Figura 4. Si hay un volumen volumen de  de muestr a insuficiente, no proceda con la prueba.

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

7

 

Xpert ® MTB / RIF

Figura 4. aspiración a la línea de la pipeta 3. Dispensación de la muestra lentamente para minimizar el riesgo de formación de aerosol, transferir la muestra de muestra tratadas con reactivo en la cámara de muestra del cartucho Xpert MTB / RIF. Ver Figura 5.

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S Figura 5. Muestra de dispensación descontaminado licuado en la cámara de muestra del cartucho

4. Cierre la tapa del cartucho con firmeza. Restante de la muestra tratada con el reactivo de la muestra puede conservarse durante un máximo de cuatro horas a 2-8 ºC en caso de repetición de pruebas se requiere.

9.4 A partir de la Prueba

Importante Antes de comenzar la prueba, asegúrese de que el sistema está funcionando Versión GeneXpert Software 4.3 o superior y que el archivo de definición de ensayo Xpert MTB / RIF se importa en el software. En esta sección se enumeran los pasos básicos para el funcionamiento de la prueba. Para obtener instrucciones detalladas, consulte la  Manual del Operador del Sistema GeneXpert Dx o el GeneXpert Infinito Manual del Operador del Sistema.

Nota Los pasos que debe seguir pueden ser diferentes si el administrador del sistema ha cambiado el flujo de trabajo predeterminado del sistema. 1.

Encienda el sistema de instrumentos GeneXpert.

•

Si se utiliza el instrumento GeneXpert Dx, primero encienda el instrumento GeneXpert Dx y vuelva a encender el ordenador. El software GeneXpert se iniciará automáticamente automáticamen te o puede requerir un doble clic en el icono de acceso directo del software GeneXpert Dx en el escritorio de Windows.

o

•

Si se utiliza el instrumento GeneXpert Infinity, encienda el instrumento. En el escritorio de Windows, haga doble clic en el icono de acceso directo del software

Xpertise.

2.

Iniciar sesión en el software softwar e de sistema de instrumento GeneXpert usando su nombre de usuario y contraseña.

3.

En la ventana Sistema GeneXpert, haga clic Crear prueba ( GeneXpert Dx) o Pedidos y Prueba fin ( Infinito).

4.

Escanear o escribir escribir el ID del paciente ente (opcional). (opcional). Si vas a escribir la identificación identificación del del paciente paciente,, asegúrese d de e que la ide identificación ntificación de dell paciente se h ha a escrito correctam correctamente. ente. La identificación del paciente se asocia con los resultados de la prueba y se muestra en la ventana de vista de resultados.

5.

Escanear o escribir escribir el ID de la mu muestra. estra. Si escribe el ID de la muestra muestra,, asegúrese de que el ID de la muestra se h ha a escrito correctame correctamente. nte. El ID de la m muestra uestra se asocia con los resultados de la prueba y se muestra en la ventana de resultados y todos los informes aparece el cuadro de diálogo del cartucho de escaneo.

8

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

 

 XXpert pert  ® MTB / RIF

6.

Escanear el código de barras en el cartucho Xpert MTB / RIF ensayo. Aparece la ventana Crear prueba. Utilizando la información del código de barras, el software rellena las casillas de los siguientes campos: Seleccionar ensayo, Reactivo ID de lote, cartucho de SN, y fecha de vencimiento.

Nota Si el código de barras en el cartucho Xpert MTB / RIF ensayo no busque, a continuación, repita la prueba con un nuevo cartucho. 7. Haga clic en Iniciar la prueba ( GeneXpert ( GeneXpert Dx) o Enviar ( Infinito). ( Infinito). Introduzca su contraseña si así lo solicita. 8.

Para el Sistema de Infinity GeneXpert, coloque el cartucho en la cinta transportadora. El cartucho se carga automáticamente, la prueba se ejecutará y el cartucho usado se coloca en el contenedor de residuos.

o Para el Instrumento GeneXpert Dx: A. Abra la puerta del módulo de instrumentos con la luz verde parpadeante y cargar el cartucho. SEGUNDO. Cierre la puerta. La prueba se inicia y la luz parpadeante verde cambia a una luz verde fija. Una vez finalizada la prueba, la luz se apaga.

C. Esperar hasta que el sistema libera la cerradura de la puerta antes de abrir la puerta del módulo y retirar el cartucho.

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S RE.

Los cartuchos usados deben ser desechados de los contened contenedores ores de residuos de muestras adecuadas de acuerdo a las prácticas estándar de la institución.

9.5 Visualización y resultados de impresión

En esta sección se enumeran los pasos básicos para visualizar e imprimir los resultados. Para obtener instrucciones más detalladas sobre cómo ver e imprimir los resultados, ver el Manual del

Operador del Sistema GeneXpert Dx o el GeneXpert Infinito Manual del Operador del Sistema.

1. Haga clic en el Ver resultados icono para ver los resultados.

2. Al término de la prueba en aproximadamente dos horas, haga clic en el Informe Informe botón  botón de la pantalla Ver resultados para ver y / o generar un archivo de informe pdf.

10.

Control de calidad

Cada prueba incluye un control de procesamiento de la muestra (SPC) y la comprobación de sonda de control (PCC).

Control de procesamiento de la muestra (SPC) - Asegura que la muestra se procesó correctamente. El SPC contiene esporas no infecciosas en forma de una torta de esporas en seco que se incluye en cada cartucho para verificar el procesamiento adecuado de MTB. El SPC comprueba que se han producido las condiciones para la lisis de MTB si los organismos están presentes y verifica que el procesamient procesamiento o de la muestra es adecuada. Además, este control detecta la inhibición del espécimen asociados del tiempo real las reacciones de PCR y actúa como un control positivo interno.

El SPC debe ser positivo en una muestra de MTB-negativo y puede ser negativo o positivo en una muestra positiva. El S PC pasa si cumple con los criterios de aceptación

validados. El resultado de la prueba será  Inválido  Si el SPC no se detecta en una muestra de MTB-negativo.

Comprobación de sonda de control (PCC, CC1, CC2) - Antes del inicio de la primera y segunda reacciones del ensayo de PCR anidada, el sistema de instrumentos GeneXpert

mide la señal de fluorescencia de las sondas QC1 y QC2 (reacción 1) y la rpoB  y  y sondas SPC (reacción 2) para monitorear la rehidratación del grano, el llenado de tubos de r eacción,

la sonda integridad y la estabilidad del tinte. El PCC pasa si cumple con los criterios de aceptación asignadas.

Los controles externos

MMQCI (Controles de Calidad de Maine Molecular, Inc.) INTROL ™ Control de Marcha externa (catálogo # TBNEG-04) como control negativo y MMQCI INTROL ™ arranque externo Controles (catálogo # TBWT-04 y catálogo # TBMDR1-04) como RIF susceptibles y resistentes RIF controles positivos se pueden utilizar para el entrenamiento, pruebas de aptitud, y

control de calidad externo. Los controles externos deben ser utilizados de acuerdo con las ordenanzas locales, estatales y federales de los requisitos de las organizaciones acreditadas

'según sea el caso.

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

9

 

Xpert ® MTB / RIF

11.

Interpretación de resultados El sistema de instrumento GeneXpert genera los resultados de las señales fluorescentes medidas y algoritmos de cálculo incrustados. Los resultados se pueden ver en la ventana de vista de resultados. Vea la Figura 6, Figura 7, Figura 8 y Figura 9 para ejemplos espe cíficos, y ver  Tabla 2 para para u  una na lista de ttodos odos lo loss resultados posibles. resultados posibles.

Tabla 2. Xpert MTB / RIF ensayo Resultados e interpretaciones Resultado

Interpretación MTB detectado; Resistencia Rif

El objetivo de MTB se detecta dentro de la muestra:

DETECTADO

•

Una Una mutación m mut utac ació ión n en en el el rpoB gen ha sido detectado.

•

SPC: NA (no aplicable). Una señal de CCP no es necesario porque la amplificación MTB puede competir con este control.

•

Comprobación de sonda (CC1 y CC2): PASS. Todos los resultados de la comprobación

(Figura 6)

de la sonda pasan.

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S MTB detectado;

El objetivo de MTB se detecta dentro de la muestra:

La resistencia del Rif no se detecta

•

Un Una a mutación muta mutaci ción ón en el el el rpoB gen no se ha detectado.

•

SPC: NA (no aplicable). Una señal de CCP no es necesario porque la amplificación MTB puede competir con este control.

•

Comprobación de sonda (CC1 y CC2): PASS. Todos los resultados de la comprobación

(Figura 7)

de la sonda pasan.

MTB detectado;

El objetivo de MTB se detecta dentro de la muestra:

Resistencia Rif INDETERMINADO

•

Una mutación en el rpoB gen no se pudo determinar debido a la detección de señal insuficiente.

•

SPC: NA (no aplicable). Una señal de CCP no es necesario porque la amplificación MTB puede competir con este control.

•

Comprobación de sonda (CC1 y CC2): PASS. Todos los resultados de la comprobación

(Figura 8)

de la sonda pasan.

MTB NO DETECTADO

El objetivo MTB no se detecta dentro de la muestra.

(Figura 9)

•

SPC: PASS. El SPC se reunió con los criterios de aceptación.

•

Comprobación de sonda (CC1 y CC2): PASS. Todos los resultados de la comprobación de la sonda pasan.

NO VÁLIDO (  ( La Figura 10)

La presencia o ausencia de MTB no se puede determinar. El SPC no cumple con los criterios de aceptación, la muestra no se ha procesado correctamente, o PCR

fue inhibida.R   epita la prueba  . Vea la Sección 11.2, Procedimiento vuelva a probar.

•

MTB VÁLIDO: La presencia o ausencia de ADN de MTB no se puede determinar.

•

SPC: FALLO. El resultado objetivo de MTB es negativo, y el SPC Ct no está dentro del rango válido.

•

Comprobación de sonda (CC1 y CC2): PASS. Todos los resultados de la comprobación de la sonda pasan.

10

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 XXpert pert  ® MTB / RIF

Tabla 2. Xpert MTB / RIF resultados del ensayo e Interpretaciones (Continuación (Continuación))

Interpretación

Resultado

La presencia o ausencia de MTB no se puede determinar.

ERROR

Repita la prueba . prueba . Vea la Sección 11.2, 1 1.2, Procedimiento vuelva a probar.

•

MTB: Ningún resultado

•

SPC: Ningún resultado

•

Comprobación de sonda (CC1 y CC2): / FALLO. error de comprobación de sonda puede ser la fuente de error, pero otros errores, como el fallo de un componente del sistema, puede ocurrir incluso si pasa la verificación de sensores.

SIN RESULTADOS

La presencia o ausencia de MTB no se puede determinar. Secc ión 11.2, Procedimiento vuelva a probar. Repita la prueba . Vea la Sección RESULTADO NO indica que se recogieron datos insuficientes. Por ejemplo, el operador detiene una prueba que estaba en curso.

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    ó  n    i   a  c   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   S  ó •

MTB: Ningún resultado

•

SPC: Ningún resultado

•

Comprobación de sonda (CC1 y CC2): NA (no aplicable).

Figura 6. Un ejemplo de una MTB detectado; Resistencia Rif resultado detectado

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

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  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S Figura 7. Ejemplo de una MTB detectado; Resultado Resistencia Rif NO DETECTA DETECTADO DO

Figura 8. Un ejemplo de un MTB detectado; Resistencia Rif INDETERMINADO Resultado

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Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

 

 XXpert pert  ® MTB / RIF

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S Figura 9. Un ejemplo de un resultado MTB NO DETECTADO

Figura 10. Un ejemplo de un resultado no válido

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Xpert ® MTB / RIF

11.1 Razones para repetir la prueba Repita la prueba usando un cartucho nuevo, si se produce uno de los siguientes resultados de la prueba:

•

INVÁLIDO resultado Un INVÁLIDO  resultado indica que el SPC no. La muestra no se ha procesado correctamente, o PCR se inhibió.

•

Un ERROR ERROR resultado  resultado indica que el PCC (CC1 o CC2) ha fallado o se ha producido un fallo en el sistema, y el ensayo fue abortado. La causa de los errores son posiblemente debido al tubo de reacción se llena de forma inadecuada, se ha detectado un problema de integridad de la sonda de reactivo, se excedieron los límites de presión máxima, o un módulo GeneXpert fracasaron.

•

UN SIN RESULTADOS indica RESULTADOS indica que se recogieron datos insuficientes. Por ejemplo, el operador detiene una prueba que estaba en curso.

11.2 Procedimiento de reevaluación

Si ha reconstituido restos de sedimentos o esputo prima utilice siempre nuevo reactivo de muestra para tratar el esputo antes de empezar el ensayo. Vea la Sección 9.1, concentrados de esputo de sedimentos sedimentos muestras o la Sección 9.2, primas de esputo especímenes. Si usted tiene suficiente suficientess muestras tratadas con reactivo sobrante de la muestra mues tra y está dentro de las cuatro horas de preparación de la muestra, se puede utilizar el ejemplo de sobra para preparar y procesar un nuevo cartucho de inmediato en el instrumento GeneXpert.

Nota Si un utilizando un instrumento del infinito, la segunda prueba debe iniciarse en los módulos que se designan como módulos STAT reservados.

  a   d 12. Limitaciones   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S Cuando una nueva prueba, utilice siempre un cartucho nuevo. Vea la Sección Secc ión 9.3, Preparación del cartucho.

1.

El rendimiento de la MTB MTB Ensayo Xpert / RIF se e evaluó valuó usando esputos inducido o expectorado. Las pruebas de otras mue muestras stras clínicas (por ejem ejemplo, plo, sangre, líqu líquido ido cefalorraquídeo, aspirado gástrico, heces, tejidos, orina) no ha sido evaluada y puede alterar el rendimiento del ensayo.

2. Los sedimentos de esputo concentrados usados durante la evaluación del rendimiento del ensayo MTB Xpert / RIF se prepararon siguiendo los procedimientos NALC-NaOH o NaOH recomendados por los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC).  8 El uso de otros métodos de preparación de sedimentos puede alterar el rendimiento de la prueba.

3.

El MTB / RIF ensayo Xpert no está indicado para su uso con muestras de esputo de pacientes que están siendo tratados con fármacos antitubercul osos, ya sea para determinar la

curación bacteriológica o para monitorizar la respuesta al tratamiento.

4. Un resultado negativo no excluye la posibilidad de aislar MTB-complejo a partir de la muestra de esputo. El MTB / RIF Ensayo Xpert debe ser utilizado en conjunción con cultivo de micobacterias para controlar el riesgo de resultados negativos falsos y recuperar el organismo para una caracterización adicional y pruebas de sensibilidad.

5. Una prueba positiva no indica necesariamente la presencia de organismos viables. 6.

El MTB / RIF ensayo Xpert no diferencia entre las especies del complejo MTB-(es decir, M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. canetti, M. microti, M. caprae, M. pinnipedi, M. mungi,  y M. orygis). Además, la cultura también debe llevarse a cabo para determinar si las

micobacterias distintas de complejo tuberculosis (MOTT) está presente además de MTB-complejo.

7. Debido a la baja prevalencia de la tuberculosis resistente a la rifampicina en los Estados Unidos y las implicaciones de la resistencia a la rifampicina para el tratamiento, todas las cepas de MTB-complejo determinado determinado para ser resistente rifampicina por el MTB Xpert Ensayo / RIF debe tener la presencia de mutaciones asociadas a resistencia rifampicina del rpoB 

gen confirmado por un laboratorio de referencia. Las pruebas adicionales para determinar la presencia de mutaciones asociadas con la resistencia a otros fármacos para el

tratamiento de TB también debe ser realizada.

8. Debido a la detección de MTB-complejo depende del número de organismos presentes en la muestra, resultados precisos dependen de la correcta recogida de muestras, manipulación y almacenamiento. resultados erróneos de la prueba se pueden producir a partir de cobro indebido de muestras, el no seguir el procedimiento de recogida de muestra

recomendado, manipulación o problemas de almacenamiento, error técnico, confusión de muestras, o una concentración insuficiente del material de partida. cumplimiento cuidado de las instrucciones de este inserto es necesario para evitar resultados erróneos.

9.

10.

El rendimiento de la MTB Ensayo Xpert / RIF no ha sido evaluada con muestras de pacientes pediátricos.

La realización de la prueba Xpert MTB / RIF depende de la competencia del operador y la adhesión a los procedimientos de ensayo. errores en el procedimient o de ensayo pueden causar

resultados positivos falsos o negativos falsos. Todos los operadores de dispositivos deben tener una formación de dispositivo adecuado.

11. Un profesional capacitado debe interpretar los resultados del ensayo conjuntamente conjuntamente con el historial médico del paciente, los signos clí nicos y síntomas cuidado de la salud, y los resultados de otras pruebas de diagnóstico.

12. interferencia en el ensayo se puede observar en presencia de lidocaína (> / v 20% v), mucina (> 1,5% w / v), etambutol (> 5 mg / ml), guaifenesina (> 2,5 mg / ml), fenilefrina (> 25% v / v), o aceite de árbol de té (> 0.008% v / v).

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Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

 

 XXpert pert  ® MTB / RIF

13.

Los estudios demostraron que M. scrofulaceum  cuando  cuando se prueba a una concentración de 10  8 UFC / ml produjo un resultado falso positivo Xpert MTB / RIF ensayo.

13. Valores esperados de un Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado La probabilidad de que un resultado positivo es un verdadero positivo variará en función de la prevalencia de la tuberculosis en la población que está siendo probado y si la baciloscopia es positiva o negativa. En dos evaluaciones clínicos prospectivos multicéntricos de rendimiento Xpert MTB / RIF ensayo en sujetos en los Estados Unidos con sospecha de TB activa, la prevalencia global de la enfermedad confirmada por cultivo fue de 13,2%. De los sujetos con tuberculosis confirmada por cultivo, el 71,6% eran AFB frotis positivo.

13.1 Los valores predictivos de una Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado estima que los valores predictivos positivos y negativos hipotéticos de detección de MTB para diferentes tasas de prevalencia para la detección de MTB con el MTB / RIF ensayo Xpert se muestran en la Tabla 3. Estos cálculos se basan en la prevalencia hipoté hipotéticas ticas y la ssensibilidad ensibilidad y especificidad global (en comparación con la cultura) observaron en los estudios clínicos multicéntricos. multicéntricos. La sensibilidad del ensayo MTB Xpert / RIF para las muestras de frotis positivo AFB fue del 99,4% (479/482) y la sensibilid sensibilidad ad de las muestras con baciloscopia negativa AFB fue del 67,2% (135/201). especificid especificidad ad global del ensayo Xpert MTB / RIF fue del 98,7% (1355/1373). La prevalencia de MTB fue del 11,8% en el primer estudio prospectivo de Estados Unidos y el 14,2% en el segundo estudio prospectivo de Estados Unidos.

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S Tabla 3. Valores predictivos hipotéticos de una Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado vs MTB Cultura

Probabilidad de MTB Cultura

Probabilidad de MTB cultivo negativo

Entre positivo

Entre

Prevalencia de MTB cultivo positivo

Xpert MTB / RIF DETECTADO AFB Smear Pos.

Xpert MTB / RIF DETECTADO AFB Smear Neg.

Xpert MTB / RIF NO DETECTADO

1%

89.69%

13.67%

99,90%

2%

94,61%

24,24%

99,80%

3%

96.38%

32,65%

99,70%

4%

97.29%

39.51%

99.59%

5%

97,84%

45.20%

99.48%

10%

98.97%

63.52%

98.91%

11,8%

99,14%

67.71%

98.70%

14,2%

99.30%

72.18%

98.39%

20%

99.54%

79.67%

97.59%

40%

99.83%

91,27%

93.82%

50%

99,88%

94.00%

91.01%

13.2 Los valores predictivos basados en dos resultados Xpert MTB / RIF ensayo

estima que los valores predictivos positivos y negativos hipotéticos de detección de MTB para diferentes tasas de prevalencia para la detección de MTB utilizando dos Xpert MTB / RIF Los resultados del ensayo se muestran en la Tabla 4. Estos cálculos se basan en  la prevale prevalencia ncia hipotética y la sensibilidad y especificidad global (en comparación con la

cultura) observado en el segundo de los dos estudios multicéntricos, donde se realizaron dos Xpert MTB / RIF ensayos sobre cada tema. La sensibilidad de dos Xpert MTB Ensayo /

RIF Resultados para especímenes de frotis positivo AFB fue del 100% (133/133) y la sensibilidad para las muestras con baciloscopia negativa AFB fue del 69,4% (59/85). La especificidad total de dos resultados Xpert MTB / RIF ensayo fue de 97,9% (746/762).

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

15

 

Xpert ® MTB / RIF

Tabla 4. Los valores predictivos hipotéticos de dos Xpert MTB Ensayo / RIF Resultados vs MTB Cultura

Prevalencia de MTB cultivo positivo

un

Probabilidad de MTB Cultura

Probabilidad de MTB cultivo negativo

Entre positivo

Entre

Dos Xpert MTB / RIF DETECTADO, AFB Smear Pos.

Dos Xpert MTB / RIF DETECTADO AFB Smear Neg.

Dos Xpert MTB / RIF NO DETECTADO

1%

84.40%

9,19%

99,91%

2%

91,62%

16,98%

99,82%

3%

94.31%

23.66%

99.72%

4%

95.71%

29.46%

99.63%

5%

96.57%

34.54%

99.53%

10%

98.35%

52.69%

99.02%

11,8%

98.62%

57.28%

98.82%

14,2%

98.88%

62.39%

98.54%

20%

99,26%

71.48%

97.81%

40%

99.72%

86.98%

94.37%

50%

99.81%

90.93%

91.79%

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   S  ó un Sensibilidad del 100% para dos Xpert MTB / RIF resultados de ensayo para los sujetos positivos de frotis AFB se consideró como

99,9% en esta tabla.

13.3 Los valores predictivos para el resultado MTB DETECTADO, Resistencia RIF DETECTADO Uno de Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado Los valores predictivos estimados hipotéticos para el resultado Detectado MTB, Resistencia RIF DETECTADO para DETECTADO para diferentes tasas de prevalencia de sujetos con cultivo positivo de MTB y

diferentes tasas de prevalencia de la resistencia a RIF entre los sujetos con cultivo positivo de MTB se muestran en la Tabla 5. Estos cálculos se basan en la prevalencia hipotéticas y la sensibilidad y especificidad especificidad global (en comparación con las pruebas de sensibilidad fenotípica a fármacos (DST) ) observada durante la primera de dos estudios clínicos multicéntricos. La

sensibilidad del resultado de un Xpert MTB / RIF ensayo para la detección de la resistencia a RIF fue del 94,7% (18/19) y la especificidad fue del 99,0% (404/408). La prevalencia de la tuberculosis en este estudio prospectivo de Estados Unidos fue del 11,8%. En la población de Estados Unidos con TB la prevalencia de la resistencia a la rifampicina es de aproximadamente 1,8%. 5

dieciséis

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

 

 XXpert pert  ® MTB / RIF

Tabla 5. Los valores predictivos hipotéticos de una Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado vs. DST Prevalencia de MTB Cultura

Positivo

La prevalencia de la resistencia a RIF Entre MTB cultivo positivo

Probabilidad de Resistencia RIF entre Xpert resultados

MTB DETECTADO Resistencia RIF DETECTADO

5%

Porcentaje de resultados Xpert

MTB DETECTADO RIF La resistencia detectada,

en la población

20%

Xpert resultados

MTB DETECTADO, RIF

Resistencia no se detecta

1,0%

48,4%

0,09%

0,04%

1,5%

58,6%

0,11%

0,06%

2,0%

65,5%

0,13%

0,08%

10%

91,2%

0,47%

0,45%

50%

98,9%

2,17%

3,39%

  a   d    l  a   o   r   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u   Rendimiento 14. Características de rendimiento clínico   s   e     o  -    N -    ó  n    i   a  c   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p   o     l   S  ó 11,8%

Probabilidad de Resistencia RIF entre

1,0%

48,4%

0,21%

0,05%

1,5%

58,6%

0,26%

0,07%

2,0%

65,5%

0,31%

0,10%

10%

91,2%

1.11%

0,51%

50%

98,9%

5.11%

4.16%

1,0%

48,4%

0,35%

0,05%

1,5%

58,6%

0,44%

0,07%

2,0%

65,5%

0,52%

0,10%

10%

91,2%

1,88%

0,54%

50%

98,9%

8,66%

4,46%

14.1 Estudio 1

Diseño del estudio 14.1.1

Las características de rendimiento del ensayo Xpert MTB / RIF para la detección de ADN de MTB-complejo y para la detección de la resistencia a RIF en muestras de esputo en relación con los resultados de la cultura (sólidos y / o líquidos), seguido de las pruebas de sensibilidad a los medicamentos (DST) se determinaron en un multi -center estudio (estudio 1) usando muestras

de esputo prospectivos y archivados recogidos de ambas poblaciones estadounidenses y no estadounidenses. Un estándar de sobra única muestra de esputo o el cuidado sedimento concentrado preparado a partir de esputos inducidos o expectorado se ensayaron por el ensayo de MTB Xpert / RIF de los sujetos de estudio sospechosos de tuberculosis. Todos los f rotis de

AFB se realizaron en sedimentos concentradas.

Muestras de sujetos mayores de 18 años eran elegibles para el estudio 1, si se sospechaba que la tuberculosis pulmonar, en ausencia de tratamiento TB o con menos de tres días de tratamiento de la tuberculosis, tenía un volumen suficiente para las pruebas en el MTB Ensayo Xpert / RIF y tenía baciloscopia , MTB prueba la cultura y l a sensibilidad a los

medicamentos fenotípica (DST) resultados. De las 1.126 muestras elegibles y probadas por el ensayo de MTB Xpert / RIF, 1.096 fueron utilizados en el análisis. Treinta muestras

fueron excluidos del análisis; 13 especímenes debido a los resultados Xpert MTB / RIF ensayo no determinadas (es decir, no válida, un error o ningún resultado) y 17 especímenes debido a la contaminación del cultivo de MTB.

Las muestras procedían de los sujetos del estudio que eran ≥ 18 años de edad, el 62% (n = 679) hombres, 36% mujeres (n = 396); el 1,9% (n = 21) de género era desconocido. Que eran de diversas regiones geográficamente: geográficamente: 49% (n = 542) fueron de los EE.UU. (California, Nueva York y Florida) y 51% (n = 554) eran de fuera de

los EE.UU. (Vietnam, Perú, Sudáfrica, México y Bangladesh ). De los 542

especímenes de Estados Unidos, 450 se recogen de forma prospectiva y 92 eran de un banco de muestras archivados; de los 554 especímenes que no son estadounidenses, 23 fueron recogidos prospectivamente y 531 eran de un banco de muestras archivadas.

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

17

 

Xpert ® MTB / RIF

14.1.2 rendimiento de uno Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado vs MTB Cultura De uno a tres muestras de esputo fueron recogidos de cada sujeto de estudio para su uso en el estudio clínico (33,9% de los sujetos del estudio tenía 1 muestra de esputo recogidos, el 44,2% tenía 2 muestras de esputo, y 22.0% tienen a 3 muestras de esputo). Si más de un espécimen fue recogido de un sujeto, la primera muestra con suficiente volumen fue probado por el MTB Xpert Ensayo / RIF. Si el resultado del ensayo era de no determinado (Error, no válido o ningún resultado), el mismo espécimen fue analizado de nuevo si había volumen suficiente. En general, el 1,2% de las muestras analizadas (13 / 1,126; IC del 95%: 0,7% a 2,0%) fueron no determinada. Entre 1.096 sujetos con los resultados del cultivo de MTB, un resultado Xpert MTB / RIF ensayo se obtuvo con la primera muestra de 85,5% de los sujetos, con la segunda muestra el 11,2% de los sujetos, y con la tercera muestra para 0,3% de los sujetos. estado de la baciloscopia para un sujeto fue determinado por el resultado baciloscopia de la muestra con un resultado Xpert MTB / RIF ensayo correspondiente. El estado de la cultura en MTB para lograr un sujeto se definió en base al resultado del cultivo de MTB de todas las muestras de este tema.

El rendimiento del ensayo Xpert MTB / RIF para la detección de MTB en relación con la cultura de MTB, estratificado por baciloscopia se muestra en la Tabla 6 y en la Tabla 7. Los DETECTADO se evaluaron adicionalmente usando secuenciación resultados discordantes discordantes para la la cultura  cultura de los resultados positivos y MTB Xpert MTB / RIF ensayo de MTB NO DETECTADO se bidireccional de la rpoB  región  región del genoma de MTB. Ningún análisis discordantes se realizó en muestras negativas de cultivo cultivo de MTB.

Tabla 6. rendimiento de uno Xpert MTB / IRF Ensayo Resultado vs MTB de la cultura para los sujetos AFB frotis positivo

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a   m    i   n  f  o   r r   a   r   a   p     o    l   ó   S Cultura

MTB

DETECTADO

Xpert MTB / RIF Ensayo

MTB NO DETECTADO Total

+

-

Total

350

1 un

351

1 segundo

sesenta y cinco

351

66

66 417

Sensibilidad = 99,7% (350/351) con IC del 95%: 98,4% - 99,9% Especificidad = 98,5% (65/66) con IC del 95%: 91,9% - 99,7%

un El MTB / RIF ensayo Xpert MTB detectado en una muestra que fue la cultura MTB negativo. El resultado del cultivo se basó en una

muestra de esputo para este tema.

segundo Una muestra positiva de cultivo de MTB no fue detectado por el ensayo de MTB Xpert / RIF. Esto se determinó aislado de cultivo para ser Mtb

mediante un análisis de secuenciación bidireccional.

Tabla 7. Realización de un Xpert M TB / RIF Ensayo Resultado vs MTB de la cultura para los sujetos AFB frotis negativo

Cultura

MTB

Xpert MTB / RIF Ensayo

+

-

Total

89

7 un

96

28 segundo

555

583

117

562

679

DETECTADO

MTB NO DETECTADO Total

Sensibilidad = 76,1% (89/117) con IC del 95%: 67,6% - 82,9% Especificidad = 98,8% (555/562) con IC del 95%: 97,5% - 99,4%

un El MTB / RIF ensayo Xpert MTB detectado en siete muestras que eran negativas cultura MTB. Los resultados de los cultivos se basan

en una muestra de esputo por tres sujetos, dos muestras de esputo para dos sujetos, y tres muestras de esputo para dos sujetos.

segundo Veintiocho MTB cultivo de muestras positivas no fueron detectados por el ensayo de MTB Xpert / RIF. Estas muestras de cultivo se determinó

que eran Mtb mediante un análisis de secuenciación bidireccional.

La sensibilidad global depende del porcentaje de sujetos baciloscopia positiva entre los sujetos con la cultura MTB positivo. Para las muestras recogidas de forma prospectiva a partir de las materias de los Estados Unidos de Estudio 1, este porcentaje era del 75,5% y la sensibilidad global fue

93,8%. La especificidad global fue del 98,7% (IC del 95%: 97,5% - 99,4%).

18

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

 

 XXpert pert  ® MTB / RIF

En el uso clínico sensibilidad total variará en función del porcentaje de pacientes con tuberculosis positivva a AFB-frotis en la población que se está probando; sensibilidad global será más bajo en una población sometida a prueba, donde la probabilidad de tener AFB-citología positiva de tuberculosis es inferior, por ejemplo, una población de pacientes con una mayor prevalencia de la coinfección por el VIH.

14.1.3 rendimiento de uno Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado vs MTB Cultura por el Método de Colección El rendimiento de la Xpert MTB / RIF Ensayo para la detección de MTB se determinó en relación a la cultura MTB en muestras de esputo expectorado e inducidos. Los resultados se muestran en la Tabla 8 y la Tabla 9. De los 1.096 muestras, muestras, 535 muestras muestras fueron  fueron expectorado, expectorado, 234 muestras inducidas, y 327 con el método de colección desconocido.

Tabla 8. rendimiento de uno Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado vs MTB Cultura (expectorado)

AFB frotis positivo

AFB frotis negativo

Asignaturas

Sensibilidad

Asignaturas

99,6% (271/272)

79,0% (75/95)

IC del 95%: 97,9% - 99,9%

IC del 95%: 69,7% - 85,9%

97,6% (164/168)

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a

especificidad

IC del 95%: 94,0% - 99,1%

Tabla 9. rendimiento de uno Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado vs MTB Cultura (inducido)

AFB frotis positivo

AFB frotis negativo

Asignaturas

Sensibilidad

especificidad

Asignaturas

100% IC (15/15) 95%: 79,6% - 100%

40,0% (4/10)

IC del 95%: 16,8% - 68,7%

99,0% (207/209)

IC del 95%: 96,6% - 99,7%

14.1.4 Realización de un ensayo Xpert MTB / RIF Resultado vs. Cultura por Tipo de muestra

El rendimiento de la Xpert MTB / RIF Ensayo para la detección de MTB se determinó en relación a la cultura MTB en el esputo cruda y muestras de esputo sedimento concentrado. Los resultados se muestran en la Tabla 10 y la Tabla 11. Entre 1.096 muestras, mues tras, hubo 606 606 muestras muestras de esputo esputo en bruto y 490 muestras de esputo sedimento concentrado.

Tabla 10. Rendimiento del Uno Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado vs MTB C ultura (Raw esputo)

AFB frotis positivo

AFB frotis negativo

Asignaturas

   i   n  f  o   r r  m   a   r   a   p     o    l   ó   S

Sensibilidad

especificidad

Asignaturas

99,7% (285/286)

IC del 95%: 98,0% - 99,9%

79,4% (77/97)

IC del 95%: 70,3% - 86,2%

97,8% (218/223) IC del 95%: 94,9% -99,0%

Tabla 11. Rendimiento del Uno Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado vs MTB Cultura (concentrado de sedimentos)

AFB frotis positivo

AFB frotis negativo

Asignaturas

Sensibilidad

especificidad

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

Asignaturas

100% CI (65/65) 95%: 94,4% - 100%

60,0% (12/20) IC del 95%: 38,7% - 78,1%

99,3% (402/405) IC del 95%: 97,8% - 99,7%

19

 

Xpert ® MTB / RIF

14.1.5 rendimiento de uno Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado vs Drogas Pruebas de Sensibilidad para RIF cultura MTB aislados positivos se ensayaron para determinar la susceptibilidad de drogas (DST) a la rifampicina usando los métodos proporciones de agar con medio Middlebrook o Lowenstein-Jensen Lowenstein-Jensen o el BD BACTEC  TM MGIT TM 960 SIRE ensayo. El rendimiento de la Xpert MTB / RIF Ensayo para la detección de mutaciones genéticas asociadas con la resistencia a RIF se determinó en relación a los resultados de la PSD del MTB cultura aísla. De los 1.096 sujetos elegibles y probadas por el ensayo de MTB Xpert / RIF, 1.082 f ueron utilizados en el análisis. Catorce sujetos se excluyeron del análisis; seis sujetos tuvieron un resultado Xpert MTB / RIF ensayo de de  MTB DETECTADO, Resistencia Rif INDETERMINADO y INDETERMINADO y ocho sujetos con cultivos positivos de MTB no tenían resultados de la P SD. Resultados para la detección de mutaciones de resistencia asociado RIF son reportados por el MTB Ensayo Xpert / RIF sólo cuando MTB- complejo fue detectado por el dispositivo. Los resultados discordantes fueron evaluados mediante secuenciación bidireccional de la rpoB  región  región del genoma de MTB. Los resultados globales se presentan en la Tabla 12.

Tabla 12. Rendimiento del Uno Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado vs el horario de verano

el horario de verano El horario de verano no

  a   d   a    l   r  o   t   n   o   c    i  a   a     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a RIF

Resistente

RIF Susceptible

se realiza de Cultura TB negativo

Total

MTB DETECTADO, Rif Resistencia

18

4 un

0

22

404

7

412

DETECTADO

Xpert MTB / RIF Ensayo

MTB DETECTADO,

Resistencia Rif no se detecta

1 segundo

MTB NO DETECTADO do

2

26

620

648

Total

21

434

627

1.082

Sensibilidad: Sensibilida d: 94,7% (18/19) con IC del 95%: 75,4% -99,1% Especificidad: 99,0% (404/408) con IC del 95%: 97,5% -99,6%

un De las cuatro muestras discordantes determinó que RIF susceptibles por el horario de verano y resistencia a RIF DETECTADO por el MTB Ensayo Xpert / RIF, uno

ha demostrado ser susceptible RIF y tres eran resistentes RIF por secuenciación bidireccional.

segundo Un espécimen discordantes determinados a ser resistentes RIF por el horario de verano y resistencia a RIF NO DETECTADO DETECTADO por el MTB / RIF Ensayo Xpert se determinó que

era resistente RIF por secuenciación bidireccional. do MTB no se detectó y por lo tanto la detección de mutaciones de resistencia asociado RIF no se pudo determinar.

Resistencia RIF INDETERMINADO INDETERMINADO Se  Se presentaron los resultados de un 1,3% (6/447; IC del 95%: 0,6% - 2,9%) de las muestras detectadas-MTB Xpert MTB / RIF ensayo general; 0,28% (1/351; IC del 95%: 0,01% a 1,58%) de muestras positivas AFB-frotis y 5,21% (5/96; IC del 95%: 2,24% a 11,62%) de las muestras negativas AFB-frotis.

  f  o   r r  m   n    i    a   r   a   p     o    l   ó   S

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 XXpert pert  ® MTB / RIF

14.2 Estudio 2 Diseño del estudio 14.2.1 Un estudio prospectivo multicéntrico multicéntrico (estudio 2) se llevó a cabo en múltiples sitios en los Estados Unidos, así como en África del Sur y Brasil. Rendimiento del ensayo MTB / RIF se evaluó como una alternativa a la microscopía fluorescente de colores AFB-citología como una ayuda en la determinación de la necesidad de mantener el aislamiento infección por el aire en los pacientes con sospecha de tuberculosis pulmonar activa. Los resultados de la prueba Xpert MTB / RIF ensayo de dos muestras de esputo de serie en los sujetos de estudio con sospecha de tuberculosis pulmonar activa se compararon con los resultados de frotis teñidos fluorescentes AFB de las mismas muestras; un subconjunto de los sujetos tenían una tercera muestra de esputo AFB-probados por frotis pero no por el MTB Xpert Ensayo / RIF. Cada muestra se cultivó durante MTB-compleja utilizando medios de cultivo líquidos y sólidos, con crecimiento de micobacterias confirmado por las pruebas de sensibilidad a los medicamentos complejo MTB y rifampicina realizado a través del método de agar Middlebrook proporción. Estudio 2 también fue diseñado para evaluar el rendimiento clínico del ensayo de MTB Xpert / RIF utilizando muestras de esputo recogidos prospectivamente en las poblaciones infectadas por el VIH y no infectadas por VIH. Los sujetos de estudio mayores de 18 años eran elegibles para la inscripción si se sospechaba que la tuberculosis pulmonar, en ausencia de tratamiento o tenían menos de 48 horas de tratamiento de la tuberculosis dentro de los 180 días anteriores a la toma de la primera muestra de esputo, y tenía la determinación y / o documentación del estado del VIH . Los sujetos fueron incluidos en el análisis si se producen al menos dos muestras de esputo recogidas en un volumen suficiente para las pruebas de ensayo Xpert MTB / RIF, baciloscopia y cultivo de MTB, y l os resultados interpretables estaba estaban n disponibles para los tres métodos. Una tercera muestra para análisis se recogieron en algunos sitios basados en el estándar de protocolos de atención. De 992 sujetos elegibles y probados, treinta y dos sujetos (3,2%) fueron excluidos del análisis: 7 debido a la ausencia de resultados de los cultivos y 3 debido a la contaminación contaminación del cultivo de MTB. Veintidós pacientes pacientes (2,2%) fueron excluidos debido a la Xpert MTB / RIF Ensayo resultados no determina determinados dos (es decir, decir,  NO VÁLIDA, ERROR, o ERROR, o SIN RESULTADOS). Por RESULTADOS). Por lo tanto, 960 sujetos fueron utilizados utilizados en el análisis basado en el primer resultado Xpert MTB / RIF ensayo. Veinte de los 22 sujetos excluidos

  a   d   a    l   r  o   t   o  n    i  a   a   c     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    n   ó    i   c   a

del análisis basado en el primer resultado Xpert MTB / RIF ensayo dieron resultados válidos para la segunda muestra de prueba Xpert MTB / RIF ensayo, por lo tanto, el análisis basado en dos muestras de prueba Xpert MTB / RIF ensayo incluyó un total de 980 asignaturas.

Los sujetos del estudio fueron 62% hombres, 38% mujeres. El sesenta y cinco (65%) por ciento de los sujetos eran de los EE.UU., y el 35% eran de no sitios de Estados Unidos. Cuarenta y cinco (45%) por ciento de los sujetos de estudio fueron infectados por el VIH y el 55% eran sujetos no infectados por VIH. Expectorado y esputos inducidos representó el 59,6% y el 33,6% de las muestras, respectivamente; El 7% de las muestras de esputo fueron sin especificar. Veintiocho por ciento de las muestras de esputos eran prima y el 72% se concentra sedimentos de esputo.

14.2.2 Xpert MTB / RIF Ensayo de rendimiento como predictivo de los resultados de la serie fluorescentes manchadas frotis AFB

De 215 sujetos de estudio con confirmada por cultivo de MTB-complejo (14,2% [88/618] de los sujetos de los Estados Unidos y el 37,1% [127/342] de los sujetos no estadounidenses), el 99% de los sujetos (97% de los sujetos de los Estados Unidos y el 100% de los sujetos no estadounidenses) con sospecha de tuberculosis pulmonar en MTB-complejo se detectó mediante microscopía de ácido-alcohol resistentes de dos o tres muestras de esputo de serie también tenían MTB-compleja detectada por una prueba de un solo esputo por el MTB Xpert Ensayo / RIF. Los resultados de la prueba de dos muestras de esputo de serie por el MTB Xpert Ensayo / RIF detectaron MTB-com MTB-complejo plejo en todas las materias AFB-frotis positivo (100% en los sujetos de los Estados Unidos y el 100% en los sujetos no estadounidenses).

Un resultado negativo sola Xpert MTB / RIF ensayo predice la ausencia de tuberculosis pulmo pulmonar nar frotis positivo AFB con un valor predictivo negativo global (VPN) del 99,7% (99,6% en los EE.UU. y el 100% en los no-EEUU). Dos negativos Xpert MTB / Resultados RIF ensayo de serie predijeron que la ausencia de tuberculosis pulmonar con baciloscopia positiva AFB con un valor presente neto global del 100%.

14.2.3 Una Xpert MTB / RIF Ensayo Resultado como predictivo de los resultados de la serie fluorescentes manchadas frotis AFB

Tabla 13 y la Tabla 14 14 se present presentan an los resultados globales de un ensayo de MTB Xpert / RIF de resultados en comparación con los resultados del cultivo de MTB, estratificados por resultado la

  f  o   r r  m   n    i    a   r   a   p     o    l   ó   S

baciloscopia (Tabla 13). Tabla 14 es una comparación lado a lado a  lado de la ac actu tuación ación de uno d de e MTB / RIF ensayo Xpert resultado en comparación con el resultado compuesto de dos BAAR en los

Estados Unidos y los sujetos no estadounidenses (N = 960). La sensibilidad global de una MTB Ensayo Xpert / RIF en sujetos con baciloscopia negativa con frotis positivos y AFB AFB (sobre la base de dos frotis AFB) fue del 98,5% (IC del 95%: 94,6%, 99,6%) IC y el 54,8% (95%: 44,1 %, 65,0%), respectivame respectivamente, nte, y la especificidad glob global al fue del 98,7% (IC del 95%: 97,5%, 99,3%). Uno

de los resultados Xpert MTB / RIF ensayo de "MTB No detectado" se asoció con una probabilidad de resultados de MTB con cultivo positivo / AFB frotis positivo del 0,4% para los sujetos de los Estados Unidos y 0,0% para los sujetos no estadounidenses.

Xpert ® MTB / RIF 301-1404, Rev. B Febrero el año 2015

21

 

Xpert ® MTB / RIF

Tabla 13. Rendimiento del Uno Xpert MTB Ensayo / RIF Resultado estratificado por dos frotis AFB relativa al MTB Cultura en sujetos no estadounidenses Estados Unidos y

Cultura Negativo

Positivo

AFB Smear + AFB Smear Xpert MTB / RIF Ensayo

Cultura

Cultura

general + AFB Smear+ Smear+ AFB Smear -

general -

Total

Positivo

129

46

175

1

9

10 un

185

Negativo

2

38

40

17

718

735

775

Total

131

84

215

18 segundo

727

745

960

Rendimiento del Xpert MTB Ensayo / RIF para frotis positivo: Sensibilidad: 98,5% (129/131); IC del 95%: 94,6%, 99,6% Especificidad: 94,4% (17/18), 95% IC: 74,2%, 99,0%

  a   d    l  a   o   r   t   o  n    i  a   a   c     p   o   c     a   n   u     s   e     o  -    N -    ó  n    i   a  c

Rendimiento del Xpert MTB Ensayo / RIF para frotis negativo:

Sensibilidad: 54,8% (46/84); IC del 95%: 44,1%, 65,0% Especificidad: 98,8% (718/727), 95% IC: 97,7%, 99,4% Prevalencia de MTB cultivo positivo:

Prevalencia de MTB cultivo positivo en los sujetos de los Estados Unidos:

22,4% (215/960) 14,2% (88/618)

Prevalencia de MTB cultivo positivo en sujetos no estadounidenses: 37,1% (127/342)

Por ciento de los sujetos baciloscopia positivas entre los sujetos con MTB cultivo positivo: 60,9% (131/215)

Probabilidad general de MTB cultivo positivo entre los sujetos con un Xpert MTB / RIF Resultado negativo: 5,2% (40 /

IC 775), 95%: 3,8%, 7,0%

Probabilidad de MTB cultivo positivo entre los sujetos con un resultado negativo Xpert MTB / RIF (sujetos estadounidenses):

2,4% (13/539); IC del 95%: 1,4%, 4,1%

Probabilidad dad de MTB cultivo positivo entre los sujetos con un resultado negativo Xpert MTB / RIF (sujetos no estadounidenses): 11,4% (27/236); IC del 95%: 8,0%, 16,1%

Probabilidad general de MTB cultivo positivo y baciloscopia positiva entre los sujetos con un resultado negativo Xpert MTB / RIF: 0,3% (2/775), IC del 95%: