TINCIÓN DE CÉLULAS ANIMALES Y VEGETALES

TINCIÓN DE CÉLULAS ANIMALES Y VEGETALES 

OBJETIVOS. - Iniciarse en las técnicas de preparación microscópica - Teñir y observar células

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FUNDAMENTO TEÓRICO.

Para intentar hacer una buena preparación hay que intentar conseguir preparaciones de una sola capa de células aunque puede ocurrir que el material de partida se encuentre así (algunos epitelios o tejidos epidérmicos). En el caso de materiales más o menos fluidos, hay que realizar una extensión, y en el de materiales sólidos, un corte con microtomo, Suele ser necesario realizar una fijación de los tejidos para conservar (fijar) las estructuras celulares; para ello suelen utilizarse fijadores químicos o calor. A veces este paso está incluido en la tinción, que se realiza para distinguir las partes que interesa observar porque los materiales biológicos son, generalmente, incoloros. Después de lavar el exceso de colorante, la preparación se monta añadiendo conservantes y sustancias que facilitan la visión a través del microscopio, y colocando encima un cubreobjetos. 

MATERIAL

Material de laboratorio

Reactivos Material biológico 

Microscopio. Lanceta. Escalpelo. Pinzas. Portaobjetos/ Cubreobjetos. Banco de tinción Papel de filtro Placa de Petri Frasco Lavador Glicerina al 50%. Azul de metileno Verde de metilo acético Cebolla

MÉTODO

a) Técnica de realización de una preparación de células de mucosa bucal: 1. Raspa con la uña del dedo (puedes usar un palillo de dientes despuntado) la parte interna de un carrillo, y deposita el producto extraído (puede que no veas nada, pero seguro que en la uña llevas células) sobre una gota de agua que has depositado en el centro de un portaobjetos. 2. Con ayuda de una aguja enmangada o del palillo que has usado anteriormente, extiende la gota y calienta suavemente el portaobjetos por la parte inferior hasta que se seque.

3. Coloca el portaobjetos sobre los bordes del soporte de tinciones y añade una gota del colorante azul de metileno. 4. Deja la preparación con el colorante durante dos minutos y lava a continuación con agua mediante un frasco lavador, hasta que el agua salga clara. 5. Coloca un cubreobjetos sobre la preparación dejándolo caer formando inicialmente un ángulo de 45 º. 6. Seca la preparación y obsérvala al microscopio. La observación se hace empezando con el objetivo de menos aumentos. b) Técnica de realización de una preparación de células de epidermis de cebolla: 1. Parte una cebolla y separa sus “capas”; extrae, con ayuda de unas pinzas, una porción pequeña (1 cm2) de la membrana que las recubre. 2. Deposita la membrana en una placa de Petri con agua. Introduce un portaobjetos oblicuamente en la placa y con ayuda de las pinzas o de una aguja enmangada lleva la membrana sobre el portaobjetos, procurando que no queden arrugas. 3. Coloca el portaobjetos con la membrana sobre los bordes de una placa de Petri o sobre el soporte de tinciones y añade unas gotas del colorante verde de metilo acético. 4. Deja la preparación con el colorante durante cinco minutos y lava a continuación con agua mediante un frasco lavador, hasta que el agua salga clara. Al lavar se debe de hacer con mucho cuidado para no arrastrar la membrana (puede ser conveniente sujetarla suavemente con las pinzas). 5. Coloca un cubreobjetos sobre la preparación dejándolo caer formando inicialmente un ángulo de 45 º. 6. Seca la preparación y obsérvala al microscopio. Modo de colorear

Manera de colocar el cubreobjetos

una preparaci¢n

Cubreobjetos Placa de Petri

Portaobjetos

 ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS.  Observa al microscopio con los objetivos de 4x y 10x. Realiza dibujos de tus observaciones y describe en cada dibujo cómo son las células y el aumento total de la observación.  Señala en tus dibujos las partes de las células que hayas observado claramente. ¿Por qué no se observan otros componentes de la célula?

Pared celular Citoplasma Citoplasma

Nucleo

Nucleo