Técnicas de Inoculación

 

TÉCNICAS DE INOCULACIÓN. Hernández Pérez Brayan Alexander Higuera Dagnino Karla Yazmín

 

Fundamento teórico 

En el laboratorio de Microbiología la técnica más usada es la inoculación de los medios de cultivo, o sea, la transferencia de microorganismos de un medio ambiente a otro con el  propósito de cultivarlos cultivarlos y aislarlos aislarlos de otros, para poder estudiarlos estudiarlos debidamente debidamente y  posteriormente identificarlos. identificarlos. Un inóculo inóculo corresponde corresponde a una cantidad suficiente suficiente y representativa de un microorganismo problema. Así Así pues se debe partir de un cultivo puro en una concentración adecuada. adecuada.

 

Técnicas TÉCNICA DE SEMBRADO EN ESTRÍA. El inóculo primario efectúa mediante un asa, Una vez hecho el inóculo  primario se puede emplear empl ear un asa o alambre de picadura para diseminar disemin ar la muestra en los cuatro c uatro cuadrantes de la placa de agar. El inóculo se disemina sucesivamente en estrías con un movimiento de arriba hacia abajo en cada cuadrante, dando vuela la caja 90°. El asa se debe condel fuego estrías. El objetivo de esta bien técnicaa es diluirenelángulos inóculode suficientemente sobreesterilizar la superficie agarentre paralas asísucesivas poder obtener colonias bacterianas aisladas a partir de unidades formadoras de colonias. Existen varios métodos para inocular con estría, como son: técnica de los cuatro cuadrantes, por agotamiento (estría múltiple), por aislamiento en estría y técnica de los tres giros

 

TÉCNICA DE SEMBRADO EN ESTRÍA POR AGOT AGOTAMIEN AMIENTO TO 

A). Tomar Tomar una muestra del caldo con una asa de siembra estéril y depositarla en un extrema de la placa de agar EMB.

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B). Realizar estriado con movimientos de zig zag de un extremo al otro de la placa. C). Cuidar de no levantar el asa de la placa hasta con concluir.

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D). Rotular la caja e incubarla a 37 o C por 24 a 48 horas.

 

TÉCNICA DE SEMBRADO EN ESTRÍA MULTIPLE. 

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A). Tomar Tomar una muestra con asa estéril y depositarla en un extremo de la placa de agar  Nutritivo.

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B). Extender la muestra de un extremo al otro de ésta, solo en la parte superior. C). Flamear el asa, y girar un poco la caja y repetir el estriado.

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D). Repetir est proceso una 4 a 5 veces.

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E). Rotular e incubar a 37oC por 24 a 48 horas.

 

TÉCNICA DE SEMBRADO EN ESTRÍA DE LOS TRES GIROS. 

A). Tomar una muestra con asa estéril del cultivo y depositarla en un extremo de la paca de agar sangre.

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B). Extender la muestra hasta la mitad superior de la caja. C). Sin flamear el asa girar la caja 90o y volver a sembrar en estría.

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D). Girar la placa nuevamente y repetir hasta completar toda la caja.

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C). Rotular la caja e incubar a 37o por 24 a 48 horas.

 

Técnicas 2. TÉCNICA DE SEMBRADO CON UN APLICADOR DE ALGODÓN (HISOPO) : Es un técnica muy usada en medicina, la cual consiste en obtener una muestra con un hisopo estéril de unen cultivo mixto, trazar en la placa de agar unascon cuantas estrías una pequeña zona el borde de lay placa. Posteriormente se pasa un asa estérilinoculando la zona inoculada, y se  procede como la anterior anterior técnica.

 

TÉCNICA DE SEMBRADO CON HISOPO 

A). Impregnar el hisopo estéril en la muestra y en condiciones asépticas colocarla en un extremo de la caja

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de agar MSA. B). Estriar con asa estéril por el método de estría múltiple.

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C). Rotular e incubar a 37o C por 24 a 48 horas

 

Técnicas 3. TÉCNICA PARA RECUENTO SEMICUANTITATIVO DE COLONIAS: Para esta técnica se utiliza un asa de platino, calibrada para inocular 0.01 o 0.001 ml. de líquido, se sumerge en la y se practicauniformemente una sola estría en queángulo cruce el centro de la de placa de agar. Posteriorment Posteriormente el muestra inóculo se disemina recto respecto la estría primaria, luego lae  placa se gira en 90° y se disemina disemina el inóculo inóculo hasta cubrir toda toda la placa de agar. agar.

 

SEM BRADO TÉCNICA DE SEMBRADO SEMICUANTITATIVO 

A). Con un asa estéril tomar una muestra del cultivo y sembrar en una sola estría a lo largo de la caja de agar SS.

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B). El inóculo se disemina en ángulo recto respecto a la estría primaria. C). Se gira la caja en ángulo de 90o y se disemina el inóculo hasta cubrir toda la caja.

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D). Rotular e incubar a 37o C por 24 a 48 horas.

 

Técnicas 5. TÉCNICA DE LA VARILLA ACODADA DE VIDRIO. Otro método de aislar microorganismos microorgani smos y cultivarlos requiere el uso de una varilla doblada en ángulo. Con un asa o  pipeta Pasteur colocar colocar unalagota delestéril cultivodispersar cultivo bacterianuniformemente bacteriano o y depositarla la cerc cerca a del de la superficie del agar, y con varilla gota deborde microorganismos sobre toda la superficie de la placa de agar agar.. Este procedimiento sirve para que en algunas  partes de la superficie de de agar se aíslen organismos organismos individuales individuales que formarán colonias puras.

 

TÉCNICA DE SEMBRA SEMBRADO DO CON VARILLA VARILLA ACODADA. 

A). Colocar 0.1 ml. de la muestra con una pipeta estéril en un extremo de la placa de agar de Mac Conkey .

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B). Con una varilla previamente flameada con alcohol y enfriada, distribuir la muestra en toda la placa, según las

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indicaciones de su maestro.

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C). Reposar por 15 minutos la caja con tapa hacia arriba e incubar a 37oC por 24 a 48 horas.

 

Técnicas 5. TÉCNICA DE SIEMBRA POR DILUCIÓN. Se dispondrá de un grupo de tubos con agua estéril, enumerados, al primer tubo se le adicionará una cantidad conocida de muestra microbiana, se homogeniza, se pasa unasucesivamente cantidad específica tubo, se deseada. el  proceso anterio anterior r para el tercery tubo, y así suces ivamente hasta al obsegundo obtener tener la dilución drepite eseada. Dicha dilución se inocula 1 mililitro en las placas de agar, y se extiende con varilla acodada.

 

TÉCNICA DE SEMBRADO EN TUBO CON MEDIO LÍQUIDO. 

A). Inclinar el tubo con caldo en un ángulo de aproximadamente 30°.

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B). Tomar Tomar con asa estéril una muestra del cultivo y depositarla justo en donde hacen ángulo el caldo y la pared del tubo. D). Regresar el tubo a su posición original y mezclar el inóculo con movimientos ligeros.

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E). Rotular e incubar en posición recta a 37oC por 24 a 48 horas.

 

Técnicas para inocular medios de cultivo. 1. TÉCNICA PARA INOCULAR CALDOS DE CULTIVO: Los tubos con caldo se inoculan inclinando el tubo y acercar el asa con la muestra a la superficie del vidrio justo sobre el  punto dond e hacedebajo ángulode el la calsuperficie caldo, do, así cuando se regresa regresa a su posición original original el inóculo queda donde sumergido del medio.

 

TÉCNICA DE SEMBRADO EN TUBO CON MEDIO SEMISÓLIDO. 

A). Tomar una muestra del cultivo con alambre para picadura.

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B). Inocular el tubo atravesando en profundidad el medio semisólido, cuidando de seguir el mismo trayecto al retirar el alambre, para evitar falsos positivos.

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C). Rotular e incubar a 37o C por 24 a 48 horas. Incubar en posición recta.

 

Técnicas para inocular medios de cultivo. 2. TÉCNICA PARA INOCULAR TUBOS CON AGAR EN “PICO DE FLAUTA”: Se puede inocular sola la superficie con asa desde abajo hacia arriba con movimiento en “S”. O bien se inocula primero atravesando el agar en profundidad con un alambre de picadura, y se continúa sembrando por estrías la parte inclinada desde abajo hacia arriba con un movimiento en “S”.

 

Técnicas para inocular medios de cultivo. 3. TÉCNICA PARA INOCULAR TUBOS CON MEDIO SEMISÓLIDO: Por lo general este tipo de medios se utilizan para pruebas de movilidad, por lo que se inoculan en forma recta, atravesando profundid profundidad ad alutilizado medio, es importante el alambre retire siguiendo el en mismo trayecto para atravesar que el medio ya quedesipicadura se hacense movimientos en abanico durante la inoculación se desarrollaría un crecimiento sobre este dando un resultado falso positivo sobre movilidad

 

MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA O COLONIAL. 

1. TAMAÑO. Diámetro en mm.

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2. FORMA. Puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide, fusiforme.

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3. ELEVACIÓN. Plana, elevada, convexa, monticular, umbeliforme, umbilicada.

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4. MARGEN. (Borde de colonia). Entero, ondulado, lobulado, aserrado, filamentoso,

rizado. 

5. COLOR. Blanco, amarillo, negro, naranja, etc.

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6. SUPERFICIE. Brillante, mate, etc.

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7. DENSIDAD. Opaca, translúcida, transparente, etc.

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8. CONSISTENCIA. Butirosa, viscosa, membranosa, quebradiza, etc.

 

MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA O COLONIAL.

 

 REACCIONES EN MEDIOS DE AGAR USADOS  EN LA IDENTIFICACIÓN IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS. 

1. HEMÓLISIS EN AGAR SANGRE.

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Alfa Aclaramiento parcial de la sangre alrededor de las colonias con coloración verde del medio.

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Beta . Aclaramiento completo de la sangre alrededor de las colonias debida a la lisis de los glóbulos rojos. Gamma . No hay cambio en el medio .

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2. PRODUCCIÓN DE PIGMENTOS EN MEDIOS DE AGAR.

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A). Pigmentos hidrosolubles, que colorean el medio.

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B). Piocianina.

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C). Pigmentos fluorocrómicos (fluoresceína). D). Pigmentos no difusibles confinados a las colonias.

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3. OLOR. Es difícil describir esta característica, pero algunos ejemplos de bacterias con olores característicos, son :

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Pseudomonas spp. Olor a zumo de uvas.

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Proteus spp. Olor a chocolate quemado. Streptomyces spp. Olor a sótano enmohecido.

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Clostridium spp. Olor fétido, nauseabundo.

 

Referencias Laboratorio de microbiología general rev 1 oct/2017.