Streptococcus Iniae & S.agalactiae

 

 SNI 7545.3:2009

Standar Nasion Nasion al Indonesia

Metode Metod e identif identifikasi ikasi bakteri p pada ada ikan secara konvensio kon vensional nal – Bagian 3 3:: Streptococcus Streptococcus  iniae iniae   dan Streptococcus agalactiae  agalactiae 

ICS 65. 65.150 150

Badan Standard isasi is asi Nasion Nasional al

 

SNI 7545.3:2009 

Daftar isi

Daftar isi.....................................................................................................................................i Prakata ......................................................... ............................ ........................................................... ........................................................... .............................................. .................iiii 1 2

Ruang lingkup..................................... lingkup........ ........................................................... ........................................................... ................................................. .................... 1 Istilah dan definisi ..................................................... ........................ ......................................................... ......................................................... ............................. 1

3

Prinsip....................................... Prinsip.......... ........................................................... ........................................................... ........................................................... .............................. 2

4

Peralatan ........................................................... ............................. ........................................................... ................................................................ ................................... 2

5

Bahan .......................................................... ............................. ........................................................... ........................................................... ........................................ ........... 3

6

Prosedur ....................................................... ......................... ........................................................... ........................................................... ........................................ .......... 3

7

Pelaporan .......................................................... ............................. ........................................................... ................................................................ .................................. 6

8

Keamanan dan Keselamatan kerja................................................. kerja................... ........................................................... ................................... ...... 6

Lampiran A (normatif) Pembuatan media............................................. media............... ........................................................... ................................... ...... 7 Lampiran B (normatif) Pembuatan pereaksi............................ pereaksi .......................................................... ............................................. ............... 10 Bibliografi.................................... Bibliografi...... ........................................................... ........................................................... .............................................................. ................................ 12 Tabel 1 - Karakteristik bakteri Streptococcus Streptococcus  iniae iniae dan  dan Streptococcus agalactiae ....... ............... .......... 6

i

 

SNI 7545.3:2009 

Prakata

Dalam rangka keberlanjutan usaha budidaya, meningkatkan produktivitas dan jaminan mutu komoditas perikanan serta memberikan hasil uji yang akurat bagi setiap pengujian laboratorium uji, maka perlu disusun suatu Standar Nasional Indonesia (SNI) tentang metode identifikasi bakteri Streptococcus Streptococcus   iniae iniae   dan Streptococcus agalactiae  agalactiae  pada ikan secara konvensional. Standar ini dirumuskan oleh Subpanitia Teknis 65-05-S2 Perikanan Budidaya dan telah dibahas dalam rapat-rapat teknis dan terakhir disepakati dalam rapat konsensus pada tanggal 25 Agustus 2008 di Bogor dengan memperhatikan: 1 2

3

Keputusan Menteri Kelautan dan Perikanan RI. No.Kep.01/Men/2002 No.Kep.01/Men/2002 tentang Sistem Manajemen Mutu Terpadu Hasil Perikanan. Keputusan Menteri Kelautan Kelautan dan Perikanan RI. No.Kep.06/Men/2002 No.Kep.06/Men/2002 tentang tentang Persyaratan dan Tata Cara Pemeriksaan Mutu Hasil Perikanan yang Masuk ke wilayah Republik Indonesia. Keputusan Menteri Kelautan dan Perikanan RI. No.Kep.21/Men/2004 No.Kep.21/Men/2004 tentang Sistem Pengawasan dan pengendalian Mutu Hasil Perikanan untuk Pasar Uni Eropa.

Standar ini telah melalui proses jajak pendapat pada tanggal 2 April 2009 sampai dengan 2 Juni 2009 dengan hasil akhir RASNI.

ii

 

SNI 7545.3:2009 

Metode Me tode identi fik asi bakteri pada ikan secara konv ensional – Bagian 3: Streptococcus  iniae Streptococcus iniae dan  dan Streptococcus agalactiae  agalactiae 

1

Ruang Ruang lingk up

Standar ini menetapkan metode identifikasi bakteri Streptococcus iniae  iniae  dan Streptococcus Streptococcus   agalactiae pada ikan secara konvensional.

2

Istilah dan definisi

2.1 Gram positif Gram  positif hasil pewarnaan Gram Gram yang  yang ditandai dengan sel bakteri yang berwarna ungu 2.2 ikan besar ikan yang sudah dapat dibedakan organ dalamnya secara makroskopis 2.3 ikan kecil ikan yang tidak dapat dibedakan organ dalamnya secara makroskopis 2.4 inkubasi pengkondisian lingkungan untuk tumbuh dan berkembangbiak sehingga bakteri dapat tumbuh dan menunjukkan karakteristik sesuai dengan yang dikehendaki 2.5 inokulasi menumbuhkan bakteri dari satu media ke media lain 2.6 isolasi pemisahan bakteri dari organ target ikan dengan menumbuhkan pada media agar 2.7 isolat murni bakteri hasil pemurnian dari koloni yang terisolir 2.8 media formulasi bahan yang digunakan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi bakteri 2.9 media agar media padat yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme 2.10 media sele selektif ktif yang digunakan untuk mengisolasi dan menumbuhkan bakteri tertentu formulasi bahan

1 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

2.11 media semi semi soli d formulasi bahan yang digunakan untuk melihat pertumbuhan dan/atau motilitas dari bakteri yang diisolasi 2.12 metode konvensional penentuan bakteri melalui uji fisika, uji morfologi dan uji biokimia 2.13 mikroorganisma   mikroorganisma organisma yang berukuran kecil dan hanya dapat dilihat dengan menggunakan mikroskop 2.14 organ target organ yang menjadi sasaran serangan bakteri 2.15 pewarnaan Gram Gram   uji untuk membedakan sifat dinding sel bakteri 2.16 Streptococcus merupakan salah satu bakteri berbentuk bulat gram positif dengan koloni mikroskopis berantai 2.17 uji morfologi sel  sel   uji yang dilakukan untuk mengetahui ukuran dan bentuk bakteri dengan menggunakan mikroskop 2.18 uji fisika uji yang dilakukan untuk melihat ketahanan bakteri terhadap kondisi tertentu 2.19 uji biokimia uji yang dilakukan dengan menggunakan bahan - bahan kimia

3

Prinsip

Mengisolasi dan memurnikan bakteri pada media selektif KF agar atau media Brain Heart Infusion Agar  (BHIA),  (BHIA), selanjutnya diidentifikasi diidentifikasi secara morfologi, uji fisika,  fisika,  dan uji biokimia.

4

Peralatan

a) b) c) d) e) f) g) h)

autoclave; autoclave; botol semprot; Bunsen burner ; cawan petri; gelas objek; hot plate & magnetic stirrer ;  inkubator; jarum Őse; se; 2 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

i)  j) k) l) m) n) o)

labu erlenmeyer ; meja bedah; bedah; mikroskop; mortar  dan  dan grinder ; oven;; oven peralatan bedah; pipet tetes;

p) q) r) s) t) u)

pipet berskala; rak tabung reaksi; tabung reaksi; timbangan analitik (ketelitian 0,01 g); uv laminarflow-hood (biological safety cabinet); cabinet); vortex mixer .

5

Bahan

a) b) c) d) e)

aesculin broth; broth; akuades; alkohol 70 %; bile agar bile  agar plate  plate;; blood  agar/  agar/ agar darah;

f) Brain Heart Infusion Agar  (BHIA);  (BHIA); g) filter paper  dan/atau  dan/atau stik  untuk  untuk sitochrom oksidase; oksidase; h) mannitol agar; i) media KF;  j) medium O/F basal; basal; k) media SIM atau media MIO; l) media TSA yang mengandung NaCl 6,5 %; m) minyak imersi; n) parafilm; o) parafin cair; p) pereaksi sitochrom oksidase; oksidase; q) pereaksi katalase H2O2 3 %; r) pereaksi pewarnaan Gram Gram;; s)  phenol red broth broth base media; base media; t) Tryphenyltetrazo Tryphenyltetrazolium lium chloride (TTC) chloride (TTC) solution  solution 1 %; u) vaseline. CATATAN: pembuatan media diuraikan dalam Lampiran A dan pembuatan pereaksi diuraikan dalam Lampiran B.

6 6.1

Prosedur Preparasi con toh

Ikan besar -

Bersihkan permukaan tubuh ikan dengan kapas yang telah dibasahi alkohol 70 %. Bedah ikan dengan menggunakan peralatan bedah steril. Secara aseptis, tusuk dengan jarum Őse  se  organ target (cairan otak, otak, hati, ginjal, limpa dan darah serta tubuh). Ikantubuh. yang Darah dikehendaki hidup (non lethal sampling  (non ), ), isolat diambil dariluka darah dan luka diambiltetap dengan menggunakan alat suntik steril, kemudian siap dilakukan isolasi. 3 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

Ikan kecil atau telur -

Ambil contoh dibilas dengan menggunakan akuades steril minimal 3 kali, kemudian contoh digerus, siap untuk diisolasi.

6.2

Isolasi bakteri

a) Bersihkan permukaan meja kerja dengan alkohol 70 %. b) Secara aseptis, tusuk tusuk organ target menggunakan menggunakan jarum Őse, se,   kemudian goreskan ke media BHIA  BHIA atau media  media KF. c) Secara aseptis, aseptis, hasil gerusan gerusan ikan kecil kecil atau telur telur diambil dengan dengan jarum Őse kemudian goreskan ke media BHIA  BHIA atau media  media KF. d) Secara aseptis, aseptis, teteskan teteskan darah di atas media BHIA BHIA   atau media  media  KF kemudian digoreskan menggunakan jarum Őse. se. e) Segel cawan petri yang berisi biakan bakteri dengan parafilm. f) Inkubasikan biakan bakteri pada suhu 28 °C selama 12 jam - 24 jam.  jam.  g) Pada media BHIA, bakteri bakteri diduga Streptococcus iniae dan iniae dan S. agalactiae  agalactiae  apabila setelah diisolasi akan tumbuh koloni halus berwarna transparan sedangkan pada media KF, akan membentuk koloni berwarna coklat. 6.3

Pemurnian bakteri

a) Ambil koloni yang tumbuh terpisah di dalam goresan yang diduga Streptococcus Streptococcus   iniae iniae   dan S. S.  agalactiae agalactiae untuk  untuk selanjutnya dimurnikan dimurnikan dalam media BHIA. b) Inkubasikan pada suhu 25 °C - 30 °C selama 12 jam - 24 jam. c) Apabila hasil pemurniannya diperoleh koloni yang seragam maka diteruskan dengan  dengan  uji lanjutan.   lanjutan. 6.4

Tahap Tahap analisi s

6.4.1

Pewarnaan Gram Gram  

a) Siapkan gelas objek yang telah dibersihkan dari lemak dengan alkohol 70 % dan diberi label. b) Teteskan 1 tetes akuades akuades steril pada pada permukaan permukaan gelas objek. objek. c) Ambil isolat dengan jarum Őse steril , campur dengan akuades dan diulas merata pada permukaan gelas objek. d) Fiksasikan dengan dengan melewatkan melewatkan preparat di atas api api (jarak 15 cm) beb beberapa erapa kali sampai sampai e) f) g) h) i)  j) k) l) m) n) o)

terlihat kering. Teteskan larutan crystal violet  pada  pada preparat sampai merata dan diamkan selama 1 menit. Cuci dengan air mengalir. Teteskan larutan iodine lugol  pada  pada preparat sampai merata, dan diamkan selama 1 menit. Cuci preparat dengan air mengalir dan dikeringanginkan. dikeringangin kan. Teteskan larutan alkohol aseton aseton pada  pada preparat sampai merata dan diamkan maksimal 30 detik. Cuci preparat dengan dengan air mengalir mengalir dan dikeringangink dikeringanginkan. an. Teteskan larutan safranin pada preparat sampai merata dan diamkan selama 2 menit. Cuci preparat dengan air mengalir dan dikeringanginkan. dikeringangin kan. Amati preparat menggunakan menggunakan m mikroskop. ikroskop. Sifat bakteri Gram Gram positif  positif ditandai dengan sel bakteri berwarna ungu. Sifat bakteri Gram negatif ditandai dengan dengan sel bakteri bakteri berwarna merah. merah.

6.4. 6.4.2 2

Uji motil itas dengan media semi solid

a) Ambil isolat dengan jarum Őse lurus se lurus dan inokulasikan dengan menusukkan pada media semi solid (SIM atau MIO). b) Inkubasikan pada suhu 28 °C selama 12 jam - 24 jam. 4 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

c) Reaksi positif ditandai ditandai dengan pertumbuhan pertumbuhan bakteri yang menye menyebar bar dan reaksi negatif ditandai pertumbuhan bakteri yang tidak menyebar. 6. 6.4. 4.3 3

Uji sitoc hrom oksidase

a) Basahi kertas saring dengan pereaksi oksidase pereaksi  oksidase.. b) Ambil 1 loop isolat bakteri dengan jarum Őse (Őse platinum se platinum atau atau  Őse plastic se plastic disposable), disposable), goreskan pereaksi   oksidase atau gunakan  gunakan  stik stik   oksidase.. pada kertas saring yang sudah diberi pereaksi  oksidase c) Reaksi negatif jika jika tidak ada perubahan perubahan warna warna pada kertas saring saring dan positif jika terjadi perubahan warna biru keunguan pada goresan dalam waktu singkat. 6.4.4 6.4 .4

Uji Oksid atif-Fermentati f

a) Siapkan 2 tabung tabung berisi berisi media media O/F basal. b) Ambil isolat bakteri dengan jarum Őse lurus se lurus steril. c) Inokulasikan isolat isolat bakteri ke dalam dalam tabung yan yang g berisi media O/F basal basal dengan cara ditusukkan. d) Satu tabung diisi dengan parafin cair steril hingga ketinggian 1 cm di atas permukaan media O/F basal, sedangkan tabung lainnya tanpa parafin cair. e) Inkubasikan Inkubasik an pada suhu 25 °C - 30 °C selama 12 jam - 24 jam. f) Reaksi negatif jika tidak ada perubahan warna pada kedua tabung reaksi. g) Reaksi oksidatif oksidatif positif jika terjadi terjadi perubahan perubahan warna media pada pada tabung tanpa parafin parafin dari hijau ke kuning. h) Reaksi fermentatif positif positif jika terjadi per perubahan ubahan warna dari hijau ke kuning kuning pada tabung yang tertutup parafin. 6.4.5

Uji katal ase

a) Secara aseptis, ambil biakan bakteri dengan jarum Őse, se,   oleskan pada gelas objek kemudian tambahkan 1 tetes larutan H2O2  3 %. b) Bakteri bersifat katalase katalase positif bila menghasilkan menghasilkan gelem gelembung bung udara dalam waktu waktu kurang dari 10 detik. 6.4.6 a) b) c) d) e)

Ambil isolat bakteri menggunakan jarum Őse. se. Inokulasikan isolat bakteri ke dalam dalam bile bile agar  agar plate  plate.. Inkubasikan Inkubasik an pada suhu 37 °C selama 24 jam - 48 jam. Amati pertumbuhan bakteri dalam media. Reaksi positif apabila tumbuh pada media dan reaksi negatif apabila tidak tumbuh pada media.

6.4.7 6.4 .7 a) b) c) d)

Uji bile salt 40 salt  40 %

Uji pertu mbu han dalam NaCl NaCl 6,5 %

Ambil isolat bakteri menggunakan jarum Őse. se. Inokulasikan Inokulasika n isolat bakteri ke dalam TSA yang telah ditambah NaCl 6,5 %. Inkubasikan Inkubasik an pada suhu 37 °C selama 24 jam - 48 jam. Reaksi positif apabila tumbuh pada media dan reaksi negatif apabila tidak tumbuh pada media.

6.4.8

Uji haemolisis haemolisis  

a) Inokulasikan isolat bakteri ke dalam dalam blood agar  dengan  dengan metode platting  metode platting . b) Inkubasikan pada suhu 25 °C - 30 °C selama 24 jam. c) Amati daerah daerah yang terbentuk di di sekitar koloni yang yang tumbuh. tumbuh.

5 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

d) Reaksi positif alpha haemolisis haemolisis   jika jika terdapat zona kehijau-hijauan disekitar daerah koloni reaksi positif betha haemolisis haemolisis jika  jika terdapat zona bening disekitar daerah koloni. e) Reaksi negatif apabila tidak terjadi zona warna disekitar daerah koloni. 6.4. 6.4.9 9

Uji ae aesculi sculi n hydrol isis

a) Inokulasikan isolat bakteri ke dalam dalam aesculin broth. broth. b) Reaksi Inkubasipositif padaditandai suhu 25dengan °C - 30warna °C selama c) hitam.24 jam - 48 jam. 6.4.10 6.4 .10 Uji pro duk si asam dari D-mannitol D-mannitol   a) Ambil isolat dengan jarum Őse dan se dan inokulasikan ke dalam media phenol media  phenol red broth base  base  yang sudah ditambahkan dengan D-mannitol . b) Inkubasikan Inkubasika n pada suhu 25 °C - 30 °C selama 12 jam - 24 jam. c)  Reaksi positif jika terbentuk warna kuning pada agar dan negatif bila tidak terjadi perubahan warna.  7

Pelaporan

Bakteri dinyatakan sebagai  sebagai  Streptococcus iniae  iniae  dan Streptococcus agalactiae  agalactiae 

apabila

memenuhi karakteristik seperti pada Tabel 1. Tabel Ta bel 1 No

8

Karakteristik bakteri Streptococcus Streptococcus  iniae iniae dan  dan S. agalactiae  agalactiae  Test

1 2 3 4 5 6 7

Pewarnaan Gram Gram   Motilitas Oksidase Oksidatif-Fermentatif Oksidatif-Fermentatif Katalase Bile salt  40 % Pertumbuhan Pertumbuha n dalam NaCl 6,5 %

8

Haemolisis

9 10

 Aesculin hydrolisis hydrolisis Asam dari D-mannitol dari D-mannitol

Karakteristik S. iniae in iae Gram positif Gram  positif Negatif Negatif Fermentatif Negatif Negatif Negatif

S.agalact S.agalactiae iae Gram positif Gram  positif Negatif Negatif Fermentatif Negatif Positif Positif

 Alpha haemolisis  haemolisis haemolisis   beta haemolisis haemolisis      dan/atau Beta haemolisis Positif Negatif Positif Negatif

Keamanan dan Keselamatan kerja

a) b) c) d)

Cuci tangan sebelum dan sesudah melakukan analisis. Gunakan jas laboratorium laboratorium selama selama melakukan melakukan analisis. analisis. Bersihkan meja kerja sebelum dan sesudah sesudah melakukan melakukan analisis. analisis. Bersihkan segera contoh yang tercecer dan mengandung bakteri menggunakan bahan desinfektan. e) Media yang sudah digunakan disterilkan disterilka n terlebih dahulu sebelum dibuang.

6 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

Lampiran A (normatif) Pembuatan Pe mbuatan media

 A.1

Brain Heart Heart Infus ion Ag ion  Ag ar (BHIA)

Bahan: BHIA komersial Cara membuat: a) Larutkan 52 gram BHIA dalam 1 liter akuades. b) Panaskan hingga mendidih kemudian disterilk disterilkan an pada suhu 121 °C selama 15 menit.

 A.2

Media Medi a O-F basal

Bahan: Peptone   Peptone NaCl K2HPO4   Agar  Akuades Bromthimol blue  blue   Aqua solution  solution 

2g 5g 0,3 g 3g 1000 ml 0,2 % 15 ml

Cara membuat: a) b) c) d)

Panaskan semua bahan sambil diaduk. Tambahkan larutan indikator dan sterilisasi pada suhu 115 °C selama 20 menit. menit. Tambahkan 1 % larutan karbohidrat steril (glukose glukose). ). Campurkan dan tuang 1,5 ml kedalam tabung reaksi, pH akhir 7,1.

 A.3

Media Medi a Tripti case Soya Soya Agar (TSA)

Bahan: TSA  Akuades

40 g 1000 ml

Cara membuat: a) b) c) d)

Timbang TSA sebanyak 40 gram. Tambahkan 1000 ml akuades dalam erlenmeyer  yang  yang diberi magnetic stirer . Panaskan di atas hot plate, tidak plate, tidak sampai mendidih. Sterilkan dengan autoclave autoclave 121  121 °C selama 15 menit.

e) Bagi dalam cawan petri/ petridish   petridish  lalu simpan.

7 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

 A.4

KF  KF  Streptococcus Streptococcus agar  base  base

 A.4.1 Ag ar base base   Bahan: Protease peptone  peptone 

10 g/l

Yeast extract      Sodium chlorida chlorida  Sodium glycerophosphate  glycerophosphate  Maltose   Maltose Lactose   Lactose Sodium azide  azide  Bromo-cresol purple  purple   Agar pH 7.2 ±0.2

10 5 g/l g/l 10 g/l 20 g/l 1 g/l 0.4 g/l 0.015 g/l 20 g/l

 A.4.2

Tryphenyltetrazolium Chloride (TTC) Chloride (TTC) solution (1 %)

Vial berisi: 2,3,5-Tryphenyltetraz 2,3,5-Tryphenyltetrazolium olium chloride (1 chloride (1 %) Setiap vial untuk membuat 500 ml media Cara membuat: a) b) c) d)

Larutkan 38.2 g agar base base ke  ke dalam 500 ml akuades. Didihkan selama 5 menit dengan suhu 5 °C. Tambahkan secara secara akseptis 1 botol kecil (5 ml) 2,3,5-Triphenyltetrazolium 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (1 chloride (1 %). Bagi kedalam cawan petri/ petridisk    lalu simpan.  petridisk  lalu

 A.5

Media Medi a Sulphi de-Indole-M de-Indole-Motili otili ty (SIM) (SIM)  

Bahan: Meat extract Tryptone   Tryptone Na2S2O3.5H2O Cysteine hydrochloride hydrochloride  NaCl  Agar  Akuades

3g 30 g 0,5 g 0,2 g 5g 5g 1l

Cara membuat: a) Panaskan sambil diaduk dan didihkan selama 1 menit - 2 menit semua bahan. b) Tuang pada tabung reaksi atau tube tube dan  dan sterilisasi pada suhu 121 °C selama 15 menit.  A.6

Media Medi a Motility Indol Orthinin (MIO)

Bahan:  Agar MIO  Akuades

31 g 1000 ml

8 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

Cara membuat: a) Masukkan MIO ke ke dalam dalam labu erlenmeyer  menggunakan   menggunakan stirer magnetic  dan tambahkan 1000 ml air. b) Panaskan di dekat hot plate hingga plate hingga mendidih. c) Sterilkan dengan autoclave autoclave  pada suhu 121 °C selama 15 menit. d) Bagi ke dalam tabung reaksi yang sudah steril.

 A.7

Media Medi a blood  blood agar  agar base base (agar  (agar darah)

Bahan: Blood  agar  agar base base    Akuades Defribinated blood  

40 g 1000 ml 3%-8%

Cara membuat: a) b) c) d)  A.8

Larutkan blood  agar  agar base base,, sterilkan pada suhu 121 °C selama 15 menit. Setelah suhu larutan ±  50 °C tambahkan defribinated blood  3  3 % - 8 %. Aduk perlahan (jangan sampai ada gelembung udara). Distribusikan Distribusik an ke dalam cawan petri.  Aes cu li n b ro th

Bahan:  Aesculin   Aesculin  Ferric citrate Peptone water  

1g 0,5 g 1000 ml

Cara membuat: a) Larutkan esculin esculin dan  dan ferric citrate di citrate di peptone  peptone water . b) Sterilisasikan dalam autoclave autoclave 115  115 °C selama 10 menit. c) Simpan di tempat gelap.

 A.9

Bile Salt 40 % 

Bahan: Ox bile, dehydrated   Serum, steril Nutrien Agar

40 g 50 ml 1000 ml

Cara membuat: a) Nutrien agar ditambah Ox bile  dicampur dan dilarutkan. bile dicampur b) c) d) e)

Sterilisasi pada suh u 115 °C selama selama 25 menit. menit. Dinginkan pada suhu suhu 55 °C. Tambahkan serum secara aseptis. Distribusikan Distribusik an ke dalam dalam plate  plate.. 9 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

Lampiran B (normatif) Pembuatan Pe mbuatan perea pereaksi ksi

B.1

Pereaksi Pereaksi pewarna Gram Gram  

B.1.1

Larutan crystal violet  violet  

Bahan: Crystal violet   Ethanol    Ammonium oxalat  oxalat    Akuades

2,0 g 20,0 ml 0,8 g 80 ml

Cara membuat: a) Crystal violet  dilarutkan   dilarutkan dalam ethanol . b)  Ammonium oxalat  oxalat  dilarutkan  dilarutkan dalam akuades. c) Campurkan kedua larutan dan diamkan selama 24 jam, kemudian lakukan penyaringan. B.1.2

Larutan iodine iodine  

Bahan: Iodine Potassium iodide  iodide   Akuades

1g 2g 300 ml

Cara membuat: a) Potassium iodide dilarutkan iodide dilarutkan dalam 20 ml akuades. b) Tambahkan iodine dan iodine dan dibiarkan semalam. c) Tambahkan sisa akuades. B.1.3

Larutan Larut an penjerni h

Bahan: Ethanol  Acetone    Acetone

95 ml 5 ml

Cara membuat: Campurkan ethanol  dan  dan acetone acetone.. B.1.4

Larutan Larut an safrani n

Bahan: Safranin  Safranin  Ethanol (95 %)  Akuades

0,25 g 10 ml 90 ml 10 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

Cara membuat: Safranin  dilarutkan dalam ethanol dan tambahkan akuades Safranin

B.2

Pereaksi Pereaksi uji sitachrom oksidase

Bahan: Tetramethyl-p-phenylenediamine Tetramethyl-p-phenylenedia mine dihydrochloride dihydrochloride   Akuades

1 ml 99 ml

Cara membuat: Larutkan tetramethyl-p-p tetramethyl-p-phenylenedi henylenediamine amine dihydrochloride dihydrochloride kedalam  kedalam akuades  akuades 

B.3

Pereaksi Pereaksi katalase

Bahan: H2O2 

3 ml

 Akuades

97 ml

Cara membuat: Larutkan H2O2 dalam akuades.

B.4

Pereaksi Pereaksi asam dari manitol manitol  

Bahan: D (-) mannitol Phenol - red broth base media

5 g/l - 10 g/l

Cara membuat: a) Larutkan Larutkan phenol  phenol red broth base media base media dalam akuades, dapat pula ditambahkan agar 0,5 g/l - 1,0 g/l jika menginginkan media tersebut dalam bentuk agar. b) Sterilisasi Sterilisas i dengan autoclave autoclave suhu  suhu 121 °C selama 15 menit. c) Setelah suhu suhu kurang lebih lebih 60 °C °C tambahkan 5 g/l - 10 g/l manitol . d) Distribusikan Distribusik an ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham durham.. e) Simpan dalam refrigerator .

11 dari 12

 

SNI 7545.3:2009 

Bibliografi

 Association of Official Official Analytical Chemistry  Chemistry  (AOAC),  (AOAC), 1996. Official Methods of Analysis, 16th. Official Chemical Method , 1979, Fish Fish  Inspection Branch Fisheries and Ocean Canada. Canada.

12 dari 12