Separacion

 

Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional De Ciencias Biológicas Prolongación Manuel Carpio y Plan de Ayala s/n, Miguel Hidalgo, Santo Tomás, T omás, 11350 Ciudad de México, CDMX .

Separación de fosfolípidos contenidos en la yema de huevo de gallina por cromatografía en capa fina Introducción

Los lípidos son un grupo heterogéneo de biomoléculas relativamente insolubles en agua y solubles en solventes no polares como el éter, cloroformo y benceno. Existen numerosas clasificaciones de los lípidos; la más sencilla es aquella que considera en principio sólo dos grandes grupos: los lípidos complejos y los lípidos simples; los primeros son los que contienen c ontienen ácidos grasos en su estructura y están unidos a un grupo -OH de otra molécula. Ejemplos de estos son lecitinas, cerebrósidos y lanolina. El grupo de los lípidos simples comprende a aquellas moléculas que son derivadas del isopreno y no pueden ser saponificadas; dentro de él se incluyen sustancias conson lasmentol, propiedades másy variadas. las Algunos ejemplos cortisona prostaglandina E. Las funciones de los lípidos son múltiples: a) Función energética energética o de reserva. Las grasas neutras se almacenan en los adipocitos y suministran calorías, fácilmente utilizados en períodos de escasez. b) Funciones estructurales. Todas las membranas biológicas están formadas por fosfolípidos y glicolípidos (y a veces esteroides) estructurados en bicapas. c) Funciones catalít catalíticas. icas. Algunos lípidos actúan en microcantidades como agentes activadores o reguladores del metabolismo. d)

Para comenzar la extracción de los fosfolípidos de la yema de huevo, primero mezclamos una yema con 30 mL de cloroformo-metanol (2:1 v/v). Los lípidos, al ser no polares, son solubles en cloroformo, por ello quedan en la parte inferior del vaso de precipitados. Por otro lado, en la parte superior de la mezcla se evidencia la formación de una capa grumosa, la cuál es originada por el metanol que al reducir la constante dieléctrica del medio provoca la aglomeración y precipitación de las proteínas. Esta mezcla se agita durante 20 minutos en un baño de hielo, el cual evita que el disolvente se evapore. Una vez terminado el tiempo procedemos a filtrar, no sin antes mojar el papel filtro con cloroformometanol para evitar que se absorban en el papel los lípidos disueltos. El filtrado tiene una fase orgánica (inferior) donde se encuentran los lípidos y una fase acuosa (superior) que proviene del agua contenida en la yema de huevo y que además contiene aminoácidos, vitaminas, metanol, entre otras sustancias polares. Para purificar este extracto se realizó un lavado con KCl 0.1 M, una sal iónica que permite que los aminoácidos hidrofóbicos se incorporen a la fase acuosa. Una vez que esta listo el filtrado se procede a desechar la fase acuosa.

Objetivos

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Aplicar la técnica de cromatografía en capa fina para la separación de los fosfolípidos de la yema de huevo. Discutir las ventajas de la técnica de separación respecto a la cromatografía en papel.

Análisis de la técnica

Resultados

 

Tabla 1. Relación de frentes de los fosfolípidos separados en capa fina.

Fosfolípido

Molibdato

Ninhidrina

Bismuto

Yodo

Lípidos neutros y colesterol

-

-

-

0.948

FEA

0.583

0.620

-

0.689

FC

0.483

-

0.932

0.517

FS

0.4

0.344

-

0.396

EM

0.183

-

0.576

0.258

LFC

0.133

-

0.152

0.206

estructuras, por etanolamina que también posee una amina primaria.

El bismuto se utiliza para revelar fosfolípidos que contienen colina. Aparecen 3 manchas de color naranja. La primera corresponde a LFC, la segunda a la EM (formada por fosforilcolina y ceramida) y la última a FC.

El yodo revela a los lípidos que en su estructura tienen dobles enlaces, donde se adiciona para dar una coloración café. En la placa aparecen 6 manchas siguiente ordeny de menorneutros a mayory Rf: LFC, en EM,el FS, FC, FEA lípidos colesterol.

Discusión Conclusión

El molibdato revela fosfolípidos en general al reaccionar con el grupo fosfato, por lo que se obtuvieron 5 manchas de color azul rey que corresponden a LFC, EM, FS, FC y FEA. Se

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observa una asexta mancha quey no tiene color corresponde lípidos neutros colesterol. Estay ausencia de color es debido a que éstos no poseen un grupo fosfato, es decir, no son fosfolípidos y por lo tanto el molibdato no los revela.

Determinamos por medio de la cromatografía en placa fina que la yema de huevo de gallina contiene los siguientes fosfolípidos: Lisofosfatidilcolina Esfingomielina Fosfatidilserina Fosfatidilcolina Fosfatidiletanolamina Lípidos neutros y colesterol

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Bibliografía

La ninhidrina revela fosfolípidos que contienen grupos amino libres. Se observan 2 manchas de color violeta: una de FS que en su estructura está el aminoácido serina con una amina primaria, y FEA, el cual está compuesto, entre otras

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Cervantes, M., Hernández, M., “Biología general”, 3ª Ed. Patria, pp. 70-73, (2015).

-

Macarulla, J., Marino, A., “Bioquímica cuantitativa”, Ed. Reverté, pp. 133 -137,

(1988).

 

-

Peña, A. D., Arroyo, Á. B., Gómez, A. P., Tapia, R. I., “Bioquímica”, Ed. Limusa, pp.

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105-119, (2004). Teijón, J. M.,

“Fundamentos de bioquímica estructural”, 2ª Ed. Tébar, pp.

345-348, (2006). Preguntas extra

1. a) b) c) d) e)

¿Cómo será el perfil cuando de fosfolípidos de los siguientes extractos se comparan con el de yema de huevo de gallina? Gorrión Pato Avestruz Tiranosaurio Rex Cerebro de ratón

R= Evolutivamente las aves provienen de los dinosaurios, por lo tanto, el perfil cromatográfico de todas las aves y del dinosaurio será igual al de la gallina, que contiene lisofosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidilserina, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, algunos lípidos neutros, colesterol y triacilglicéridos, en diferente cantidad según sea el tamaño del ave. En el caso del cerebro de ratón el perfil de fosfolípidos es la fosfatidilcolina, fosfatidil serina, fosfatidiletanolamina, esfingomielina y el fosfatidilinositol que es característico en los mamíferos (rata), en comparación con la yema de huevo de gallina la cual no tiene fosfatidilinositol pero si lisofosfatidilcolina y los demás fosfolípidos.

2.

Escriba las estructuras químicas de los fosfolípidos identificados, así como del ácido fosfatídico.