SEMINARIO 5 6 7 8

Seminario N°5

Paciente de 26 años, sexo masculino. Acude a consulta porque ha tenido náuseas y vómitos, a lo que se añade diarrea acuosa no sanguinolenta, que inició de forma gradual y que ha ido empeorando. Nota un aumento de temperatura y dolor de cabeza intenso, además de mialgias. Hace 2 días acudió a una reunión y comió pollo a la  brasa con ensaladas ensaladas y aderezo (mayonesa) Al examen físico: Paciente adelgazado. Temperatura: 39º C, frecuencia cardiaca (FC): 84/min, frecuencia respiratoria (FR): 20/min. Deposiciones sin sangre y sin moco. 1. Señale agentes bacterianos más frecuentes que causan diarrea.

Los agentes bacterianos más frecuentes son: a. Gastroenteritis bacteriana:  Es una inflamación del estómago e intestinos causada por bacterias.  b. Escherichia coli:  La Escherichia coli está dividida por sus propiedades virulentas,  virulentas,  pudiendo causar diarrea en humanos y otros animales. Otras cepas causan c ausan diarreas hemorrágicas diarreas hemorrágicas por  por virtud virtud de su agresividad,  patogenicidad y toxicidad. c. Campylobacter jejuni  Provoca infecciones intestinales usualmente de origen zoonótico. origen zoonótico. El  El cuadro clínico se manifiesta  por una una diarrea  diarrea aguda, que puede o no ir acompañada de vómitos, de vómitos, dolor  dolor abdominal, dolor de cabeza y malestar general. El período de incubación es de 1 a 10 días, el cuadro clínico es autolimitado y dura entre 2 a 5 días. d. Salmonela Shigella  Produce salmonelosis Produce salmonelosis con un periódo de incubación de entre 5 horas y 5 días, diarrea días, diarrea y dolor abdominal. A través de las heces (excremento) del enfermo se elimina un gran número de esta  bacteria y se observa fiebre entérica con un periodo de incubación incubación de 7 a 28 días, causante de dolor de dolor de cabeza, fiebre, cabeza, fiebre, dolor  dolor abdominal y diarrea, erupción máculo-papulosa en pecho en pecho y espalda. Los  espalda. Los enfermos presentan un período de convalecencia entre 1 y 8 semanas y las personas curadas eliminan Salmonella. También puede ocasionar fiebres entéricas o infección intestinal por intoxicación con algunos alimentos. e. Yersinia.  La yersiniosis es la enfermedad infecciosa causada por las Yersinia, comúnmente por Y. enterocolitica, y frecuente en niños. La infección rara vez causa síntomas causa síntomas en adultos, en niños  pueden causar  fiebre, dolor  fiebre, dolor abdominal y diarrea, y diarrea, a  a veces hemorrágica. veces hemorrágica. 2. ¿Cuáles son las características morfológicas y fisiológicas de las enterobacterias? 

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Las características morfológicas son:  Las enterobacterias de la familia Enterobacteriaceae son bacilos gramnegativos comúnmente móviles mediante flagelos perítricos a excepción hecha del género Klebsiella y Shigella que son siempre inmóviles. Poseen pili comunes. Son organismos no esporulados y no capsulados a excepción de las especies del género Klepsiella, que si son capsuladas, y de E. coli que puede adquirir la cápsula. Las características fisiológicas son: 

La familia “enterobacteriaceae” son organismos quimiorganótrofos, anaerobios facultativos de

metabolismo fermentativo y no exigentes nutricionalmente, creciendo en medios de cultivos ordinarios. Son catalasa y nitrasa positivos y oxidasa negativos.

3. ¿Cuáles son los factores de virulencia de las enterobacterias? ¿Qué efecto producen en el humano? 

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Los factores de virulencia son a. Adherencia a células intestinales y a células cultivadas  b. Capacidad de INAVADIR y REPRODUCIRSE del citoplasma, destruyendo a la célula hospedera. c. Elaborar Citotoxinas d. Poros en las cilias del intestino delgado e. Pilis pequeños f. Flagelos g. Sideróforos Muchas de estas bacterias son patógenas y causa de infección oportunista, otras son descomponedoras que viven en la materia orgánica muerta o viven en el ser humano como parte de una  población microbiana normal. Algunas enterobacterias patógenas causan principalmente infección del tracto urinario y del tracto respiratorio.

4. ¿Cuál es el reservorio y mecanismo de transmisión de Salmonella? 

El mecanismo de transmisión es por el consumo de alimentos contaminados (aves, huevos y productos lácteos) y transmisión directa fecal-oral en los niños. El principal reservorio de Salmonella son las aves de corral, el ganado vacuno y el porcino; por lo tanto, son fuentes de infección importantes las carnes de estos animales y los huevos. En el caso de S. typhi y S. paratyphi son patógenos humanos estrictos.

5. Enumere las especies de Salmonella que son nocivas para los humanos. ¿Qué enfermedades causan? 

Las especies nocivas son: a. Gastroenteritis  Forma más frecuente de salmonelosis causada por Salmonella Enteritidis.  b. Septicemia  Causada por todas las especies de salmonella, aunque las infecciones por S. choleraesuis, S.  paratyphi y S. typhi son las que mayor frecuencia la producen. c. Fiebre entérica o más conocida por fiebre tifoidea  Causada por la S. typhi. Una forma leve de esta enfermedad, la fiebre paratifoidea: se produce  por S. paratyphi A, Salmonella schottmuelleri (anteriormente conocida como S. paratyphi B) y Salmonella hirschlfeldi (conocida antes como S. paratyphi C). d. Colonización asintomática  Las especies de Salmonella responsables de producir la fiebre tifoidea y paratifoidea se mantienen  por la colonización del ser humano.

6. Mencione los métodos bacteriológicos que se emplean para el aislamiento de Salmonella 

Los aislamientos de Salmonella se conservan: a. En agar semisólido: (caldo nutritivo adicionado de agar al 0,8%) en viales de vidrio o de plástico, con cierre hermético. La cepa se siembra por punción, se incuba a 37ºC durante 18-24 horas. Los viales se almacenan a temperatura ambiente.  b. A - 70ºC en caldo-glicerol: La cepa se siembra en caldo tripticasa de soya y se incuba a 37ºC durante 3 a 4 horas, a fin de que alcance la fase logarítmica de crecimiento. En criotubos se coloca 400 µl de glicerol estéril y se agrega 1000 µl del cultivo bacteriano. Se co nserva en congeladora a –  70ºC. Para ser utilizada para distintos propósitos se toma una porción de la suspensión congelada con un palillo de madera y se subcultiva en un medio sólido o líquido.

7. Enumere las especies de E. coli que son nocivas para los humanos. 

Las especies nocivas son: a. E. coli enterotoxígena (ECET)  b. E. coli enteropatógena (ECEP) c. E. coli enteroagregativa (ECEA) d. E. coli enterohemorrágica (ECEH) e. E. coli enteroinvasiva (ECEI).

8. ¿Cómo actúan las toxinas de E. coli enterotoxigénica?  

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Coloniza el intestino delgado. Posee fimbrias que le permiten adherirse fuertemente y suministrar la toxina al epitelio. Produce 2 toxinas, una termolábil (TL) y otra termoestable (TE), o ambas a la vez. Las toxinas actúan al desencadenar el sistema adenilciclasa y aumentar la secreción de agua y electrólitos,  pero sin producir lesión ni destrucción celular. La toxina TL está relacionada de forma funcional, inmunológica y estructural con la toxina del cólera. LT es funcional y estructural mente semejante a la toxina del cólera, esta toxina está formada por una subunidad A y por cinco subunidades B idénticas. Las subunidades B se unen a receptores iguales a la del cólera, así como a otras glucoproteínas de superficie en las células epiteliales del intestino delgado. Después de la endocitosis, la subunidad A de LT-I se transloca por la membrana de a vacuola, la subunidad A tiene actividad difosfato adenosina (ADP)-ribosiltransferasa e interacciona con una proteína de membrana (Gs) que regula adenil ciclasa. E l resultado es el aumento de las concentraciones de monofosfato de adenosina cíclico (AMPc), con un incremento de la secreción de cloro y disminución de la absorción de cloro y sodio, que se manifiesta con diarrea acuosa. También la toxina estimula la secreción prostaglandinas y citosinas inflamatorias. La toxina ST está relacionada con ciertas cepas de E. coli de Yersinia. El daño que produce es esencialmente funcional. La ST es una toxina pequeña y monomérica que se une al receptor de transmembrana de la guanilato ciclasa, lo que provoca el aumento de las concentraciones guanosina monofosfato ciclasa (GMPc) y la posterior hipersecreción de líquidos.

9. Explique el mecanismo por el que E. coli causa infección del tracto urinario.

10. ¿Cuáles son las especies de Shigella que causan infección en el ser humano? Explique los factores de virulencia de esta bacteria. 

De acuerdo con su antígeno O, el género se divide en cuatro grupos o especies que, a su vez, abarcan 43 serotipos (42, de acuerdo a algunos autores). La estructura antigénica de Shigella  se caracteriza por  presentar

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antígeno

somático

“O”

y

pueden

o

no

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antígeno

K.

Cada serogrupo puede subdividirse en tipos, sobre la base de variantes del antígeno O, y estos serotipos se designan mediante números arábigos. Shigella dysenteriae se puede dividir en 1, 2, 3, 4, 5 siendo el 1 el más patógeno. Todas las especies poseen una exotoxina, en mayor cantidad Shigella dysenteriae 1. Se caracteriza porque produce acción citotoxica, entetoxica y neurotoxica. Factores de virulencia.  Shigella se adhiere a las células HeLa (línea celular de cáncer cérvico-uterino humano), provoca que estas lo internalicen en su citoplasma y escapa del fagosoma para reproducirse en el citoplasma eucarionte. Posteriormente, se disemina a células vecinas, sin entrar en contacto con el medio extracelular.  Plásmido de virulencia. Este plásmido de 220 kb es esencial en el proceso de invasión; las cepas que carecen de él son incapaces de promover su internalización, y cuando es transferido experimentalmente a otras especies, se obtienen cepas transformadas capaces de ingresar a las células HeLa. A este respecto, el plásmido de virulencia es fundamental en las siguientes funciones bacterianas: Producción de adhesinas e invasinas. Diseminación intercelular de la bacteria. Secreción de diversos factores de virulencia.  La región plasmídica que determina la entrada bacteriana a la célula hospedadora codifica para la síntesis de las proteínas Ipa (Invasion Plasmid Antigens), de su chaperón molecular IpgC y un sistema de secreción de las Ipa, conocido como Mxi-Spa (Membrane excretion of Ipa and surface presentation of Ipa). Las proteínas IpaA, IpaB, IpaC e IpaD son indispensables para la adherencia e invasión de Shigella; IpaD funciona como la adhesina primaria, en tanto que IpaB e IpaC actúan como invasinas, solamente se detectan en el medio extracelular después del contacto entre la bacteria y la célula epitelial, y ambas conforman un complejo extracelular que promueve la internalización bacteriana. Por lo que se refiere al MxiSpa corresponde a un clásico sistema de secreción proteica tipo III y manifiesta su relevante función hasta que han interactuado las superficies del bacilo y de la célula hospedera; además, incluye la participación de IpgC, para estabilizar a IpaB e impedir que ésta interactúe con IpaC en el citoplasma bacteriano, ya que ello impediría el traslado y la exportación de ambas moléculas.   

1. Cuáles son las características morfológicas de Helicobacter Pylori?

El Helicobacter pylori es un bacilo Gram negativo, en el estomago es corto espiralado o en forma de "S", de 2.5 a 5.0 micras de ancho, en los cultivos son menos espirales y aparecen mas como bacilos curvados. Presentan de 4 a 6 flagelos polares envainados de 30 a 2.5 nanómetros y presenta una característica terminación conformando un bulbo, cada flagelo está insertado en el cuerpo bacteriano mediante un disco amplio de 90 nanómetros. La vaina protege al flagelo de la despolimerización del ácido gástrico. Helicobacter pylori (Hp) existe en dos formas: una forma espiral cultivable y una forma cocoide. Ambas pueden encontrarse en el estómago y en el duodeno, aunque la mayoría presentan la morfología bacilar espiral. La forma cocoide prácticamente no se adhiere a las células epiteliales y, además, tampoco es capaz de inducir la producción de interleucina 8 (I). 2. Cuáles son las características fisiológicas y estructurales de H. pylori? Cómo se clasifican las especies de H. pylori?   

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Es microaerófila (requiere oxígeno pero a más bajas concentraciones de las encontradas en la atmósfera) Usa hidrógeno y metanogénesis como fuente de energía. Además es oxidasa y catalasa positiva. Con su flagelo y su forma espiral, la bacteria "taladra" literalmente la capa de mucus del estómago, y después puede quedarse suspendida en la mucosa gástrica o adherirse a células epiteliales ya que produce adhesinas, (que son proteínas fijantes). H. pylori produce una enzima llamada "Ureasa" que transforma la urea en amoniaco y en dióxido de carbono. Y es el amoniaco que va neutralizar parcialmente la acidez gástrica (que sirve para disolver los alimentos y matar la mayor parte de bacterias digeridas). Lamentablemente el amoniaco es tóxico y va a maltratar la superficie de las células epitelial es y provocar el proceso de formación de las úlceras. REINO: Monera o Bacteria. FILO: Proteobacteria. CLASE: Épsilon Proteobacteria. ORDEN: Campylobacterales. FAMILIA: Helicobacteraceae. GÉNERO: Helicobacter. ESPECIE: Helicobacter pylori.

3. Cuál es el reservorio y la vía de transmisión de la bacteria.

Su principal reservorio es el hombre y la vía más importante de transmisión parece ser la fecal-oral por contaminación de las aguas de consumo. Le sigue en importancia la oral-oral. El hábitat específico del H pylori es la mucosa gástrica del hombre, aunque otros reservorios animales y algún tipo de transmisión zoonótica es una  posibilidad que ha de tenerse en cuenta. Se ha detectado la bacteria en primates, en cerdos y en gatos domésticos,  pero no se tiene evidencia de que estos animales sean fuente de contagio para el hombre. 4. Mencione los factores de virulencia de H. pylori.

Factores de virulencia tales como: a) la actividad de ureasa que promueve la liberación de amonia la cual puede inducir daño en el epitelio gástrico.  b) adhesinas bacterianas que son fundamentales para el proceso de colonización; c) hemaglutininas las cuales inducen auto-anticuerpos debido a su similaridad bioquímica con antígenos presentes en los grupos sanguíneos. d) presencia del gen asociado a la vacuolización (vacA) y del gen asociado a la citotoxicidad (cagA) que correlaciona con cepas virulentas que exhiben actividad de citotóxica. e) Lipopolisacárido.

5. Señale cuáles son los factores patogénicos que facilitan la colonización inicial por H. pylori .

Proteínas de membrana externa (OMPs): La adherencia de H. pylori a la mucosa gástrica es considerada de gran importancia en la colonización inicial así como en la persistencia de este patógeno en el estómago humano. El análisis sistemático de los genomas de las cepas secuenciadas de H. pylori ha confirmado la existencia de 5 grandes familias de OMPs que comprenden 4 % del genoma de la bacteria. Varios miembros de esta familia de  proteínas, como: la proteína de adhesión a los antígenos de Lewis B (BabA), la proteína inflamatoria de membrana externa (OipA), la adhesina de unión a ácido siálico (SabA), la lipoproteína asociada a la adherencia (AlpA y AlpB), y HopZ, funcionan como factores de adherencia y median el tropismo de H. pylori por el tejido gástrico. 6. Mencione 3 características epidemiológicas de esta bacteria.

Las condiciones socioeconómicas y ambientales que son más desfavorables condicionan la aparente diferencia de prevalencia. En personas de nivel socioeconómico alto, las mujeres tienen una tasa de infección menor que los hombres. A nivel mundial, se ha establecido que en los países desarrollados el 50% de los pacientes con síntomas del tracto gastrointestinal superior son portadores de esta bacteria y un 80% en los países en vías de desarrollo. 7. Cuáles son las tinciones que se utilizan para identificar H. pylori? Qué tipo de muestra se emplea en este caso.

Se han utilizado diferentes tinciones como la de Gram, Gram modificada o bien el examen en fresco utilizando un microscopio con contraste de fases. Otras tinciones son útiles, además de para determinar el diagnóstico de la infección, para conocer el grado de patología gástrica. Entre ellas destacan las tinciones de Giemsa, carbolfuchina, Genta, la tinción triple de carbolfuchina/azul de Alcina/hematoxilina-eosina y tinciones de inmunohistoquímica. 8. Cuál es la importancia de la prueba de ureasa? Cómo se realiza?

La prueba rápida de la ureasa es una técnica cualitativa que determina la actividad de la enzima ureasa en una  pequeña muestra de mucosa gástrica, dicha prueba es universalmente empleada para detectar la presencia de este microorganismo. Se realiza colocando la pieza de biopsia en un tubo con urea que además contiene un indicador de cambio de pH. Si la muestra presenta actividad ureásica, se hidroliza la urea y se forman iones de amonio, los cuales aumentan el pH de la solución, produciendo el cambio de color. La sensibilidad de la prueba se ve afectada en los pacientes que han recibido tratamiento con antibióticos 9. Mencione las características del medio de cultivo necesarias para el crecimiento de H. P ylori.

El Helicobacter pylori es una bacteria muy exigente y para su crecimiento en medios de cultivo necesita una atmósfera adecuada, microaerofílica, con una baja concentración de oxígeno y presencia de CO2 de 5 - 10%, así como una humedad de 70 - 90%. Se recomienda el uso de estufas de CO2 que permite mantener una temperatura entre 35 a 37 °C o utilizar jarras de anaerobiosis para el crecimiento del bacilo. Tiene otras dos enzimas muy útiles  para su identificación cuando crece en medios de cultivo que son la oxidasa y la catalasa. Los medios de cultivo utilizados deben ser ricos en nutrientes y deben contener sangre de carnero, caballo o humana o productos derivados de la sangre; por lo que el medio más adecuado es el de Skirrow. 10. Mencione las enfermedades asociadas a H. Pylori

En pacientes con úlceras gástricas en donde se detecta H. pylori, el procedimiento habitual es erradicarlo hasta que la úlcera sane. El cáncer gástrico y el linfoma de MALT (linfoma de la mucosa asociada al tejido linfoide) han sido relacionados con H. pylori (pero aún sigue en investigación)

Seminario N°7

Paciente de sexo masculino de 18 años, sin antecedentes de importancia Hace 24 horas empieza a sentirse mal, decaído, “sin fuerzas”, con dolor muscular, falta de apetito y dolor de cabeza intenso y nota “manchitas moradas” en todo el cuerpo que “se unen”.

Al examinarlo se observan máculas violáceas en varias partes del cuerpo pero sobretodo en manos y pies. Paciente está somnoliento, pero alerta al llamado. No hay fiebre. Al poco tiempo de estar en la Emergencia el paciente empeora: temperatura 38.9 ° C, aumento del número de las lesiones y se evidencia rigidez de nuca. 1. Mencione las características morfológicas del género Neisseria. 

Las especies Neisseria son bacterias gram negativas aerobias de diámetro comprendido entre 0,6-1µm y que se disponen en parejas (diplococos) cuyos lados adyacentes se aplanan para adoptar una morfología semejante a la de un gramo de café. Las bacterias son inmóviles y no forman endosporas. Todas las especies son oxidasa-positiva y casi todas sintetizan catalasa; propiedades que, junto a la morfología de la tinción de Gram, hacen posible la identificación rápida de sospecha de una cepa clínica. Generan ácidos  por oxidación de carbohidratos (No por fermentación).

2. ¿Cuáles son las especies del género Neisseria qué son patógenas para el ser humano? 

El género Neisseria engloba 10 especies detectadas en el ser humano, dos de las cuales son patógenas estrictas del ser humano: a.  Neisseria gonorrhoeae  Sus factores de virulencia son la Pilina, proteína I, II y III, proteínas que se unen a transferrina,  proteínas que se unen a hemoglobina, LOS, proteasa de IgA1 y la B-lactamasa.  b.  Neisseria meningitidis  El principal factor de virulencia es el polisacárido de la capsula.

3. Explique la función de las estructuras de superficie de la bacteria. 

Las estructuras de la superficie son: a. Pilina  Permiten adhesión inicial a las células humanas no ciliadas  b. Proteína POR (Proteína I)  Permite la supervivencia intracelular, al evadir la fusión de los fagolisosomas en los neutrófilos c. Proteína OPA (Proteína II)  Permite la adhesión firme a las células eucariotas d. Proteína RMP (Proteína III)  Permite la protección de los antígenos frente a los anticuerpos bactericidas e. Proteínas que se unen a Transferrina  Permiten la adquisición de Hierro para el metabolismo bacteriano f. Proteínas que se unen Lactoferrina  Permiten la adquisición de Hierro para el metabolismo bacteriano g. Proteínas que se unen a la Hemoglobina  Permiten la adquisición de Hierro para el metabolismo bacteriano h. Lipooligosacárido (LOS)  De actividad endotóxica i. Proteasas de IgA1  Permite la destrucción de la Inmunoglobulina A1  j. Beta Lactamasa  Permite la hidrolización del anillo beta lactámico de la penicilina

4. ¿Cuáles son las características del crecimiento de Neisseria y en qué medio de cultivo se desarrollan? 

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La temperatura adecuada para el crecimiento de este microorganismo oscila entre los 35°C a 37°C; se debe evitar la desecación y presencia de ácidos grasos; requerimientos de cistina y una fuente de energía; se debe añadir aminoácidos, purinas, pirimidinas, vitaminas y almidón soluble, este último inhibe el efecto tóxico de los ácidos grasos; y por último un requerimiento de presencia de dióxido de carbono al 5%. Se pueden desarrollar tanto en medios selectivos (Medio de Thayer Martin modificado), ya que inhiben los microorganismos contaminantes; como en medios no selectivos (Agar Chocolate), ya que algunas cepas de la Neisseria son inhibidas por la Vancomicina p resente en los medios selectivo.

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5. ¿Cuál es el reservorio y la puerta de entrada de N. meningitidis? 

La transmisión de N. meningitidis se realiza por contacto de persona a persona, o por la inhalación de gotas respiratorias que contienen meningococos.1, 2, 7 Al no sobrevivir en el ambiente y no tener un reservorio en animales, el hombre constituye su única posibilidad de sobrevivir y propagarse. El contacto es usualmente con un enfermo o un portador asintomático que aloja a la bacteria en la nasofaringe y que la transmite por gotas respiratorias o secreciones orales. Neisseria meningitidis es susceptible a cambios de temperatura y a la desecación y, por lo tanto, la infección no se transmite por fómites. Los actos de toser o estornudar contribuyen al mecanismo de transmisión,1,2 por lo que no resulta sorpresivo que la tasa de colonización puede ser mayor a 50% en escuelas, internados, o en cuarteles militares, especialmente durante periodos asociados a un incremento en infecciones virales del tracto respiratorio superior.

6. ¿Cuál es la prueba de laboratorio que se emplea para identificar a N. meningitidis? ¿Qué muestras deben recolectarse? |  Directos a. Muestras  –   LCR hemocultivo b. Cultivos- poner el microorganismo en un medio mixto se

 puede identificar mediante la tinción Gram y la prueba de oxidasa. c. Frotis- la tinción de Gram con el líquido cefalorraquídeo centrifugado o en material aspirado de las petequias. d. Serología- Los anticuerpos a polisacáridos meningococos pueden medirse mediante pruebas de aglutacion con perlitas de látex o hemoaglutinación o por su activación bacteriana. 7. ¿Cuáles son las enfermedades causadas por N. gonorrhoeae? 

Las enfermedades más comunes que causa son: a. Gonorrea  Caracterizada por secreción purulenta en la localización afectada (p.ej; uretra, cuello del útero, epidídimo, próstata, ano) tras un periodo de incubación de 2-5dias.  b. Gonococemia  Es una enfermedad de transmisión sexual causada por la bacteria Neisseria gonorrhoeae, la cual se disemina desde el sitio inicial de infección a través del torrente sanguíneo hacia otros órganos del cuerpo. c. Infecciones diseminadas  Diseminación de la infección desde el aparato urinario a través de la sangre hasta la piel o las articulaciones; se caracteriza por exantema pustular con base eritematosa y artritis supurativa en las articulaciones afectadas. d. Oftalmia neonatal  Infección ocular purulenta adquirida por el neonato durante el nacimiento.

8. ¿Cuáles son los exámenes de laboratorio que se utilizan para identificar a N. gonorrhoeae? 

Los exámenes a realizar son: a. Directo  Tinción de Gram en muestras uretrales es precisa solo en hombre, nuevos métodos de diagnóstico rápido (inmunofluorescencia directa con anticuerpos monoclonales, ELISA, sondas de ADN y PCR).  b. Cultivo y aislamiento  En medios selectivos como agar de chocolate y otros medios de cultivo enriquecido con un atmosfera con dióxido de carbono al 5%. c. Identificación  Pruebas bioquímicas o técnicas serológicas (IF directa, ELISA, coaglutinación).