RISALAH MIKROBIOLOGI

Risalah Mikrobiologi

Lab Mikrobiologi FK UNS

1

Risalah Mikrobiologi

RISALAH MIKROBIOLOGI EDISI PERTAMA

Ibnu Kharisman Rizky Saraswati Indraputri Annisa Pertiwi Silvia Imnatika Fitchi Ichsani Dewantari Saputri Assaduddien Faras

Asisten Mikrobiologi FK UNS 2010

Lab Mikrobiologi FK UNS

2

Risalah Mikrobiologi DAFTAR ISI Halaman Judul…………………………..………….…………. Daftar isi………………………………………………………... BAB I – Blok Infeksi Tropis………………………...……...

1 3 5 Pengenalan alat………………………………..……... 5 Sterilisasi desinfeksi…………………………………. 11 Prosedur sampling…………………………………… 15 Media penyubur……………………………………... 23 Media transport……………………………………… 25 Media kaya………………………………...………… 26 Media uji sensitivitas………………………………… 29 Uji sensitivitas……………………...………………... 30 Antibiotik…………………………………………. 31 Media isolasi…………………...…………………….. 33 BAB II – Blok Respirasi….………………...................……... 42 Pewarnaan Sederhana………………………………… 42 Pewarnaan Diferensial………………………………... 42 Pewarnaan Khusus……………………………………. 42 Pengecatan Gram…………………………………….. 42 Pewarnaan Tahan Asam (BTA)…………………….. 44 BAB III – Blok Gastrointestinal...……………………….…. 47 Organisme infeksi pada saluran pencernaan………… 47 Eschericia coli…………………………………….. 47 Shigella sp………………………………………… 51 Salmonella sp…………………………………….... 56 Kleibsella sp……………………………………….. 58 Media identifikasi…………………………………….. 59 Media MacConkey…................................................ 59 Media Eosin Methylene Blue (EMB)……………... 60 Media Urea Agar….................................................. 62 Triple Sugar Iron Agar (TSIA)……………………. 63 Media Simon Citrat………………………………... 66 Sulfide Indol Motility……………………………..... 66 BAB IV – Blok Urogenital……...…………………................ 70 Teknik sampling urin..................................................... 70 Lab Mikrobiologi FK UNS

3

Risalah Mikrobiologi

BAB V

Infeksi saluran kemih…………………………………. 73 Bakteri penyebab ISK.................................................... 75 Neisseria gonorrhoeae……………………………... 75 Chlamydia trachomatis…………………………….. 76 Gardnerella vaginalis………………………………. 80 Treponema pallidum……………………………….. 82 Proteus sp. …………………………………………. 83 – Blok Kulit……………………………................... 85 Staphylococcus sp…………………….………………. 85 Streptococcus sp………………………………………. 89

Lab Mikrobiologi FK UNS

4

BAB I

Risalah Mikrobiologi BLOK INFEKSI TROPIS

Pengenalan Alat 1. Tabung A. Durham -

Fungsi : sebagai penangkap gas hasil fermentasi gula-gula Digunakan pada media : LDS (Lactose Single Strain) LDS (Lactose Double Strain) BGLB (Brilliant Green Lactose Broth) Media Karbohidrat (Glukosa, Sukrosa, Laktosa, Maltosa) YANG KECIL DIDALAM, BUKAN YANG BESAR

B. Pembenihan - Bahan Gelas - Bentuk Silinder ujung bulat - Untuk media perbenihan cair/ semisolid C.

C. Screw Cap Fungsi : membiakkan virus dan bisa digunakan sebagai wadah media transport kuman enterik maupun nonenterik

Lab Mikrobiologi FK UNS

5

Risalah Mikrobiologi D. Centrifuge - Bahan gelas - Bentuk silinder ujung runcing - Untuk pereaksi/ sampel yang akan mengalami sentrifugasi sehingga didapatkan sedimentasi

E. Wasserman - Untuk pemerikasaan serologis diagnosis Sifilis

2. Labu A. Erlenmeyer -

Lab Mikrobiologi FK UNS

Bahan gelas Mulut berleher sempit Untuk menyimpan cairan steril

6

Risalah Mikrobiologi B. Becker Glass Bahan gelas Bentuk silinder garis lurus Untuk membuat larutan

3. Pipet A. Pasteur

B. Ukur

Fungsi untuk mengambil reagen/sampel bisa sampai dengan endapanya 4. Piring Petri - Untuk pembenihan kuman - Ada 3 ukuran : a. Kecil : diameter 5cm, untuk pembenihan jamur b. Sedang : diameter 10 cm, untuk pembenihan kuman c. Besar ; diameter 15 cm, untuk uji sensitivitas antibiotik

Lab Mikrobiologi FK UNS

7

Risalah Mikrobiologi 5. Oshe

Oshe kolong Oshe Kait Oshe Jarum

- Untuk pengambilan sampel, penggoresan sampel pada media pembenihan - Ada 3 jenis : a. Kolong: untuk media plate/ piring petri b. Kait : untuk mengambil koloni kuman c. Jarum : untuk media padat tegak 6. Autoclave

- Fungsi untuk sterilisasi panas basah bertekanan - Suhu 121˚ celcius selama 15 menit - Bakteri akan mengalami koagulasi protein, efeknya strelisasi menjadi lebih cepat

Lab Mikrobiologi FK UNS

8

Risalah Mikrobiologi 7. Hot Air Oven

- Untuk Sterilisasi panas kering secara tidak langsung - Suhu 175˚ C selama 90 menit - Bakteri akan mengalami oksidasi protein - Bahan yang dapat disterilkan : Pipet, piring petri, bahan dari gelas, dll

8. Anaerobic Jar - Untuk menumbuhkan kuman anaerob - Contoh kuman: Clostridium tetani, Bacilus fragilis - Bagian terdiri dari : Gas Generating kit, Indikator (misalnya phenol red yang apabila dalam keadaan anaerob, akan berubah dari merah menjadi biru), Katalisator palladium

9. Inkubator - Bahan baja, terdapat pengaturan suhu - Untuk inkubasi kuman

Lab Mikrobiologi FK UNS

9

Risalah Mikrobiologi 10. Quebec Colony Counter - Menghitung jumlah koloni kuman secara semi otomatis - Terdapat LUP, zona pembagian, display jumlah kuman, dan lampu

11. Penyudip

Spatel lidah Spreader Kapas Lidi

Spatel lidah : bahan plastik, bentuk panjang pipih, untuk fiksasi lidah pada pengambilan swab (apusan) tenggorok

Kapas lidi

Spreader : bahan kaca, untuk menyebarkan spesimen urin di media agar plate. Kapas lidi : lidi dengan ujung kapas steril, untuk swab spesimen.

Lab Mikrobiologi FK UNS

10

Risalah Mikrobiologi 12. Saringan udara (air filter)

- Alat khusus untuk menganalisa kontaminan udara (mikroorganisme di udara) - Menilai udara dengan kecepatan 100 L/menit. Alat ini akan menyaring udara dan menanamnya dalam cawan petri berukuran 100 mm

STERILISASI DESINFEKSI STERILISASI = proses destruksi/membunuh semua bentuk kehidupan mikroorganisme termasuk spora dan virus dengan cara mekanik, tekanan, maupun radiasi. DESINFEKSI = proses membunuh mikroorganisme pathogen dalam bentuk vegetatif (kecuali spora dan virus) yg dilakukan terhadap benda dengan bahan kimia. JENIS-JENIS STERILISASI 1. Fisik A. Panas 1) basah a. Tanpa Tekanan i. Pasteurisasi Cara sterilisasi bakteri patogen dan non patogen pada susu. Suhu yang digunakan pada pasteurisasi sekitar 670 C selama satu jam. Pasteurisasi pada susu dilakukan selama 3 hari berturut-turut pada waktu yang sama, suhu yang sama, dan lama pasteurisasi yang sama. ii. Boilling water Sterilisasi dalam air dengan suhu 100˚ C selama 10-15 menit.

Lab Mikrobiologi FK UNS

11

Risalah Mikrobiologi b. Tekanan Autoclave : sterilisasi dengan uap air dengan tekanan 1,5 atm, suhu 121˚C, selama 15 menit. Untuk membunuh bakteri dan spora. 2) Kering - Waktu lebih lama, suhu lebih tinggi - Dengan cara : a. Flamming (flambir) memanaskan alat dengan cara melewatkannya diatas api tanpa pemijaran (tidak sampai berpijar) fungsi : mensterilkan skalpel, pinset dan mulut tabung. b. Pembakaran (red heat/incineration) cara ini 100% efektif tetapi mempunyai keterbatasan fungsi : mensterilkan oshe, membakar bangkai binatang percobaan dan sampah medis. Alat : incinerator. c. Udara panas (hot air sterilization/Oven) Pemanasan oven dg suhu tinggi 160˚-180˚ C, 1 jam. Caranya: dengan memanaskan udara dalam oven dengan listrik atau gas. Fugsi : mensterilkan alat-alat dari kaca seperti cawan petri, pipet, tabung reaksi,erlemeyer, alat suntik, perban, dsb. B. Radiasi 1) Gamma ( Elektromagnetik ) Panjang gelombang < 1 nm  daya penetrasinya tinggi  bakteri vegetatif dan spora Fungsi : sterilisasi alat-alat farmasi, alat-alat disposable (sarung tangan, spuit, benang jahit, kateter, dll), vaksin dan makanan tahan lama 2) Ultraviolet Panjang gel 220-290 nm, paling efektif 260 nm  daya penetrasi rendah  tidak dapat digunakan pada material tertutup dan endospora. Fungsi : sterilisasi udara, ruangan perawatan dan ruang operasi.

Lab Mikrobiologi FK UNS

12

Risalah Mikrobiologi C. Mekanik/Filter Digunakan dengan metode filtrasi/penyaringan terutama untuk larutan yang rusak dengan pemanasan, contoh : serum dan enzim. Macam-macamnya : 1) Menyaring cairan Hai ini dapat dilakukan dengan berbagai filter seperti : a. Saringan Sietz : mempergunakan bahan asbestos sebagai alat penyaringnya. b. Berkefeld : mempergunakan filter terbuat dari tanah diatome. c. Chamberland : mempergunakan filter terbaru dari porselen. d. Fritted glass filter : mempergunakan filter terbuat dari serbuk gelas. e. Cellulose Asetat : pada industri minuman. Kelemahan : banyak filtrat tersisa pada saringan, virus lolos, hanya sekali pakai 2) Menyaring Udara Untuk menjaga udara tempat penyimpanan alat, agar alat (labu, tabung) yang sudah steril tidak tercemar oleh kuman, atau untuk menjaga agar suatu biakan kuman tidak tercemar oleh kuman lain, maka alat-alat tersebut harus ditutup dengan kapas yang mudah ditembus udara tetapi dapat menahan mikroorganisme. Untuk mencegah pencemaran oleh mikroorganisme udara pada waktu perbenihan, dapat menggunakan suatu alat yang disebut laminar flow bench dimana udara yang masuk ke dalamnya disaring terlebih dahulu dengan suatu saringan khusus. Menggunakan penyaring HIPA (High-Efficiency Particulate Air). Filter terdiri dari lipatan selulose asetat. D. Kimiawi 1. Alkohol - Paling efektif untuk sterilisasi dan desinfeksi - Mendenaturasi protein dengan jalan dehidrasi => membran sel rusak & enzim tdk aktif 2. Halogen - Mengoksidasi protein kuman 3. Yodium - Konsentrasi yg tepat tdk mengganggu kulit - Efektif terhadap berbagai protozoa 4. Klorin - Memiliki warna khas dan bau tajam

Lab Mikrobiologi FK UNS

13

Risalah Mikrobiologi - Desinfeksi ruangan, permukaan serta alat non bedah 5. Fenol (as. Karbol) - Mempresipitasi protein secara aktif, merusak membran sel, menurunkan tegangan permukaan - Standar pembanding untuk menentukan aktivitas suatu desinfektan 6. Peroksida (H2O2) - Efektif dan nontoksik - Molekulnya tidak stabil - Me-nonaktifkan enzim mikroba 7. Gas Etilen Oksida - Mensterilkan bahan yang terbuat dari plastik Efektivitas sterilisasi kimia dipengaruhi oleh: - konsentrasi - suhu - jumlah kuman - lama paparan - pH bahan kimia - Mudahnya kontak dengan mikroorganisme JENIS-JENIS DESINFEKSI - Disinfektan yang tidak berbahaya bagi permukaan tubuh dapat digunakan dan bahan ini dinamakan antiseptik. - Antiseptik adalah zat yang dapat menghambat atau menghancurkan mikroorganisme pada jaringan hidup, sedang desinfektan digunakan pada benda mati. Desinfektan dapat pula digunakan sebagai antiseptik atau sebaliknya tergantung dari toksisitasnya terhadap jaringan. Macam-macam desinfektan yang digunakan: 1. Alkohol (etil/propil alkohol) - Desinfeksi kulit - Alkohol yang dicampur dengan aldehid digunakan dalam bidang kedokteran gigi untuk desinfeksi permukaan gigi 2. Aldehid (Glutaraldehid) - Desinfektan yang kuat - Glutaraldehid 2% dapat dipakai untuk mendesinfeksi alat-alat yang tidak dapat disterilkan

Lab Mikrobiologi FK UNS

14

Risalah Mikrobiologi - Efektif terhadap bakteri vegetatif seperti M. tuberculosis, fungi, dan virus akan mati dalam waktu 10-20 menit, sedang spora baru mati setelah 10 jam. 3. Biguanid (Klorheksidin) - bidang kedokteran gigi sebagai antiseptik dan kontrol plak - zat ini sangat aktif terhadap bakteri gram (+) maupun gram (-) - efektivitasnya pada rongga mulut terutama disebabkan oleh absorpsinya pada hidroksiapatit dan salivary mucus. 4. Senyawa halogen - hipoklorit dan povidon-iodin adalah zat oksidasi dan melepaskan ion halida - murah dan efektif - menyebabkan karat pada logam dan cepat diinaktifkan oleh bahan organik (misalnya chloros, domestos, dan betadine). 5. Fenol - larutan jernih, tidak mengiritasi kulit dan dapat digunakan untuk membersihkan alat yang terkontaminasi oleh karena tidak dapat dirusak oleh zat organik - bersifat virusidal dan sporosidal yang lemah - sebagian besar bakteri dapat dibunuh oleh zat ini, banyak digunakan di rumah sakit dan laboratorium. 6. Klorsilenol - tidak mengiritasi - aktifitasnya rendah terhadap banyak bakteri dan penggunaannya terbatas sebagai desinfektan (misalnya Dettol).

PROSEDUR SAMPLING 1. Pengambilan Sampel Pengambilan sampel merupakan hal terpenting dalam mengidentifikasi bakteri penyebab penyakit. Dalam pelayanan pemeriksaan mikrobiologi, terdapat 3 fase, yaitu: pre analitik, analitik, dan post analitik. - Fase pre analatik merupakan fase dimana dimulainya pengambilan spesimen, pelabelan spesimen, pengisian lembar pemeriksaan, hingga pengiriman spesimen. - Fase analitik sendiri merupakan proses pengujian spesimen klinik, dimulai dari pewarnaan, kultur, identifikasi, atau uji sensivitas

Lab Mikrobiologi FK UNS

15

Risalah Mikrobiologi antibiotika. Bidang pemeriksaannya yaitu, bekteriologi, virologi, fungi, biologi molekuler, serologi. - Fase post analitik yaitu fase dimana hasil pemeriksaan mikrobiologi di analisis, penyimpanan spesimen, serta pelaporan dan kerja sama dengan tim pengendalian infeksi di rumah sakit serta dinas kesehatan setempat. Ada beberapa hal yang harus kita perhatikan dalam pengambilan sampel. Pertama harus meminimalkan kontaminasi. Hal kedua yang diperhatikan yaitu tepat dalam pemilihan waktu pengambilan. Ketiga, Jumlah specimen harus mencukupi untuk dilakukan kultur. Hal keempat yang harus diperhatikan yaitu gunakanlah kontainer yang sesuai. Kelima, diperhatikan yaitu sampel diambil sebelum pemberian antibiotik(ab). Keenam, sebelum dikirim diberi label dan dipastikan tidak bocor. Ketujuh, meminimalkan waktu pengiriman atau memaksimalkan penggunaan media transport. Kedelapan, dilakukan sesuai dengan aturan pengambilan spesimen. Terakhir, jenis spesimen yang diambil sesuai dengan jenis permintaan pemeriksaan. Pengambilan sampel harus memerhatikan poin-poin yang telah disebutkan diatas. Apabila ada sampel yang tidak sesuai dengan poinpoin diatas, maka pengambilan sampel pasien dapat ditolak. Kriteria penolakan spesimen, yaitu: A. Tidak dilabel dengan benar. B. Waktu penyimpanan atau pengiriman yang terlalu lama. C. Kontainer rusak atau tidak sesuai dengan jenis spesimen/pemeriksaan. D. Bukan sputum tetapi air liur. E. Pengambilan spesimen yang tidak sesuai dengan jenis pemeriksaan yang diminta. F. Swab kering. G. Dll. Prosedur sampling merupakan pemindahkan sampel atau kultur bakteri dari satu tempat ke tempat yang lain secara aseptis (terhindar dari kontaminasi). Prosedur sampling ada bermacam-macam yaitu:

Lab Mikrobiologi FK UNS

16

Risalah Mikrobiologi - Kultur darah yaitu pengambilan sampel yang spesimennya berupa darah. Indikasi dari kultur darah yaitu bakteriemia, septikemia, syok pasca operasi yang tidak jelas sebabnya, demam beberapa hari yang tidak jelas sebabnya, demam mengigil pada pasien dengan: infeksi luka bakar, ISK, infeksi jaringan yang progresif. Sepsis pasca operasi, cathether IV/intraarteri. Prioritas : urgen Teknik pengambilan: Pungsi vena (v.mediana cubiti) Jumlah : Dewasa 10-30 ml, anak 1-5 ml Wadah : vacutainer dengan anticoagulan Desinfeksi lokasi pungsi: Alkohol 70% & Betadine Pengiriman : 2 jam, suhu ruangan

Catatan: A. Kultur darah sebaiknya dilakukan sebelum terapi Ab B. Kultur darah diulang dengan mempertimbangkan diagnosis C. Jangan melakukan kultur darah lebih dari 3x24 jam, karena tidak meningkatkan hasil inokulasi D. Sampel bisa diambil dari beberapa lokasi untuk menghindari kontaminasi flora kulit E. Pikirkan kemungkinan infeksi anaerob dengan mengambil sampel dan mengirimkan didalam anaerobic bag. -

Kultur Urin Kultur yang mengambil urin sebagai spesimennya. Indikasi dari kultur urin, yaitu infeksi saluran kemih (ISK) dan sepsis. Prioritas : Rutin Wadah : Pot steril Desinfeksi : Sabun antiseptik Pengiriman : segera, Ice boxed

Lab Mikrobiologi FK UNS

17

Risalah Mikrobiologi Macam-macam teknik pengambilan sampel urin:

Gambar pengambilan sampel urin. Teknik yang digunakan yaitu Midstream flow, dengan jumlah 30-50 ml.

Gambar pengambilan sampel urin dengan teknik suprapubic punture. Jumlah yang diambil adalah 20 ml.

Lab Mikrobiologi FK UNS

18

Risalah Mikrobiologi Gambar pengambilan sampel urin dengan uretral catheter. Jumlah yang diambil yaitu 15 ml. Catatan dalam kultur urin: • Urine pagi hari sangat ideal untuk kultur, karena jumlah bakteri terbanyak didapatkan • Minimal jumlah urine 3-5 ml -

Kultur tulang/jaringan Indikasi : osteomielitis, TB tulang Prioritas : efektif Teknik Pengambilan : Biopsi, operasi Jumlah : beberapa serpih Wadah : tabung berisi medium cair steril/NaCl steril Desinfeksi : menurut protap OK Pengiriman : segera, suhu ruang

Gambar pengambilan sampel tulang/jaringan dengan teknik biopsy. Catatan kultur tulang/jaringan • Sertakan apusan dari lokasi pengambilan sampel pada gelas obyek untuk pemeriksaan mikroskopis

Lab Mikrobiologi FK UNS

19

Risalah Mikrobiologi •

Sertakan sampel darah untuk dilakukan kultur darah sebagai bahan konfirmasi hasil

- Kultur cairan sendi Indikasi : septik arthritis Prioritas : urgen Teknik pengambilan : pungsi intaarticular Jumlah : min 1 mL Wadah : tabung berisi medium cair steril Desinfeksi : alkohol 70% dan betadin Pengiriman : segera, suhu ruang -

Kultur LCS

Lab Mikrobiologi FK UNS

20

Risalah Mikrobiologi Indikasi Prioritas Teknik pengambilan Jumlah Wadah Desinfeksi Pengiriman -

Kultur luka Indikasi Prioritas Teknik jumlah Wadah Desinfeksi Pengiriman

: encephalitis, meningitis : urgen : lumbar puncture : 1 mL : tabung steril : alkohol 70% dan betadine : segera, suhu ruang

: komplikasi trauma, komplikasi pembedahan, infeksiinfeksi melalui kulit : rutin : swab (surface wound) dan aspirasi (deep wound) :: tabung berisi medium transport steril dan syringe steril dan anaerobic bag : alkohol 70% : dalam 24 jam, suhu ruang

Lab Mikrobiologi FK UNS

21

Risalah Mikrobiologi

Catatan kultur luka : • Kultur anaerob hanya dilakukan pada abses tertutup, untuk luka terbuka tidak dilakukan kultur anaerob • Selalu sertakan smear eksudat, untuk pemeriksaan mikroskopis pada kultur wound • Pastikan prosedur tindakan seluruhnya dilakukan dengan aseptik/steril untuk menghindari kontaminan • Jangan mengambil sampel pus di permukaan luka, harus dari dasar luka

Setelah sampel pasien diambil, saatnya untuk dilakukan penanganan spesimen. Hal-hal yang dilakukan, yaitu: • Pewarnaan Gram langsung.

Lab Mikrobiologi FK UNS

22

Risalah Mikrobiologi • • • • •

Kultur rutin dilakukan pada media : Agar darah, agar coklat dan MacConkey (kultur pada media lain disesuaikan dengan permintaan). Pewarnaan Gram dari koloni yang tumbuh. Identifikasi. Uji sensitivitas antibiotika. Uji lanjutan jika ada dugaan multi resisten (ESBLs, MRSA, MDR TB dll). MEDIA PENYUBUR

1. Alkaline peptone water Alkaline peptone water adalah media penyubur untuk spesies Vibrio sp. (mis. Vibrio cholerae dan Vibrio parahaemolyticus). Media cair pada suhu ruangan dan berwarna kuning. Komposisi media ini adalah protein dari jaringan hewan dan NaCl (sebagai pemelihara keseimbangan osmotik). Media ini digunakan untuk menyuburkan Vibrio sp. yang jumlahnya sedikit pada sampel sebelum di tanam di media selektif seperti TCBS agar. Diinkubasi selama 18-2 jam pada suhu 37˚C. media penyubur digunakan saat pasien dalam keadaan convalescent, pasien yang dicurigai asimptomatis, dan spesimen dari lingkungan. Vibrio sp. akan tumbuh dengan cepat 6-8 jam setelah inkubasi. Gambar : Alkaline peptone water steril.

2. Selenite cystine broth Selenite cystine broth adalah media selektif penyubur untuk Salmonella sp. dan beberapa strain shigella sp. pada sample feses, urin, dan alat kesehatan penting lainnya. Kandungan media ini adalah natrium fosfat, pepton, laktosa, natrium selenit, dan L-Cystein. Selenite cystine broth digunakan terutama untuk membatasi kurangnya sensitivitas yang disebabkan oleh media penyubur lainnya khususnya dalam produk makanan dengan komposisi materi organik seperti telur atau bubuk telur.

Lab Mikrobiologi FK UNS

23

Risalah Mikrobiologi Media ini direkomendasikan untuk mendeteksi salmonella pada keadaan non-akut ketika organisme hanya terdapat dalam jumlah kecil pada feses, dan untuk studi epidemiologi untuk mendeteksi salmonella dari pasien yang asimtomatis atau konvalesen. Media ini menghambat pembelahan bakteri seperti Coliform, tetapi mendukung Salmonella untuk tumbuh dengan mudah. Pepton yang tedapat pada media ini merupakan sumber nitrogen, vitamin, dan asam amino essensial untuk bakteri. Laktosa digunakan sebagai sumber karbohidrat, natrium selenit menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif dan hampir seluruh bakteri Gram negatif, kecuali Salmonella. L-Cystin berfungsi untuk menurunkan toksisitas natrium selenit dan sebagai tambahan adalah sulfur organik. Sejumlah 1-2 gr sampel ditanam di media ini berasal dari feses, sampel makanan atau materi padat lainnya. Inokulasi dan inkubasi pada suhu 35 ± 2˚C selama 18-24 jam.

MacConkey MacConkey adalah media isolasi bakteri Gram negatif dan juga sebagai media diferensiasi (pembeda) fermentasi laktosa terutama untuk keluarga enterobacteriae dan genus pseudomonas. Adanya kristal violet dan garam empedu menyebabkan Gram positif tidak bisa tumbuh dikarenakan keduanya dapat merusak membran bakteri Gram postif. mengandung pepton, laktosa, dan NaCl.

Lab Mikrobiologi FK UNS

24

Risalah Mikrobiologi Bakteri yang memfermentasi laktosa akan menyebabkan suasana dalam media menjadi asam dengan menurunnya pH sehingga menyebabkan koloni kuman berwarna merah. Untuk bakteri yang memfermentasi kuat laktosa koloninya akan dikelilingi lingkaran warna merah muda dan yang lemah tidak dikelilingi lingkaran merah muda. Bakteri yang tidak memfermentasi laktosa tidak akan menghasilkan reaksi apapun (netral) sehingga koloni akan berwarna putih. Dari ini dapat disimpulkan bahwa bakteri yang memfermentasi laktosa bersifat non-patogen dan yang tidak memfermentasi laktosa bersifat patogen.

Gambar : agar Mac Conkey dengan bakteri yang mampu memfermentasikan laktosa (kanan) dan tidak memfermentasikan laktosa (kiri). MEDIA TRANSPORT Media transport adalah media untuk menaruh bakteri dan melindungi bakteri agar tetap hidup ketika pemeriksaan harus ditunda. Biasanya penundaan dilakukan untuk mengirim spesimen dari suatu tempat ke laboratorium mikrobiologi. 1. Carry and Blair Medium ini adalah modifikasi dari medium Stuart. Perbedaannya ada pada improvisasi system buffer dengan mengganti sodium glycerophosphate dengan inorganic phosphates. Formulasi ini digunakan untuk meningkatkan pertumbuhan Enterobacteriaceae dan untuk mempertahankan Salmonella dan Shigella dalam waktu yang lama. Media ini memiliki potensi oksidasi/reduksi rendah, yang menjamin kelangsungan hidup bakteri untuk jangka waktu yang lama. Medium ini memiliki kandungan nutrisi yang rendah dan buffer fosfat,

Lab Mikrobiologi FK UNS

25

Risalah Mikrobiologi bersama dengan Sodium thioglycollate, yang menghambat pertumbuhan besar strain seperti Escherichia coli dan Klebsiella aerogenes. Agar NO2 adalah agen memperkuat. Karena pH tinggi, Carry-Blair dikatkan sangat baik untuk studi epidemiologi dari Vibrio parahemolyticus. Panjang waktu pemulihan telah dilaporkan untuk Salmonella dan Shigellae (49 hari). Dan medium ini untuk bakteri Gram negatif. Pada praktek klinis, sering digunakan untuk rectal swab. 2. Amies Medium ini digunakan untuk memastikan pemeliharaan mikroorganisme tidak berlebihan. Medium ini inorganic buffer dan biasa digunakan untuk bakteri Gram negatif. Pada praktek klinis, sering digunakan untuk nasopharyngeal swab. 3. Stuart Medium ini mengandung kalsium klorida bersama dengan sodium Glycerophosphate yang bertindak sebagai agen penyangga/ buffer yang baik dan juga menjaga keseimbangan osmotik dalam medium. Medium ini semi solid, non-nutrient yang mencegah proliferasi mikroba. Oleh karena itu, medium ini memberikan tanda yang adekuat pada keberadaan bakteri anaerob dengan indikator methylene blue. Jika botol menunjukkan warna biru, seluruh medium harus dibuang. Komposisi medium ini memastikan bahwa mikroorganisme mampu bertahan untuk jangka waktu yang lama. medium ini dapat digunakan untuk bakteri Gram positif dan negatif. Pada praktek klinis, sering digunakan untuk nasopharyngeal swab. Media Kaya Berdasarkan tingkatannya, media kaya merupakan media yang mengandung zat-zat kimia dan mengandung zat organik tingkat tinggi, seperti serum, darah, dan telur, dll. Hal ini dikarenakan, media kaya digunakan untuk pertumbuhan bakteri tertentu yang tidak dapat tumbuh dalam media sederhana, misalnya: Gonococcus, Pneumococcus, Streptococcus, Bacteroides, Fusobacterium, Clostridium, dll. Bakteri tersebut membutuhkan penambahan zat-zat organik dari makhluk hidup misalnya darah, telur, dll. Contoh media kaya, yaitu 1. Agar Darah Agar darah merupakan media kaya untuk pertumbuhan beberapa bakteri. Media ini digunakan untuk membedakan bakteri berdasarkan

Lab Mikrobiologi FK UNS

26

Risalah Mikrobiologi kemampuan menghemolisis. Media ini dibuat dari tripic soy agar dengan 5% darah domba.

Gambar : tripic soy agar dengan darah domba dan tanpa darah domba. Intepretasi hemolisis pada agar darah dapat dikategorikan sesuai dengan tipe kemampuan hemolisis bakteri. - Beta hemolitikus (β) didefinisikan sebagai lisis darah penuh. Bagian disekitar koloni berwarna transparan. Banyak spesies dari bakteri yang memproduksi toksik yang dapat menghancurkan sel darah merah. Contoh dari tipe ini adalah Streptococcus betahemolyticus species, Streptococcus pyogenes,dll.

Gambar koloni bakteri dengan tipe beta-hemolyticus. Alpha hemolitikus (α) bekerja dengan cara mereduksi hemoglobin pada sel darah merah menjadi methemeglobin di sekitar koloni bakteri. Hal ini menyebabkan -

Lab Mikrobiologi FK UNS

27

Risalah Mikrobiologi warna disekitar koloni pada media, yaitu hijau atau coklat. Beberapa sumber menyebut alpha-hemolyticus dengan “partial hemolysis” atau hemolisis sebagian. Gambar alpha-hemolyticus streptococcus species grup viridans (Streptococcus mutans, mitis, dan salivarius grup) - Gamma hemolitikus (γ) yaitu tipe yang berlawanan dengan tipe hemolisis lainnya. Gamma mengindikasi kurangnya kemampuan bakteri dalam menghemolisis. Tidak ada reaksi yang terjadi pada media disekitar koloni atau bakteri tidak dapat menghemolisa agar darah.

Gambar enterococcus yang merupakan salah satu tipe gamma hemolysis. 2. Agar Coklat Media ini merupakan media yang digunakan untuk mengisolasi dan menamam bakteri tertentu. Media agar coklat merupakan media kaya yang dapat memfasilitasi pertumbuhan Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae dan Neisseria meningitidis. Salah satu sumber pembuatan media coklat adalah darah domba yang dipanaskan, sehingga memberi warna coklat pada media.

Gambar media agar coklat

Lab Mikrobiologi FK UNS

28

Risalah Mikrobiologi MEDIA UJI SENSITIVITAS Mueller-Hinton agar Mueller-Hinton (MH) agar adalah media yang direkomendasikan untuk uji sensitivitas antimikroba dengan metode Kirby-Bauer untuk bakteri nonfastidious yang di standardisasi oleh the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). MH mengandung penghambat mikroba seperti sulfonamid, trimetoprim, dan tetrasiklin yang rendah. Pada awalnya MH digunakan sebagai media tanam untuk Neisseria. Tetapi, saat ini lebih banyak menggunakan media selektif. Agar ini direkomendasikan untuk uji sensitivitas antimikroba metode Kirby-Bauer pada bakteri patogen aerob dan fakultatif anaerob, seperti Staphylococcus, enterobacteriaceae, batang Gram negatif (Pseudomonas sp., Acitenobacter sp., enterococci dan vibrio cholerae. Metode ini dimodifikasi untuk menguji fastidious species (spesies bakteri yang membutuhkan lingkungan dengan nutrisi yang lebih kompleks) mis. Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae, S. pneumoniae dan Streptococcus. Komposisi MH : ekstrak daging, karbohidrat, agar, asam hidrosilat dari Casein. Pada suhu ruangan pH agar MH antara 7,2 dan 7,4. Jika pH 7,4, kelebihan timidin atau timin dapat membalikkan efek hambatan terhadap sulfonamides dan trimetoprim sehingga menghasilkan zona hambat yang lebih kecil atau tidak ada zona hambatan sama sekali.

Gambar : media padat datar mueller hinton steril (kiri) dan yang telah diinokulasi dan diberi antibiotik-metode Kirby Bauer (kanan) Konsentrasi kation seperti kalsium dan magnesium dapat mempengaruhi efek aminoglikosid dan tetrasiklin terhadap Pseudomonas aeruginosa. Konsentrasi kation yang berlebihan dapat menghasilkan memperkecil zona

Lab Mikrobiologi FK UNS

29

Risalah Mikrobiologi hambatan dan jika sebaliknya, akan memperbesar ukuran zona hambatan. Kelebihan kalsium memperbesar zona hambatan P. aeruginosa terhadap daptomisin. Dan jika ion zink yang berlebihan akan memperkecil zona hambatan carbapenems terhadap P. aeruginosa. UJI SENSITIVITAS Uji sensitivitas adalah uji untuk melihat kepekaan suatu kuman terhadap antimikroba dengan melihat besar zona hambat pada media pembenihan. Dari uji sensitivitas ini didapatkan MIC (Minimum Inhibitory Concentration) dan MBC (Minimum Bactericidal Concentration). MIC bertujuan untuk mengetahui kadar minimal suatu antibiotika yang dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Dan MBC adalah konsentrasi terendah dari antimikroba yang akan mencegah pertumbuhan organisme setelah subkultur ke media bebas antibiotik. Uji sensitivitas ini ada beberapa macam metode, dilusi (pengenceran) dan difusi (cakram). Untuk metode dilusi tidak kita pelajari lebih lanjut, yang dipelajari adalah metode difusi. Metode Difusi juga memiliki beberapa macam metode. Ada metode Flemming dan metode Kirby Bouer. Metode Kirby Bouer : Metode ini merupakan metode yang paling sering digunakan namun hanya dapat mengetahui nilai MIC saja. Dan hasil dari uji ini dapat mengetahui apakah antimikroba tersebut resisten atau sensitif terhadap mikroba yang ditanam dalam media pembenihan. Dalam melakukan metode ini harus memperhatikan beberapa hal :  Menggunakan disk antimikroba yang telah distandarkan konsentrasinya yakni 0,5 Mc Farlant  Menggunakan medium standar yang telah ditentukan (medium Muller hinton Agar)  Menggunakan kuman yang telah distandarkan jumlahnya (108)  telah diidentifikasi, hanya satu jenis kuman  Masa inkubasi ditentukan kurang lebih 18 jam  Sensitivitas ditentukan dengan mengukur diameter zona hambatan yang terbentuk Cara kerja Metode Kirby Baouer:

Lab Mikrobiologi FK UNS

30

Risalah Mikrobiologi

Setelah diinkubasi, kemudian ukurlah zona hambat antimikroba. Dan cocokan kedalam table untuk dinilai apakah termasuk Sensitif, intermediet atau resisten.

Disk Antimikroba Untuk jenis obat, memiliki inisial masing-masing. Exp : Amoxicilin ; AMX

Zona Hambat inilah yang diukur diameternya. Kemudian dicocokan kedalam tabel apakah termasuk kedalam antimikroba yang sensitif, intermediet (sedang) atau resisten. Antibiotik Antibiotik merupakan zat yang dihasilkan oleh suatu mikroba (terutama fungi yang dapat menghambat atau membasmi mikroba jenis lain.

Lab Mikrobiologi FK UNS

31

Risalah Mikrobiologi Cara Kerja Antibiotik : 1. Inhibitor Sintesis Dinding Sel Pada antibiotik penisilin berkerja mengikat protein PB yang akan merusak dinding sel yang akan membuat sel bengkak dan berlanjut pecah dan mati. Contoh lainya : golongan Beta laktam, vancomisin. 2. Inhibitor fungsi dinding sel Normalnya sel plasma pada bakteri mempunyai fungsi permeabilitas selektif. Fungsi antimikroba disini adalah menganggu transport mikronutrien bakteri tersebut, sehingga tidak dapat mengendalikan komposisi intrasel yang akan menyebabkan kerusakan sel tersebut. Contoh : imidazol, triazoles. 3. Inhibitor Sintesis Protein Antibiotik disini akan menggagu sintesis protein yang berada pada ribosom sel bakteri, contoh antibiotiknya adalah aminoglikosida (subunit ribosom 30s) dan Chloramphenicol (subunit ribosom 50s). 4. Inhibitor Sintesis DNA Pada antibiotik rifampisin akan berikatan dengan enzim DNA polimerase yang akan mengganggu sintesis DNA. 5. Inhibitor dari Proses Metabolisme Sel Sulfonamid mengganggu fungsi metabolisme pada sel bakteri di jalur asam folat untuk sintesis DNA.

Lab Mikrobiologi FK UNS

32

Risalah Mikrobiologi

MEDIA ISOLASI Media isolasi adalah media yang mengandung bahan-bahan tertentu baik bahan alami ataupun sintetis yang menyebabkan hanya bakteri atau organisme tertentu saja yang dapat tumbuh dengan optimal. Bakteri atau organisme lainnya kemungkinan dapat tumbuh juga namun tidak optimal atau bahkan tidak dapat tumbuh sama sekali. Pada pembahasan kali ini, media isolasi yang akan kita bahas adalah media Lowenstein Jensen, Kudoh, Brucella agar, Thioglycolate, Fletcher, Saborroud, TCBS, Thayer martin, dan Bordet Gengou. Selain media-media tadi, masih banyak lagi media isolasi yang lainnya. 1. Lowenstein jensen Formula / Liter aquadest L-Asparagine 3.6 g Kalium Fosfat 2.5 g Magnesium Sulfat 0.24 g Natrium Citrate 0.6 g Malachite Green 0.4 g Tepung Kentang 30 g

Lab Mikrobiologi FK UNS

Suplemen Gliserol, 12 mL Suspensi telur, 1000 mL

33

Risalah Mikrobiologi Media ini menggunakan suspensi telur dan gliserol untuk isolasi dan diferensiasi dari Mycobacterium sp. Telur digunakan karena dapat menumbuhkan banyak varietas dari mycobacterium sp. Gliserol dan suspensi telur menyediakan sumber asam lemak dan protein yang dibutuhkan untuk metabolisme Mycobacterium sp. Kalium fosfat dan magnesium sulfat mendukung pertumbuhan dan bertindak sebagai buffer. Natrium citrate dan malachite green adalah agen yang selektif untuk mencegah pertumbuhan kotaminan dan menginisiasi pertumbuhan mycobacteria.

Gambar. Media Lowenstein Jensen dengan koloni M. tuberculosis

2. Kudoh Media ini sebagian besar bahannya sama dengan media Lowenstein Jensen. Kegunaannya pun sama yaitu untuk isolasi Mycobacterium sp. Yang menjadi pembeda adalah adanya tidak adanya sentrifugasi dalam proses pembuatan medianya. Proses pembuatan yang lebih praktis dan simpel inilah yang membuat media Kudoh lebih banyak digunakan di daerah rural dan memiliki prevalensi TBC tinggi seperti di Asia Tenggara. Gambar. Media Kudoh dengan koloni M. tuberculosis

Lab Mikrobiologi FK UNS

34

Risalah Mikrobiologi 3. Brucella agar Formula (dalam g/L) Pepton 10.00 NaCl 5.00 Glukosa 10.00 Agar 15.00 Ekstrak daging sapi 5.00

Suplemen (1 vial 500 ml dalam medium) Nystatin 50000 UI Natamycin 25.0 mg Bacitracin 12500 UI Vancomycin 10.0 mg Polymyxin B 2500 UI Nalidixic Acid 2.5 mg

Gambar. Brucella agar dengan koloni Brucella sp. Brucella agar digunakan untuk kultur dan isolasi dari Brucella sp. bakteri anaerob yang menyebabkan penyakit brucellosis, suatu penyakit yang ditularkan oleh hewan ataupun produk hewani seperti susu dan daging yang terinfeksi. Ekstrak daging sapi dan pepton pada media ini berguna sebagai sumber karbon dan energi. NaCl berguna untuk sumber elektrolit untuk keseimbangan osmotik. Penambahan suplemen berupa beberapa berbagai macam antibiotik (lihat tabel) menyebabkan media ini selektif untuk pertumbuhan Brucella sp. 4. Fletcher Formula (gram/liter) Jaringan hewan yang telah dicerna oleh enzim pepsin 0.300 Ekstrak daging sapi NaCl Agar

0.200 0.500 1.500

Gambar. Media Fletcher

Lab Mikrobiologi FK UNS

35

Risalah Mikrobiologi Leptospira sp. yang menyebabkan penyakit leptospirosis merupakan organisme yang sangat kecil sehingga susah diamati dengan media biasa. Cara yang paling reliabel untuk diagnosis laboratorium adalah dengan melakukan kultur dari darah atau cairan cerebrospinal pada minggu pertama sakit atau dari urine saat infeksi atau beberapa minggu setelahnya. Inkubasi dilakukan pada suhu ruangan dan dalam kondisi gelap selama lebih dari 6 minggu. Leptospira sp. akan berada pada beberapa cm di bawah permukaan. Material yang diambil setelah inkubasi ini kemudian diwarnai dengan pengecatan Giemsa dan diperiksa di bawah iluminasi mikroskop medan gelap. Leptospira sp. akan bergerak dengan ciri khas corkscrew motility. Selain mengandung bahan-bahan dasar, media ini juga mengandung serum kelinci dan thiamine yang berfungsi menopang pertumbuhan Leptospira sp. 5. Sabouraud agar Formula (per liter) Nama Media BD BD dan Bahan Sabouraud Sabouraud Glucose Agar dengan Agar Penicillin dan Streptomycin

pencernaan Kaseinoleh enzim pankreas Pencernaan jaringan tubuh hewan oleh pepsin Glucose Agar

BD BD Sabouraud Sabouraud Agar Agar dengan dengan Gentamicin Chlorampdan henicol Chloramphenicol 5.0 g 5.0 g

5.0 g

5.0 g

5.0

5.0

5.0

5.0

40.0 15.0

40.0 15.0

40.0 15.0

40.0 15.0

Lab Mikrobiologi FK UNS

36

Risalah Mikrobiologi Penicillin G Streptomycin Gentamicin Chlorampheni col pH

-

60000 IU 0.06 g -

0.04 0.4

0.4

pH 5.6 +/0.2

5.6 +/- 0.2

5.6 +/- 0.2

5.6 +/0.2

Sabouraud Agar digunakan untuk kultur dan isolasi dari fungi, terutama yang diambil dari sampel klinis yang kemungkinan terkontaminasi bakteri. Pepton pada Sabouraud Agar adalah sumber nitrogen dan growth factor. Glukosa merupakan sumber energi. Konsentrasi glukosa yang tinggi memberikan keseimbangan osmotik untuk pertumbuhan fungi, sebagian besar bakteri tidak dapat tumbuh pada kondisi glukosa yang tinggi. Selain glukosa dapat digunakan dekstrosa sebagai sumber gula dan energi. pH yang rendah juga menunjang pertumbuhan fungi, sementara banyak bakteri yang tidak dapat tumbuh pada pH yang rendah. Selain bahan-bahan dasar, media Sabouraud Agar juga ditambah dengan antibiotik untuk menginhibisi pertumbuhan bakteri. Chloramphenicol merupakan antibiotik broad spectrum yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram negatif dan Gram positif. Antimikroba lainnya seperti penicillin, gentamicin, dan streptomycin atau kombinasinya juga telah diketahui efektif untuk menghambat pertumbuhan bakteri tanpa menghambat pertumbuhan fungi.

Gambar. Sabouraud Agar dengan beberapa koloni fungi

Lab Mikrobiologi FK UNS

37

Risalah Mikrobiologi 6. Thiosulfate citrate bile sucrose agar (tcbs agar) Formula ( g/l) Pepton dari kasein 5.0

sukrosa 20.0

Pepton dari daging 5.0

Natrium Klorida 10.0

Ekstrak ragi

5.0

Besi (III) citrat 1.0

Natrium citrat

10.0

thymol blue 0.04

Natrium thiosulfat 10.0 ox bile

5.0

bromothymol blue 0.04 Agar-agar 14.0

Natrium cholate 3.0

Gambar. TCBS Agar dengan koloni Vibrio cholerae

Media ini ditujukan untuk menumbuhkan Vibrio cholerae dan golongan Vibrio sp. yang pathogen lainnya seperti V. parahaemolyticus. Adanya koloni V. cholerae ditunjukkan dengan adanya perubahan warna indikator bromthymol blue dari biru menjadi kuning karena ada perubahan pHdari basa menjadi asam. Thiosulfat dan citrat berkonsentrasi tinggi serta bersifat alkali kuat pada media ini dapat menghambat pertumbuhan enterobacteriaceae. Cairan empedu (bile) dan cholate dapat mensupresi pertumbuhan Enterococcus. Bakteri coliform mungkin dapat tumbuh pada media ini, namun tidak dapat memetabolisme sukrosa sehingga tidak ada perubahan warna indikator. Tetapi beberapa strain Proteus dapat memetabolisme sukrosa dan membentuk koloni vibrid-like yang berwarna kuning.

Lab Mikrobiologi FK UNS

38

Risalah Mikrobiologi 7. Thayer martin Media Thayer Martin sebenarnya adalah modifikasi dari media Mueller Hinton Agar (lihat pada subbab Uji Sensitivitas Antibiotik) dengan penambahan 5% darah domba dan beberapa antibiotik. Oleh karena itu, media ini juga dikenal dengan sebutan Modified Thayer Martin (MTM). Modifikasi ini bertujuan untuk mengisolasi pertumbuhan Neisseria gonorrhoeae, bakteri Gram negatif penyebab penyakit gonorrhea atau kencing nanah. Antibiotik yang biasanya digunakan pada media Thayer Martin adalah: - Vancomycin, berguna untuk membunuh organisme Gram positif, walaupun kadang beberapa organisme Gram positif seperti Lactobacillus sp. dan Pediococcus sp. resisten pada vancomycin. - Colistin, berguna untuk membunuh sebagian besar organisme Gram negatif kecuali Neisseria. Namun ada organisme Gram negatif lainnya yang resisten terhadap colistin, yaitu Legionella sp. - Nystatin, dapat membunuh sebagian besar fungi. - Cotrimoxazole (SXT), menginhibisi pertumbuhan bakteri Gram negatif, terutama Proteus.

Gambar. Media Modified Thayer Martin dengan koloni N. gonorrhoeae yang diambil dari usapan cervix pasien gonorrhea

8. Bordet gengou Formula per liter dalam aquades BD Bordet Gengou Agar with 15% Sheep Blood Kentang, Infusi padat 4.5 g Kaseinyang telah dicerna 5.0 oleh pancreas

Lab Mikrobiologi FK UNS

BD Bordetella Agar with Charcoal and 7% Horse Blood Ekstrak daging sapi 10.0 g Gelatin yang telah dicerna 10.0 enzim pankreas

39

Risalah Mikrobiologi Jaringan hewan yang telah dicerna oleh enzim pepsin NaCl

5.0

Serat terlarut

10.0

5.5

4.0

Agar Cefalexin Glycerol Darah domba yang telah didefibrinasi pH 7.2 +/- 0.2

20.0 0.04 10.0 ml 15%

Charcoal yang telah diaktifkan) NaCl Niacin (asam nikotinik) Cefalexin Darah kuda yang telah didefibrinasi Agar pH 7.4 +/- 0.2

5.0 0.01 0.04 7% 12.0 g

Gambar. Bordet Gengou agar dengan koloni Bordetella pertussis Bordet Gengou adalah media yang digunakan untuk isolasi dan kultur Bordetella pertussis. Semua spesies Bordetella adalah pathogen pada sel epitel siliaris saluran pernapasan. Bordetella pertussis diketahui sebagai penyebab penyakit pertusis atau batuk rejan (batuk 100 hari). B. parapertussis juga diketahui sebagai panyebab penyakit serupa yang lebih sedang pengaruhnya. B. bronchiseptica adalah pathogen pada hewan, namun juga dapat menyebabkan bronchitis dan pneumonia pada manusia. Bordetella pertussis merupakan organisme yang sulit untuk dikultur. Banyak substansi yang dapat menghambat pertumbuhan B. pertussis, termasuk asam lemak pada saluran pernapasan atau kapas pada aplikator yang digunakan untuk mengambil sampel. Oleh karena itu, pengambilan sampel untuk diagnosis pertussis tidak boleh menggunakan swab dengan aplikator. Pengmabilan sampel yang sesuai adalah dengan menggunakan alat penyedot (suction). Serat yang ada pada infusi kentang dan charcoal (arang) berperan sebagai adsorbent yang dapat menyerap asam lemak. Gliserol digunakan sebagai sumber karbon. NaCl berfungsi untuk menjaga

Lab Mikrobiologi FK UNS

40

Risalah Mikrobiologi keseimbangan osmotik pada media. Penambahan darah domba dan darah kuda menyediakan growth factor dan mengurangi toksisitas dari peroksida. DAFTAR PUSTAKA Buxton, Rebecca (2013). Blood Agar plates and hemolysis protocols. Diakses di http://www.microbelibrary.org/library/laboratory-test/2885-bloodagar-plates-and-hemolysis-protocols Challis JA (2008). Sterilization, Disinfection, and Antisepsison Practical Handbook of Microbiology Second Edition. CRC : London Jaspe RC et.al. (2009). Evaluation of the kudoh swab method for culturing of mycobacterium tuberculosis in rural area. Tropical Medicine International Health. 14(4), pp:468-471 Jawetz, Melnick & Adelberg’s (2007). Medical Microbiology: 22th Edition. McGrowHill. Kudoh S, Kudoh T (1974). A simple technique for culturing tubercle bacilli. World Health Organization. 51, pp: 71-82 Murray, PR et.al. (2007). Manual of clinical microbiology, 9th edition. American Society of Microbiology, Washington, D.C. Murray, R. P., et al (1999). Manual of Clinical Microbiology. American Society for Microbiology Publishing, Washington, D.C. 20005. Ryan KJ (2004). Leptospirosis: clinical aspect. Dalam Ryan KJ, Ray CG. Sherris medical microbiology: an introduction to infectious disease 4th edition. McGraw-Hill: New York. Staf Pengajar Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia (1994). Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta. Bina Rupa Aksara. Summerbell, R.C (2003). Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. Dalam: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, dan R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. Tim laboratorium mikrobiologi FK UNS. Buku petunjuk praktikum untuk mahasiswa pendidikan dokter. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc. (2009). The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary 27--2009. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA

Lab Mikrobiologi FK UNS

41

BAB II

Risalah Mikrobiologi BLOK RESPIRASI

PEWARNAAN SEDERHANA Mengapa kita harus melakukan pewarnaan bakteri. Bakteri memiliki refraksi yang sama seperti air sehingga jika dilihat di bawah mikroskop akan terlihat opak (putih) dan hampir tidak terlihat. Oleh karena itu dilakukan prosedur pewarnaan untuk membuat sel dan struktur didalamnya dapat lebih terlihat dibawah mikroskop cahaya. Cat (stain)adalah zat yang menempel pada sel yang dapat memberikan warna. Warna inilah yang dapat membuat bakteri lebih terlihat dan juga berfungsi untuk membedakan tipe mikroorganisme atau untuk bagian spesifik dari mikroorganisme. Terdapat 3 jenis perwarnaan, yaitu pewarnaan sederhana (simple staining), pewarnaan diferensial, dan pewarnaan spesial. Pewarnaan sederhana dapat digunakan untuk melihat bentuk, ukuran, dan susunan bakteri. Untuk melihat bakteri harus dilakukan pengecatan karena bakteri transparan. Pewarnaan ini hanya menggunakan satu jenis cat,misalnya methylen blue, safranin, fuchsin basis, dan kristal violet. Pewarnaan diferensial Menggunakan 2 atau lebih cat dan membuat mikroorganisme dapat dikategorikan menjadi beberapa grup atau tipe. Pengecatan Gram dan ZN merupakan contoh dari pewarnaan diferensiasi. Pewarnaan khusus Untuk mewarnai struktur khusus dalam bakteri. Misalnya Endospora menggunakan metode schaeffer-fulton, Kapsul dengan metode negatif, dan Flagella menggunakan pewarnaan gray. PENGECATAN GRAM Pengecatan Gram adalah metode pengecatan bakteri yang digunakan secara luas untuk identifikasi bakteri. Metode ini diperkenalkan oleh seorang dokter dari Denmark bernama Hans Christian Joachim Gram pada tahun 1884. Sebelum mengenal lebih jauh tentang pewarnaan Gram, mari kita lihat dulu struktur sel bakteri:

Lab Mikrobiologi FK UNS

42

Risalah Mikrobiologi

Skema sederhana dari pengecatan Gram adalah sebagai berikut:

Pewarna pertama adalah crystal violet yang berwarna ungu. Selanjutnya diberikan kalium iodide (KI) sebagai mordant, KI menyebabkan denaturasi protein dinding sel bakteri Gram positif sehingga warna pertama terjebak pada dinding sel dan menyebabkan warna crystal violet pada dinding sel terlihat lebih jelas. Selanjutnya bakteri diberikan alcohol 90% sebagai decolorizer atau peluntur. Bakteri Gram positif akan mempertahankan warna pertama karena memiliki lapisan peptidoglikan yang lebih tebal. Selanjutnya diberikan safranin sebagai pewarna kedua atau counter strain.

Lab Mikrobiologi FK UNS

43

Risalah Mikrobiologi Note: Bakteri yang tahan terhadap peluntur akan mempertahankan pewarna pertama  Berwarna ungu-> Gram positif Bakteri yang tidak tahan terhadap peluntur akan menyerap pewarna kedua  Berwarna merah-> Gram negatif Tidak semua bakteri dapat diwarnai dengan pewarnaan Gram, contohnya pada genus Mycobacterium yang mempunyai dinding sel yang dilapisi lilin (wax) yang terbentuk dari asam mikolat. PEWARNAAN TAHAN ASAM (BTA) Seperti yang telah dijelaskan sebelumnya, ada beberapa golongan bakteri yang tidak dapat diwarnai dengan pewarnaan Gram, salah satunya adalah golongan Mycobacterium sp yang dikenal juga sebagai golongan bakteri tahan asam (BTA). Dinding sel bakteri tahan asam terdiri dari peptidoglikan, arabinogalaktan, dan lipid. Kandungan 50% dari lipid dinding sel BTA adalah asam mikolat, yang kemudian membentuk lapisan seperti lilin yang menyebabkan cat susah masuk ke dalam dinding sel bakteri. Contoh bakteri tahan asam: -

Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium lepra

- Nocardia sp - Actinomyces sp

Terdapat berbagai macam metode pewarnaan tahan asam, yaitu: metode Ziehl Nielsen, Metode Kinjoun Gabbet, dll. Bakteri tahan asam setelah diberi pewarna pertama akan tahan terhadap pencucian dengan asam dan alkohol sehingga tidak mengikat pewarna kedua. Hal ini dikarenakan adanya asam mikolat yang menyebabkan bakteri sukar diwarnai. Agar dapat mewarnai bakteri tahan asam maka perlu menghilangkan lapisan asam mikolat pada dinding sel dengan cara pemanasan atau dengan deterjen. Metode Ziehl Nielsen: - Zat warna pertama (merah) + Pemanasan -

Pemanasan

-

Peluntur (HCl dan Alkohol)

-

Zat warna kedua (biru)

Lab Mikrobiologi FK UNS

44

Risalah Mikrobiologi Prosedur pewarnaan tahan asam Ziehl Nielsen: Pewarna pertama: Fuchsin basis

Menghilangkan lipid: pemanasan

Peluntur: Alkohol dan HCl

Pewarna kedua: Methylen Blue Kandungan pewarna yang digunakan: - Cat ZN A : Fuchsin basis Alkohol 96% Fenol 5% in Aqua - Cat ZN B : HCl Alkohol 95% - Cat ZN C : Methylene blue Cara kerja Praktikum:

Lab Mikrobiologi FK UNS

45

Risalah Mikrobiologi Setelah terwarnai, bakteri tahan asam akan mempertahankan pewarna pertama (merah) dengan sangat kuar dan tahan terhadap asam dan alkohol. Bakteri tidak tahn asam akan melepaskan pewarna pertama dan mengikat pewarna kedua (biru).

Hasil: - BTA (+): Bakteri berwarna merah dengan latar belakang biru - BTA (-) : Bakteri berwarna biru dengan latar belakang biru Daftar Pustaka Tim Laboratorium Mikrobiologi FK UNS. 2012. Buku petunjuk praktikum untuk mahasiswa pendidikan dokter. Surakarta, FK UNS

Lab Mikrobiologi FK UNS

46

BAB III

Risalah Mikrobiologi BLOK GASTROINTESTINAL

Pada bab ini kita akan membahas dua hal, yaitu organisme penyebab infeksi pada saluran pencernaan dan media yang digunakan untuk mengidentifikasi organisme tersebut. A. ORGANISME PENYEBAB INFEKSI PADA SALURAN PENCERNAAN Ada banyak sekali organisme yang menyebabkan infeksi pada saluran pencernaan. Buku ini hanya akan membahas sedikit organisme yang menyebabkan infeksi pada saluran pencernaan. ESCHERICHIA COLI E. coli merupakan bakteri yang habitat normalnya berada di intestinal manusia dan hewan. Keberadaannya menandakan adanya fecal contamination pada air dan makanan. Morfologi  gram negative (-)  Family enterobacteriaceae  Batang soliter  Flagel petrichous  Memiliki beberapa strain.  Tidak berspora  Aerob atau fakultatif anaerob  Beberapa memiliki kapsul  Suhu optimal 37oC

Fisiologi E. coli dapat beradaptasi dalam usus (secara anaerob) atau di luar usus (secara aerob atau anaerob). Bakteri ini dapat hidup di media glukosa maupun

Lab Mikrobiologi FK UNS

47

Risalah Mikrobiologi bahan organik. Selain meragi glukosa, bakteri ini juga meragi laktosa. Hal ini yang menandakan bahwa bakteri ini sebenarnya non patogen. Sampai pada beberapa strain memiliki patovar yang bervariasi seperti EPEC, ETEC, EIEC, dan EHEC. Beberapa strain juga dapat menunjukkan hemolisis tipe β. Uji Biokimia  Indol (+)  Asetat (+)  peragian laktosa (+)  gas & glukosa (+)  Lisin dekarboksilase (+/-)  Motilitas (+/-) Faktor-Faktor Patogenitas Bakteri E. Coli memiliki beberapa faktor Patogenitas 1) Antigen permukaan  Antigen O (somatik) Bagian terluar dinding sel polisakarida dan terdiri dari unit berulang lipopolisakarida. Tahan terhadap panas dan alkohol. Sedangkan antibodi terhadap antigen O adalah IgM.  Antigen H (flagella) Terletak pada flagella dan dapat didenaturasi atau dihilangkan oleh panas atau alcohol. Aglutinasi dengan antibodi anti-H, terutama IgG.  Antigen K ( permukaan atau amplop) Pada bakteri E. Coli ini, antigen K berupa polisakarida. Aktivitas aglutinasinya dapat diganggu dengan antiserum O. 2) Enterotoksin  Toksin LT (termolabil) Toksin LT ini merangsang enzim adenil siklase yang terdapat didalam sel epitel mukosa usu halus. Kemudian toksin LT ini menyebabkan peningkatan aktivitas enzim tersebut dan terjadinya peningkatan permeabilitas sel epitel usus. Sehigga terjadi akumulasi cairan dalam usus yang mengakibatkan diare. inaktivasi pada suhu 60˚C selama 30 menit.  Toksin ST (termostabil) Toksin ST merupakan asam amino dengan berat molekul 1970 Dalton, yang mempunyai satu atau lebih ikatan disulfide yang berperan penting dalam mengatur stabilitas pH 7 dan suhu

Lab Mikrobiologi FK UNS

48

Atlas Mikrobiologi 37oC. Toksin ini juga merupakan ―colonization factor” dan memiliki toleransi suhu sampai 100˚C. 3) Eksotoksin Mengakibatkan keracunan makanan yang serius pada manusia yaitu diare berdarah. 4) Hemolisin Mengakibatkan terjadinya hemolisis pada eritrosit. 5) Kolisin Merupakan toksin yang menyebabkan E.coli dapat menghambat pertumbuhan bakteri lain dan menyebar ke bagian-bagian tubuh manusia yang terinfeksi. Patogenesis 1) Diare Penyakit yang sering ditimbulkan oleh E. Coli adalah DIARE. Berikut adalah penyakit diare yang berkaitan. E. Coli yang menyebabkan diare sangat sering ditemukan di seluruh dunia. E, Coli ini diklasifikasikan oleh cirri khas sifat – sifat virulensinya dan setiap grup menimbulkan penyakit melalui mekanisme yang berbeda, antara lain:  Enteropathogenic E. coli (EPEC). Penyebab penting diare pada bayi, khususnya di Negara berkembang. EPEC melekat pada sel mukosa yang kecil. Faktor yang diperantarai secara kromosom menimbulkan pelekatan yang kuat. Akibat dari infeksi EPEC adalah diare cair yang biasanya sembuh sendiri taetapi dapat juga kronik. Lamanya diare EPEC dapat diperpendek dengan pemberian anibiotik. Diare terjadi pada manusia, kelinci, anjing, kucing dan kuda. Seperti ETEC, EPEC juga menyebabkan diare tetapi mekanisme molekular dari kolonisasi dan etiologi adalah berbeda. EPEC sedikit fimbria, ST dan LT toksin, tetapi EPEC menggunakan adhesin yang dikenal sebagai intimin untuk mengikat inang sel usus. Sel EPEC invasive (jika memasuki sel inang) dan menyebabkan radang.  Enterotoxic E. coli (ETEC). Penyebab yang sering dari “diare wisatawan” dan sangat penting menyebabkan diare pada bayi di Negara berkembang. Faktor kolonisasi ETEC yang spesifik untuk menimbulkan pelekatan ETEC pada sel epitel usus kecil. Lumen usus terengang oleh cairan dan mengakibatkan hipermortilitas serta diare, dan berlangsung selama beberapa hari. Beberapa strain ETEC

Lab Mikrobiologi FK UNS

49

Atlas Mikrobiologi







menghasilkan eksotosin tidak tahan panas. Prokfilaksis antimikroba dapat efektif tetapi bisa menimbulkan peningkatan resistensi antibiotic pada bakteri, mungkin sebaiknya tidak dianjurkan secara umum. Ketika timbul diare, pemberian antibiotic dapat secara efektif mempersingkat lamanya penyakit. Diare tanpa disertai demam ini terjadi pada manusia, babi, domba, kambing, kuda, anjing, dan sapi. ETEC menggunakan fimbrial adhesi (penonjolan dari dinding sel bakteri) untuk mengikat sel – sel enterocit di usus halus. ETEC dapat memproduksi 2 proteinous enterotoksin: dua protein yang lebih besar, LT enterotoksin sama pada struktur dan fungsi toksin kolera hanya lebih kecil, ST enterotoksin menyebabkan akumulasi cGMP pada sel target dan elektrolit dan cairan sekresi berikutnya ke lumen usus. ETEC strains tidak invasive dan tidak tinggal pada lumen usus. Enterohemorrhagic E. coli (EHEC). Penyebab penyakit “diare berdarah”. Menghasilkan verotoksin, dinamai sesuai efek sitotoksinya pada sel Vero, suatu sel hijau dari monyet hijau Afrika. Terdapat sedikitnya dua bentuk antigenic dari toksin. EHEC berhubungan dengan holitis hemoragik, bentuk diare yang berat dan dengan sindroma uremia hemolitik, suatu penyakit akibat gagal ginja akut, anemia hemolitik mikroangiopatik, dan trombositopenia. Banyak kasus EHEC dapat dicegah dengan memasak daging sampai matang. Diare ini ditemukan pada manusia, sapi, dan kambing. Enteroinvasive E. coli (EIEC). Menyebabkan penyakit yang sangat mirip dengan shigellosis. Penyakit terjadi sangat mirip dengan shigellosis. Penyakit sering terjadi pada anak – anak di Negara berkrmbang dan para wisatawan yang menuju ke Negara tersebut. EIEC melakukan fermentasi laktosa dengan lambat dan tidak bergerak. EIEC menimbulkan penyakit melaluii invasinya ke sel epitel mukosa usus. Diare ini ditemukan hanya pada manusia. Enteroaggregative E. coli (EAggEC). Menyebabkan diare akut dan kronik pada masyarakat di Negara berkembang. Bakeri ini ditandai dengan pola khas pelekatannya pada sel manusia. EAggEC menproduksi hemolisin dan ST enterotoksin yang sama dengan ETEC.

Lab Mikrobiologi FK UNS

50

Atlas Mikrobiologi 2) Infeksi Saluran Kemih (ISK) Penyebab yang paling lazim dari infeksi saluran kemih dan merupakan penyebab infeksi saluran kemih pertama pada kira – kira 90% wanita muda. Dengan gejala sering miksi, disuria, hematuria, dan piura. Kebanyakan infeksi ini disebabkan oleh E. Coli dengan sejumlah tipe antigen O. 3) Sepsis Bila pertahanan inang normal tidak mencukupi, E. Coli dapat memasuki aliran darah dan menmyebabkan sepsis. Bayi yang baru lahir dapat sangat rentan terhadap sepsis E. Coli karena tidak memiliki antibodi IgM. Sepsis dapat terjadi akibat infeksi saluran kemih. 4) Meningitis E. Coli merupakan salah satu penyebab utama meningitis pada bayi. SHIGELLA Genus Shigella terbagi menjadi 4 spesies, yaitu S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii, dan S. sonnei. Setiap spesies ini, kecuali S. sonnei, memiliki beberapa serotype. Pada umumnya, S. sonnei lebih sering ditemukan di negara maju sedangkan S. flexneri dan S. dysenteriae lebih sering di negara berkembang. Shigella adalah bakteri gram negatif yang berbentuk batang ramping. Coccobacillar dapat ditemukan pada biakan muda. Shigella adalah bakteri fakultatif anaerob tapi dapat hidup dengan baik secara aerob. Koloni yang dapat diamati setelah 24 jam berbentuk cembung, circular, transparan dengan diameter kira-kira 2 mm. Semua shigellae memfermentasikan glukosa. Tetapi, tidak memfermentasikan laktosa kecuali Shigella sonnei. Spesies shigella dapat dibedakan dengan yang memfermentasi manitol dan yang tidak. Bakteri ini nonmotil, tidak memproduksi gas dan H2S. Habitat normal bakteri ini terbatas pada traktus intestinal pada manusia dan primata lainnya. Struktur antigen Antigen O somatik Shigella adalah polisakarida. Terdapat 40 serotype yang diklasifikasikan berdasarkan reaksi biokimia dan antigen. Patogenesis Infeksi shigella hampir selalu terbatas pada traktus gastrointestinal, kasus penyebaran lewat hematogen sangat jarang. Shigella sangat menular, dosis

Lab Mikrobiologi FK UNS

51

Atlas Mikrobiologi infektif untuk menyebabkan penyakit hanya membutuhkan 103 organisme (biasanya butuh 105–108 bakteri untuk salmonellae dan vibrio). Proses patologis yang penting adalah invasi ke sel epitel mukosa dengan menginduksi fagositosis, keluar dari vakuola fagositik, multiplikasi dan menyebar melalui sitoplasma sel epitel, dan berlanjut ke sel sebelahnya. Mikroabses di dinding usus besar dan ileum terminal akan berlanjut menjadi nekrosis membran mukosa, ulkus superfisial, perdarahan, dan pembentukan pseudomembran pada area ulkus tersebut. Jika di ambil jaringan di area ini, akan ditemukan fibrin, leukosit, debris sel, membran mukosa yang nekrotik, dan bakteri. Jika proses tersebut mereda, akan digantikan dengan jaringan granulasi yang mengisi ulkus dan terbentuk jaringan parut. Toksin Semua shigella melepas toksin berupa lipopolisakarida. Endotoksin ini mungkin merupakan penyebab iritasi dinding usus besar. Shigella dysenteriae eksotoksin Shigella dysenteriae memproduksi shigatoksin, prototipe untuk famili shigalike toksins (verocutotoksins), yang juga terdapat di beberapa Enterobacteriaceae lainnya. Shigatoksin menambah kerusakan sel epitel kolon, diare dengan feses cair (watery) pada onset shigellosis dan berkurang frekuensinya pada hemolytic-uremic syndrome (HUS) S. dysenteriae type 1 (Shiga bacillus) memproduksi heat-labile ekxotoksin yang mempengaruhi usus dan sistem saraf pusat. Eksotoksin adalah antigen dan letal untuk eksperimen terhadap hewan. Bekerja sebagaimana enterotoksin, eksotoksin menyebabkan diare seperti verotoksin E. coli, mungkin dengan proses yang sama. Pada manusia, eksotosin juga menghambat penyerapan gula dan asam amino di usus halus. Aktivitas neurotoksin mungkin dapat memperparah infeksi S.dysenteriae dan reaksi sistem saraf pusat (mis. Meningismus, coma). Pasien dengan infeksi Shigella flexneri atau Shigella sonnei mengembangkan antitoksin yang menetralisis eksotoksin secara in vitro. Terjadi dua proses perkembangan infeksi, toksin yang diproduksi pada awal infeksi menyebabkan diare sangat banyak tanpa darah dan selanjutnya jika terjadi invasi pada usus besar akan menyebabkan diare dengan darah dan pus. Gejala klinis Setelah periode inkubasi (1-2 hari), terdapat onset tiba-tiba nyeri abdomen, demam, dan diare (watery diarrhea). Sehari setelah adanya onset, infeksi berlanjut pada usus halus dan kolon menyebabkan feses lebih banyak, kurang cair tapi sering disertai mucus dan darah. Setiap gerakan peristaltik

Lab Mikrobiologi FK UNS

52

Atlas Mikrobiologi usus, disertai dengan tegangan dan tenesmus (spasme rectal), menyebabkan nyeri abdomen bagian bawah. Lebih dari setengah kasus pada dewasa, demam dan diare reda dengan sendirinya pada hari ke 2-5. Namun, pada anak-anak dan lansia, hilangnya cairan dan elektrolit dapat menyebabkan dehidrasi, asidosis, dan bahkan kematian. Penyakit yang diakibatkan S. dysenteriae seringkali berat. Pada penyembuhan, hampir seluruh orang yang terjangkit basil disentri dapat terjadi infeksi kronik dan mungkin terjadi penyakit yang rekuren. Setelah sembuh dari infeksi, orang yang terinfeksi menghasilkan antibodi terhadap shigella, tetapi antibodi ini tidak melindungi diri terhadap reinfeksi. Komplikasi Infeksi S. dysenteriae serotipe 1 dapat menyebabkan komplikasi seperti kejang, sepsis, prolaps rectum, atau toksik megacolon. Komplikasi yang lebih sering adalah hemolytic-uremic syndrome (HUS) yang ditandai dengan triad anemia hemolitik, trombositopenia, dan gagal ginjal. Kondisi HUS dapat bervariasi mulai yang ringan dengan penyembuhan cepat, atau dapat berat dengan disertai gagal ginjal dan kematian. Komplikasi lainnya yang dapat disebabkan oleh S. dysenteriae adalah perdarahan usus masif dan peritonitis perforatif, sedangkan infeksi S. sonnei biasanya hanya menyebabkan diare. Uji laboratorium Diagnosis ditegakkan dengan identifikasi kultur kuman patogen. Spesimen yang digunakan untuk kultur dapat berupa feses segar, mucus, dan swab rectum. Kombinasi media selektif/indikator dilakukan untuk kultur primer. Kultur dapat dilakukan dengan penanaman bakteri pada media diferensial (cont: MacConkey atau EMB) dan media selektif (Hektoen enteric agar atau salmonella-shigella agar). Pada pemeriksaan mikroskopis mungkin dapat terlihat leukosit dan beberapa eritrosit. Serovar ditentukan dengan antisera spesifik dengan uji aglutinasi. Orang normal sering memiliki aglutinin untuk melawan beberapa spesies shigella. Namun, penentuan titer antibodi mungkin menunjukkan peningkatan antibodi spesifik. Pemeriksaan serologi tidak digunakan untuk menegakkan diagnosis infeksi shigella. Imunitas Infeksi shigella akan diikuti dengan respon antibodi spesifik. Injeksi shigella yang telah dimatikan menstimulasi produksi antibodi dalam serum tetapi tidak dapat melindungi manusia untuk melawan infeksi. IgA yang ada di usus menjadi penting untuk membatasi reinfeksi pada penelitian vaksin

Lab Mikrobiologi FK UNS

53

Atlas Mikrobiologi dengan bakteri yang dilemahkan secara oral. Serum antibodi terhadap antigen shigella somatik adalah igM. Terapi dan Penatalaksanaan Ciprofloxacin, ampicillin, doxycycline, dan trimethoprimsulfamethoxazole adalah antibiotik yang paling sering digunakan untuk menghambat pertumbuhan isolat shigella dan dapat menekan serangan klinis disentri akut dan memperpendek lamanya gejala. Harus dilakukan rehidrasi untuk menggantikan cairan dan elektrolit yang hilang. Epidemiologi, pencegahan, dan kontrol Shigella ditransmisikan lewat makanan, tangan, feses, lalat, dan dari orang ke orang. Hampir seluruh kasus infeksi shigella terjadi pada anak usia dibawah 10 tahun. S dysenteriae dapat menyebar secara luas. Untuk mencegah hal tersebut terjadi, cara yang dilakukan saat ini adalah dengan menghilangkan reservoirnya yaitu dengan menjaga kebersihan sumber air, makanan, dan susu, mengontrol pembuangan limbah dan lalat, mengisolasi pasien dan mendisinfeksi sekretnya, deteksi kasus subklinis dan carrier (termasuk pengolah makanan), dan penggunaan antibiotik pada pasien yang terinfeksi. Tahapan kultur Shigella Spesimen feses sebaiknya diambil saat stadium awal, yaitu saat diare berlangsung (4 hari dari onset awal) dan sebelum terapi antibiotik. Spesimen diambil dengan cara rectal swab atau swab dari feses segar (jika terdapat darah, lendir, atau pus, ambil bagian ini). Spesimen yang tidak dikultur dalam waktu 2 jam setelah pengambilan harus diletakkan di dalam media transport dan segera di dinginkan. Media transport yang dipakai adalah Cary-Blair (dapat juga digunakan sebagai media transport kuman enterik patogen lainnya). Jika spesimen diperiksa setelah 2-3 hari setelah pengambilan, sebaiknya di bekukan segera pada suhu -70˚C. Untuk isolasi yang optimal untuk Shigella, harus digunakan dua media selektif : 1. MacConkey (MAC) agar yang biasa digunakan dan memiliki selektivitas yang rendah, dan 2. Xylose lysine desoxycholate (XLD) agar yang memiliki kemampuan selektif yang lebih tinggi. Spesimen feses harus ditanam sesegera mungkin, inokulasi dilakukan dengan meneteskan 1 tetes carian tinja atau suspensi feses. Cara lainnya adalah dengan swab rectal atau swab feses. Inkubasi dilakukan selama 18-24 jam pada suhu 35˚-37˚C. Koloni Shigella di MAC terlihat cembung, tidak berwarna, dengan diameter 2-3 mm, tidak meragi laktosa. Koloni Shigella di XLD menunjukkan

Lab Mikrobiologi FK UNS

54

Atlas Mikrobiologi koloni transparan berwarna merah muda atau merah lembut dengan diameter 1-2 mm. Selanjutnya setelah kultur, lakukan uji biokimia menggunakan Kligler iron agar (KIA) atau triple sugar iron agar (TSIA). Pada KIA atau TSIA akan didapatkan alkali/K (merah) pada slant dan acid/A (kuning) pada butt, sedikit atau tidak ada gas, dan tidak ada H2S. Uji biokimia lainnya seperti urea menunjukkan hasil negatif (warna kuning), pada SIM menunjukkan H2S negatif (warna hitam), motilitas negatif (tidak berkabut di sekitar tusukan), dan indol dapat positif atau negatif. Gambar : dari kiri ke kanan. Spesies : Shigella flexneri KIA : K/A (alkali/acid), gas (-), H2S(-). SIM : Sulfide/ H2S (-), indole (+/-) *dalam gambar (+), Motility (-). Urea : urease (-). Simon Citrat : SC (-)

Gambar : MacConkey : tidak meragi / memfermentasi laktosa.

Gambar : Shigella pada pewarnaan Gram menunjukkan batang Gram negatif. SALMONELLA KLEBSIELLA B. Media Identifikasi

Lab Mikrobiologi FK UNS

55

Atlas Mikrobiologi SALMONELLA Kebanyakan Salmonella adalah bakteri Gram negatif patogen bagi manusia dengan penyebaran melewati rute oral. Salmonella biasanya menyebar dari hewan dan atau produk hewan, menyebabkan enteritis, infeksi sistemik, dan demam enterik. Morfologi dan Identifikasi Genus Salmonella sangatlah variatif dan luas. Kebanyakan Salmonella yang dapat teridentifikasi bersifat motil dengan flagella peritrichia. Salmonella dapat tumbuh pada media sederhana, namun mereka hampir tidak pernah meragi laktosa atau sukrosa. Mereka dapat membentuk asam dan biasanya membentuk H2S. Mereka dapat bertahan hidup dengan cara berhibernasi di air dalam waktu yang lama, bahkan di air yang beku sekalipun. Salmonella resisten terhadap beberapa zat seperti brilliant green, sodium tetrathionate, dan sodium deoxycholate yang biasanya dapat menghambat pertumbuhan kuman enteric lainnya. Oleh karena itu, dalam melakukan identifikasi Salmonella zatzat tersebut digunakan untuk mengisolasi Salmonella. Klasifikasi Anggota Genus Salmonella dasarnya diklasifikasikan berdasarkan epidemiologinya, host range, reaksi biokimia, dan struktur dari antigen O, H, dan Vi (jika ada) yang nampak. Patogenesis dan Temuan Klinik Pada buku ini kita akan memfokuskan bahasan pada Salmonella typhi saja (penyebab demam typhoid) karena genus Salmonella sangatlah banyak jenisnya. Demam typhoid berbeda dengan penyakit typhus, dimana penyakit typhus disebabkan oleh Rickettsia sp. sedang demam typhoid disebabkan oleh Salmonella typhi yang tertelan dan mencapai usus halus, lalu kemudian menyebar melalui jaringan limfatik dan aliran darah. Kemudian melalui darah menyebar lagi ke banyak organ, termasuk usus halus itu sendiri. Salmonella typhi memperbanyak dirinya pada jaringan limfoid usus dan dikeluarkan melalui feses. Setelah masa inkubasi selama 10-14 hari, akan Nampak gejala demam. Malaise, sakit kepala, konstipasi, bradikardia, dan myalgia. Pada demam typhoid, demam yang terjadi dapat naik sangat tinggi (±39oC) lalu kemudian sampai fase plateau, dan dapat menyebabkan pembesaran lien dan hepar. Bercak merah (rose spot) juga biasanya muncul pada kulit abdomen atau dada pada kasus tertentu. Anthal leukosit biasanya normal atau rendah.

Lab Mikrobiologi FK UNS

56

Atlas Mikrobiologi Diagnosis dan Tes Laboratorium a. Spesimen Darah yang digunakan untuk kultur harus diambil secara berulang. Kultur urine dapat bernilai positif pada minggu kedua. Sampel agar juga harus diambil secara berulang dan berkala. Kultur agar dapat menunjukkan hasil positif pada minggu kedua atau ketiga. b. Metode Isolasi dari Salmonella 1. Media Kultur Selektif Digunakan Salmonella-shigella (SS) agar, Hektoen Enteric agar, XLD, atau deoxycholate-citrate agar. 2. Media Penyubur Spesimen yang digunakan biasanya berasal dari feses. Media yang digunakan adalah Selenite F atau tetrathinate broth, keduanya 3. Identifikasi Akhir Koloni suspek dari media solid diidentifikasi dengan pola reaksi biokimia tertentu dan dengan metode test aglutinasi pada object glass. c. Metode Serologis 1. Test Aglutinasi Pada test ini, serum yang diketahui dicampur dengan dengan hasil kultur yang belum diketahui pada deck glass. Reaksi positif berupa gumpalan akan dapat terlihat beberapa menit kemudian. Ada beberapa kit komersial yang digunakan untuk reaksi aglutinasi Salmonella berdasarkan antigen O mereka, yaitu: A, B, C1, C2, D, dan E. 2. Test Dilusi Aglutinasi (Test Widal) Serum aglutinin naik dengan tajam selama minggu kedua dan ketiga dari infeksi Salmonella typhi. Widal test digunakan untuk mendeteksi antibodi yang bereaksi dengan antigen O dan H. Setidaknya dua specimen serum pasien yang diambil dengan interval 7-10 hari diperlukan untuk membuktikan adanya kenaikan titer antibodi. Titer antibodi terhadap antigen O > 1/320 dan terhadap antigen H > 1/640 dianggap sebagai hasil positif. Titer tinggi pada antibodi yerhadap antigen Vi terdapat pada individu carrier. Hasil dari test ini harus diinterpretasi dengan hati-hati karena ada kemungkinan reaksi silang antibodi yang digunakan. Test ini tidak dapat digunakan untuk mengetahui demam enterik yang disebabkan oleh organisme selain Salmonella typhi.

Lab Mikrobiologi FK UNS

57

Atlas Mikrobiologi d. Imunitas Infeksi Salmonella typhi atau Salmonella paratyphi biasanya menyebabkan imunitas pada penderitanya. Infeksi ulang dapat terjadi namun biasanya gejalanya lebih ringan dari infeksi pertama. Meskipun demikian, relaps kemungkinan dapat terjadi pada 2-3 minggu pasca kesembuhan. IgA yang tersekresi dapat mencegah menempelnya Salmonella pada epitel usus. e. Terapi Terapi antimikroba terhadap infeksi Salmonella menggunakan ampicilin, trimethoprim-sulfametoxazole, atau chepalosporin generasi ketiga. Resistensi antibiotik diturunkan secara genetik pada plasmid bakteri. Uji sensitivitas antimikroba sangat diperlukan untuk memilih antibiotik yang tepat. Pada banyak individu carrier, Salmonella ditemukan menetap pada vesica vellea dan pada ductus biliaris. Beberapa carrier kronis dapat diobati dengan terapi medikamentosa saja, namun pada banyak kasus terapi medikamentosa harus didampingi dengan cholecystectomy. KLEBSIELLA Merupakan bakteri yang ada dalam saluran pernafasan dan feses pada manusia normal dengan jumlah sekitar 5 % dari jumalh bakteri normal yang ada. Pada keadaan patologis klebsiella bisa mengakibatkan infeksi saluran pernafasan. Klebsiella merupakan bakteri gram negatif, berkapsul. Pada penanaman di Mac.Conkey terlihat bentuk mukoid dan berwarna muda, bakteri yang ditanamam di Mac.Conkey menunjukan warna merah muda berarti bakteri tersebut memragi laktosa. Patogenis dari Klebsiella menghasilkan endotoksin yang menyebabkan inflamasi, demam, dan syok septik. Gambar: Koloni Klebsiella pada media Mac Conkey menunjukka gambaran khas berupa koloni yang terlihat mukoid atau seperti lendir.

Lab Mikrobiologi FK UNS

58

Atlas Mikrobiologi B. MEDIA IDENTIFIKASI Media identifikasi digunakan dengan melihat sifat-sifat biokimia dari organisme yang bereaksi dengan bahan-bahan yang ada pada media. Media Mac Conkey  Merupakan media isolasi bakteri gram negatif dan juga sebagai media differensiasi fermentasi laktosa terutama untuk keluarga enterobacteriae dan genus pseudomonas  Adanya kristal violet dan garam empedu menyebabkan gram positif tidak bisa tumbuh dikarenakan keduanya dapat merusak membran bakteri gram postif. Mengandung pepton, laktosa, dan nacl  Juga berfungsi sebagai media pembeda bakteri yang bisa dan yang tidak bisa memfermentasi laktosa  Bakteri yang memfermentasi laktosa akan menyebabkan suasana dalam media menjadi asam dengan menurunnya ph sehingga menyebabkan koloni kuman berwarna merah  Untuk bakteri yang memfermentasi kuat laktosa koloninya akan dikelilingi lingkaran warna merah muda dan yang lemah tidak dikelilingi lingkaran merah muda  Bakteri yang tidak memfermentasi laktosa tidak akan menghasilkan reaksi apapun (netral) sehingga koloni akan berwarna putih  Dari hasil fermentasi dan non fermentasi dapat disimpulkan bakteri yang memfermentasi laktosa bersifat non-patogen dan yang tidak memfermentasi laktosa bersifat patogen. Gambar: Media Mac Conkey yang ditumbuhi beberapa koloni organisme dengan sifat biokimia yang berbeda.

Lab Mikrobiologi FK UNS

59

Atlas Mikrobiologi MEDIA EOSIN METHYLENE BLUE (EMB) Eosin-methylene blue (EMB) agar adalah media padat plate (datar) yang dikembangkan oleh Holt-Harris dan Teague pada tahun 1916. EMB adalah media selektif untuk bakteri gram negatif, dan menghambat pertumbuhan bakteri gram positif. EMB juga bermanfaat sebagai media isolasi dan diferensiasi jenis basil gram negatif dan basil enterik (biasa disebut coliform dan fecal coliform). Bakteri yang memfermentasi laktosa pada medium membentuk koloni yang berwarna dan sebaliknya terbentuk koloni yang tidak berwarna pada bakteri yang tidak dapat memfermentasi laktosa. EMB juga digunakan untuk mengukur kualitas air untuk mengetahui adanya bakteri coliform dan fecal coliform sebagai tanda kontaminasi mikroorganisme patogen pada air. EMB juga digunakan untuk membedakan organisme pada grup colontyphoid-dysentry : koloni Escherichia coli tumbuh dengan kilat logam gelap (kehijauan), koloni Aerobacter aerogenes dengan berwarna coklat di pusatnya, dan koloni bakteri gram negatif yang tidak memfermentasi laktosa berwarna pink. EMB mengandung pepton, laktosa, sukrosa, dan zat warna eosin Y dan methylene blue. Pewarna methylene blue di dalam media ini menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif. Eosin adalah pewarna yang merespon perubahan pH, dari transparan menjadi hitam pada suasana asam (akibat fermentasi laktosa dan/atau sukrosa). Sebagai sumber energi, EMB hanya mengandung laktosa dan sukrosa tanpa glukosa. Gula-gula ini dapat difermentasi dan mendorong pertumbuhan bakteri, khususnya coliform fecal dan non fecal. Diferensiasi bakteri enterik dilihat dari kemampuannya untuk memfermentasi laktosa. Bakteri gram negatif yang memfermentasi laktosa (pada umumnya enterik) membuat media menjadi asam dan pada suasana asam, pewarna memproduksi kompleks ungu gelap disertai dengan koloni kilat logam kehijauan. Warna kilat logam kehijauan ini merupakan indikator adanya fermentasi laktosa dan/atau sukrosa dalam jumlah yang banyak pada koloni fecal coliform. Jika produksi asam lebih sedikit, akibat dari reaksi fermentasi yang lambat, akan memberikan warna coklat-pink pada koloni. Koloni bakteri yang tidak memfermentasi laktosa terlihat transparan atau pink.

Lab Mikrobiologi FK UNS

60

Atlas Mikrobiologi Gambar : E.coli dalam EMB (Coli type), terlihat koloni berwarna kilat logam kehijauan. Karena presipitasi methylene blue di medium akibat produksi asam yang sangat banyak dari reaksi fermentasi

Gambar : Pseudomonas aeruginosa (bakteri gram negatif) dalam EMB, koloni berwarna pink mukoid. Kurang gelap, sering ditemukan adanya titik gelap di tengah koloni berwarna cerah ("fisheye" type).

Gambar : Staphylococcus aureus (bakteri gram positif). Tidak ada pertumbuhan karena media EMB menghambat pertumbuhan bakteri gram positif.

Gambar : tidak memfermentasi laktosa sehingga tidak memproduksi asam.

Lab Mikrobiologi FK UNS

61

Atlas Mikrobiologi Gambar : EMB steril

MEDIA UREA AGAR Urea merupakan salah satu media identifikasi yang mengandung urea dan fenol red sebagai indikator. Media ini digunakan untuk mengidentifikasi kuman enterik yang memiliki enzim urease. Sehingga apabila kuman yang ditanam memiliki atau dapat menghasilkan enzim urease, maka urea yang ada didalam media dapat teruraikan dan menjadi CO2, air dan ammonia (NH3). Amonia yang terbentuk dari reaksi penguraian urea oleh urease akan mengakibatkan suasana basa dalam media. Sehingga fenol red yang terkandung didalam media akan berubah menjadi merah atau merah muda. Nah, hal ini dapat mengindikasikan bahwa kuman yang ditanam merupakan jenis kuman enterik yang dapat menghasilkan enzim urease. Dan jika media ini tidak berubah menjadi merah atau merah muda, maka artinya suasana media tidak berubah menjadi basa, dan itu berarti urea tidak terhidrolis dan menandakan kuman enterik tersebut tidak menghasilkan enzim urease. Kuman-kuman enteric yang mengasilkan enzim urease adalah Genus Proteus sp. san Kleibsiella sp. Berikut ini adalah reaksi biokimia dari media Urea Agar

Gambar: beberapa reaksi biokimia dari Media Urea Agar

Lab Mikrobiologi FK UNS

62

Atlas Mikrobiologi

TRIPLE SUGAR IRON AGAR (TSIA) TSI (triple sugar iron) agar yang mengandung 1% laktosa, 0.1% glukosa, dan 1% sukrosa. TSIA adalah media diferensasi solid-miring yang digunakan untuk mengetahui adanya reaksi fermentasi karbohidrat (KH) dan produksi H2S. TSIA paling sering digunakan untuk identifikasi Enterobacteriaceae. TSIA sebenarnya serupa dengan KIA, bedanya hanya pada jumlah KH, KIA hanya punya 2 KH (glukosa dan laktosa). Selain karbohidrat, medium ini juga mengandung ekstrak daging, ekstrak ragi, dan pepton yang menjadi sumber nitrogen, vitamin, dan mineral. Phenol red merupakan pH indikatornya. Terdapat dua bagian TSI yaitu slant yang miring dan bersifat aerob dan butt yang berada di dasar bersifat anaerob. Ketika terjadi fermentasi karbohidrat, pH media akan menjadi asam dan warna akan berubah dari merah-kekuningan menjadi kuning. Merah gelap menunjukkan adanya alkilasi pepton. Hasil fermentasi KH dapat kita lihat setelah dilakukan ikubasi selama 1824 jam pada suhu 37˚C. Fermentasi KH dapat berlangsung dalam kondisi aerob dan anaerob. Fermentasi KH K/A (slant : merah, butt : kuning) : glukosa difermentasikan, tapi tidak terjadi fermentasi sukrosa atau laktosa. KH difermentasi melalui jalur Emben-Meyerhof-Parnas menghasilkan ATP dan piruvat. Pada slant, piruvat selanjutnya dimetabolisme menjadi CO2, H2O, dan energi. Fermentasi glukosa terjadi setelah inkubasi selama 18 jam. Jika bakteri tidak dapat menggunakan laktosa atau sukrosa, pepton (asam amino) akan dimetabolisme secara aerobik. Metabolisme pepton akan menghasilkan ammonia (NH3) dan terjadi peningkatan pH dan mengubah warna indikator pH menjadi merah. Pada butt (anaerobik) terjadi metabolisme glukosa untuk memproduksi ATP dan piruvat, yang dikonversikan menjadi produk akhir yang stabil, oleh karena itu, butt seringkali asam. Contoh : Citrobacter freundii , Citrobacter koseri, and Morganella morganii.

Lab Mikrobiologi FK UNS

63

Atlas Mikrobiologi A/A (slant : kuning, butt : kuning) : glukosa, laktosa dan/ sukrosa terfermentasi. Bakteri yang memfermentasi glukosa, laktosa, dan/ sukrosa akan menghasilkan reaksi (A/A). pada beberapa jam, bakteri memetabolisme glukosa sehingga terjadi reaksi (A/A). Jalur Emben-Meyerhof-Parnas akan terjadi di slant dan butt untuk memproduksi ATP dan piruvat. Pada slant, piruvat selanjutnya dimetabolisme menjadi CO2, H2O, dan energi. Setelah inkubasi (18 jam), glukosa telah habis difermentasi sehingga sumber energi selanjutnya yang digunakan untuk metabolisme adalah laktosa dan sukrosa, inilah yang menyebabkan kondisi asam pada slant. Jika medium diinkubasi lebih lama (48 jam), laktosa dan sukrosa akan habis, sehingga pada slant, sebagai gantinya bakteri akan memetabolisme pepton sehingga akan terjadi reaksi alkali. Pada butt (anaerobik) terjadi metabolisme glukosa untuk memproduksi ATP dan piruvat, yang dikonversikan menjadi produk akhir yang stabil, oleh karena itu, butt seringkali asam. Contoh : Enterobacter aerogenes, E. cloacae, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, and K. Pneumoniae. K/K (slant : merah, butt: merah) atau (K/NC) : tidak terjadi fermentasi glukosa, laktosa, dan sukrosa. Beberapa bakteri nonenterik seperti pseudomonas, tidak dapat memfermentasikan glukosa, laktosa, dan sukrosa. Bakteri ini mendapatkan energi dari pepton yang dimetabolisme secara aerob dan anaerob sehingga menghasilkan NH3 yang mengubah indikator pH menjadi merah. Jika bakteri memetabolisme pepton secara aerob dan anaerob, maka slant dan butt akan berwarna merah (K/K). Sedangkan jika pepton hanya dimetabolisme secara aerob, slant akan berwarna merah dan butt tidak berubah warna (K/NC). Contoh bakteri pada kelompok ini adalah Acinetobacter sp. dan Pseudomonas sp. Produksi gas Produksi gas positif (CO2 dan O2) jika terdapat gelembung gas pada butt, seringkali agar terlihat pecah atau terdorong keatas. Contoh bakteri penghasil gas : Enterobacter aerogenes, E. cloacae, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, and K. Pneumoniae. Produksi H2S Sodium thiosulfat yang terdapat didalam medium akan direduksi menjadi hidrogen sulfid (H2S), gas yang tidak berwarna. H2S selanjutnya akan bereaksi dengan ferro amonium sulfat menghasilkan besi sulfid, presipitat berwarna hitam yang terdapat di butt. Adanya presipitat hitam ini mengindikasikan

Lab Mikrobiologi FK UNS

64

Atlas Mikrobiologi bakteri memproduksi H2S pada kondisi asam (warna kuning pada butt), walaupun terkadang warna kuning tidak terlihat jelas. Jika terdapat kondisi seperti ini, dapat dikatakan acid over acid (A/A), H2S +.

A

B

Note : gambar A 1. Media steril = warna orange 2. K/A (merah/kuning) + H2S (hitam) + Gas (lihat di dasar tabung) (inkubasi 18 jam). Salmonella 3. K/A (merah/kuning) + H2S (hitam) + Gas (lihat di dasar tabung) (inkubasi 48 jam). Warna kuning tertutup oleh H2S yang berwarna hitam. Salmonella 4. K/A + H2S + Gas (18 jam). Gas tidak terlihat pada gambar ini. Proteus 5. K/A + H2S + Gas (48 jam). Proteus Note : Gambar B 1. Media steril = warna orange 2. A/A + Gas. Klebsiella 3. A/A (18 jam). Yersinia enteocolitica 4. A/A (48 jam). Pada slant terlihat sedikit merah akibat produksi asam yang sedikit dan mengalami oksidasi pada permukaan media. Yersinia enteocolitica

Lab Mikrobiologi FK UNS

65

Atlas Mikrobiologi 5. A/A + H2S + Gas. Dapat ditemukan hasil reaksi mirip dengan salmonella tetapi warna hitam yang dihasilkan sedikit. Gas tidak terlihat Pada gambar ini. Citrobacter SIMON CITRAT Agar simon citrate adalah media yang dibuat dari sodium sitrat yang merupakan sumber utama dari karbon dan ammonium merupakan sumber utama dari nitrogen. Indikator pH pada simon citrate yaitu Bromothymol blue (BTB). Hasil reaksi dari simon sitrat yaitu biru untuk hasil positif dan hijau untuk hasil negatif. Gambar: Hasil reaksi Simon Citrat positif dan negatif.

SC (-)

SC (+)

SULFIDE INDOLE MOTILITY Media Sulfide indole motility (SIM) adalah media agar semisolid yang digunakan untuk mengidentifikasi pembentukan hidrogen sulfit (H2S), indol, dan motilitas bakteri. Media SIM digunakan untuk mendeferensiasi golongan bakteri famili Enterobacteriaceae. Media SIM mengandung pepton dan natrium thiosulfat sebagai bahan dasarnya, dan ferro ammonium sulfat sebagai indikator pembentukan H2S karena H2S merupakan gas yang tidak berwarna. Berikut adalah penjelasan mengenai reaksi yang terjadi pada media SIM: a. Reaksi pembentukan H2S Pepton yang dipakai sebagai bahan dasar media SIM adalah bentuk metabolit protein oleh enzim pepsin, jadi dalam pepton ini terdapat berbagai jenis asam amino, salah satunya adalah cysteine. Bakteri yang

Lab Mikrobiologi FK UNS

66

Atlas Mikrobiologi memiliki enzim cysteine desulfurase dapat menyebabkan cysteine kehilangan atom sulfurnya (S) jika ditambahkan dengan air (H2O) dan membentuk gas hydrogen sulfide (H2S). Berikut ini reaksi kimianya:

Reaksi pembentukan H2S dari cysteine Gas H2S merupakan gas yang tidak berwarna. Oleh karena itu sebagai indikator pembentukan H2S, dalam media SIM juga ditambahkan Fe(NH4)SO4 (ferro ammonium sulfat). Reaksi antara gas H2S dengan ferro ammonium sulfat akan membentuk presipitat ferro sulfit yang berwarna hitam. b. Reaksi pembentukan indol Asam amino tryptophan dapat dijumpai di hampir semua protein, termasuk pepton. Bakteri yang mempunyai enzim tryptophanase dapat menghidrolisis tryptophan ke dalam bentuk metabolitnya yaitu: indol, asam piruvat, dan ammonia. Bakteri menggunakan asam piruvat sebagai sumber karbon (C) dan ammonia sebagai sumber nitrogen (N), sedangkan indol tidak digunakan dan menumpuk dalam media SIM. Keberadaan indol dapat dideteksi dengan penambahan reagen Kovac. Reagen Kovac dengan indol akan menghasilkan warna merah cerah pada permukaan media (seperti cincin). Bakteri yang membentuk cincin merah dikatakan indol positif, sedang yang tidak membentuk cincin merah dikatakan indol negatif. Berikut ini reaksi kimianya:

Reaksi pembentukan ammonia

Lab Mikrobiologi FK UNS

67

Atlas Mikrobiologi Reaksi pembentukan cincin merah dari indol dengan penambahan reagen Kovac. c. Motilitas bakteri Media SIM merupakan media yang semisolid. Konsentrasi agar yang digunakan pada media SIM dibuat lebih rendah dari pelarutnya. Kondisi media yang semisolid ini ditujukan untuk melihat pergerakan bakteri. Kekeruhan serta penampakan ―akar pohon‖ yang terbentuk dari area di sekitar tusukan oshe pada tabung media SIM menjadi indikasi adanya pergerakan bakteri. Tabung media SIM yang telah diinokulasi dibandingkan dengan tabung yang belum diinokulasi untuk melihat kekeruhannya.

Gambar. Hasil test dari beberapa tabung: (A) tabung yang belum diinokulasi, (B) tabung mengandung bakteri Klebsiella pneumonia yang bersifat nonmotil dan indol negatif, (C) tabung mengandung bakteri Escherichia coli yang bersifat motil dan indol positif, (D) tabung mengandung bakteri Proteus mirabilis yang bersifat motil, indol negatif, dan memproduksi H2S.

Lab Mikrobiologi FK UNS

68

Atlas Mikrobiologi Smart Way of Identification Urea

Proteus

Urea

Salmonela

H2S

H2S

kleibsella

SC Asam

E. coli Indol

Shigella

Indol

Pseudomonas

Asam

Daftar Pustaka: Brooks GF, Carroll KL, Butel JS, Morse SA. (2007). Jawetz, Melnick, and Adelberg’s Medical Microbiology 24th edition. McGraw-Hill Companies, New York. MacWilliams, Maria P. (2009) Citrate Test Protocol http://www.microbelibrary.org/component/resource/laboratorytest/3203-citrate-test-protocol. Murray, PR et.al. (2007). Manual of clinical microbiology, 9th edition. American Society of Microbiology, Washington, D.C.

Lab Mikrobiologi FK UNS

69

BAB IV

Atlas Mikrobiologi BLOK UROGENITAL

TEKNIK SAMPLING URIN Pengambilan sample urin ada 3 macam : 1. Midstream (pancuran tengah): pengambilam sample urin ini banyak dilakukan karena lebih mudah dan murah. Metode ini di gunakan untuk melihat terkontaminasinya uretra anterior. Urin yang paling baik digunanakan adalah urin pagi hari. a. Cara: bersihkan dahulu dengan sabun di area kelamin , selanjutkan keluarkan urin pertama kemudian pertengahan pancancaran urin ditampung di wadah steril, setelah itu tutup wadah steril.

b. Intrepetasi hasil: hasil biakan dari sample urin midstream ini terkandung flora normal yaitu E.coli dan Lactobacillus. Normalnya adalah kurang dari 100.00/ml urin, jadi jika ditemukan lebih dari itu kemungkinan terkontaminasi. Jumlah kuman per mL urin

Penilaian

10 – 1000

Koloni tidak tumbuh atau terjadi kontaminasi di kulit/vagina

1000 – 100.000

Kemungkinan kontaminasi terlambat mengerjakan

Lab Mikrobiologi FK UNS

atau

70

Atlas Mikrobiologi ≥ 100.000

Terjadi ISK

c. Cara perhitungan koloni pada urin :

2. Metode katerisasi: metode ini digunakan pada pasien yang menggunakan kateter dengan syarat, urin yang terkumpul dalam kantong urin tidak boleh melebihi waktu 24 jam. Pengambilan sampel urin diambil pada selang percabangan kateter bukan pada urine bag. a. Cara pengambilan: pertama siapkan alat steril berserta wadah steril, lalu bersihkan area yang akan disuntikan yaitu area percabangan antara katetere dengan sambungan urine bag, setelah itu urin diambil dan ditaruh di wadah steril, kemudian ditutup.

b. Intepretasi hasil: Dinyatakan ISK bila didapat jumlah organisme 102 /ml urin-103 /ml urin 3. Metode suprapubik: metode ini digunakan untuk melihat kontaminasi bakteri anaerob.

Lab Mikrobiologi FK UNS

71

Atlas Mikrobiologi a. Cara mengambilan :

1

2

3 b. Intepretasi hasil: bila ditemukan biakan berarti terkontaminasi. Setelah kita mengetahui cara pengambilan sample urin, selanjutnya kita belajar cara transport sampel urin apabila sampel urin tidak digunakan langsung. Urin harus diperiksa paling lama 2 jam setelah diambil. Jika tidak bisa diperiksa dalam 2 jam, maka letakkan di refrigerator (suhu 4⁰C) atau dengan bahan pengawet (exp. asam borat). Untuk melihat adanya kontaminasi pada sampel urin yang telah kita ambil kita gunakan cara penanaman, yang dilakukan dalam parktikum bakteriologi urin, sebagai berikut : c. Alat dan bahan  lampu spiritus 1 buah  spreader 1 buah  mikropipet 10 μL  pipet tip steril 1 box  spesimen urin (10 ml) 1 botol  nutrien agar 1 plate

Lab Mikrobiologi FK UNS

72

Atlas Mikrobiologi d. cara kerja :

INFEKSI SALURAN KEMIH Infeksi saluran kemih (ISK) adalah penyakit yang ditandai dengan adanya bakteriuri dengan reaksi inflamasi. ISK melalui cara penularannya dapat dibedakan menjadi sexually transmitted disease (STD) dan unsexually transmitted disease (non-STD). ISK yang STD meliputi gonnorrhoea, siphilis, chancroid, bakterial vaginosis. ISK yang non-STD dibagi menjadi 2 tergantung dari posisi anatomis tubuh kita, yaitu ISK bawah (uretritis, cistitis, ureterocititis, prostatitis, orchitis) dan ISK atas (Pyelonefritis). Agen penyebab UTI biasanya adalah bakteri Gram negatif, pseudomonas, dan enterococcus yang dapat dikategorikan sebagai flora normal pada perineum, urethra, dan vagina. ISK akut 70-80% disebabkan oleh E.coli. ISK sederhana (uncomplicated) biasanya bukan disebabkan adanya obstruksi saluran, dan merupakan self limited disease (dapat sembuh sendiri), serta tidak menyebabkan komplikasi jangka panjang. Sedangkan ISK berkomplikasi (complicated) adalah ISK yang muncul selama kehamilan dan pada pasien dengan diabetes mellitus. Jenis Penyakit ISK 1. Prostatitis :  Infeksi pada prostat.

Lab Mikrobiologi FK UNS

73

Atlas Mikrobiologi  Entri kuman lewat uretra terjadi intraprostatik urin refluks, bakteri bermigrasi dari uretra akat vesica urinaria lewat ductus prostat. Dapat juga secara hematogen, limfogen dari rektum atau dari pembedahan prostat.  Penyebab : Gram-negatif uropatogen (E coli, Klebsiella, dan Pseudomonas) 2. Epididimitis  Infeksi pada epididimis  Chlamidya trachomatis dan Neisseria gonorrhoeae adalah bakteri penyebab paling sering pada dewasa muda. Enterobactericeae dan coccus gram positif lebih sering menjadi penyebab pada pasien yang lebih tua.  Jalur penyebaran : Retrogard dari uretra prostatik ke vas deferens lalu ke epididimis. 3. Pyelonefritis  Infeksi parenkim ginjal.  Jalur penyebaran : Infeksi retrogars dengan cara ascending dari vesica urinari dan secara hematogen.  Penyebab : E coli, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Pseudomonas, Serratia, Enterococcus, dan Staphylococcus species. 4. Cystitis bakterial  Jalur penyebaran : mekanisme asenden.  Penyebab : E coli, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Pseudomonas, Serratia, Enterococcus, dan Staphylococcus species. 5. Uretritis  Infeksi pada uretra  Penyebab tersering : Neisseria gonorrhoeae Klasifikasi ISK 1. Infeksi pertama (First infection)  Infeksi pertama kalinya  Umumnya uncomplicated, sensitif terhadap AB  Sering pada wanita muda, 1/3 nya akan reccurens 2. Unresolver bacteriuria Urine tak pernah steril selama terapi. Penyebab :  Resisten terhadap AB  Pasien tidak disiplin  Infeksi campuran  Reinfeksi  CRF

Lab Mikrobiologi FK UNS

74

Atlas Mikrobiologi 

Bakteri menjadi resisten

Uji Diagnostik 1. Pemeriksaan laboratorium  Leukosit : Dapat dikatakan UTI jika terdapat 2-5 atau lebih sel darah putih  Kultur urin (gold standard) dan hitung jumlah bakteri 2. Urine dipstick test  Leucocyte esterase test (suatu enzim yang terdapat dalam granul primer netrofil)  Nitrit test (hasil perbahan nitrat oleh enzym nitrate reductase pada bakteri) Jalur Penyebaran 1. Ascending dari vesica urinari refluks ke ginjal menyebabkan pyelonefritis atau ke urethra lalu ke prostat menyebabkan prostatitis 2. Hematogen (melalui aliran darah) : Ke ginjal, prostat, testis 3. Limfogen (melalui aliran limfe) : exp: dari usus, cervix ke vesica urinari, ginjal 4. Direct extention (perluasan langsung) : exp: dari usus ke vesica urinary Bakteri Penyebab ISK A. Neisseria Gonorrhoeae 1) Overview Nesseria gonorrhoe merupakan salah satu spesies bakteri gram negatif, berbentuk seperti biji kopi (coffee bean shaped – diplococcus). Biasanya N gonorrhoe disebut juga dengan gonococcus. Bakteri ini merupakan bakteri yang hidup secara anaerob serta sering pada bagian intraseluler tubuh. N gonorrhoe dapat menyebabkan penyakit menular seksual atau melalui penularan secara vertikal antara ibu dengan bayi yang baru dilahirkan. Bakteri ini sering menginfeksi membran mukosa. Epitel yang sering diinfeksi oleh bakteri ini adalah epitel kuboid atau kolumnar (Wong B, 2013).

Lab Mikrobiologi FK UNS

75

Atlas Mikrobiologi Baanyak faktor yang mempengaruhi virulensi dan patogenitas dari N gonorrhoe, yaitu: 1. Pili membantu menempelnya gonococcus ke permukaan membran mukosa dan berkontribusi dalam pencegahan penghancuran oleh neutrofil. 2. Opacity-associated (Opa) protein dapat meningkatkan adherence antara gonococcus dan fagosit, invasi ke sel host, dan menikatnya kemungkinan untuk menekan sistem imun.. 3. Porin channels (porA, porB) berada pada membran terluar dari bakteri. Porin channels ini sangat berperan dalam virulensi. 4. TetM melindungi ribosom dan menyebabkan resistensi terhadap tetrasiklin. Gonococcus menempel pada sel mukosa host dan dalam waktu 24-48 jam, berpenetrasi di subepitelial. Respon pada host berkarakteristik dengan invasi dari neutrofil, diikuti dengan epithelial sloughing, formasi dari mikroabsesb submukosa, dan discharge purulen. 2) Mikrobiologi Didalam laboratorium, N gonorhoe di tumbuhkan di dalam media agar coklat dengan karbondioksida. Dari sebelas species Neisseria yang menyerang manusia, hanya ada dua yang patogen. Salah satunya yaitu Neisseria gonorhoe yang menyebabkan penyakit gonorrhea. Neisseria biasanya diisolasi media Thayer-Martin agar, yaitu agar yang mengandung antibiotik (vancomycin, colistin, nystatin, dan TMP-SMX) dan nutrisi untuk memfasilitasi pertumbuhan spesies Neisseria dengan menghambat pertumbuhan bakteri lain dan jamur (Genco, 2010). B. Chlamydia Trachomatis 1) Overview Chlamydia merupakan bakteri gram negatif obligat intraselular hanya dapat berkembang biak didalam sel eukariot hidup dengan membentuk semacam koloni atau mikrokoloni yang disebut Badan Inklusi (BI). Chlamydia membelah secara benary fision dalam badan intrasitoplasma. C. trachomatis berbeda dari kebanyakkan bakteri karena berkembang mengikuti suatu siklus pertumbuhan yang unik dalam dua bentuk yang berbeda, yaitu berupa Badan Inisial. Bentuk perbedaan morfologi Chlamydia adalah sebagai berikut :

Lab Mikrobiologi FK UNS

76

Atlas Mikrobiologi a. Partikel infeksius yang disebut sebagai elementary body (EB) atau badan elementer, suatu bentuk yang lebih kecil (30-400nm) dan terdapat diluar sel (extracelluler) yang dapat menimbulkan infeksi.

b. Intrasitoplasmik, adalah bentuk yang dapat bereproduksi yang disebut Reticulate Body (RB) atau badan retikulat dengan bentuk yang lebih besar (800-1000nm) dan terdapat didalam sel (Intraceluller) yang tidak menimbulkan infeksi Antigen pada permukaan chlamydia dapat diklasifikasikan sebagai Lipopolisakharida (LPS) dan Major Outer Membrane Protein (MOMP) yang merupakan antigen spesifik Chlamydia. Heat Shock Protein (HSP) yang terkode secara genetik berhubungan dengan respon imunopatologik namun sampai sekarang belum jelas apakah respon anti bodi terhadap CHSP 60 memang terlibat dalam imunopatologik chlamydia atau semata-mata sebagai petanda infeksi chlamydial yang persintel. Species C. trachomatis mempunyai 515 serovar, dimana serovar A,B dan C menyebabkan tarchoma, serovar D sampai K menyebabkan infeksi genital, serovar L1 sampai L3 menyebabkan limfogranuloma venereum (LGV). Bakteri ini menyebabkan beberapa penyakit, diantaranya: - Nongonococcal urethritis (NGU): ada discharge uretrha, bisa berkembang menjadi epididimitis, prostatitis pada pria dan salpingitis, pelvic inflammatory disease (PID) pada wanita. Berulangnya episode dari salpingitis dan PID pada wanita bisa

Lab Mikrobiologi FK UNS

77

Atlas Mikrobiologi -

mengakibatkan infertilitas maupun kehamilan ektopik. Disebabkan Type D-K. Trachoma: Disebabkan tipe A-C. Bisa menyebabkan keratokonjungtivitis kronis bahkan kebutaan. Menyebar melalu kontak antar manusia melalui sekret mata maupun udara. Neonatal Conjunctivitis : hampir 50% pada wanita pengidap penyakit dengan C.Trachomatis. Yang paling sering adalah inclusi konjungtivitis pada bayi lahir. Sindroma Reiter: suatu sindroma yang terdiri dari tiga gejala yaitu: artritis, uretritis dan konjungtivitis, yang dikaitkan dengan infeksi genital oleh C. trachomatis. Hal ini disokong dengan ditemukannya ―Badan Elementer‖ dari C. trachomatis pada sendi penderita dengan menggunakan teknik Direct Immunofluerescence.

2) Mikrobiologi Ada beberapa cara untuk memeriksa bakteri, diantaranya: a) Biakan Ini merupakan metode tradisional untuk diagnosis laboratorium dan tetap sebagai metode pilihan untuk spesimen medikolegal dimana sensitifitas diperkirakan 80-90 % dan spesitasnya 100 %. Yang dapat digunakan adalah sel-sel Mc. Coy yaitu sel-sel yaitu sel-sel fibroblas tikus (L-cells). Biakan sel dapat juga digunakan mencari bahan inklusi Chlamydia dengan bantuan grup spesifik fluorescein-labelled antibodi monoklonal terhadap C. trachomatis. Prosedur ini membutuhkan mikroskop fluorescens b) Pemeriksaan Mikroskopik Pewarnaan giemsa atau larutan yodium dan diperiksa dengan mikroskop cahaya biasa. Pada pewarnaan Giemsa, Badan Inklusi (BI) terdapat intra sitoplasma sel epitel akan nampak warna ungu tua, sedangkan dengan pewarnaan yodium akan terlihat berwarna coklat. Jika dibanding dengan cara kultur, pemeriksaan mikrosopik langsung ini sensitifitasnya rendah dan tidak dianjurkan pada infeksi asimtomatik. c) Deteksi Antigen Langsung Dikenal 2 cara pemeriksaan antigen yaitu : i. Direct Fluorescent Antibodi (DFA) Cara ini merupakan test non-kultur pertama dimana C. trachomatis dapat ditemukan secara langsung dengan

Lab Mikrobiologi FK UNS

78

Atlas Mikrobiologi

ii.

metode monoklonal antibodi yang dilabel dengan fluorescein. Dengan teknik ini Chlamydia bebas ekstraseluler yang disebut badan elementer (BE) dapat ditemukan. Kadang-kadang juga dapat ditemukan badan inklusi intrasitoplasmik. Cara ini tidak dapat membedakan antara organisme mati atau hidup, tetapi keuntungannya tidak membutuhkan biakan sel jaringan dan hasilnya dapat diketahui dalam 30 menit. Enzym Immuno Assay (EIA) Banyak tes-tes yang tersedia saat ini menggunakan teknik ini. Tidak seperti DFA, EIA bersifat semiautomatik dan sesuai digunakan untuk memproses spesimen dalam jumlah besar.

d) Serologi Tes serologik tidak digunakan secara rutin dan luas untuk diagnosi infeksi traktus genitalis chlamydial kecuali untuk LGV, oleh karena dijumpai prevalensi antibodi pada populasi seksual aktif yang mempunyai resiko tinggi terhadap infeksi C. trachomatis, yaitu berkisar 45 -60 % dari individu yang diperiksa. Walupun tidak selalu dijumpai pada setiap kasus infeksi genital tanpa komplikasi, antibodi terhadap C. trachomatis biasanya timbul setelah infeksi dan dapat menetap selama bertahun-tahun. Respon Ig M dapat dilihat pada infeksi episode pertama. Berbagai teknik serologik diaplikasikan untuk mempelajari infeksi clamydial antara lain: i. Complement Fixation (CFT) CFT menggunakan antigen 'group' chlamydia untuk mendeteksi serum antibodi terhadap semua anggota genus ini. Konsekuensinya, deteksi antibodi terhadap antigen lipopoly sacharida chlamydial tidak dapat membedakan antara infeksi C. trachomatis dengan C. psittaci dan juga tidak cukup sensitif untuk deteksi antibodi terhadap C. pneumonia. ii. Microimmunofluorescence (MIF) MIF menggunakan antigen chlamydial purifikasi tertentu yang ditempatkan diatas slide kaca bereaksi dengan serum penderita. Test ini sensitif dan spesifik, dimana pada

Lab Mikrobiologi FK UNS

79

Atlas Mikrobiologi sebagian besar kasus dapat memberikan informasi mengenai serotype infeksi C. trachomatis. Selain di serum, antibodi dapat juga ditemukan pada sekresi lokal tubuh lainnya seperti air mata dan sekresi genital. Antibodi C.trachomatis dapat diklasifikasikan menurut Ig (IgM, IgG dan IgA) dengan teknik ini. Respon IgM merupakan ciri infeksi akut dan terutama digunakan dalam diagnosis infant chlamydial pneumonia. Hasil serologik chlamydial biasanya diinterprestasikan sebagai berikut:  Infeksi akut : titer IgM > l/8 dan/atau peningkatan 4 kali lipat atau lebih, atau penurunan titer IgG.  Infeksi kronik : titer IgG tetap tinggi > l/256. l5 e) Tes DNA Chlamydia i. DNA Hibridisasi (DNA Probe) Test ini sensitifitasnya kurang dibandingkan metode kultur yaitu 75-80% dan spesifitas lebih dari 99 %. ii. Nucleic Acid Amplification Teknik amplifikasi nukleat yang terbanyak dipakai yaitu : Polymerase Chain Reaction (PCR) dan Ligase Chain Reaction (LCR). Test ini memiliki sensitifitas dan spesifisitas tinggi, dan dapat menggunakan non-invasif spesimen seperti urine untuk menskrining infeksi asimtomatik pada wanita maupun pria C. Gardnerella Vaginalis 1) Overview Gardnerella adalah salah satu genus dari bakteri gramvariabel yang mana merupakan suatu spesies. Gardnerella vaginalis dapat menyebabkan bacterial vaginosis pada wanita. Salah satu dari spesies Haemophilus, tumbuh, berukuran kecil, sirkuler, koloni abu-abu, di

Lab Mikrobiologi FK UNS

80

Atlas Mikrobiologi bawah mikroskop terlihat gram negatif, namun sebenarnya memiliki dinding sel gram positif, dengan sel clue, sel epitel yang menyelimuti bakteri. 2) Morfologi Bacterial vaginosis (BV) adalah suatu flora vagina yang hidup secara normal, lactobacilli termasuk Gardnerella vaginalis dan anaerob ini ditunjukan dengan adanya warna abu-abu, homogen, terkait dengan pH. Ada pada sebagian wanita dengan kondisi yang asimptomatis. Bahwa Gardnerella vaginalis bukan dari kondisi saja, tetapi juga reduksi dari Lactobacilli dan peningkatan jumlah bakteri termasuk bakteri Gardnerella, bacteroides and mobiluncus, anaerobic streptococci, Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum. Gardnerella vaginalis secara seksual ditransminasi oleh coccobacillus. 3) Penyebab, Gejala dan Penyebaran Cairan alat kelamin perempuan yang terinfeksi mengandung banyak sel darah putih (leukosit) dan warnanya agak kekuningkuningan hingga hijau. Umumnya kental dan berbau. Organ perempuan yang dapat terkena infeksi adalah vulva, vagina, leher rahim, dan rongga rahim. Penyebab infeksi dapat dari kuman/bakteri, jamur, parasit, dan virus. 4) Mikrobiologi Pada uji tes katalase, oksidase, reduksi nitrat, indole, dan urease semuanya negatif. Kuman ini bersifat fakultatif, dengan produksi akhir utama pada fermentasi b e r u p a a s a m a s e t a t , banyak galur yang juga menghasilkan asam laktat d a n a s a m format. Ditemukan juga galur anaerob obligat. Dan untuk pertumbuhannya dibutuhkan tiamin, riboflavin, niasin, asam folat, biotin, purin, dan pirimidin. Berbagai literatur dalam 30 tahun terakhir membuktikan bahwa G. Vaginalis berhubungan dengan bacterial vaginalis.

Lab Mikrobiologi FK UNS

81

Atlas Mikrobiologi D. Treponema Pallidum 1) Overview Treponema Pallidum adalah bakteri penyebab penyakit Sifilis. Treponema pallidum berbentuk spiral, negatif-Gram dengan panjang rata-rata 11 μm (antara 6-20 μm) dengan diameter antara 0,09 – 0,18 μm. Bentuknya seperti double helix/ helicial coil yang nampak pada mikroskop lapang gelap atau immunoflouresen. Manusia adalah satusatunya host bagi bakteri ini. Figure 1. Treponema Pallidum Treponema pallidum mudah hancur pada suhu 42 ° C (107,6 ° F), dengan sabun dan air, dan dengan pengeringan. Hampir semua penularan melalui kontak seksual, kontak fisik yang sangat erat antara membran mukosa juga memungkinkan terjadinya transmisi, serta penularan melalui transfusi darah. (MedScape, 2012) 2) Mikrobiologi Diagnosis tergantung pada temuan klinis dari tes serologis dan hasil pemeriksaan cairan tulang belakang. Ada dua jenis pemeriksaan serologis untuk Treponema Pallidum, yaitu : 1. Non Treponemal antigen Test a. Reaksi Floculasi : Kahn, VDRL(Veneral Diseases Research Laboratory), Murata, Kline, Mazzini, Hinton, RPR(Rapid Plasma Reagin) b. Reaksi Ikatan komplemen : Wasserman, Kolmer #Kelebihan i. Murah dan mudah dikerjakan ii. Bila gejala klinis dan anamnesa jelas positif, tes ini menegakkan diagnose iii. Reaksi positif pada partner sex atau tersangka pada penyelidikan epidemiologi mempunyai arti penting iv. Bila titer cepat meningkat dan nilai positifnya diagnosa positif hampir pasti

Lab Mikrobiologi FK UNS

82

Atlas Mikrobiologi v. Pada tersangka sifiliskongenital dan juga untuk monitoring sifilis, tes kuantitatif sangat berharga sebagai alat diagnosis #kekurangan i. Bisa terjadi BFPR (Biological False Positive Reaction). Penyakit lain yang dapat menimbulkan BFPR pada test ini antara lain: Malaria, Lepra, Pelapsing fever, Lupus eritematosus, Leptospirosis, Lymfogranuloma venerum, Chancroid, Rhematoid anthritis dll. 2. Treponemal Antigen Test a) Reaksi Aglutinasi : TPHA (Treponema Pallidum Hema Aglutination) b) Reaksi fixasi komplemen : TPCF (Treponema Pallidum Complement Fixation) c) Reaksi Imobilisasi : TPI (Treponema Pallidum Immunoflourecen) d) Reaksi Immunoflouresen : FTA (Flouresen Treponema Antibodi) #Kelebihan i. Pemeriksaan ini lebih spesifik daripada non treponemal antigen test. E. Proteus sp. 1) Overview Proteus spesies merupakan salah satu bakteri Gram negative yang teridentifikasi sebagai kuman enteric. Proteus spesies ini menjadi bakteri yang infeksius hanya ketika bakteri ini meninggalkan saluran pencernaan. Bakteri ini dapat Figure 2. Gambaran swarmming menyebabkan pneumonia, dari Proteus Sp. bacterimia pada saluran kemih, dan infeksi local pada pasien rumah sakit (nosocomial infection). Pada sebagian laki-laki yang tidak melakukan sirkumsisi, bakteri ini berkembang baik dibalik preputium. 2) Mikrobiologi Proteus spesies memiliki bentuk batang, berflagel peritrich dan memiliki phili. Dikarenakan memiliki flagel yang lofotrich inilah Proteus sp. merupakan kuman enteric yang paling motil diantara

Lab Mikrobiologi FK UNS

83

Atlas Mikrobiologi kuman enteric lainnya. Sehingga pada media identifikasi kuman Sulfide Indole Motility (SIM), Proteus spesies merubahnya menjadi sangat keruh. Proteus spesies memproduksi enzim urease, bahkan kecepatan menghidrolisis urea sangat cepat. Sehingga pada media identifikasi kuman enterik berupa media urea, proteus spesies menunjukkan hasil positif. Proteus spesies juga merupakan bakteri yang menggunakan sitrat sebagai bahan karbon-nya. Sehingga Nampak positif pada media identifikasi kuman enterik berupa media Simon Citrat (SC) yang berubah menjadi warna biru. Proteus spesies juga menampakkan gambaran ―swarming‖ pada agar. DAFTAR PUSTAKA : Brooks G.F., Carrol K.C., Butel J.S., Morse S.A. (2007). Jawetz, Melnick & Adelberg’s Medical Microbiology 24th Edition. McGraw-Hill Companies, Inc : USA Daili SF, Makes WIB, Zubier F, Judanarso J. (2003). Vaginosis Bakterial. In: Maskur Z. editor. Penyakit menular seksual. Edisi kedua. Jakarta : FakultasKedokteran Universitas Indonesia.p. 79-84 Genco, C; Wetzler, L (editors) (2010). Neisseria: Molecular Mechanisms of Pathogenesis. Caister Academic Press. ISBN 978-1-904455-51-6. Harvey R.A. (2001). Lippincott's Illustrated Reviews Series : Microbiology. Lippincott Williams & Wilkins : USA Levinson W. (2010). Review of Medical Microbiology & Immunology, Eleventh Edition. The Mcgraw-Hill Companies, Inc. : USA. Pg 176 Maryani, Suryawati B., Hudiono, Prasetyo A.A., Tri N. S. (2011). Buku Praktikum Serologi. Laboratorium Mikrobiologi FK UNS. Mikalová L, Strouhal M, Cejková D, Zobaníková M, Pospíšilová P, Norris SJ, et al. (2010). Genome analysis of Treponema pallidum subsp. pallidum and subsp. pertenue strains: most of the genetic differences are localized in six regions. PLoS One.;5(12):e15713. Smajs D, Norris SJ, Weinstock GM. (2011). Genetic diversity in Treponema pallidum: Implications for pathogenesis, evolution and molecular diagnostics of syphilis and yaws. Infect Genet Evol. Wong, Brian. (2013). Gonorrhea. Diakses 30 Juli 2013. http://emedicine.medscape.com/article/218059overview#aw2aab6b2b4aa

Lab Mikrobiologi FK UNS

84

BAB V

Atlas Mikrobiologi BLOK KULIT

A. Sthapylococcus Sthapyloccocus adalah bakteri gram positif berbentuk cocus dan berkelompok seperti buah anggur. Spesies dari Sthapylococus ada banyak yang paling umum ditemukan adalah Sthapylococcus aureus, Sthapylococcu epidermidis, Sthapylococcus saprophyticus. Untuk membedakan antara spesies bakteri tersebut bisa dilihat dari sifat sifat setiap spesies tersebut dengan beberapa uji laboratorium. Selain sifat warna koloni pun berbeda, untuk Sthapylococcus aureus yang memiliki tingkat infeksi lebih tinggi memiliki warna abu-abu sampai kuning kecoklatan, sedangan untuk Sthapylococcus epidermidis yang merupakan flora normal pada kulit manusia lebih berwarna keputihan. Untuk membedakan apakah Sthapylococci patagogen atau tidak bisa juga dengan mengunakan uji MSA (Mannitol Salt Agar) jika patogen akan mengubah warna merah menjadi kuning. ( Sthapylococci dapat memfregmentasi dengan lambat karbohidrat. Berikut ini tabel perbedaan morfologi. Bakteri Uji Sifat lain Warna MSA koagulasi Sthapylococcus aureus

Positif

Sthapylococcu Negatif epidermidis (flora kulit normal) Sthapylococcus Negatif saprophyticus

Lab Mikrobiologi FK UNS

Betahemolisis

Kekuningan keemasan

Nonhemolisis

Keputihan

Nonhemolisis

Kehijauan/kuning

Merah menjadi kuning Tetap merah

-

85

Atlas Mikrobiologi

Gambar Sthapylococcus dalam pewarnaan gram, terlihat warna biru dengan bentuk cocus (bulat) dengan menggerombol seperti buah anggur Sumber gambar : Color Atlas of Diagnostic Microbiology

Gambar A. Sthapylococcus aureus , Gambar B. Sthapylococcus tampak area bening disekitar koloni epidermidis, menandakan bakteri ini dari agar darah yang menandakan tidak menghemolisis sifat beta-hemoliticus. Sumber gambar : Color Atlas of Diagnostic Microbiology

Lab Mikrobiologi FK UNS

86

Atlas Mikrobiologi

Gambar A. Sthapylococcus yang tidak memfragmentasi manitol sehingga tidak menghasilkan asam dan tidak merubah warna merah menjadi kuning(indikator fenol red).B. Sthapylococcus aureus yang merubah warna fenol red dari merah menjadi kuning. Sumber gambar : Color Atlas of Diagnostic Microbiology Sedangkan untuk membedakan Sthapylococcus dengan Streptococcus dengan uji katalase dimana Sthapylococcus mempunyai enzim katalase yang mengubah hidogen piroksida menjadi oksigen dan air.

Gambar A.uji Katelase untuk membedakan antara Sthapylococcus (menghasilkan enzim katalase merubah H2O2 menjadi O2 dan H2O) dengan Streptococcus(tidak memiliki enzim katalase).

Lab Mikrobiologi FK UNS

87

Atlas Mikrobiologi

Gambar B. Merupakan uji kougulase dimana Sthapylococcus aureus akan membentuk gumpalan fibrin sedangkan Sthapylococcus epidermidis tidak Sumber gambar : Color Atlas of Diagnostic Microbiology Patogenesis Sthapylococcus aureus menghasilkan beberapa enzim yang berguna dalam patogenesisnya : 1. Protein A inhibitor 2. Enterotoksin A-E 3. Toxic Shock Syndrome Toksin ini akan mengakibatkan penyakit toxic shock syondrome (TSS). 4. Enzim koagulase : berfungsi mengubah fibrinogen menjadi guumpalan fibrin. 5. Citolisis toksin-exotosin : berfungsi menghancurkan membran sel , termasuk sel darah sehingga dapat melisiskan darah. 6. Exfoliatin : menyebabkan scalded skin syndrome , ini yang menyebabkan terbentuknya bula pada stapilococal impetigo, terdapat dua jenis a yang heat stabile , yang B heat labile. 7. Leukosidin : membunuh sel darah putih. 8. Dan beberapa enzim lainya seperti : lipase, proteinase, beta-laktamase, spreading faktor, hyalurodidase.

Lab Mikrobiologi FK UNS

88

Atlas Mikrobiologi Gambaran Klinis No Penyakit 1.

2.

3.

4. 5. 6. 7.

8.

Gejala dan gambaran klinis Gastroentritis Mucul gejala setelah 2-6 jam dari infeksi dengan gejala mual, nyeri abdomen, muntah dan dapat diikuti oleh diare Endokarditis Demam, lemas, leukositosis,suara murmur pada jantung. Abses Subcutan memerah,lemas, dan bengkak terapa panas Toxic Shock Demam, hipotensi, rash, Syndrome kegagalan multi organ. Pneumonia Gejala pnumonia Impetigo Eritomatous papul hingga bula osteomyelitis Nyeri pada tulang, demam,titik lesi pada gambaran radiologi, pembekaan Surgucal infection Demam dengan selulitis dan abses

Patogen faktor (enzim) Enterotoksin A-E pada makanan yang termakan.

Pembekuan fibrin dan citolisis toxic. Koagulase enzim

Toxic Shock Syndrome Toksin Semua enzim Koagulase enzim, dan exfoliatin Citolisis enzim dan koagulasi enzim

Koakulase, exfoliatin , TSST.

bisa

Pengobatan Sthapylococcus menghasilkan enzim beta-laktamase , dimana akan menghambat kerja antibiotik golongan beta-laktam seperti contohnya penisilin. Antibiotik efektif adalah methicilin dan untuk topikal mupirocin. B. Streptococcus 1. Morfologi dan identifikasi Streptococci adalah bakteri Gram positif berbentuk coccus yang tersusun seperti rantai. Memiliki kapsul ( yang dapat mengganggu fagositosis) dan pili. 2. Karakteristik pertumbuhan

Lab Mikrobiologi FK UNS

89

Atlas Mikrobiologi Energi yang digunakan dari glukosa akan menghasilkan asam laktat sebagai produk akhir. Pertumbuhan dan hemolisis dibantu dengan kondisi 10% CO2. Streptococcus patogen tumbuh sangat baik pada suhu 37˚C. streptococcus adalah bakteri fakultatif anaerob dan dapat tumbuh dibawah kondisi aerob dan anaerob. 3. Klasifikasi Terdapat beberapa jenis cara me-klasifikasi streptococcus, yaitu : (1) morfologi koloni dan reaksi hemolitik pada agar darah, (2) spesifisitas serologi pada dinding sel dan antigen dinding sel atau kapsul, (3) reaksi biokimia dan resistensi faktor fisik dan kimia, dan (4) variasi ekologi. A. Reaksi hemolitik Banyak streptococcus yang dapat menghemolisis eritrosit (agar darah) dengan derajat yang bervariasi. 1) β-hemolisis β-hemolisis didefinisikan sebagai reaksi lisis komplit eritrosit. Tedapat zona jernih dan transparan pada medium di sekitar koloni. Banyak spesies bakteri yang memproduksi toksin yang dapat menghancurkan eritrosit. Salah satunya adalah Streptococcus pyogenes yang hanya memproduksi hemolisin yang labil oksigen (streptolisin O), hemolisin yang hanya akan aktif pada kondisi rendah oksigen (anaerobik). Hampir seluruh strain Streptococcus pyogenes juga memproduksi hemolisin stabil oksigen (Streptolisyn S) yang dapat melisiskan eritrosit pada kondisi udara lingkungan.

Lab Mikrobiologi FK UNS

90

Atlas Mikrobiologi Gambar 1 : (kiri) Streptococcus β-hemolitikus, Streptococcus pyogenes; (Kanan) Streptococcus pyogenes dapat dengan jelas memperlihatkan tulisan dibawahnya karena medium yang transparan. 2) α-hemolisis Adalah reaksi reduksi hemoglobin eritrosit menjadi methemoglobin pada media agar darah yang dapat terlihat di sekitar koloni menyebabkan perubahan warna media menjadi hijau atau coklat. Beberapa buku mendefinisikan bahwa alfa hemolisis adalah hemolisis eritrosit sebagian. Jika inkubasi diperpanjang, akan didapatkan beberapa spesies menjadikan media lebih jernih, akan tetapi masih dapat bayangan hijau atau coklat. Contoh spesies Streptococcus α-hemolisis disebut sebagai kelompok streptococcus ―Viridans‖, spesies seperti Streptococcus mutans, mitis, dan salivarius juga menunjukkan reaksi α-hemolisis.

Gambar 2 : Streptococcus α-hemolitikus : Streptococcus viridans 3) ɣ-hemolisis Menunjukkan tidak adanya reaksi hemolisis di sekitar koloni. streptococcus ɣ-hemolis atau Enterococcus faecalis biasanya tidak menghemolisis eritrosit setelah inkubasi selama 24 jam, tetapi terkadang akan menunjukkan α-hemolisis yang lemah.

Lab Mikrobiologi FK UNS

91

Atlas Mikrobiologi

Gambar 3 : ɣ-streptococcus atau Enterococcus faecalis B. Substansi spesifik grup (lancefield classification) Dikelompokkan menjadi grup A-H dan K-U tergantung dari karbohidrat yang terdapat pada dinding sel streptococcus. C. Capsular polysaccharides Antigen polisakarida ini digunakan untuk mengklasifikasikan S. pneumonia menjadi lebih dari 90 tipe dan untuk mengklasifikasikan streptococcus grup B (S. agalactie). D. Reaksi biokimia Reaksi biokimia pada streptococcus terdiri dari reaksi fermentasi, ada/tidaknya enzim (mis.katalase), dan tes resistensi agen antimikroba. Reaksi biokimia dilakukan setelah koloni ditumbuhkan dalam media dan setelah observasi reaksi hemolisis. Streptococcus pyogenes Hampir seluruh streptococcus yang mengandung antigen grup A adalah S. pyogenes. S. pyogenes adalah patogen pada manusia yang dihubungkan dengan reaksi invasi lokal atau sistemik serta gangguan imunitas poststreptococcal. Koloni S. pyogenes berukuran 1-2 mm dan menghasilkan zona β-hemolisis disekitarnya dengan diameter lebih dari 0,5 mm. 1. Struktur antigen Protein M adalah faktor virulensi utama pada S. pyogenes grup A. Antigen ini terdapat di dinding sel dan memiliki peran dalam patogenesis demam reumatik. Membran dinding sel streptococcus yang dimurnikan akan menginduksi pembentukan antibodi yang bereaksi terhadap sarcolemma jantung manusia. 2. Toksin dan Enzim Streptokinase yang diproduksi oleh streptococcus β-hemolitikus grup A mengubah plasminogen plasma menjadi plasmin (enzim proteolitik

Lab Mikrobiologi FK UNS

92

Atlas Mikrobiologi aktif yang mencerna fibrin dan protein lainnya). Proses ini dapat dicegah dengan serum antibodi inhibitor nonspesifik, antistreptokinase. Streptokinase dalam kedokteran dapat diberikan secara intravena (IV) untuk pengobatan emboli pada pulmo, arteri koroner, dan trombosis vena. Streptodornase (streptococcal deoxyribonuclease) medepolimerisasi DNA. Campuran streptodornase dan streptokinase digunakan sebagai debridemen enzimatik karena membantu mencairkan eksudat dan memudahkan pembersihan pus serta jaringan nekrotik. Antibodi terhadap DNAse dihasilkan setelah infeksi streptococcus, khususnya setelah infeksi kulit. Asam hyaluronidase merupakan faktor penyebaran infeksi mikroorganisme. Eksotoksin pirogen (toksin eritrogenik). Eksotoksin pirogen streptococcus telah dihubungkan dengan streptococcal toxic shock syndrome dan scarlet fever. Eksotoksin pirogen beraktivitas sebagai superantigen yang menstimulasi sel T dengan berikatan dengan major histocompatibility complex (MHC) kelas II pada reseptor sel T. sel T yang teraktivasi selanjutnya menghasilkan sitokin yang memediasi syok dan kerusakan jaringan. Diphosphopyridine nucleotidase. Substansi ini berhubungan dengan kemampuan organisme membunuh leukosit. Hemolisin. Streptolisin O adalah protein yang aktif menghemolisis tetapi dengan cepat tidak aktif jika terdapat oksigen. Orang yang terinfeksi streptococcus akan menghasilkan antistreptolisin O yang memblok hemolisis. Titer serum antistreptolysin lebih dari 160-200 menunjukkan nilai tinggi dan infeksi baru S pyogenes atau level antibodi tinggi persisten akibat respon imun berlebih terhadap paparan awal pada orang dengan hipersensitif. 3. Penyakit kulit yang disebabkan invasi oleh S pyogenes β-hemolitik grup A A. Erisipelas— infeksi pada lapisan permukaan kulit. Biasanya berawal pada wajah atau ekstremitas bawah, diperburuk dengan adanya nyeri, eritema superfisial, dan plaque-like edema dan berbatas jelas. B. Cellulitis—Streptococcal cellulitis adalah infeksi akut, dengan cepat menyebar pada dermis dan jaringan subkutan. Penyakit ini mengikuti trauma ringan, luka bakar, luka terbuka, atau insisi. Terjadi nyeri, pembengkakan, dan eritema.walaupun memiliki gejala yang hampir sama dengan erisipelas, Selulitis dapat dibedakan dari erisipelas dengan 2 gambaran klinis : pada lesi selulitis tidak meninggi, dan batas antara jaringan yang sakit dan yang sehat tidak jelas.

Lab Mikrobiologi FK UNS

93

Atlas Mikrobiologi C. Necrotizing Fasciitis (Streptococcal Gangrene)— infeksi jaringan subkutan dan fascia. Terjadi penyebaran nekrosis yang luas dan sangat cepat kulit dan jaringan subkutan. Bakteri lain selain S pyogenes dapat juga menyebabkan necrotizing fasciitis. Penyakit infeksi S pyogenes dan produksinya yang menyebabkan infeksi lokal A. Streptococcal pyoderma- infeksi lokal pada kulit, khususnya pada anak-anak yang disebut dengan impetigo. Terdapat vesikel yang pecah dan area yang dilapisi oleh pus dan akhirnya menjadi krusta. Penyakit ini sangat menular, khususnya pada iklim hangat dan lembab. Infeksi Group A streptococcal pada kulit dapat mendahului glomerulonefritis tetapi tidak jarang menyebabkan demam reumatik. 4. Uji diagnostik laboratorium A. Spesimen Spesimen dapat diambil dari swab tenggorok, pus, ataupun darah. Spesimen ini dipakai untuk di kultur. B. Apusan (smear) Jika apusan pus menunjukkan streptococcus tetapi pada kultur tidak dapat tumbuh, harus dicurigai adanya bakteri anaerob. C. Kultur Spesimen yang dicurigai mengandung streptococcus dikultur di media AGAR DARAH. Jika bakteri anaerob yang dicurigai, harus diinkubasi pada kondisi CO2 10%. D. Antigen detection test Uji ini menggunakan kit yang memakai enzim atau metode kimia untuk mengekstrak antigen dari swab, lalu menggunakan EIA atau uji agglutinasi untuk mengetahui adanya antigen. Uji ini memiliki 60-90% sensitivitas dan 98-99% spesifisitas. E. Uji serologis Peningkatan antibodi terhadap antigen streptococcus grup A dapat di perkirakan. Antibodi seperti antistreptolisin O (ASO), terutama pada penyakit sistem respirasi; anti-Dnase dan antihyaluronidase, terutama pada infeksi kulit; antibodi anti-M type-specific; dan lainnya. ASO dipakai secara luas untuk mengetahui imunitas melawan infeksi streptococcus. Streptococcus dibunuh oleh leukosit dan antibodi terhadap streptolisin O meningkat selama infeksi. antibodi ini memblok hemolisis oleh streptolisin O tapi tidak menunjukkan imunitas. Titer yang tinggi (>250) mengindikasikan adanya infeksi baru atau berulang

Lab Mikrobiologi FK UNS

94

Atlas Mikrobiologi dan lebih sering ditemukan pada individu dengan komplikasi rheumatik daripada orang yang tidak mengalami komplikasi. F. Uji optochin : untuk membedakan streptococcus α hemolitik. Pertumbuhan Pneumococcus dihambat oleh optochin, streptococcus α hemolitik lain tidak dihambat 5. Pengobatan Semua S pyogenes rentan terhadap penisilin G dan hampir seluruhnya rentan terhadap eritromisin. Beberapa resisten terhadap tetrasiklin. Pada kondisi infeksi akut, semua usaha harus dilakukan untuk membasmi streptococcus dari pasien, menghilangkan antigen stimulus (sebelum hari ke 8), sehingga mencegah pasien mengalami penyakit komplikasi poststreptococcus (seperti glomerulonefritis dan demam reumatik). Dosis penisilin atau eritromisin yang adekuat dapat membasmi streptococcus dalam waktu 10 hari. Antibiotik juga dapat mencegah reinfeksi streptococcus β-hemolitikus grup A pada pasien demam reumatik. Streptococcus agalactiae Merupakan streptococcus β-hemolitik grup B dan memproduksi zona hemolisis sedikit lebih besar dibanding koloninya (diameter : 1-2 mm). Streptococcus grup B adalah flora normal vagina pada 5-15% wanita. Infeksi streptococcus grup B pada bulan pertama kehidupan (neonatus) mungkin dapat menyebabkan meningitis, sepsis atau respiratory distress syndrome. Pemberian ampisilin IV pada ibu yang carrier streptococcus grup B pada persalinan dapat mencegah kolonisasi pada bayinya dan mencegah infeksi. Streptococcus viridans Spesies yang termasuk streptococcus viridans adalah S mitis, S mutans, S salivarius, S sanguis, dan lainnya. Memiliki sifat α-hemolitik, tetapi mungkin bisa nonhemolitik. Pertumbuhan bakteri ini dihambat dengan optochin. Merupakan flora normal yang lazim ditemukan pada saluran respirasi atas dan penting untuk mengetahui kondisi membran mukosa disana dan dapat mencapai aliran darah jika terdapat trauma sehingga dapat menyebabkan endocarditis pada katup jantung yang abnormal. Uji katalase Ada beberapa metode uji katalase, yaitu metode slide atau drop, tabung, semikuantitatif untuk identifikasi Mycobacterium tuberculosis, heatstable katalase untuk membedakan spesies Mycobacterium, dan metode tabung kapiler dan cover slip. Metode yang paling terkenal untuk uji bekteriologi adalah metode slide atau drop karena hanya membutuhkan sedikit jumlah mikroorganisme dan teknik yang mudah.

Lab Mikrobiologi FK UNS

95

Atlas Mikrobiologi Metode slide atau drop adalah prosedur untuk menilai secara kualitatif yang digunakan terutama untuk membedakan antara staphylococci dengan streptococci. Untuk bertahan hidup, organisme memiliki mekanisme untuk memperbaiki kerusakan oksidatif dari H2O2. Beberapa bakteri memproduksi enzim katalase yang memfasilitasi detoksifikasi selular. Katalasi menetralisir efek bakterisid dari hidrogen peroksida dan konsentrasinya dalam bakteri berbanding lurus dengan patogenitas. Uji katalase digunakan untuk menilai adanya enzim katalase pada bakteri. Uji katalase juga dapat membedakan bakteri aerob dan anaerob obligat (memiliki sedikit enzim). Katalase mempercepat pemecahan hidrogen peroksida (H2O2) menjadi air dan oksigen dengan reaksi : 2H2O2 + katalase → 2H2O + O2. Reaksi ini dinilai dengan pembentukan gelembung secara cepat. Untuk uji bakteri aerob, digunakan H2O2 3% yang disimpan dalam botol yang gelap. Sedangkan untuk identifikasi bakteri anaerob, dibutuhkan H2O2 15%. Uji katalase aerob dan anaerob ini digunakan untuk membedakan strain Clostridium yang aerotoleran dengan hasil katalase negatif terhadap spesies Bacillus yang katalase positif. Metode slide (drop) Cara : 1. Letakkan object glass didalam cawan petri. 2. Gunakan stik kayu untuk mengambil sedikit organisme dari koloni yang telah diisolasi 18-24 jam dan letakkan di atas object glass. Hatihati jangan sampai agar darah terambil karena dapat menyebabkan hasil positif palsu. 3. Gunakan pipet pasteur untuk meneteskan 1 tetes H2O2 3% pada object glass tadi, jangan dicampur(diaduk). 4. Segera mungkin tutup cawan petri untuk membatasi reaksi terhadap udara 5. Nilailah apakah terbetuk gelembung udara dengan cepat. Gelembung udara terjadi karena adanya O2 dan air. Hasil : Positif : adanya pembentukan secara cepat gelembung udara. Jika reaksi lemah, object glass dapat di taruh pada dasar yang gelap. Negatif : tidak ada gelembung udara yang terbentuk.

Lab Mikrobiologi FK UNS

96

Atlas Mikrobiologi

Gambar 4 : hasil uji katalase metode slide. Atas : reaksi positif yang diproduksi oleh Staphylococcus aureus; Bawah : reaksi negatif yang diproduksi oleh Streptococcus pyogenes Rangkuman Identifikasi

Lab Mikrobiologi FK UNS

97

Atlas Mikrobiologi Daftar Pustaka :

Brooks G.F., Carrol K.C., Butel J.S., Morse S.A. 2007. Jawetz, melnick & adelberg’s medical microbiology 24th edition. McGraw-Hill Companies, Inc : USA De La Maza, Luiz M. et all.1997.Color atlas of diagnostic microbiology. Mosby, New York. Lauise Hawley et al.2004. Kaplan Medical USMLE Lecture Notes. Kaplan Medical, New York. Taaro, Park K.2008. Foundation medical microbiology basic principle.17thed. Mc Graw Hill, New York.

Lab Mikrobiologi FK UNS

98

Atlas Mikrobiologi

Lab Mikrobiologi FK UNS

99