Reporte 2 - Medios de Cultivo

 

Universidad de San Carlos de Guatemala Facultad de Ingeniería Escuela de Ingeniería Química Laboratorio de Microbiología Ing. Carlos Wong

PRÁCTICA NO. 2: MEDIOS DE CULTIVO

Luis Emilio Garcia Laj !" "#!$% Secci&n Q Guatemala' "# de agosto del !"(

 

Índice

Introducci&n )bjetivos

# $

Cuer*o de investigaci&n

+Qu, es un medio de cultivo-

(

 lmacenamiento  lmacena miento

/

Metodología *ara la *re*araci&n de medios de cultivo

%

Conclusiones

"!

0ibliogra1ía

""

 ne2os

"

2

 

Introducción  

En esta *r3ctica se llev& a cabo la *re*araci&n de un caldo Lactosado con el 1in

de estudiar los di1erentes medios de cultivo 4ue e2isten' así como su utilidad dentro dent ro del laborato laboratorio rio de microbio microbiologí logía. a. 5ara esto' se *es& *es& una determin determinada ada cantidad del *olvo 6 se *rocedi& a disolverlo en una cantidad de volumen en un vaso de *reci*itados grande. 5osteriormente' 5osteriormente' se verti& en tubos de ensa6o con el 1in de obtener varias muestras del medio de cultivo. 5or 7ltimo' se les agreg& una cam*ana de 8ur9am' 4ue en este caso' sería la encargada de atra*ar el gas 4ue se gene genera ra si dentr dentro o de la muest muestra ra de es estud tudio io 9ubie 9ubiera ra bacte bacteria rias. s. Se reali: reali:& & 7nicamente dado a 4ue se deseaba conocer la metodología *ara *re*arar un medio de cultivo.

 

E2iste E2iste diversid diversidad ad de medios medios de cultivo' cultivo' cu6o cu6o 1in *rinci*a *rinci*all es estimula estimularr el

crecimiento crecimien to de microorganismos' microorganismos' *ara lo cual de*endiendo de*endiendo del ti*o 4ue se desee' se a;aden a;aden di1eren di1erentes tes sustanc sustancias ias *ara in9ibir in9ibir el crec crecimien imiento to de algunos algunos otros otros microorganismos 4ue no son de inter,s. Es *or esto 4ue deben seguirse las instrucciones *roveídas *or el 1abricante cuando se *re*ara un medio de cultivo *ara asegurar 4ue los resultados 4ue se obtendr3n sean re*roducibles. Cabe mencionar tambi,n 4ue el almacenamiento es otro 1actor im*ortante a tomar en cuent cuenta a cuand cuando o se *re* *re*ar ara a un medio medio de culti cultivo vo'' dado dado a 4ue 4ue *ued *ueden en result resultar  ar  sensibles a la lu: solar o a di1erentes condiciones de tem*eratura 6 *resi&n. Se inclu6e tambi,n algunas 1otogra1ías de los resultados resultados obtenidos de la *re*araci&n del caldo Lactosado dentro del laboratorio de Microbiología.

3

 

O!eti"o# $ener%&

 

Llevar a cabo el estudio de los medios de cultivo a trav,s de la *re*araci&n de un caldo Lactosado en el laboratorio.

E#'ec()ico# *. 8ar a conocer la clasi1icaci&n de los medios de cultivo. 2. Establecer los as*ectos im*ortantes *ara la *re*araci&n de un medio de cultivo.

+. 8e1inir las condiciones necesarias necesarias *ara el almacenamiento almacenamiento de un medio de cultivo.

,. 8etallar la metodología *ara la *re*araci&n del caldo Lactosado 6 agar.

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Cuer'o de &% in"e#ti-%ción /u0 e# un 1edio de cu&ti"o  

Un medio medio de de culti cultivo vo es una me:cla me:cla de nutrien nutrientes tes 4ue' 4ue' en en concentr concentracio aciones nes

adecu ad ecuad adas as 6 en cond condici icione ones s 1ísica 1ísicas s &*tim &*timas as'' *er *ermit miten en el creci crecimie mient nto o de los microorganismos. Estos medios son de suma im*ortancia en un laboratorio de Microbiología Microbiolo gía *or lo 4ue un control en su 1abricaci&n' *re*araci&n' *re*araci&n' conservaci&n conservaci&n 6 uso'' asegura uso asegura la e2actitu e2actitud' d' con1iab con1iabilid ilidad ad 6 re*rodu re*roducibi cibilida lidad d de los resultad resultados os a obtener. En la *r3ctica se em*lean distintos ti*os de medios de cultivo 4ue *ueden ser *re*arados en 1orma lí4uida o en 1orma s&lida. Usualmente *ara *re*arar un medi me dio o s& s&li lido do'' se *art *arte e de un medi medio o lí4u lí4uid ido o al 4ue 4ue se le a;ad a;ade e un agen agente te solidi1icante como el agar' la gelatina o la sílicagel. Es *osible clasi1icar a los medios de cultivo seg7n la naturale:a de sus com*onentes<



Medios naturales o com*lejos< constituidos en su ma6oría *or sustancias com*l m*lejas jas

de

orige igen

vegeta etal

6

animal imal''

las las

4ue

son

usualm lmen entte

com*lementadas *or la adici&n de minerales 6 otras sustancias. En ellos no se conocen todos los com*onentes' ni las cantidades e2actas *resentes de cada uno de ellos. 

Medios de1inidos o sint,ticos< son los medios 4ue tienen una com*osici&n 4uímica de1inida 4uímica de1inida cualitat cualitativam ivament ente e 6 cuantita cuantitativa tivament mente. e. Usualme Usualmente nte se em*lean en trabajos de investigaci&n.

=ambi,n es *osible clasi1icar a los medios de cultivo seg7n su uso<



Medi Me dios os de enri enri4u 4uec ecim imie ient nto< o< so son n medi medios os lí4u lí4uid idos os 4ue 4ue 1avo 1avore rece cen n el crecimiento de un ti*o de microorganismo en *articular. simismo' *ermiten aume au menta ntarr el n7mer n7mero o de micro microor organ ganism ismos os de ese ese ti*o. ti*o. Gener Generalm alment ente e co cont ntie iene nen n una una o m3s m3s su sust stan anci cias as in9i in9ibi bido dora ras s del del crec crecim imie ient nto o de los los microorganismos con e2ce*ci&n de los 4ue se desean cultivar. 5

 



Medios selectivos< son similares a los de enri4uecimiento' se distinguen *or  ser

medios

s&lidos

6

est3n

dise;ados

*ara

el

aislamiento

de

microorganismos es*ecí1icos.



Medios di1erenciales< son medios 4ue *oseen indicadores de *roductos derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. >o contienen ning7n ti*o de sustancia con actividad antimicrobiana. 5ermiten conocer  algunas de las características 1isiol&gicas de los microorganismos.

 

Los medios de cultivo *ueden ser *re*arados en el laboratorio a *artir de cada

uno un o de sus sus const constitu itu6e 6ente ntes s b3sic b3sicos' os' o *or sim*l sim*le e re9i re9idra dratac taci& i&n n de *rodu *roducto ctos s accesibles comercialmente ?medios de cultivo des9idratados@. Generalmente se *re1iere el uso de los medios de cultivo des9idratados des9idratados *or4ue' adem3s de 1acilitar  el tr trab abaj ajo' o' con con ello ellos s se tien tiene e ma6 ma6or *osi *osibi bili lida dad d de obte obtene nerr resu result ltad ados os re*roduc re*r oducible ibles. s. Entonce Entonces' s' al *re*ara *re*ararr un medio medio de cultivo cultivo'' deben deben tomarse tomarse en cuenta los siguientes as*ectos<



5re*ararlos 7nicamente a *artir de *roductos 4ue *rovengan de 1abricantes



o *roveedores 4ue suministren *roductos de calidad. Em*lear agua destilada o desminerali:ada con una calidad microbiol&gica 6



1isico4uímica adecuada. Utili:ar materiales de vidrio bien lavados 6 enjuagados con agua destilada o



desminerali:ada. Controlar el tiem*o 6 la tem*eratura recomendada durante su esterili:aci&n' 6a 4ue 4ue nunc nunca a se debe deben n e2ce e2cede derr las las co cond ndic icio ione nes s se se;a ;ala lada das s *or *or el 1abricante.

A&1%cen%1iento 6

 

 

Los medios de cultivo des9idratados des9idratados deben almacenarse almacenarse en envases sellados sellados

bajo las condiciones 4ue se;ale el 1abricante. Generalmente se almacenan en un lugar 1resco ?entre "( 6 (AC@' con *oca 9umedad 6 *rotegidos de la lu: solar  directa. >unca se deben almacenar cerca de autoclaves' 9ornos' ni otra 1uente de calor o va*or. Los medios de cultivo des9idratados son 9igrosc&*icos. Cuando los envases de estos medios de cultivo des9idratados son abiertos *ara su uso inicial' se debe debe te tene nerr la *rec *recau auci ci&n &n de ce cerr rrar arlo los s tan tan *ron *ronto to como como sea sea *osi *osibl ble e 6 mantenerlos mantener los bien cerrados *ara *revenir la entrada de 9umedad. La absorci&n de agua *roduce cambios en el *B' 1ormaci&n de grumos' decoloraciones del *olvo' etc.' etc .' lo cual cual indic indica a 4ue 4ue deben deben ser ser desca descarta rtado dos s *or4 *or4ue ue *ued *ueden en 9aber 9aber su1ri su1rido do cambios 4uímicos o estar contaminados.

Una ve: 4ue el medio de cultivo 9a sido *re*arado 6 esterili:ado' *uede almace alm acena narse rse a tem*er tem*eratu atura ra ambie ambiente nte *or un *erio *eriodo do m32imo m32imo de  seman semanas as *r *rot oteg egid ido o de la lu:' lu:' o *or *or *eri *eriod odos os ma6o ma6ore res s a "C "CD" D"( (C. C. >o obst obstan ante te'' almacenados bajo re1rigeraci&n entre C 6 %AC se e2tiende la vida 7til de los mismos' ?nunca *or debajo de !C 6a 4ue se destru6e la estructura del gel@. Los medios de cultivo se deben mantener en reci*ientes bien cerrados *ara evitar su des9idrataci&n 6 cuando se usa ta*&n de algod&n' se debe colocar *or encima una envoltura de *a*el ?Cra1t@. )tro *unto im*ortante a tomar en cuenta' es 4ue cada lote de medio de cultivo *re*arado *re*ara do debe *asar *or un riguroso *roceso *roceso de control de calidad calidad'' en donde se determinan sus *ro*iedades 1isico4uímicas ?a*ariencia' *B' etc.@ 6 microbiol&gicas ?ester ?es terili ilidad dad 6 *romo *romoci& ci&n n de crecim crecimien iento to@@ veri1i veri1ica cand ndo o 4ue 4ue cum*l cum*lan an con con los re4uisitos de calidad establecidos 6 *or ende demostrar 4ue son a*tos *ara su uso.

 

7

 

Metodo&o-(% '%r% &% 're'%r%ción de 1edio# de cu&ti"o  

En el laboratorio laboratorio se *re*ar& un medio de cultivo lí4uido ?caldo Lactosado@' Lactosado@' *or 

lo 4ue a continuaci&n se detallar3 la metodología de este<

*. 2. +. ,. 3.

Sus*ender !.% gramos de *olvo en %!! mililitros de agua. 8ejar re*osar *or ( minutos. Calentar con agitaci&n 1recuente 6 llevar a ebullici&n *ara disoluci&n total. 8istribuir en reci*ientes a*ro*iados' en este caso' tubos de ensa6o. Si se debe observar la *roducci&n de gas' agregar " cam*ana de 8ur9am a

cada reci*iente conteniendo medio de cultivo. 4. Esterili:ar en autoclave a ""C durante "( minutos. 5.  lmacen  lmacenar ar el medio de cultivo des9idratado des9idratado a "!D#(C' "!D#(C' 6 si se trata de un medio de cultivo *re*arado' a D%C.

  El caldo Lactosado es un medio rico en nutrientes 6 no contiene in9ibidores del crecimie crec imiento nto bacteria bacteriano. no. 5ermite 5ermite recu*er recu*erar ar c,lulas c,lulas injuriad injuriadas' as' dilu6e dilu6e sustanc sustancias ias t&2icas o in9ibitorias 6 1avorece el desarrollo de Salmonella con res*ecto a otras bacterias. El e2tracto de carne 6 la *e*tona son la 1uente de carbono 6 nitr&geno mientras 4ue la lactosa es el 9idrato de carbono 1ermentable. 5or la 1ermentaci&n de la lactosa se *roduce 3cido 6 gas ?el cual se evidencia al utili:ar las cam*anas 8ur9am@.

 

5or otra *arte' se detalla tambi,n la metodología metodología *ara la *re*araci&n *re*araci&n de un

medio de cultivo s&lido ?agar@<

*. Leer cuidadosamente el marbete del medio de cultivo des9idratado. 2. Cal Calcula cularr la cantidad cantidad necesaria necesaria *ara *re*ar *re*arar ar /! mililitro mililitros s de medio medio de cultivo s&lido des9idratado 6 seguir los *asos # 6 $. +. >o medir *B. >o es recomendable *ara medios 4ue contienen agarDagar. ,. =a*ar *ar el matr matra: a: 6 cale calent ntar ar 9ast 9asta a diso disolu luci ci&n &n tota total' l' *ara *ara ello ello agit agitar  ar  re*etidamente 6 evitar 4ue el medio de cultivo 9ierva 6 se derrame. 3. 8is 8istrib tribuir uir el medio medio de cultivo cultivo en material material a*ro*iado a*ro*iado'' como *or ejem*lo ejem*lo'' tubos de ensa6o.

8

 

4. =a*ar cada uno de los tubos con algod&n' eti4uetarlos 6 esterili:arlos en autoclave a ""AC 6 "( lb de *resi&n durante ! minutos.

Not% *. >o *i*etear el agar 1undido *ues se ta*ar3 la *i*eta. 5ara ello medir el volumen con agua 6 marcar los tubos' *osteriormente agregar el medio 9asta dic9a marca.

Not% 2. Un medio de cultivo s&lido ?agar@ se *uede *re*arar a *artir del medio de cultivo lí4uido ?caldo@' agregando a ,ste la cantidad necesaria de agarDagar ?"( a ! gramos de agar *or litro 6 medio@ *ara el volumen de medio de deseado.

 

9

 

Conc&u#ione# *. Los medios de cultivo *ueden clasi1icarse de acuerdo a su uso 6 a la naturale:a de sus com*onentes.

2. Es im*ortante tomar en cuenta las indicaciones del 1abricante al *re*arar el medio de cultivo *ara asegurar buenos resultados.

+. El almacenamiento de un medio de cultivo es de suma im*ortancia debido a 4ue 1actores como la lu: solar *ueden arruinarlo *or com*leto.

,. La *re*araci&n del caldo Lactosado dentro del laboratorio se reali:& de 1orma e2itosa.

10

 

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,. Universidad Central de Kene:uela. Facultad de Farmacia. 7Pre'%r%ción de 1edio# de cu&ti"o. Consultado el "!%!"(. "!%!"(. 8is*onible en 1ormato eb en< 9tt*