Relatório de Triglicérides

Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia - UESB Departamento de Química e Exatas - DQE Docente: Graziele Disciplina: Bioquímica Clínica Curso: Farmácia

Relatório de Bioquímica Clínica

Jequié/BA Junho/2013

Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia - UESB Departamento de Química e Exatas - DQE Docente: Graziele Disciplina: Bioquímica Clínica Curso: Farmácia

Determinação de Triglicerídeos

Relatório apresentado à disciplina de Bioquímica Clínica, sob a supervisão da professora Graziele, como requisito parcial de avaliação da I unidade.

Jequié/BA Junho/2013 2

Sumário

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Introdução

Os ácidos graxos ocorrem, principalmente, como ésteres de glicerol (acilgliceróis). A classe dos acilgliceróis depende do número de ácidos graxos presentes na molécula: monoglicerídios (um ácido graxo esterificado), diglicerídios (dois ácidos graxos esterificados) e triglicerídios (três ácidos graxos esterificados). Os triglicerídeos são as formas mais importantes de armazenamento de ácidos graxos, e os mesmos são sintetizados no fígado e intestino, sendo transportados nas formas de quilomícrons, VLDL e pequena parte (cerca de < 10%) das LDL presentes no plasma.  A função principal das lipoproteínas plasmáticas parece ser a de transporte dos triglicerídeos e do colesterol dos locais de origem, no intestino (origem exógena) e no fígado (origem endógena) para os locais de armazenamento e utilização. O HDL deve ser visto como tendo um papel vital no transporte do excesso de colesterol dos tecidos extra-hepáticos de volta para o fígado, por onde é excretado na bile (transporte reverso do colesterol). A remoção do excesso de colesterol celular das paredes arteriais pode ter um papel crucial em diminuir o acúmulo de colesterol nas paredes arteriais, inibindo a aterogênese. O aumento

da

HDL

retarda

o

aparecimento

de

aterosclerose

e

conseqüentemente faz a diminuição da progressão das doenças da artéria coronária. A HDL exerce efeito protetor com enzimas antioxidantes que podem prevenir algum processo inflamatório inicial (8). O papel antiaterogênico da HDL tem implicações importantes para o controle das doenças cardíacas Os triglicerídeos e o colesterol entram no plasma na forma de partículas de lipoproteínas ricas em triglicerídeos (quilomícrons e VLDL) e sofrem mudanças intravasculares através da enzima lipase lipoprotéica, que hidrolisa os triglicerídeos e os diglicerídeos em ácidos graxos e monoglicerídeos. A quase totalidade das gorduras ingeridas na dieta são triglicerídios formados por ácidos graxos saturados e insaturados. Alguns ácidos graxos piliinsaturados (ácidos linolénico, linolêico e araquidônico) não são sintetizados no organismo e devem ser supridos na dieta. Os triglicerídios da dieta são hidrolizados pela 4

ação das lipases pancreáticas e sais biliares para formar 2-monoglicerídios e ácidos graxos livres. Por difusão, os 2-monoglicerídios e os ácidos graxos entram no retículo endoplasmático das células da mucosa e são reesterificados a triglicerídos. Estudos experimentais investigam a elevação dos triglicerídeos no soro associada a aumento do risco de doenças coronarianas. Surgem evidências de que a hipertrigliceridemia é um fator de risco independente para doenças coronarianas , pois contribui para estas doenças por um efeito aterogênico direto das lipoproteínas ricas em triglicerídeos, particularmente as VLDL. O tamanho das partículas de VLDL liberadas depende da disponibilidade de triglicerídeos no fígado. Os valores de referência para o colesterol total, segundo o Expert Parol of the National Cholesterol Education Program (NCEP, 1987) são de até 200mg/dl (17). Altos níveis de LDL e baixos níveis de HDL estão relacionados com doenças cardíacas, sendo dessa forma necessárias dietas adequadas e exercícios físicos no intuito de diminuir esses níveis e evitar doenças cárdicas que matam milhões de pessoas todos os anos.

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Objetivos

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Geral: Realizar determinação de triglicérides em amostra de sangue. Específicos: Realizar teste cromogênio com leitura da absorbância no espectrofotômetro. Realizar cálculos dos valores obtidos da análise. Verificar resultados e comparar aos valores de referência.

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Material utilizado

Tubos de ensaio Seringa e agulha Centrífuga Espectrofotômetro Cubetas Micropipeta de 100 e 1000 microlitros  Algodão  Álcool 70 Garrote Ponteiras para micropipeta Reagentes

Reagente 1 Padrão

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Procedimento experimental

Para a coleta da amostra o paciente deve estar com peso e dieta estáveis por três semanas e em jejum de 12 a 14 horas. A abstinência alcoólica é desejável nas 72 horas que antecedem o teste. Obter a amostra com o paciente assentado. O torniquete não deve ser mantido por tempo maior que um minuto e deve-se obter a amostra de sangue após liberar o torniquete.  Após a retirada da amostra a mesma foi transferida para um tubo contendo EDTA (plasma), para posterior centrifugação. Realizada a centrifugação, o plasma da amostra foi retirado por meio de um filtro de separação. Tomaram-se três tubos de ensaio e procedeu-se como a seguir:

Misturou-se e colocou em banho-maria 37ºC por dez minutos. O nível da água no banho deve ser superior ao nível do reagente nos tubos de ensaio. Determinaram-se as absorbâncias do teste e padrão em 505 nm. A cor é estável por 60 minutos.

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Resultados e discussão

 Após a realização dos procedimentos e leitura no espectrofotômetro, os resultados foram obtidos a partir dos cálculos abaixo: Triglicérides (mg/dL) = Absorbância da amostra x 200  Absorbância do padrão Como a reação segue a Lei de Lambert-Beer, o Fator de calibração pode ser usado. Fator de calibração = Concentração do padrão( 200 mg/dL )  Absorbância do padrão Triglicérides(mg/dL) = Absorbância do teste x Fator de calibração Fator de calibração =200 = 338,98 0,59 Triglicérides(mg/dL) = 0,70 x 338,98 = 237,28 mg/dL Os valores de referência para o colesterol total, segundo o Expert Parol of the National Cholesterol Education Program (NCEP, 1987) são de até 200mg/dl. Os valores obtidos no exame se encontram elevados diante dos níveis de referência, ultrapassando assim uma margem de segurança para evitar vários problemas de saúde. Elevados níveis de triglicerídeos no soro estão associados com quatro condições patogênicas que aceleram a aterosclerose (Rapp, R.J, 2002): diminuição dos níveis de HDL no soro (Abbasi, F, 2000); aumento das lipoproteínas remanescentes; pequena Influência da dieta na concentração sérica de triglicerídeos elevação na LDL; aumento das condições trombogênicas (Nakaya, N, 2002). Isto sugere que algum tipo de hipertrigliceridemia poderá ser a causa de aterosclerose (Nakaya, N, 2002).

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O aumento dos triglicerídeos é um distúrbio lipídico relativamente freqüente na prática clínica. Os níveis pós-prandiais de triglicerídeos aumentam dentro de duas horas (faixa de duas a dez horas) após a ingestão de alimentos. Recomenda-se, portanto, jejum de 12 a 16 horas antes da coleta da amostra, pois pode haver uma variação de 25% a 50% (faixa de 18% a 100%) entre os dias. Esta grande variação de um dia para outro está bem observada nos níveis dosados de triglicerídeos (Ravel, R, 1997). A obesidade, o estresse agudo, a ingestão de álcool, as dietas com alto teor de gordura e doces, a gravidez, a estrogenoterapia, a terapia de glicocorticóides e um número considerado de doenças (diabetes, pancreatite aguda, síndrome nefrótica, gota e uremia, entre outros) aumentam consideravelmente os níveis de t riglicerídeos (Ravel, R, 1997). Os triglicerídeos têm um papel primário na formação de aterosclerose em se tratando de hipertrigliceridemia (Rapp, R.J, 2002). A hipertrigliceridemia é o distúrbio lipídico de mais fácil controle, pois os níveis de triglicérides podem ser satisfatoriamente controlados por mudanças nos hábitos de vida, dieta equilibrada, aumento da atividade física e restrição ao álcool. Raramente encontra-se hipertrigliceridemia isolada, sendo freqüentemente acompanhada por aumento no colesterol total, no LDL-colesterol e diminuição no HDL-colesterol. Utilizou-se um método enzimático colorimétrico onde os triglicerídeos são determinados de acordo com as seguintes reações: Lipase da lipoproteína

Triglicerídes -------→ Glicerol + ácido graxos Glicerolquinase

Glicerol + ATP -------→ Glicerol-3-fosfato + ATP Glicerol-3-fostato Oxidase

Glicerol-3-fosfato + O2 -------→ Dihidroxiacetona +H2O2 Peroxidase

2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + 4 Clorofenol -------→ Quinoneimina + 4H2O Quanto maior for à concentração de triglicerídeos na amostra, mais intensa será a cor vermelha do produto final, em níveis muito elevados a amostra

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demonstra um aspecto leitoso de cor amarelada devido à presença de quilomicrons.

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Conclusão

Por meio da presente prática foi possível realizar o teste de determinação de triglicérides, onde o resultado obtido da amostra coletada apresentou alterado em relação aos valores de referência, no entanto o(a) paciente não estava no  jejum preconizado para tal teste, podendo assim afetar no resultado da análise.

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Referências

 Abbasi, F. et al. High carbohydrate diets, triglyceride-rich lipoproteins, and coronary heart disease risk. Am J Cardiol., 85: 45-8, 2000. Henry, J.B. Diagnósticos clínicos e tratamento por métodos laboratoriais.18 ed. São Paulo: Manole, 1998. Libby, P. Managing the risk of atherosclerosis: the role of high-density lipoprotein. Am J Cardiol., 88: 3N-8N, 2001. Nakaya, N. Hypertriglyceridemia as a cause of atherosclerosis. Nippon Rinsho., 60(5): 860-7, 2002. Rapp, R.J. Hypertriglyceridemia: a review beyond low-density lipoprotein. Cardiology in Review, 10(3): 163-72, 2002. Ravel, R. Laboratório clínico: aplicações clínicas dos dados laboratoriais. 6 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1997. Schiavo. M. et al, Influência da dieta na concentração sérica de triglicerídeos, Jorna Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial; Rio de Janeiro, v. 39, n.4, 2993.

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