Relatório de Micro - Teste Bioquímico

Testes Bioquímicos e Quantificação Relatório de Microbiologia

Compon Component entes es do grupo: grupo: Giusep Giuseppin pinaa ro!en ro!en"a "ano# no# $ulian $ulianaa Marin% Marin%o# o# &etíc &etícia ia 'd 'dão ão## (tep%a (tep%anie nie Medeiros e )ictória B*rbara+ Turma, QM -.rofessores: B*rbara e /lie"er+ I) Introdução

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' identificação e quantificação dos micro0organismos em determinado material 1 de e2trema import import3nc 3ncia# ia# princi principa palme lmente nte para para a sa4de sa4de p4b p4blic lica+ a+ 5s micro0 micro0org organi anismo smoss patog6 patog6nic nicos os são são respons*!eis por di!ersas doenças# e# portanto# tal controle de qualidade de!e ser usado para impedir a propagação das mesmas para %umanos e animais# atra!1s de alimentos# rem1dios etc# al1m de plantas+ 5 prim primei eiro ro m1to m1todo do usad usadoo para para iden identi tific ficaç ação ão de micro micro0o 0org rgan anism ismos os 1 a micr micros osco copi piaa eletr7nica+ Com isso# identifica0se a morfologia e fisiologia dos mesmos e selecionam0se testes especí específic ficos os para para as possí! possí!eis eis esp1c esp1cies ies## atra!1 atra!1ss de culti! culti!os os em determ determina inados dos meios meios con conten tendo do nutrientes pre!iamente definidos+ ' partir destes testes 1 possí!el definir características metabólicas# e# consequentemente# fa"er a identificação da esp1cie+ Com relação 8 quantificação# os m1todos se di!idem em duas classes: os que quantificam o n4mero total de c1lulas# ou se9a# as mortas e !i!as# e os que quantificam o n4mero de c1lulas !i*!eis# ou se9a# só as !i!as+ ' microscopia tamb1m 1 usada para quantificar os micro0organismos+  um m1todo de contagem do n4mero de c1lulas totais# a não ser que se9a utili"ada uma t1cnica de coloração especial+ or1m# para quantificar# a microscopia pode não ser confi*!el+ ara reali"ar os testes quantitati!os# a amostra a ser contada de!e ser diluída quase sempre#  pois# contam0se col7nias# e# portanto# esse n4mero não pode ser muito ele!ado nem muito bai2o# entre ;< a ;es alteraç>es 5 meio tornou0se ro2o

Com óleo 0 5 meio tornou0se Com óleo 0 5 meio tornou0se Meio 5= Glicose

laran9a 0 amarelado

laran9a 0 amarelado

(em óleo 0 5 meio tornou0se (em óleo 0 5 meio tornou0se laran9a 0 0 amarelado

laran9a 0 0 amarelado Com óleo 0 5 meio tornou0se

Meio 5= Manitol

I

laran9a (em óleo 0 5 meio tornou0se laran9a 0 0 amarelado

4!!) Ver"el#o de Metila e Vo$es%&ros'auer (MR V&)

/ste teste a!alia a !ia fermentati!a reali"ada pela bact1ria e cont1m os testes !ermel%o de metila e )oges0ros@auer+ 5 teste !ermel%o !ermel%o de metila metila 1 um teste qualitati! qualitati!oo para identificar identificar se a bact1ria produ" produ" *cidos fortes E*cido ac1tico# fórmico e l*ticoF a partir da glicose atra!1s da !ia de fermentação de *cido mista+ Como 1 produ"ido um *cido# isso far* f ar* que o pJ do meio se torne *cido+ 5 !ermel%o de metila# possui coloração !ermel%a em pJ abai2o de # e coloração amarela em pJ acima de #D+ 5s meios em que foram inoculadas as bact1rias possuíam a coloração amarelo claro E fi$ura !F ortanto# o resultado resultado 1 positi!o se %ou! %ou!er er a alteração alteração da coloração coloração do meio para !ermel%o !ermel%o e# a

 perman6ncia da coloração# negati!o+

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Figura 1. Meio MR

Figura 2.

MR Pseudomonas Figura 3. MR E" coli

Kessa Kessa forma a  E" coli obte!e um resultado positi!o para o teste pois %ou!e a mudança da cor do meio para o !ermel%oE fi$ura F+ 'ssim# a glicose inicialmente foi con!ertida a *cido  pir4!ico e este sofreu uma fermentação *cida mista# %a!endo assim a formação de *cido+ Kesta forma# o pJ do meio diminuiu e %ou!e a alteração da cor do indicador para o !ermel%o+ $* para a  Pseudomonas# o resultado foi

negati!o# uma !e" que não %ou!e a alteração da coloraçãoE fi$ura *F

$* o teste de )oges ros@auer diferencia os micro0organismos que reali"am a fermentação  pela !ia butilenoglicólica da glicose+ Hesse teste# quando o *cido pir4!ico passar pela fermentação  pela !ia butilenoglicólica butilenoglicólica %a!er* a formação formação de acetoína acetoína EacetilmetilcarbinolF+ ara re!elar o resultado do teste# primeiramente# %* a adição de L5J+ ois a acetoína 1 o2idada a diacetil# pelo o2ig6nio atmosf1rico em ambiente constituído basicamente por %idró2ido de pot*ssio+ pot*ssio+ /m seguida# seguida# %* a adição de 0naftol# 0naftol# e com isso o diacetil diacetil ser* con!ertido con!ertido %* um comple2o !ermel%o+ Kessa forma# o resultado 1 positi!o quando %ou!er alteração da coloração do meio para !ermel%oE fi$ura 4F+

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Figura 4.

meio )

Figura 5. ) E" coli

Figura 6. ) Pseudomonas

Com a an*lise dos resultados# poderia0se concluir que para ambas as bact1rias o resultado foi negati!o# uma !e" que não %ou!e a formação da coloração !ermel%a# a coloração gerada 1 resultado da mistura dos reagentes utili"adosE fi$uras + e ,F+ or1m o resultado do teste 1 inconclusi!o uma !e" que não se %* certe"a de que os reagentes esta!am em condiç>es adequadas adequadas para o uso+ Mas na literatura 1 dito que ambas bact1ricas possuem resultados negati!os# como foi obtido no teste+ or1m se a bact1ria analisada possuísse resultado  positi!o# poderia se se obter atra!1s do teste um resultado resultado err7neo de!ido 8 condição do reagente+ reagente+ 4!*) Meio -IM

5 Meio (?M 1 um teste teste bioquímic bioquímicoo com base na motilidade motilidade dos micro0orga micro0organismo nismoss e  produção de sulfeto sulfeto e indol+ ' produção de sulfeto permite !erificar se a bact1ria 1 capa" de degradar tiossulfato de!ido  possuir a en"ima tiossulfato redutase+ Hesta redução dos compostos de en2ofre# %a!er* a formação de *cido sulfídrico# que 1 incolor# por1m este reagir* com o indicador que 1 o ferro# formando um

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Kesta forma# o resultado positi!o para a produção de sulfeto 1 o aparecimento de precipitado  preto no meio+ 'ssim# ambas bact1rias analisadas possuem resultado negati!o# uma !e" que em ambos os teste não %ou!e a formação de precipitadoE fi$uras . e /F+ 5 meio meio (?M tamb1m tamb1m permit permitee !erifica !erificarr se %* produç produção ão de indol indol++ ' produção produção de indol ser* decorrente da ação da en"ima triptofanase sobre o triptofano e2istente no meio# que pode ser  obser!ado na reação abai2o:

ara ser identifica identificada da a produç produção ão de indol 1 adicio adicionado nado o reagen reagente te de Lo!a Lo!acs# cs# e o resulta resultado do  positi!o ser* o aparecimento aparecimento de uma uma coloração a!ermel%ada+ a!ermel%ada+ 'ssim# a  E" #oli possui resultado positi!o E fi$ura .F# uma !e" que# o meio se tornou !ermel%o# o que não ocorre com a  Pseudomonas que te!e o resultado para o teste negati!o E fi$ura /F+ ' motilidade 1 obser!ada atra!1s do aspecto do meio# em que !erifica se a bact1ria cresceu apenas no local em que foi inoculada inoculada ou por todo o meio+ /sse teste 1 !erificado atra!1s atra!1s da turbide" do meio+ ' E" coli apresentou o meio tur!o e a bact1ria foi capa" de crescer por todo o meio#  possuindo portanto motilidade+ $* a  Pseudomonas te!e te!e resu resulta ltado do nega negati! ti!o# o# pois pois %ou! %ou!ee o crescimento apenas no local aonde foi inoculada+

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5 meio &?' permite !erificar se a bact1ria possui a lisina descarbo2ilase E&KCF+ /sta en"ima atua descarbo descarbo2ilan 2ilando do a lisina lisina presente nos amino*cidos amino*cidos++ 5 meio cont1m cont1m o indicador indicador p4rpura p4rpura de  bromocresol que apresenta coloração coloração amarela em pJ abai2o de #D #D e ro2o em pJ acima acima de #N+ 5 meio inicialmente apresenta a coloração amarela# isso ocorre pois o meio cont1m glicose e com isso %* a fermentação da glicose e consequentemente a produção de *cido+ ?sso far* com que o pJ diminua e o meio apresente a coloração amarela+ ara a ação ação da en"ima lisina descarbo2ilase descarbo2ilase 1 necess*rio que o meio meio este9a este9a *cido# e isso isso 1 obtido  pela fermentação da glicose+ 's bact1rias que possuem a en"ima descarbo2ilam a lisina com a formação de amina Ecada!erinaF que tornar* o meio b*sico como se pode obser!ar pelo esquema abai2o:

Como o meio se tornar* basico# %a!er* a !iragem do indicador e o meio apresentar* a coloração ro2a+ ortanto# o resultado ser* positi!o quando o meio apresentar a coloração ro2a e negati!o quando este possuir a coloração amarela+

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5 teste de fermentação de glicose tem por ob9eti!o fa"er a diferenciação bioquímica de  baseada na metaboli"ação de carboidratos por !ia o2idati!a ou fermentati!a em sistema fec%ado Ecom óleo# fi$ura !4F+  Ho tubo contendo E"coli Efi$ura !+ e !, F a cor amarela do meio indica a mudança de pJ do meio de neutro E!erdeF para *cido EamareloF+ ' mudança no meio indica a formação de *cido  pro!eniente da degradação da glicose+ '  E"coli degradou a glicose tanto no tubo aberto quanto no tubo selado com óleo impedindo a entrada de ar E fi$ura !+ e !,F+ ' partir destes resultados conclui0 se que a  E"coli 1 anaeróbia facultati!a# pois seu metabolismo funciona em ambientes com ou sem o2ig6nio+  Ho tubo contendo a bact1ria  Pseudomonas obser!ou0se o mesmo resultado# indicando que esta tamb1m possui um metabolismo anaeróbio facultati!o E fi$ura !+ e !, F+

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'  Pseudomonas apresentou capacidade de degradar este carboidrato tanto no tubo aberto quanto no tubo selado com óleo# indicado pela cor amarela do meio indicando formação de *cido Efi$ura !/F+ /ste resultado indica indica que a mesma mesma 1 anaeróbia facultati!a+ facultati!a+

Figura 17. 5= manitol

Figura 18+ 5= Manitol com óleo

Figura 19. Pseudomonas

+DF Quantificação ' t1cnica t1cnica de quantificação !isa efetuar a contagem total de bact1rias numa amostra+ ara isto são feitas diluiç>es em s1rie da amostra a ser inoculada no meio+ Ho m1todo Oour0lateP uma

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/m relação aos testes bioquímicos# 1 muito importante correlacionar os dados e2perimentais com os dados catalogados# para identificar se o microorganismo em questão+ Toda!ia# alguns erros  podem ocorrer# uma !e" que nem sempre os dados dados t1oricos e e2perimentais !ão coincidir+ coincidir+ Caso Caso isso ocorra# de!e0se a!eriguar a proced6ncia dos reagentes e dos demais materiais e refa"endo o teste  para tomar alguma conclusão+ VI) Biblio$rafia

'H)?('+ Descri Descriçã ção o dos dos Meios Meios de 6ultur 6ultura a 7"8re 7"8re$ad $ados os nos nos 79a"e 79a"ess Micr Microbi obiol ol$i $ico coss + Kisponí!el em: %ttp:SSS+an!isa+go! %ttp:SSS+an!isa+go!+brser!ico +brser!icosaudemanuais saudemanuaismicrobiologiamodD microbiologiamodD