Relatório de aula prática: Extração de DNA.

Ministério da Educação Secretaria de Educação Média e Tecnológica Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Amazonas – IFAM ró!reitoria de Ensino "icenciatura em Ciências #iológicas

$a%ueline Sam&aio da Sil'a

(elatório de aula &r)tica* E+tração de -A.

Manaus /012

Introdução  A e+tração do -A &ode ser 3eita atra'és de eletro3orese em gel de &oliacrilamida &osteriormente corado &ela &rata, ou em gel de agarose, corado &or  4rometo de et5dio. Em %ual%uer uma delas, o material am&li3icado é 'isualizado como uma 4anda, a ser analisada de acordo com o seu &eso molecular.  A eletro3orese consiste na se&aração de moléculas ionizadas, de acordo com suas cargas elétricas e &esos moleculares em cam&o elétrico. Moléculas org6nicas como (-A, -A e &rote5nas são se&aradas &ela migração destas em um gel durante a a&licação de um &otencial elétrico. Moléculas com carga negati'a migram &ara o &ólo &ositi'o, a esse &rocesso, c7amamos de 6nodo, en%uanto moléculas com carga &ositi'a %ue migram &ara &ólos negati'os c7amamos de c)todo. 8ma molécula de -A, %uando e+&osta a um cam&o elétrico, migra &ara o eletrodo na 'elocidade ou mo4ilidade eletro3orética, &ro&orcional a 3orça do cam&o e a carga l5%uida da molécula. A mo4ilidade eletro3orética é tam4ém in'ersamente &ro&orcional ao coe3iciente 3riccional da molécula, %ue, &or sua 'ez, é em 3unção do taman7o e 3orma da molécula, e da 'iscosidade do meio. -essa técnica é utilizada uma cu4a com dois com&artimentos, eletrodos e solução salina &ara condução de eletricidade. Entre os com&artimentos da cu4a é encai+ado o gel %ue de'e 3icar su4merso. e%uenos &oços são 3eitos no gel durante sua &re&aração com &entes. As amostras são &i&etadas nesses &oços. Essas amostras de'em ser &re'iamente misturadas a um corante, c7amado gel loading  buffer (GelRed). Esse corante é uma solução com&osta de azul de 4romo3enol 9e:ou +ileno cianol; e glicerol e é utilizado &ara aumentar a densidade das amostras, im&edindo %ue elas saiam dos &oços, além de dar a coloração %ue ser'e como indicador do &rogresso eletro3orético. ara a migração, a&lica!se 'oltagem e corrente elétrica ao sistema.  A dist6ncia %ue o 3ragmento &ercorreu a &artir do &onto de a&licação, é com&arada com a dist6ncia %ue outros 3ragmentos de taman7os con7ecidos &ercorreram no mesmo gel. Esses 3ragmentos são os ladders 9marcadores de &eso molecular;, misturas de segmentos de -A de taman7os 'ari)'eis e e%