Relatório 2 - Extração e Caracterização DNA

Objetivos Conhece Conhecerr as propri proprieda edades des físico-q físico-quím uímicas icas fundam fundament entais ais do DNA através através de sua extração do material genético da cebola a partir dos tecidos do bulbo e de suas propriedades !ticas"

Parte experimental #xtração do DNA da cebola$

Determinação da concentração do DNA$

Determinação da estabilidade térmica e da pure%a do DNA$

Determinação da massa molecular do DNA por eletroforese em gel de agarose$

Resultados e discussão &ara que se retire o DNA do n'cleo das células deve-se primeiramente reali%ar a lise da membrana celular" () diversos protocolos na literatura alguns mais eficientes que outros entretanto o nível de complexidade é elevado" A maneira mais simples e r)pida para sua lise é propiciar um choque térmico na amostra pois dessa forma existe a ruptura da membrana celular e posteriormente a liberação do DNA" #sse é um método limitado a pequenas quantidades de DNA *+," #m seguida a camada fosfolipídica da biomembrana é eliminada pela presença de um detergente no presente caso o dodecil sulfato de s!dio .D./ o qual também auxilia na inativação en%im)tica e dissocia o DNA das proteínas mantendo seu enovelamento

*0,

"

1mportante ressaltar que o sal cloreto de s!dio também auxilia a dissociação do DNA das  proteínas" 2 #D3A por sua ve% é respons)vel por prevenir que o processo de apoptose

*45,

ocorra uma ve% que íons de c)lcio Ca 06/ e magnésio 7g06/ os quais fa%em parte e são essenciais para tal processo se encontram complexados em sua presença" 8sualmente a precipitação do DNA é reali%ada na presença de )lcoois" No presente caso utili%ou-se uma solução de etanol 9:; a qual foi adicionada lentamente de maneira a não perturbar o sistema em grande extensão e portanto promover a precipitação do DNA de maneira cuidadosa uma ve% que outas macromoléculas como por exemplo ernanda? e companheiros demonstraram em seu trabalho a efici@ncia da  precipitação do DNA tanto pelo etanol quanto pelo isopropanol além de misturas desses dois )lcoois" A amostra de DNA obtida pode então ser avaliada quanto a sua pure%a e concentração por meio da técnica de espectroscopia na região do ultravioleta uma ve% que o DNA apresenta grupos em sua estrutura que possibilitam a absorção de radiação nessa região do espectro" ale ressaltar que proteínas também apresentam grupos que proporcionam tal  propriedade" #xemplos de bases nitrogenadas que constituem o DNA e de amino)cidos que

constituem as proteínas e que absorvem na região do ultravioleta são apresentados na >igura B"

>igura B$