Relatório 2 Caracterização de Proteínas (1)

INTRODUÇÃO A caracterização de proteínas pode ser realizadas de várias maneiras, poré porém, m, apen apenas as duas duas form formas as se serão rão o embas embasam ament ento o para para o rela relató tóri rio: o: caracterização por reações de coloração e reações de precipitação[1! A caracterização por meio da coloração pode ser analisada através da reação com a nin"idrina e da reação com o #iureto! A reação com a nin"idrina resulta em um produto de cor violeta, tanto para para prote proteína ínass como como aminoá aminoácid cidos[ os[$! $! %e %esta sta reaçã reação, o, duas duas molécu moléculas las de nin" nin"id idrrina ina rea ea&e &em m com a molé moléccula ula do am amin inoá oáccido ido ou pro proteín teínas as,, este'uiometr este'uiometria ia da reação $:1! Além do produto produto formado (cor violeta), "á a formação de moléculas de á&ua e dió*ido de carbono (&ás carb+nico)! A reação desta caracterização está descrito no es'uema a se&uir: O O -

O

O R

H +

H3N

N

HO

+

O

O

+

2 ∆

HO

R

C

H

+

3 H2O +

3 O

C

HO O

s'uema 1: -eação do aminoácido com a nin"idrina! A reação com #iureto ocorre necessariamente com proteínas, pois identi.ca li&ações peptídicas[/! peptídicas[/! A proteína rea&e rea&e com o 0reativo 0reativo de #iureto, uma mistura da solução de sulfato de cobre com "idró*ido de sódio 'ue possui coloração azul, e forma um comple*o violeta! A .&ura do comple*o formado é mostrada em se&uida:

2i&ura 1: comple*o violeta formado através da reação de #iureto %as reações de caracterização através da precipitação pode ocorrer com desnaturação ou sem desnaturação da proteína! A desnaturação da proteína faz com 'ue esta perca sua função ativa, ou se3a, sua atividade bioló&ica! As reações de precipitação com desnaturação ocorrem através do calor cal or e de ácidos fortes! 4 calor aumenta a ener&ia do sistema e 'uebra as li&ações fracas! 5á a presença de ácidos fortes, rompe a ponte salina (%6 /7 88888 8449 )e ocorre a protonação na carbo*ila, eliminando as li&ações eletrostáticas!

O

As reações de precipitação sem desnaturação ocorrem através da adição de sais, adição de solventes or&nicos (etanol e acetona) e do ponto isoelétrico! A adição de sais provoca os efeitos de salting-ine de salting-out , 'ue aumenta a solubilidade da proteína e diminui a solubilidade respectivamente! ;ara e*plicar mel"or, o efeito de 0saltin&8in ocorre até a presença de uma concentração do sal no 'ual a solubilidade da proteína irá aumentar! Ao ultrapassar essa concentração, sur&e o efeito 0saltin&8out, no 'ual os íons do sal irão solvatar a proteína diminuindo a força eletrostática das car&as das proteínas e como conse'u