RELATÓRIO 1 - Extração de DNA

Universidade Federal de Alagoas - UFAL Centro de Tecnologia - CTEC Curso de Engenharia Química

MÁGDA CORREIA DOS SANTOS

EXTRAÇÃO DE DNA

DISCIPLINA: LABORATÓRIO DE ENGENHARIA QUÍMICA II PROFESSORA: ANA KARLA DE SOUZA ABUD

MACEIÓ / 2011 0

UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS – UFAL CENTRO DE TECNOLOGIA - CTEC

MÁGDA CORREIA DOS SANTOS

 Extração de DNA

Relatório

descritivo

sobre

o

experimento:

Extração de DNA, apresentado à disciplina Laboratório de Engenharia Química II. Orientadora: Ana Karla de Souza Abud

Maceió, 15 de Março de 2011 1

RESUMO

O presente relatório descreve o experimento de extração de material genético (DNA) da ameixa. O DNA (ácido desoxirribonucléico) é uma molécula orgânica que contêm a “informação” que instrui o desenvolvimento e funcionamento de todos os seres vivos. Existem inúmeras técnicas de extração de DNA e a escolha dessa técnica depende da fonte, quantidade, e idade da amostra. A extração do material genético possui inúmeras aplicações em áreas como medicina, agricultura, criminalística, entre outras. Na prática realizada com o objetivo de extrair o DNA da ameixa, foi realizada uma extração com objetos e reagentes de uso cotidiano e que podem ser encontrados em qualquer cozinha, e os resultados foram satisfatórios para o objetivo proposto pelo experimento, sendo observado a formação de um emaranhado branco de filamentos de DNA da ameixa.

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SUMÁRIO

FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA...........................................................................................4 OBJETIVOS..............................................................................................................................7 MATERIAIS E MÉTODOS....................................................................................................8 RESULTADOS E DISCUSSÕES...........................................................................................9 CONCLUSÃO.........................................................................................................................10 BIBLIOGRAFIA.....................................................................................................................11

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FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA

O DNA é o responsável pelo armazenamento e transmissão da informação genética que é expressa pela produção das variadas proteínas que compõem um ser vivo. Esta informação é copiada ou transcrita nas moléculas de RNA, cujas seqüências contêm o código para a ordenação específica de aminoácidos de uma cadeia polipeptídica que formarão as proteínas. Uma molécula de DNA é constituída por duas cadeias que se organizam em uma estrutura de dupla-hélice, sendo que cada cadeia simples de DNA é formada por uma molécula do açúcar desoxirribose, uma base que pode ser adenina, guanina, citosina ou timina e um grupo fosfato. Existem apenas esses quatro tipos de bases no DNA: adenina e guanina pertencem ao grupo das purinas, enquanto que timina e citosina são do grupo das pirimidinas. As moléculas de DNA são encontradas dentro das células de todos os seres vivos, incluindo plantas, fungos e bactérias. Com exceção das bactérias, nas quais o DNA fica solto dentro da célula, em muitos outros seres vivos ele fica acomodado dentro de um compartimento existente, denominado núcleo. No caso de organismos eucariotos (aqueles que possuem núcleo individualizado por ser envolto por uma membrana, como, por exemplo, seres humanos, outros animais e vegetais), grande parte do DNA está justamente dentro do núcleo das células. Para comprovar que realmente existe DNA em todas as células vias, temos que tentar retirá-lo e visualizá-lo. Protocolos similares são usados nas extrações de DNA de várias fontes, como amostras de sangue, tecidos, frutas, saliva, etc., e consistem de: 

Ruptura (física e química) das membranas celulares para liberação do material genético;



Desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos: DNA e proteínas;



Separação do DNA dos demais componentes celulares. Para que haja a ruptura da parede celular, expondo o material genético das células,

realiza-se o corte ou esmagamento do material. Para o desmembramento, as moléculas de detergente desestruturam as moléculas de lipídios presentes nas membranas celulares e o aquecimento favorece a reação, desnaturando as moléculas de DNA. A adição de sal ajuda a manter as proteínas dissolvidas no líquido extraído, impedindo que elas precipitem com o DNA. Finalmente, para conseguir isolá-lo dos demais componentes, utiliza-se o álcool, pois o 4

DNA é insolúvel nele e tem menor densidade que os outros constituintes celulares. Quanto mais gelado estiver o álcool, menos solúvel o DNA vai estar. Por isso é tão importante que o etanol seja mantido no freezer  ou em um banho de gelo até o momento do experimento. A estrutura de dupla-hélice só pode ser enxergada de modo indireto e com o auxílio de aparelhos sofisticados. Milhares de fitas emaranhadas de DNA podem ser observadas em um experimento de extração de material genético de plantas ou frutas.

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OBJETIVOS

Verificar como acontece a extração do DNA da ameixa e identificar a função de cada um dos reagentes utilizados no procedimento de extração.

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MATERIAIS E MÉTODOS

a) MATERIAIS:

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2 Copos;

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2 Tubos de ensaio;

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1 Colher;

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Estante para tubos de ensaio;

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Pipetador;

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Pipetas de 3mL;

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Sal;

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Detergente;

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Água filtrada;

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Álcool gelado e Álcool a temperatura ambiente;

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Bastão de vidro;

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Saco plástico do tipo ziploc;

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Fruta (Ameixa).

b) MÉTODOS: Para a extração de DNA da ameixa: 1. Colocou-se cerca de 5 mL de água em um copo. Adicionou-se 1/2 colher (chá) de sal e 1/2 colher (chá) de detergente neutro. Misturou-se bem com uma colher até dissolver completamente. 2. Adicionou-se ameixa picada em pedaços bem pequenos à solução anterior. 3. Transferiu-se a amostra para um saco do tipo ziploc e amassou-se a amostra, durante 5 minutos. 4. Filtrou-se a solução obtida em outro copo, utilizando funil e gaze.

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5. Colocou-se 3 mL da solução obtida em cada um dos 2 tubos de ensaio, adicionando-se 5 mL de álcool gelado em tubo de ensaio e álcool a temperatura ambiente no outro tubo de ensaio.

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RESULTADOS E DISCUSSÕES

O DNA da ameixa foi extraído e pôde ser visualizado conforme as figuras 1 e 2.

Figura 1 - Tubo contendo DNA extraído com álcool gelado.

Figura 2 - Tubo contendo DNA extraído com álcool à temperatura ambiente.

Cumpriram-se as três etapas do método para extração de DNA de células de ameixa e o resultado obtido foi à formação de um emaranhado branco de filamentos que, no caso do isolamento com álcool gelado, ficou mais próximo à superfície do tubo de ensaio, e, no caso do isolamento com álcool à temperatura ambiente, ficou mais próximo ao fundo do tubo de ensaio. Isto evidencia que o DNA é, de fato, menos solúvel no álcool gelado, pois a formação do emaranhado mais próximo à superfície do tubo de ensaio indica que o DNA está mais

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separado dos demais componentes celulares, os quais são mais densos e carregam o DNA para o fundo quando associados a ele. A utilidade prática de cada um dos reagentes utilizados no experimento foi identificada. O detergente é aplicado com a finalidade de desconstruir as moléculas de lipídeos que constituem as membranas celulares e, desta forma, o conteúdo das células de ameixa, incluindo as proteínas e o DNA, é liberado. Em outras palavras, os lipídeos formam complexos com o detergente e precipitam. O sal ajuda a manter as proteínas dissolvidas no líquido extraído, evitando que as mesmas precipitem junto com o DNA. As moléculas de DNA possuem carga negativa devido à presença do grupo fosfato; logo, as moléculas individuais de DNA tendem a se repelir. O sal também atua fornecendo íons de carga positiva que neutralizam a carga negativa das moléculas de DNA, permitindo que estas se condensem quando em contato com uma solução alcoólica. O álcool, por sua vez, atua na separação do DNA, que é menos denso, dos demais componentes celulares, pois o DNA é praticamente insolúvel no álcool. O procedimento experimental seguido é relativamente simples e permite a visualização clara do emaranhado de filamentos de DNA que se forma. Entretanto, a estrutura de dupla-hélice só pode ser visualizada de modo indireto e através de aparelhos sofisticados. O que se observou a olho nu foram milhares de fitas de DNA juntas.

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CONCLUSÃO

O resultado obtido evidenciou que o DNA das células de ameixa é menos solúvel no álcool gelado do que no álcool à temperatura ambiente. O emaranhado branco de filamento de DNA que se forma fica mais próximo à superfície do tubo de ensaio no caso da extração com álcool gelado. O álcool à temperatura ambiente não separa o DNA dos outros componentes celulares mais densos tão eficientemente quanto o álcool gelado. Existem diversos métodos de extração de DNA e pudemos realizar um desses métodos de forma simples e satisfatória com materiais que podem ser encontrados em qualquer cozinha.

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BIBLIOGRAFIA

cebola. Disponível em: . Acesso em 03 de Março de 2011 às 21h. [2]

CIENCIAMAO.

Extração

do

DNA

do

morango.

Disponível

em:

. Acesso em 03 de Março de 2011 às 21h15min. [3]

BIOINFO.

Extração

de

DNA

de

Morangos.

Disponível

em:

. Acesso em: 03 de Março de 2010 às 21h30min. [4] ABUD, A. K. S.  Notas de Aula de Laboratório de Engenharia Química II . Universidade Federal de Alagoas. Maceió-AL, 2011.

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