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PRUEBAS GENERALES PARA AMINOACIDOS Y PROTEINAS
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Nombres E-mail Alexander Gil Campo
[email protected] Yolima Hurtado Yacumal
[email protected] Kerly Escalante Yiseth_9702Qhotmail.com 3Biorgánica, Ingeniería Agropecuaria, Facultad de ciencias agrarias, Universidad del Cauca 4Grupo No: #4 5Fecha de realización de la práctica: 25/09/2014 6Fecha de entrega de informe: 02/10/2014 7 8 1. RESUMEN 9Introducción: 10Las proteinas son uno de los principales componentes de todas nuestras celulas. los 11aminoácidos(compuestos orgánicos) son los ladrillos de contruccion de la proteinas. Los 12aminoácidos se agrupan de acuerdo con su comportamiento químico. 13la sintesis de las proteinas ocurren mediante la union entre si de las cadenas de aminoácidos. los 14distintos aminoácidos imparten diferentes comportamientos quimicos en la estructura de las 15proteinas. 16Debido a la presencia de diferentes aminoácidos en las uniones peptídicas las proteínas 17reaccionan con una variedad de compuestos formando productos coloreados. 18Existen reacciones de coloración que son específicas para aminoácidos de esas proteínas y son 19importantes tanto para la detección como para el dopaje de aminoácidos y proteínas. 20Existen también reacciones generales porque sirven para caracterizar grupos comunes a todas 21las proteínas como grupos amino o uniones peptídicas (ninhidrina y biuret). 22 23Resultados: las pruebas y el reconocimiento en la práctica al ser positivas indicaban un cambio 24de color o una reacción esto se podría dar por la desnaturalización de la proteína o lo 25aminoácidos que la componen dependiendo también del reactivo. 26 27Conclusión: mediante las pruebas realizadas en laboratorio, se logró identificar la presencia de 28aminoácidos; las proteínas están constituidas por aminoácidos, por lo cual estos métodos se basan 29en el reconocimiento de estos, en diferentes muestras. 30 31RESULTADOS
Xantoproteic PRUEBA Albumina Gelatina Urea Fenilalanin a Asparagina
a + -
HopkinsBiuret + violeta + violeta + violeta
Ninhidrina + -
+ 2Pruebas generales para aminoacidos y proteinas. 3
+ +
cole -
Ehrlich + rojo + rojo - amarillo
-
- amarillo - amarillo
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Glicina Histidina Agua Triptófano
+
+ violeta -
+ + +
+ naranja
- amarillo + rojo - amarillo + rojo
1 23. ANALISIS DE RESULTADOS 3Prueba Xantoproteica: Los compuestos que presentan bencenos sustituidos (con grupos unidos 4al anillo bencénico), al reaccionar con el ácido nítrico concentrado forman compuestos nitrados 5de color amarillo, el cual se intensifica en medio alcalino.De los resultados obtenidos 6presentados en la Tabla 1 las muestras que tuvieron error experimental fueron: Glicina, 7Asparagina y Gelatina, puesto que al no tener en su estructura anillos aromático, no se debe 8presentar la coloración amarilla. 9 10 El aminoácido fenilalanina también tiene en su estructura un anillo aromático pero no está 11activado, por lo tanto el proceso de nitración no se da fácilmente y no se puede percibir entonces 12la coloración amarilla. 13Las muestras de Triptófano, Histidina y Albumina al reaccionar con HNO3 y las gotas de 14solución al 40% de NaOH reaccionaron de forma correcta y el resultado obtenido fue igual al 15teórico. El agua no presento tinción alguna puesto que su composición no presenta ningún tipo 16de aminoácido presente estructuralmente. 17 18Prueba Biuret: Es un método general para la determinación de proteínas o péptidos. Se basa en 19la reacción del sulfato de cobre con compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos, en un 20medio alcalino. El producto es un complejo color violeta cuya intensidad de color depende de la 21cantidad de enlaces peptídicos presentes. 22 23 Los resultados obtenidos, indican que la Albumina, la Gelatina. histidina y la Urea presentan 24enlaces peptídicos por lo que se observó un color violeta, esto confirma lo establecido en la 25teoría. Las demás muestras en excepción con la Asparagina al igual que la glicina,,histidina y 26triptófano, que al el no tener enlaces peptídicos sus resultados fueron los esperados (no 27coloración violeta). La prueba con el triptófano no la realizo el grupo al que le correspondía, por 28esta razón no se obtuvo un resultado 29 30Prueba de Ninhidrina: Esta reacción es bastante importante, pues es universalmente empleada 31para detectar cualitativamente y cuantitativamente a los aminoácidos. Para los aminoácidos estas 32es la única reacción de color, verdaderamente importante. La Ninhidirna es una agente oxidante 331 de los grupos alfa-amino, liberando amoniaco, CO2 y el correspondiente aldehído, así como la 34forma reducida de la Ninhidrina. Una coloración violeta determina positiva la prueba y para este 35caso también un color Vino tinto la determinara como positiva. En esta prueba se obtienen los 36resultados esperados para casi todas las muestras en excepción para la Urea, la gelatina y el agua 37ya que a diferencia de las demás muestras estas no es un alfa- aminoácido Ej. Glicina,Asparagina, 38Triptófano, Fenilalanina,Albumina, Histidina y Alanina(contienen alfa-amino), ni tampoco 39contiene alfa- aminoácidos (Ej. Gelatina). 40El resultado para la muestra de Agua confirma que esta no contiene alfa- aminoácidos. 41 2Pruebas 3
generales para aminoacidos y proteinas.
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1Prueba Hopkins cole: Los derivados indol dan productos de condensación cuando se tratan con 2aldehídos aromáticos en presencia de ácido sulfúrico o clorhídrico. El aminoácido triptófano 3contiene un grupo indol y por eso la reacción es específica para triptófano. El resultado positivo 4de esta prueba se puede evidenciar con el anillo indolico que degrada el aminoácido triptófano a 5Indol produciendo compuestos de color rojizo-anaranjado. 6 Los resultados obtenidos para esta prueba resultado son correctos ya que en ninguna muestra a 7excepción del Triptófano hay presencia de este, todas las demás muestras están libres en su 8estructura de este aminoácido (Triptófano) por ende dio un resultado (rojizo-anaranjado). 9 10Prueba de Ehrlich: La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena 11lateral de los aminoácidos se puede identificar mediante la reacción con ácido sulfanílico y nitrito 12de Sodio por formación de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo así detectar la 13presencia de Histidina libres o formando péptidos y proteínas. 14 El resultado positivo de esta prueba se puede evidenciar con un color rojo o Vino tinto. 15 16 Los resultados se interpretan así: las muestras de Urea, Agua, Glicina, y Fenilalanina (contiene 17anillo aromático bencénico) tuvieron resultados correctos (negativos) ya que ninguna de estas 18muestras contiene anillos aromáticos fenólicos y/o nitrogenados. 19Las muestra de Gelatina y albumina también arrojaron un resultado correcto (presento color rojo 20o Vino tinto) ya que este si contiene anillos fenólicos y/o nitrogenados. Por el contrario de las 21muestras de Histidina (contiene anillo aromático nitrogenado),y Triptófano (contiene anillo 22aromático nitrogenado) se obtuvieron resultados positivos. Finalmente la muestra de Asparagina 23también arrojo un resultado negativo, ya que presento una coloración amarillenta cuando 24verdaderamente al este aminoácido no tener ningún anillo aromático fenólicos y/o nitrogenado en 25su estructura no tenía por qué presentar dicho cambio de color. 26 27 284. CONCLUSIONES 29 30 • Existen diferentes pruebas para la identificación de proteínas y aminoácidos que permiten 31 establecer un resultado positivo o negativo de acuerdo a las características y composición 32 de cada una de ellas, evidenciado en coloraciones, presencia de anillos, etc. Se 33 establecieron las características de estas pruebas para la identificación cualitativa de 34 sustancias que pueden contener aminoácidos, proteínas o péptidos. Y cuando se usan 35 varias pruebas en la muestra, se pueden determinar ciertas sustancias en específico. 36 • Muchos resultados no dieron a los esperados (teóricos) pero se pudo deber a la 37 contaminación de las muestras o la contaminación de los equipos (tubos de ensayo). 38 • Se pudo determinar que todos los análisis se hicieron de manera cualitativa y que para 39 poder 40 Hacerlo de manera cuantitativa se requiere de la ayuda de otros métodos por ejemplo: 41 Espectrofotométricos. 42 43PREGUNTAS PRELIMINARES 44 1) ¿ cual es la reacción de un alfa-aminoacido y ninhidrina? 45 2) ¿ cual es la reacción con el reactivo de biuret? 46 3) ¿Que proteínas dan positivas con la prueba de Hopkins-cole? 2Pruebas 3
generales para aminoacidos y proteinas.
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1 2DESARROLLO 3 1) El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos coloreados con la 4 ninhidrina: violeta. violeta 5 azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo amino es primario. 6 2) La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la 7 presencia 8 del enlace peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos. 9 Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una 10 sustancia 11 compleja denominada Biuret. 12 3) La reacción de Hopkins-Cole, también conocida como reacción de Adamkiewiczs, es 13 una prueba estándar para el triptófano y para las proteínas que contienen triptófano. 14 La solución que se va a examinar se mezcla con ácido glioxílico y se agrega ácido 15 sulfúrico concentrado. Un anillo entre violeta y rojo en la unión de los dos líquidos 16 indica que la reacción es positiva. 175. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS 18 1) Indicar los nombres y las estructuras de al menos 2 B-aminoácidos. 19 2) Cuáles son los aminoácidos denominados esenciales para el organismo 20 humano. 21 3) Consultar las frases S y R de los reactivos a manipular en la práctica. 22 4) Cuáles son las fichas de seguridad de los reactivos a manejar en la práctica. 23Desarrollo: 24Beta-Alanina: 25El grupo amino
está unido al segundo carbono a partir del grupo carboxilo.
26 272) Cuando un alimento contiene proteínas con todos los aminoácidos esenciales, se 28dice que son de alta o de buena calidad, aunque en realidad la calidad de cada uno de 29los aminoácidos contenidos no cambia. Combinaciones de alimentos que suman los 30aminoácidos esenciales
31 32AMINOÁCIDOS ESENCIALES: 33Isoleucina: Junto con la L-Leucina 34formación
2Pruebas 3
y la hormona del crecimiento intervienen en la
y reparación del tejido muscular.
generales para aminoacidos y proteinas.
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1 1Leucina:
Junto con la L-Isoleucina y la hormona del crecimiento (HG), interviene con la
2formación 3Lisina:
y reparación del tejido muscular.
Es uno de los más importantes aminoácidos porque, en asociación con varios
4aminoácidos 5reparación
de tejidos, anticuerpos del sistema inmunológico y síntesis de hormonas.
6Metionina: 7proteínas 8va
más, interviene en diversas funciones, incluyendo el crecimiento,
Colabora en la síntesis de proteínas y constituye el principal limitante en las
de la dieta. El aminoácido limitante, determina el porcentaje de alimento que
a utilizarse a nivel celular.
9Fenilalanina: 10estructura
Interviene en la producción del colágeno, fundamentalmente en la
de la piel y el tejido conectivo, y también en la formación de diversas neuro-
11hormonas. 12Triptófano:
Está implicado en el crecimiento y en la producción hormonal,
13especialmente 14en
en la función de las glándulas de secreción adrenal. También interviene,
la síntesis de la serotonina, neuro-hormona involucrada en la relajación y el sueño.
15Treonina:
Junto con la con la L-Metionina y el ácido Aspártico, ayuda al hígado en sus
16funciones
generales de desintoxicación.
17Valina:
Estimula el crecimiento y reparación de los tejidos, el mantenimiento de
18diversos
sistemas y balance de nitrógeno.
19Debemos
recordar que, debido a la crítica relación entre los diversos aminoácidos y los
20aminoácidos
limitantes presentes en cualquier alimento. Solo una proporción
21relativamente
pequeña de aminoácidos de cada alimento pasa a formar parte de las
22proteínas 23grasa
si no debe de usarse inmediatamente.
2Pruebas 3
del organismo. El resto se usa como fuente de energía o se convierte en
generales para aminoacidos y proteinas.
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1 14)
las frases S y R de los reactivos.
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 176. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 18 1. VEJAR EVA IRMA. Prácticas de Bioquímica Descriptiva. Editorial UniSon. 2005. 19 Pag 169. 20 2. GIRALDO GERMAN ANTONIO. Laboratorio de Bioquímica: Una visión práctica. 21 24 Universidad del Quindío. 2010. Pag 97 22Libro 23 3. Mataix verdu, J, Proteínas(capitulo 5),hergon 2002.Pag 96 24 25 4. http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/TP26 Proteinas-generalidades.pdf , Fecha de visita: 01/10/1014 27 28
5. http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/FISQ/Ficheros
29
/301a400/nspn0363.pdf, Fecha de visita: 01/10/1014
30 2Pruebas 3
generales para aminoacidos y proteinas.
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1 1 2ECUACIONES DE LAS 3 ALBUMINA 4
REACCIONES
5 6 7GELATINA
8 10
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2Pruebas 3
generales para aminoacidos y proteinas.
FENILALALINA
UREA