Pruebas bioquímicas

SEM 2018-1 Prueba bioquímica

Microbiología experimental Hernández Alcantar Ivan Medio de cultivo

Sustrato

Grupo 2 Equipo 4

Indicadores y/o reveladores

18/Octubre/ 2017

Control de resultados +

-

Ausencia de color en todo el medio; el medio permanece incoloro o presenta un leve tinte amarillo debido al color del reactivo de yodo. Placas/tubos: medio de color púrpura-azul con un área incolora (zona de hidrólisis) alrededor del crecimiento.

+ Caldo:  color azul en

Caldo:

 Amilasa

Agar almidón

Almidón

Yodo acuoso de Gram/Yodo acuoso de lugol

Caseinasa

Agar Leche Descremada.

Caseína

No requiere

Gelatinasa

Medio con gelatina de Kohn

Oxidasa

Medio de cultivo enriquecido

Catalasa

Medio de cultivo enriquecido

DNA-asa

Fermentación de lactosa

 Agar DTA estándar (Puede agregarse manitol)

 Agar con hierro de Kligler

Gelatina

Compuesto reducido

Compuesto oxidado

Carbón activado

Reactivo de Kovacs, Reactivo de Gordon y Mcleod, Reactivos de Gaby y Hadley

Peróxido de hidrógeno, Buffer fosfato M/15 (pH 7.0), Tween 80 (10%).

 ÁDN

Ácido Clorhídrico

Lactosa

Rojo de Fenol y sales de Fe (2+)

Las proteasas son excretadas al medio para la degradación de proteínas, la caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco, cuando la caseína es hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento microbiano. Licuefacción de la gelatina. Partículas libres de carbón sedimentan en el fondo del tubo

todo el medio.

+ Placas/tubos: medio color púrpura-azul en el crecimiento (alrededor del mismo). + Almidón no hidrolizado; la mayoría aún presente.

La caseína no es hidrolizada y el color blanco permanece.

No hay licuefacción de la gelatina. Mezcla de carbón-gelatina intacta. No hay ninguna partícula libre de carbón en el medio. Sin cambios de color en las colonias o un color rosa pálido debido al reactivo. Puede ocurrir un cambio de coloración al negro en el medio circundante.

La colonia se vuelve de color rosa, luego marrón (rojo oscuro) y por último negro purpúreo. Colonias rosa: bacterias viables Colonias negras: Dentro de los 10-15 seg., bacterias no viables. Pruebas de catalasa  Ausencia de burbujas; rutinarias: burbujeo ausencia de O2 inmediato, observado con facilidad; formación de O2. Medio ácido-DTA  Ausencia de estándar: Zona de aclaramiento alrededor aclaramiento inmediato de las colonias, alrededor de la colonia precipitado nebuloso bacteriana, adyacente alrededor de la colonia a la zona clara una y a lo largo del medio zona blanca, nublada debido a las sales (sales precipitadas en precipitadas en el el medio), hidrolizado medio, DNA no de DNA hidrolizado-. Tubo: Reacción ácida, Tubo: Desarrollo color amarillo solamente, ningún Fondo del tubo: cambio de color. Reacción ácida, color Fondo del tubo: amarillo. Desarrollo solamente,

SEM 2018-1

Microbiología experimental Hernández Alcantar Ivan

Grupo 2 Equipo 4

18/Octubre/ 2017 ningún color.

Fermentación de glucosa

Producción de 2

 Agar con hierro de Kligler

 Agar con hierro de Kliger

Glucosa

2 

Rojo de fenol y sales de Fe (2+)

Tiosulfato de sodio.

Tubo: reacción alcalina, color rojo Fondo del tubo: Reacción ácida, color amarilla Precipitado negro evidenciado por diseminación del color negro en todo el fondo, lo cual enmascara la acidez, un anillo negro cerca de la parte superior del fondo. Movilidad:  crecimiento que se difunde desde la línea de punción. Produce ácidos por: TUBO ABIERTO (O):

O/F Glucosa

Medio basal OF de Hugh y Leifson (OFBM), Staph OF.

Glucosa

 Azul de bromotimol (OFBM), púrpura de bromocresol (Staph OF)

Respiración: Ligeramente amarillo en superficie. Fermentación: Amarillo No produce ácidos: Verde o azulado

cambio

de

Tubo: Desarrollo solamente, ningún cambio de color. Fondo del tubo: Desarrollo solamente, ningún cambio de color. No hay producción de sulfuro ferroso (color negro).

Ni fermentación ni oxidación (lectura de control del carbohidrato no inoculado): TUBO ABIERTO:  Azul o verde TUBO CERRADO: Púrpura

TUBO CERRADO (F)

Respiración: Verde Fermentación: Amarillo No produce ácidos:

Verde o azulado

Citrato

Ureasa

Descarboxilación

Lisina Ornitina  Arginina

Medio de citrato de Simmons, Medio con sulfuro de citrato de Christensen ó agar citrato de Christensen (modificado).

Caldo con urea de Rustigan y Stuart, agar con urea de Christensen

Medio base para descarboxilasa de Moller

Citrato

Urea

Lisina Ornitina Arginina

Azul de bromotimol

Rojo fenol

Púrpura de bromocresol, Rojo cresol.

Medio citrato de Simmons:  Crecimiento

Medio citrato de Simmons:   Ausencia

con un intenso colo azul en el pico de flauta.

de crecimiento y ningún cambio en el colo (verde).

Medio de citrato de Christensen y forma modificada:  Rosa-rojo

Medio de citrato de Christensen y forma modificada:  Rosa-rojo

en el pico de flauta.

en el pico de flauta.

Caldo con urea de Stuart:  Color rosa-rojo

Caldo con urea de Stuart: Sin cambios de

intenso caldo.

color (amarillo-naranja)

en

todo

el

Agar con urea de Color Christensen:

rosa-rojo (rojo-violeta) intenso en el pico de flauta. El color puede penetrar en el interior del agar. Color púrpura turbio a amarillo-púrpura apagado(producción de cadaverina). El

cultivo

es

Agar con urea de Sin Christensen:

cambios de color (Color piel a amarillo pálido).

Color amarillo brillante, claro (El microorganismo solo fermentó la glucosa) Color amarillo en la

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Microbiología experimental Hernández Alcantar Ivan

RM

Medio de Clark y Lubs modificado

Glucosa

VP

Medio de Clark y Lubs modificado

Glucosa

Rojo de metilo

Reactivo VP de Barritt, reactivo VP de Coblentz, reactivo VP único

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18/Octubre/ 2017

suficientemente ácido para permitir que el reactivo rojo de metilo permanezca con un color distintivo rojo brillante , estable, en la superficie del medio. Color rosado-rojo en la superficie del medio (acetoína presente)

superficie del medio.

Controlar la producción de gas:

Controlar la producción de gas:

de O’Meara

(modificado)

Reducción de NO3

Medio KNO3: Caldo nitrato  Agar nitrato

Fenilalaninadesaminasa

Medio fenilalanina

Indol

Movilidad

Producción de H2S

Caldo triptófano o peptona, Medio de caseína

NO3 (-)

Fenilalanina

Triptófano

Medio para prueba de movilidad (semisólido): fórmula de Edwards y Ewing.

Triptófano

Medios de cultivo que contienen

Tiosulfato

 Ácido acético, ácido sulfanílico (0.8%), alfa-Naftilamina, reactivo de Nessler

Cloruro férrico (10%), sulfato de amonio férrico.

Reactivo de Kovacs o reactivo de Ehrlich

No requiere

Reactivo de Kovacs o reactivo de

Color amarillo en la superficie del medio (igual color que el reactivo).Puede formarse un color cobrizo, pero es un resultado negativo.

Burbujas de gas en el  Ausencia de gas, tubo Durham, en la continuar con la fase I. superficie o en todo el Fase I: Falta de medio semisólido, una desarrollo de color, El única burbuja es nitrito no está presente, significativa. Si el MO continuar con la fase II es un no fermentador= para probar la prueba terminada. Si presencia de nitrato no es fermentador reducido. Fase II: Color rosa a continuar con fase I. Fase I: Color rosa a rojo oscuro en 5-10 rojo oscuro en 1-2 min min, nitrato presente Fase II:  Ausencia del (no reducido por el desarrollo de color, MO), el zinc redujo ausencia de nitrito nitrato a nitrito. (NO2-) en el medio. El microorganismo redujo nitrato a nitrito y después a productos no gaseosos. Probar la producción de NH3 por el agregado de reactivo de Nessler (muestra de color naranja oscuro). Color verde pálido a Sin cambios de color; intenso en el pico de permanece amarillo flauta y en el líquido de debido al color del condensación reactivo FeCl3 En segundos, aparece No hay un anillo rojo (fuscia ningún desarrollo de brillante) en la interfase color en la capa de del medio con la alcohol o aparece un porción inferior de la anillo turbio; toma el fase alcohólica, sobre color del reactivo de el medio Kovacs o de Ehrlich (amarillo) Móvil: Microorganismos Inmóvil: Crecimiento móviles que migran bacteriano acentuado a desde la línea de lo largo de la línea de siembra y difunden en siembra; el medio que el medio, lo que la rodea permanece produce turbidez. claro. Pueden mostrar estrías de crecimiento velloso. En presencia de No se observa el tiosulfato en el medio o precipitado negro. la degradación de proteínas liberando aminoácidos azufrados, algunos

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Microbiología experimental Hernández Alcantar Ivan aminoácidos azufrados.

beta-galactosidasa

Caldo ONPG

Ehrlich

ONPG

o- Nitrofenol

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microorganismos forman H2S gaseoso por medio de las enzimas tiosulfato reductasa y cisteína desulfurilasa. El gas incoloro H2S reacciona con el citrato de amonio férrico para producir un precipitado negro. Color amarillo entre los 20 min y las 24 h. El microorganismo contiene enzimas fermentadoras de lactosa; se clasifica como un fermentador de lactosa

Incoloro después de 24 hrs.