Prueba de Kastle

 

Prueba de Kastle-Meyer La prueba de Kastle-Meyer  es  es una prueba forense prueba forense donde se evaluara la presencia de sangre en las manchas de aparente sangre. 2. BASES TEÓRICAS  La prueba de Kastle Meyer es una prueba forense preliminar, descrita por primera vez en 1903, en la que se usa el indicador químico fenolftaleína. Se basa en los indicadores químicos de la hemoglobina, sustancia de la sangre que reacciona a la fenolftaleína Es básicamente una prueba colorimétrica. La fenolftaleína en soluciones ácidas permanece incoloro, pero en presencia de bases se torna rosa o violeta: utiliza el reactivo conocido con el nombre de Kastle-Meyer. La prueba únicamente sirve para confirmar que la muestra obtenida es sangre, aunque no podemos conocer su origen pues algunos vegetales (brócoli) y minerales minera les (cobre), también causan que la fenolftaleína reaccione. 3. MATERIALES Y REACTIVOS UTILIZADOS  Para realizar correctamente la prueba hace falta:   Muestra 1   Muestra 2   Bastoncillos de algodón (cotonete, torunda, papel de filtro, etc. Deben usarse

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los que tienen mango demadera y no los usados para la higiene de los oídos.)  Agua destilada  Agua oxigenada( peróxido de hidrogeno)  Alcohol etílico Fenolftaleína Sangre seca  Pintura seca  Guantes de latex Cubrebocas

USE SIEMPRE GUANTES DE LÁTEX YPROTECCIÓN EN BOCA Y NARIZ. Procure no dejar que las puntas de los goteros ylos hisopos se toquen. Evite también intercambiar las tapas de los reactivos y usesiempre un hisopo nuevo para cada prueba. Jamás aplique los reactivos directamentesobre la evidencia.

 

4. PROCEDIMIENTO Y JUSTIFICACIÓN DE CADA PASO  a) Se le agrega una gota de alcohol etílico al cotonete o ttorunda orunda con el fin de lisar las células presentes, y ganar sensibilidad y especificidad b) se toma una muestra de lo que se presume es sangre con un g gotero otero y se le agrega una o dos gotas al cotonete o torunda según corresponda.

c) Se le agrega una gota de reactivo FENOFTALEINA a nuestra muestra en el cotonete, y después de unos segundos se aplica una gota de peróxido de hidrogeno Si la torunda se vuelve rosada rápidamente se obtiene una prueba POSITIVA NOTA.- NO DEBE ESPERAR MAS DE 30 SEGUNDOS YA QUE ESTAS SE PUEDEN VOLVER ROSADAS NATURALMENTE, YA QUE SUFREN OXIDACIÓN,  ARROJANDO UN FALS O P OSITI OSITIVO. VO.

 

Conviene destacar que estos falsos positivos suceden sólo DESPUES de aplicar la fenolftaleína y ANTES de agregar el peróxido de hidrógeno. Una prueba POSITIVA es perceptible por el desarrollo de un color rojo oscuro a los pocos segundos de aplicarse el peróxido de hidrógeno. Puede decirse entonces que la prueba de Kastle Ka stle Meyer es altamente específica para la sangre JUSTIFICACIÓN  Aunque se ha reportado que la prueba de Kastle-Meyer es capaz de detectar diluciones de sangre hasta de 1:10 7, hay un número de limitaciones importantes para el test. La prueba dará un resultado falso positivo en la presencia de peroxidasas vegetales, como los encontrados en contrados en la cola de caballo, brócoli, coliflor, 1 etc..   Adicionalmente, otras especies oxidantes en la muestra causarán un falso etc positivo. Oxidantes químicos como las sales de cobre de  cobre o de de níquel  níquel también causarán que el reactivo de Kastle-Meyer se vuelva rosado antes de la adición del peróxido de hidrógeno, por lo que es de vital importancia agregar el reactivo primero, esperar unos cuantos segundos, y luego agregar el peróxido de hidrógeno. La sensibilidad de la prueba deKastle Meyer es de aproximadamente una parte en diez mil; 1:10.000. Esto significaque si se agrega a una gota de sangre diez mil gotas de agua todavía podría ser detectadapor el peritaje. La prueba de Kastle Meyer tiene la misma reacción con la sangre humana que con cualquier otra sangre basada en hemoglobina, así que debe realizarse una prueba confirmatoria, como la prueba la prueba de Ouchterlony para concluir definitivamente de qué especie proviene la sangre. Las pruebas catalíticas de color son muy sensibles, pero no específicas. Un color positivo de la prueba, solo, no debe ser interpretado como una prueba positiva de la sangre. Sin embargo, un resultado negativo es generalmente prueba de la ausencia de cantidades detectables de heme. MECANISMO La fenolftaleína usada en esta prueba ha sido modificada de su forma convencional, en que ha sido reducida sido reducida por dos electrones, y predisuelta en una solución alcalina. Esto se consigue típicamente hirviendo una solución alcalina de fenolftaleína con polvo de zinc, que reduce la fenolftaleína a fenolftalina. Con la reducción, el color rosado intenso de la fenolftaleína se desvanece a un color amarillo débil. Es en esta e sta forma como está presente en los kits de la prueba de Kastle-Meyer. Con el fin de general el color rosado intenso indicativo de una prueba positiva, la fenolftaleína reducida debe ser  oxidada  oxidada de vuelta a su forma coloreada normal. En la reacción relevante, el peróxido el peróxido de hidrógeno reacciona con la la hemoglobina  hemoglobina en la sangre. La fenolftaleína no participa en este primer proceso. En su reacción con el peróxido de hidrógeno, el centro hemo centro  hemo de la hemoglobina sufre la reacción de homólisis de  homólisis del enlace O-O: HOOH + Fe3+[hemo] → Fe4+=O[hemo] + OH· + H +  Los productos de esta reacción son un equivalente e quivalente tanto de la especie de oxo hierro de valencia alta, y el radical el radical hidroxilo, hidroxilo, cualquier  cualquier de los cuales es capaz de oxidar la

 

fenolftaleína reducida hacia la forma coloreada. La cantidad de ácido producido en esta reacción es insignificante en comparación con la concentración de la base presente en la solución de reactivo de fenolftalina. Además, esta reacción de heme con peróxido es catalítica, es catalítica,   haciendo de la prueba muy sensible a pequeñas cantidades de sangre presentes en la torunda de prueba.

KIT Kastle-Meyer http://detectaft.com/deteccion-sangre/ Hisopos o aplicadores de punta de algodón

Reactivos:  Hay tres reactivos incluidos en el kit, estos son:a. Alcohol:  Metil o Etil alcohol, o lo que es lo mismo, etanol. Este se usapara incrementar la sensibilidad de la prueba. Esto se lograal limpiar elárea alrededor de la mancha y exponer mejor la hemoglobina Fenolftaleína:  se trata de un químico en polvo que se prepara en unasolución de etanol etano l que actúa como indicadora de color. Al prepararse, lasolución se hierve por varias horas para eliminar el oxígeno disuelto enella. Este químico es muy sensible y se ve como un líquido incoloro. Alexponerse al oxígeno, cambia de color a un rosado profundo. Es por esoque debemos mantenerlo con una tapa bien segura, sin exponerlo al aireambiental.c. Peróxido de Hidrógeno:  Es, esencialmente, agua con un átomo extra deoxígeno. Normalmente se lo usa como antiséptico y sirve como unoxidante en esta prueba

 

 Agua Destilada o Desinonizada: No es un reactivo. Es, básicamente, agua libre de impurezas, sales, contaminantes, etc. Es de gran utilidad para transferir las sustancias que vayan a peritarse al papel de filtro, hisopo, cotonete, etc. La mejor forma de recolectar una mancha seca de sangre, la que ha formado una costra, o si ha sido limpiada o esta muy diluida, es usando unas gotas de agua destilada sobre el hisopo. El agua destilada tiene además la ventaja de no interferir en la pericia pues es pura, así que no se corre el riesgo de que alguna sustancia extraña genere un falso positivo. También, esta claro que permite mantener la muestra sin degradarse por acción bacteriana por más tiempo.  Aplicados que sean los reactivos, no debemos esperar más de 30 segundos p para ara apreciar los resultados. Esto se debe a que después de ese tiempo la fenolftaleína podría comenzar a reaccionar con el oxígeno del ambiente y tornarse rosada a pesar de no estar presente la sangre.

 

E n el cas o en que s e prep prepare are lla a s olución.

Técnica de la fenolftaleína o de Kastle-Mayer Fundamento químico Esencialmente la rige el mismo principio que se mencionó en la reacción de Adler. La diferencia estriba: a) La fenolftaleína debe ser reducida previamente a fonolftaleína incolora y este reactivo, por su labilidad, debe ser guardado en refrigeración frasco ámbar. b) Se trabaja en medio en vez de un medio ácido. c) Se en efectuará un calentamiento previo a 100alcalino °C durante un minuto. Se apuntará a continuación el comportamiento de las peroxidasas vegetales, que explicará el porqué de las modificaciones apuntadas: a) Termolabilidad: Se ha confirmado que las peroxidasas vegetales se inactivan por calentamiento a 100 °C . A la misma temperatura las peroxidasas de origen animal son estables. Un período de un u n minuto a 100 °C servirá para par a diferenciar una de otra. b) Tiempo: Las peroxidasas de origen animal son muy estables, las manchas de sangre humana dan resultados positivos aún después de varios meses de haberse producido. Cuando manchas de la misma edad pero de origen vegetal son tratadas de esta manera, dan resultado negativo. c) pH: las peroxidasas de las plantas reaccionan en medio ácido, pero no en medio alcalino. Por esta razón, ésta técnica. A pesar p esar de esto debe efectuarse pruebas testigo sin añadir agua oxigenada a muestras previamente calentadas. Esta técnica es mucho más sensible s ensible que la de la bencidina, siendo esta sensibilidad de 1: 1,000,000 a 10,000,000.

Preparación del reactivo a) Solución de fenolftaleína: - Fenolftaleína 2g - Hidróxido de potasio 20 g - Agua destilada 100 ml. - Polvo de zinc 20g

Disolver estas sustancias y colocarlas a reflujo con el polvo de zinc hasta completa decoloración. Esta solución madre deberá guardarse en un frasco ámbar en refrigeración y deberá añadírsele polvo de zinc. b) Solución de trabajo: Diluir la solución madre en etanol en la proporción proporc iónoxigenada de 1:5; la al que también deberá refrigerarse en tanto no se use. c) Solución de agua 3%

 

Procedimiento a) Humedecer un hisopo con solución salina, frotar la muestra problema y pasarlo a un tubo de ensaye con 2 ml de la misma solución. b) Calentar un minuto a 100 °C c) Añadir unas gotas del reactivo, esperar unos segundos y d) Agregar agua oxigenada. e) En caso positivo se obtendrá una coloración rosa brillante