Protocolos Actuales de Inseminación Artificial y Transferencia de Embriones en Caninos

 

Protocolos Actuales de Inseminación Artificial y Transferencia ransferencia de Embriones en Caninos Ghitis, Sabina ; Méndez, Daniela; Montañéz, Paula; V Villate, illate, Daniela y Quintero, Juan Camilo Universidad de La Salle RESUMEN Introducción.  Las tecnologías de reproducción asistida como la inseminación artificial (IA) son esenci esenciale aless par paraa mej mejora orarr el ren rendim dimien iento to rep reprod roduct uctivo ivo,, prese preserva rvarr la biodiv biodivers ersida idadd y desarrollar investigación básica. La IA es recomendada en los casos en que la monta natural no se pueda llevar a cabo, esta consta del traspaso de células espermáticas del macho a la hembra para que estos fecun fecunden den dentro del cuerpo a los oovocitos. vocitos. La IA se realiza con semen semen fresco o semen criopreservado. El estado de salud, nutrición, manejo, semen utilizado y técnica de inseminación determinarán el éxito o fracaso de este proceso. La transferencia de embriones consiste en recoger los embriones de una hembra donante y transferirlos a una hembra receptora en la que se completará la gestación en caninos.  Metodología:  Para la elaboración de este artículo, se realizó una exploración y recopilación bibliográfica de una serie de 9 bases de datos viables que poseen información de valor para el tema: “Protocolos Actuales de Inseminación Artificial y Transferencia de Embriones en Caninos”. Resultados: Entre los métodos de inseminación se encuentran transcervical, transcervical endoscópica, intrauterina y intravaginal, y los protocolos actuales de IA constan de la examinación física, estro y ovulación, Citología vaginal, Va Vaginoscopia, ginoscopia, Analisis de hormonas (estro), Preparación del semen y anál análisis isis del seme semen. n. En esto estoss protocolos protocolos tam también bién se toma toma en cuenta cuenta Tiempo Tiempo de reproducción y transferencia de embriones en el perro y la Morfología, recolección y maduración de los ovocitos en el perro.  Conclusión:   La inseminación artificial es una herramienta de gran ayuda para implementar en criaderos de razas ya que mejora la tasa de natalidad, ayuda a que perdure la línea genética, al igual que disminuye los defectos genéticos en las diferentes razas. ABSTRACT Introduction. Assisted reproductive technologies such as artificial insemination (AI) are essential to Introduction. Assisted improv imp rovee rep reprod roduct uctive ive per perfor forman mance, ce, pre preser serve ve bio biodiv divers ersity ity,, and dev develo elopp bas basic ic res resear earch. ch. AI is recommended in cases where natural breeding cannot be carried out, it consists of the transfer of  sperm cells from the male to the female so that they fertilize the oocytes within the body. AI will be  performed with fresh semen or cryopreserved semen. The state of health, nutrition, handling, semen used and insemination technique will determine the success or failure of this process. Embryo transfer  consists of collecting the embryos from a donor female and transferring them to a recipient female in which the canine pregnancy will be completed. Methodology: completed.  Methodology: For  For the elabo elaboratio rationn of this article, a  bibliographic exploration and compilation of a series of 9 viable databases that have valuable information for the topic: "Current Protocols of Artificial Insemination and Embryo Transfer in

 

Canines" Canine s" was car carrie riedd out out..   Results:   Inseminati Insemination on metho methods ds includ includee trans transcervi cervical, cal, trans transcervic cervical al endoscopic, intrauterine and intravaginal, and current AI protocols consist of physical examination, estrus and ovulation, Vaginal cytology, Vaginoscopy, Hormone analysis (estrus), Semen preparation and seme semenn analy analysis. sis. These proto protocols cols also take into accou account nt the time of repr reproduct oduction ion and transf transfer er of  embryos in the dog and the morphology, collection and maturation of the oocytes in the dog. Conclusion: Artificial Conclusion:  Artificial insemination is a very helpful tool to implement in breed farms as it improves the birth rate, helps the genetic line last, as well as decreases genetic defects in different breeds.

INTRODUCCIÓN La tecnología de reproducción asistida adopta muchas formas, desde la asistencia a un apar aparea eami mien ento to na natu tura rall en ento entorn rnos os cont contro rola lado doss ha hast staa la cl clon onac ació iónn de an anim imal ales es.. Las Las  biotecnologías reproductivas como la inseminación artificial (IA), la maduración in vitro (MIV) y la fertilización (FIV), la producción de embriones in vitro (PIV), la transferencia de embriones (ET) y la criopreservación de gametos son esenciales para mejorar el rendimiento reproduct repro ductivo, ivo, preserva preservarr la biodi biodivers versidad idad y desa desarrolla rrollarr investigac investigación ión básica. básica. (Gobello (Gobello & Corrada, 2003) La inseminación artificial (IA) es recomendada en aquellos casos en que la monta natural no se pueda llevar a cabo, por factores anatómicos, psicológicos u otros (Zamora, A. 2016). La IA es el traspaso de células espermáticas del macho a la hembra para que estos fecunden dentro del cuerpo a los ovocitos (proceso (proceso In Vivo), diferenciándose de la fertilización   In Vitro ya que está hace referencia a la extracción ta tanto nto de los espermatozo espermatozoides ides como de los ovoc ovocitos itos  para hacer la fecundación fecundación po porr fuera del cuerp cuerpoo (Nagashima eet.t. Al, Al, 2015) . Cada vez es más frecuente el uso de IA tanto para realizarla con semen fresco como con semen criopreservado. El estado de salud y nutrición de los reproductores, así como el mane ma nejo jo del del mo mome ment ntoo de inse insemi mina naci ción ón,, se seme menn ut utili iliza zado do y té técn cnic icaa de in inse semi mina naci ción ón determinarán el éxito o fracaso de este procedimiento (Stornelli,2017). El éxito de la l a IA en caninos está íntimamente relacionado con: 1. Estado de ssalud alud y nutrición ddee los reproductores. 2. delymomento mome nto de semen mayor utilizado. fertilidad de la hembra. 3. Detección Tipo, manejo calida calidad d del 4. Implementación de una técnica adecuada de IA. La transferencia de embriones es una técnica que consiste en recoger los embriones de una hembra donante y transferirlos a una hembra receptora en la que se completará la gestación en caninos esta técnica no está masificada, pero podría ser una herramienta útil a nivel comercial debido a que esta técnica puede ayudar a mejorar la eficiencia en los criaderos (Jiménez & Bustos, 2008).

METODOLOGÍA. Para la realización de este artículo de revisión, inicialmente se realizó una exploración y recopilación bibliográfica de una serie de 10 bases de datos viables que poseen información relevante para en nuestro tema : “Protocolos Actuales de Inseminación Artificial y Trans Transferencia ferencia de Embriones Caninos”.

 

Sciencedirect es una base de datos importante enfocada en artículos científicos, de este seleccionamoss un artículo: seleccionamo “Transferencia sferencia de embriones embriones en el perro y en el gato”, Artículo de la revista revista elsevier elsevier.. ●   “Tran Del repositorio de la universidad nacional de la plata se seleccionó un artículo de revisión: ●   “BIOTECHNO “BIOTECHNOLOGY LOGY de INmedicina CANINEveterinaria REPRODUCTI REPRODUCTION: AN UPDA UPDATE”, TE”, Artículo Art ículo de revisión de la facultad de la ON: universidad de la plata.

De la revista MVZ córdoba es una revista enfocada hacia la medicina veterinaria y la zootecnia de esta seleccionamos un artículo científico: ●   “Eva “Evaluac luación ión De Tres Tres Metodolog Metodologías ías De Recu Recupera peración ción De Embriones Embriones en Cani Caninos nos

Utilizando Un Modelo Postmortem “, Artículo de la revista MVZ córdoba. El grupo Axón ofrece un gran volumen de soluciones que se encuentran a la vanguardia de las últimas tecnología, del cual seleccionamos: ●   “Estado actua actuall de las técnicas de insemin inseminación ación artificial en la especie ca canina.”, nina.”, trabajo

científico del hospital de laenuniversidad de murcia. Pubmedic es una base de datosclínico enfocada la recolección artículos científicos, se selecciona un artículo científico: (Canis nis familiaris) Embryos Produced Produced by In Vitro Vitro ●   “Live Births from Domestic Dog (Ca Fertilization”, artículo científico de pubmedic. Springer link es una base de datos que almacena tanto libros como artículos científicos, se seleccionó un capítulo : Fertilization, ization, Cultu Culture, re, and Transfer.”capítulo de ●   “The Domestic Dog Embryo: In Vitro Fertil libro metodos en biologia molecular. Vetfolio es una base de datos enfocada en contenido educativo y recursos para la comunidad veterinaria en cualquier momento se selecciona un artículo: insemination”,artículo lo científico de vetfolio. ●   “Canine artificial insemination”,artícu Researchgate es una base de datos basada en la recolección de artículos científicos, se seleccionó un artículo científico: ●   “A “AV VANCES EN INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN CANINOS”, artículo artícu lo ddee revisión de la universidad de la plata. El Repositorio Institucional de la Universidad Nacional Abierta y a Distancia, es una base de datos en la que se almacenan todos los trabajos realizados por los estudiantes, se seleccionó una trabajo de grado: ●   “INSEMINA “INSEMINACIÓN CIÓN AR ARTIFICI TIFICIAL AL EN CANINOS COMO ALTERNA ALTERNATIV TIVA A PARA MEJORAR CARACTERÍSTICAS GENÉTICAS. “Trabajo de grado.

 

Cybertesis es una base de datos que posee como principal objetivo facilitar el acceso a las Tesis en Texto Completo de Pregrado y Postgrado que han sido desarrolladas por estudiantes de la Universidad Austral de Chile, se selecciona un trabajo de tesis: CONGELACIÓN ELACIÓN DE EMBRIONES EMBRIONES DE PERRA (Canis lupus ●   “OBTENCIÓN Y CONG familiaris) “, tesis de grado de la universidad austral de chile.

RESULTADOS Protocolos de actuales de inseminación artificial:  Examinación física física

Este examen se realiza tanto al macho como a la hembra, se observa que esten sanos para  permitir una mayor eficacia en la inseminación artificial, no necesariamente necesariamente el tener padres sanos asegura que la inseminación sea exitosa. Se realiza teniendo en cuenta los siguientes  parámetros: -

La salu saludd gene genera rall del del padr padree y la ma madr dree se eval evalúa úann por exam examen en de ap apti titu tudd reproductiva y examen previo a la reproducción. Solo los animales sanos sin defectos genéticos hereditarios deben considerarse

 para la inseminación inseminación artificial. - La información sobre defectos genéticos debe ser dada por el propietario. - Se realiza realiza un examen examen físico general a la madre antes de la inseminación.

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  Estro y ov ovulación: ulación: Se debe tener en cuenta en qué ciclo estral está la madre ya que la inseminación artificial se realiza durante el estro. Teniendo en cuenta las siguientes fases estrales principales para la inseminación: - Pr Proe oest strro:  Estimulación de la hormona folículo estimulante secretada por la glándu glá ndula la pit pituit uitari ariaa ind induci ucien endo do el des desarr arroll olloo y crecim crecimien iento to de los folícu folículo lo ováricos aumentando la producción de estrógenos, generando edematización destlarovulva y el este úterofinaliza libera una secreciónlos sanguínea. sanguíne disminuyen nivelesa.de estrógeno y el aumento E : Cuando de los niveles de progesterona generando una alta secreción de hormona luteinizante , en 24 a 48 horas una mayor recepción al macho y una mayor  fe fert rtil ilid idad ad a los los 2 a 3 días días de desp spué uéss de es esta ta ov ovul ulac ació iónn fa faci cili lita tand ndoo la inseminación.   Diestro:  La perra ya no es receptiva al macho por lo tanto en este no es apto realizar la inseminación. - An Anes estr troo:  Es un tiempo de receso del ciclo donde todas las hormonas son constantes, no se elevan o disminuyen.   Citología vaginal:  Es un test realizado en el laboratorio para confirmar proestro y estro insertando un hisopo de algodón esteril a través de la vulva hasta la vagina,

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evitando el vestíbulo, con el objetivo de recolectar recolectar celular de la misma y observar por  microscopía las siguientes fases implementando la tinción de Diff-quick:

 

  Proestro: Las células vaginales cambian a intermedias más grandes y luego a células cornificadas más grandes.   Estro: El número de células cornificadas incrementan incrementan..   Vaginoscopia:   Se obser observa va la muc mucos osaa vag vagina inall median mediante te un end endosc oscopi opioo flexib flexible, le,  permitiéndonos determinar el momento de la ovulación denominada evaluación de crenulación, los cuales indican el comienzo del pico de LH a medida que disminuyen los niveles de estrógenos. -

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 Analisis de hormonas hormonas para conocer conocer el estro: estro:

●   Progesterona. ●   Luteinizante.  Preparación del semen

1. Se co colec lecta ta el sem semen en imp implem lement entand andoo una va vagin ginaa artifi artificia ciall o estimu estimulac lación ión manual. 2. Una vez cole colectad ctadoo el semen se ana analizan lizan la can cantidad tidad ,viabili ,viabilidad, dad, motilidad motilidad y morfología. 3. El ratio de concepción se clasifica en fresco 880%, 0%, frio 60% 60% , congelado 50% a 60%.  Análisis de semen semen

Consiste en un recuento de de espermatozoides determinando la concentración , viabilidad , motilidad y morfología utilizando un diluyente unopette para luego contar los cuadrados ge del hemocitómetro y se multiplica el número por 1 millón para obtener el número de espermatozoides por mililitro. Esto se multiplica por el volumen de la eyaculación para determinar el número total de espermatozoides por eyaculación tiene que ser superior a 200 millones para ser una inseminación confiable. ● ●

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  Semen fresco: Debe ser inseminado de inmediato en la perra.   Semen frío: Se implementa cuando el macho no está en el mismo lugar de la hembra. debe prepararse de la siguiente manera : 1. se centrifuga para hacer un sedimento 2. se resuspen resuspende de en un diluy diluyente ente comercial qque ue sirve como fuente de energía energía para los espermatozoides. espermatozoides. 3. Se enfría len lentamente tamente dura durante nte una hhora ora para ppreservar reservar la longevidad longevidad de de los espermatozoidess durante el transporte. espermatozoide 4. El semen enfriado debe enviarse ddurante urante la nnoche oche o tan tan pronto como como sea  posible (idealmente (idealmente en 24 horas horas)) al dueño de la perra que se va a criar. criar. 5. Determinar la oovulación vulación de la hembra antes del envío del semen.   Semen congelado: 1. Mis Mismo mo proce proceso so que el del sem semen en frío pe pero ro su diluyent diluyentee es el glice glicerol rol para para evitar daños del espermatozoid espermatozoidee durante la congelación.

 

2. Una vez cong congelad eladoo se coloca en pajitas o se granula y se congela con hielo seco o nitrógeno líquido, según el proveedor del semen. 3. Las mue muestr stras as deben deben est estar ar etique etiquetad tadas as con el nombre nombre del sementa sementall u otra otra identificación y la fecha de congelación. 4. puede en enviarse viarse cong congelado elado para su uso en una fecha posterior. posterior. 5. Debe mantene mantenerse rse a -4 ° F (-20 ° C) hasta que sea necesario necesario y debe usarse usarse inmediatamente después de descongelarlo. 6. Una vez descongelados descongelados se colocan directamente en el útero. 7. No se puede usar eenn inse inseminación minación intravaginal. (Smith,S.2019)

 Métodos de inseminación ●

  Transcervical:  La deposición del semen se realizará en el interior del cérvix o el cuerpo uterino implementado para este la cateterización por un catéter escandinavo o noruego (que por su forma se logra introducir al cérvix) con un tamaño adecuado y  proporcional a la canina a inseminar. Además se debe implementar el uso de uunn fibro o cistouretroscopio rígidos. Estos catéteres deben ser metálicos , permitiendo la inserción por vía vaginal a ciegas  por el canal cervical mientras una mano fija el TC a través del abdomen la otra mano mueve el catéter introducido vía vaginal hasta el paracervix hasta que se introduce a traves de el canal cervical .

Ventajas. -

En la ma mayoría yoría ddee los casos se realiza realiza sin sedación sedación de la hembra. Perm Permite ite múltip múltiples les inse insemina minacione cioness a la misma perra perra.. Co Cost stee mí míni nimo mo..

Desventajas. -

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Nece Necesidad sidad de apre aprendiza ndizaje je y pprácti ráctica ca exha exhaustiv ustiva. a. No es posible visualizar si el catéter está bien colocado. Razas gigantes o pperras erras obesas son difíciles de cateterizar pese a la práctica.

  Transcervical endoscópica:  Se implementa el fibroendoscopio fibroendoscopio que permite la visualización externa del canal cervical permitiendo la cateterización por una sonda uretral flexible, facilitando la deposición del semen a nivel del cérvix o nivel del cuerpo uterino. Ventajas.

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Misma Mismass que la inse inseminac minación ión transcervi transcervical cal . El dueño y el veterinario pueden confirmar la deposición del semen.

 

Desventaja. -

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La inversión inicial ya que que re requiere quiere un equipamiento completo de la en endoscopia doscopia (torre, fuente luz, cámara y monitor)

  Intrauterina: Los espermatozoides son introducidos de manera directa en el interior  de los cuerpos uterinos cerca de la unión útero-tubárica. Mediante los siguientes  pasos: 1. Realización de laparotomía o laparoscopia. 2. Aislar ambos cuernos uterinos. 3. Inyectar la mitad ddee la dosis sem seminal inal en el extremo de cada un uno, o, cerca de la unión útero-tubárica. 4. Introducir una aguja a través de la pared uuterina terina o deposición deposición de 3 ml del semen diluido en extremo craneal de cuerno uterino para que se distribuya de forma homogénea la población sin inyectar. Ventajas.

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Permite obtener gestaciones con una menor calidad espermática o menor  concentración.

Desventajas. -

La hembra hembra de debe be so someterse meterse a ane anestesia stesia ggeneral eneral con los riesgos que cconlleva onlleva la misma. misma. Cont Control rol exha exhaustiv ustivoo ddee la ovulació ovulaciónn de de la la hhembr embraa (Lucas, X.2012).

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  Intravaginal:  Se deposita el semen dentro de la vagina utilizando una jeringa y un catéter largo de plástico. Mediante los siguientes pasos: (Smith,S.2019) 1. Se introduce el ccatéter atéter en la vulv vulvaa y avanza lo más posible dentro de la va vagina. gina. 2. Cuan Cuando do el caté catéter ter no puede avanz avanzar ar,, se colo coloca ca una jeringa que contiene contiene el semen. 3. Se mant mantien ienee la perra en un án ángul guloo de 45º con las patas patas traseras traseras en en el aire aire mientras se inyecta el semen. 4. Se retira la jering jeringa. a. 5. La hembra se mantiene entre 15 a 20 m minutos inutos con con el extremo caudal en el aire  permitiendo que la gravedad tran transporte sporte los espe espermatozoides rmatozoides al útero. útero. 6. Se realiza un estímul estímuloo de contr contracci acción ón vagina vaginall mediante un dedo enguan enguantado tado acarician acar iciandola dola suaveme suavemente nte las pared paredes es vaginales vaginales (Emplumar (Emplumar)) facilitando facilitando el transporte del semen hacia el cuello uterino. Ventajas.

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Se pueden realizar múltiples inseminacione inseminacioness en series diarias o ddías ías alternos. alternos. Requ Requiere iere poca expe experienc riencia. ia.

 

Desventaja. -

No se pued puedee utiliz utilizar ar seme semenn cong congelado elado..

Protocolos de actuales de transferencia de embriones El papel principal de la transferencia de embriones (ET) es permitir la producción de descendencia genética específica, especialmente en hembras infértiles o aquellas que no  pueden tener su propia descenden descendencia. cia. Las principa principales les limitaciones son son el control del tie tiempo mpo y la sincronización endocrina, la producción de embriones y la tecnología de transferencia de embriones (Fayrer, 2007). El aspec aspecto to más imp import ortant antee de la en endoc docrin rinolo ología gía,, en rel relaci ación ón con la trans transfer ferenc encia ia de embriones, es el momento óptimo para la recolección de embriones. El aumento de LH se desencadena por una disminución en la proporción de estrógeno a progesterona. El pico  preovulatorio de LH dura de 24 a 40 h [8] (media, 36 ± 5 h [9] , [10] ) y provoca un desarrollo folicular acelerado, luteinización parcial del complejo de células granulosa-teca y, en última instancia, ovulación ( que ocurre aproximadamente aproximadamente 30 a 36 h después del pico de LH). Los ovocitos primariosPor están el primermás cuerpo extruye entre 60 h después de la ovulación. lo ovulados; tanto, el período fértilpolar de laseperra es de 3 a245 ydías después de que la concentración de progesterona en sangre aumenta a> 2.5-3.0 ng / mL. Después del pico de LH, existe un compromiso folicular masivo con la producción de  progesterona, lo que resulta en aumentos rrápidos ápidos en las concentraciones de progesterona en sangre (Fayrer, 2007). El método estándar para el análisis de progesterona es un radioinmunoensayo (RIA). Sin embargo, las mejoras en las tecnologías afines han conducido a una mayor fiabilidad en los ensayos de inmunoabsorció inmunoabsorciónn ligado a enzimas y quimioluminis quimioluminiscentes centes (ELISA). Cabe se señalar  ñalar  que siempre se debe utilizar un RIA como el estándar de oro para validar estos ensayos (Fayrer, 2007). Tiempo de reproducción reproducción y transferencia transferencia de embriones en el perro

Para la producción de embriones y la transferencia de embriones, el momento de la LH y la ovulación son fundamentales. En el perro, el protocolo de tiempo típico es determinar las concentraciones de progesterona en sangre (usando un RIA) comenzando 7-8 días después del inicio del proestro, con muestras recolectadas cada dos días hasta que haya evidencia definitiva de un pico de LH competente. Después del pico de LH, la tasa de aumento de progesterona varía entre individuos, de acue acuerd rdoo con con el de desa sarr rrol ollo lo folic folicul ular ar y la resp respue uest staa a la LH. LH. La Lass co conc ncen entr trac acio ione ness de  progesterona aumentan hasta el momento de la ovulación y la fertilización; es poco probable probable que que en to toda dass las las raza razass haya haya un unaa conc concen entr trac ació iónn es espe pecí cífic ficaa de pr prog oges este tero rona na pa para ra la reproducción o la transferencia t ransferencia de embriones. (Fayrer, 2007)

 

 Métodos de recolección de de Embriones

●   Métodos quirúrgicos:

La recuperación quirúrgica de embriones se lleva a cabo mejor con la donadora bajo anestesia general. Se realiza por medio de laparotomía, se exteriorizan ovarios y cuernos uterinos para lavarlos a través de una incisión en la línea media. Después de la recuperación de los embriones, el tracto reproductivo se vuelve a coloca colocarr en la cavidad abdominal y la incisión se cierra de manera estándar. La mayor desventaja a la hora de utilizar esta técnica es la inducción de adherencias  periováricas, que pueden reducir la fertilidad de la hembra, además además del riesgo que conlleva la anestesia general (Peirano, 2008). ●   Métodos no quirúrgicos:

Se reali realiza za a travé travéss de un caté catéter ter de Fole Foleyy ( hech hechoo de látex flexib flexible), le), este tiene tiene tres canales: canales: uno para inflar el globo cerca de la punta del catéter y dos para la afluencia y colecta del medio de lavado. Se maniobra con el catéter a través del cérvix, el globo se infla cerca de la  bifurcación uterina, y se irrigan los cuernos uterinos por separado separado.. Una vez que que el cuerno está está irrigado, se desinfla el globo y el catéter se coloca en el otro cuerno uterino. El medio utilizado para irrigar se alimenta a través del ca canal nal de afluencia del caté catéter ter por flujo de gravedad de un recipiente suspendido, y el cuerno uterino se distiende hasta que se se vuelve turgente. Después se interrumpe la afluencia, se abre el canal de desagüe y permite que el fluido acumulado drene hacia un cilindro de recolección. Se han observado pocos efectos adversos en este tipo de recuperació recuperaciónn no quirúrgica, sobre sobre la fertilidad de la donadora(Peirano donadora(Peirano,, 2008).

 Evaluación de embriones

Las características morfológicas morfológicas de los embriones en sus diferentes estadíos de desarrollo, fue descrita por Linder y Wrigth (1983), tomando en cuenta esta descripción como base, Palma (2001) clasifica a los embriones bovinos de la siguiente manera:

 

(Peirano, 2008) Los aspectos importantes que se deben tener en cuenta son: forma del embrión, color, color, textura del macizo celular, número y compactación de las blastómeras, extrusión celular, si hay indicios de degeneración (vesiculación), presencia e integridad de la zona pelúcida (Palma 2001). Otro método para determinar viabilidad, es la evaluación de la morfología y calidad del embrión embri ón lueg luegoo de la vitrif vitrificac icación ión y calentam calentamiento iento.. Palma (2001), (2001), describió describió la siguiente siguiente morfología para la evaluación de embriones:

(Peirano, 2008)

 

Crioconservación

Posibilita Posibi lita alm almac acena enarr emb embrio riones nes de una amp amplia lia var varied iedad ad de esp especi ecies es mam mamífe íferas ras sin que  pierdan su capacidad de desarrollarse y nacer vivos. El empleo de embriones congelados  posibilita utilizar eficientemente donantes y receptoras, incorporar progreso genético a bajo costo, comparando los valores del embrión y el de su transporte frente a los animales en pie, transferir algunos embriones y conservar el resto además esta permite la creación de bancos de alto valor genético también permite economizar y aumentar el rendimiento del uso de receptoras. Al conservar embriones a temperaturas extremadamente bajas (-196ºC en nitrógeno líquido) es posible detener casi por completo la actividad enzimática intracelular, respiración celular, metabolismo, crecimiento, multiplicación, etc., es decir, reducir drásticamente la actividad fisiológica de la célula. Identifica cuatro etapas comunes comunes a las diferentes técnicas: técnicas: exposición de los embriones a concentraciones molares de agentes crioprotectores, enfriamiento desde temperaturas fisiológicas hasta temperaturas lo suficientemente bajas como para causar un virtual cese de todas las reacciones químicas inducidas térmic térmicamente, amente, calentamiento calentamiento desde la temper tem peratu atura ra de con conse serva rvació ciónn a tem temper peratu aturas ras fisiol fisiológi ógica cass y finalm finalmen ente, te, extrac extracció ciónn del crioprotector (Peirano, 2008). Técnicas de Crioconservación Crioconservación

Permiten conservar embriones por distintos periodos dependiendo de las temperaturas que se utilicen, tales como: ●

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  Refrigeración:La refrigeración es un método simple por medio del cual pueden mantenerse embriones embriones a temperaturas entre 0 y 4 ºC durante 24 a 72 horas con el fin de detener el desarrollo embrionario y mantener la viabilidad embrionaria.   Congelación estándar: Los embriones alcanzan su equilibrio osmótico antes de comenzar el descenso de la temperatura y lo mantienen durante el enfriamiento. La exposición de los embriones al medio de congelación (PBS mas glicerol) debe realizarse a temperatura ambiente (20-22 ºC), en un solo paso, de 10 a 30 minutos de duración.   Congelación rápida:Los embriones son deshidratados parcialmente como ocurre en el método estándar, luego se les deshidrata nuevamente colocándose en una solución mixta de glicerol y sucrosa, con el objetivo de enfriarlos rápidamente.   Vitrificación:La vitrificación es un proceso físico de solidificación utilizado para conservar órganos, órganos, tejidos y embriones. Se efectúa una deshidratación parcial de los embriones sin que éstos alcancen su equilibrio osmótico. Es un proceso termodinámico mediante el cual el fluido incrementa su viscosidad durante el enfriamiento, adquiriendo las propiedades propiedades de un sólido. A diferencia de lo que ocurre durante la congelación, en la vitrificación no se forman cristales que pueden dañar los embriones, sino que el fluido pasa a un estado sólido no estructurado similar al vidrio.(Peirano, 2008).

 

CONCLUSIÓN La inseminación inseminación artifici artificial al y la transferen transferencia cia de embr embriones iones son herramie herramientas ntas de gran gran ayuda ayuda  para implementar en criaderos de razas ya que contribuyen y mejoran la tasa de natalidad, ayudan a que perdure la línea genética, aumentan la eficiencia en criaderos, además de que disminuyen los defectos genéticos en las diferentes razas. Por otro lado, tanto la IA como la TE son bio biotec tecnol nologí ogías as que inc increm rement entan an y est estimu imulan lan el comerc comercio io globa globall de pa pajill jillas as y embriones por la facilidad de transporte, conservación y especificidad del producto. En este orden de ideas, ambas tecnologías forman parte indispensable del pilar económico en el campo de la reproducción canina.

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