PREPARADOS MICROSCOPICOS EN FRESCO Y EN SECO.pdf

PRACTICA N° 7 PREPARADOS EN FRESCO I. INTRODUCCION: Permiten observar los organismos suspendidos en un líquido en condiciones de vida normal, sin sufrir alteraciones ocasionadas por algunos colorantes; permite apreciar la movilidad, los cambios citológicos durante el proceso de división celular y en la formación de esporas. Se emplean las siguientes técnicas: 1. Técnica del Montaje Húmedo: Las preparaciones húmedas se efectúan colocando una gota del líquido que contiene los microorganismos en estudio sobre una lámina portaobjeto y cubriéndolo con una laminilla, evitando la formación de burbujas. Si el material es sólido o muy rico en gérmenes, se coloca sobre la lámina portaobjeto una gota de solución salina y en ella se emulsiona la muestra en estudio y se cubre con una laminilla. 2. Técnica de la gota pendiente: Persigue el mismo propósito que el montaje húmedo, con la ventaja que hay menor distorsión por el peso de la lámina cubreobjeto. Se utiliza lámina portaobjeto con excavación central. La técnica consiste en colocar en el centro de una lámina cubreobjeto una gota de la suspensión en estudio. El borde de la excavación de la lámina portaobjeto se cubre con una delgada capa de vaselina y luego se invierte sobre la laminilla presionando suavemente, guiando la gota de suspensión hacia el centro de la concavidad; luego se procede a colocar en posición normal la lámina portaobjeto para el examen de microscopio. El objetivo de la presente práctica es demostrar las variadas formas, disposición y movilidad de algunos microorganismos. II. MATERIAL: Materiales de laboratorio: Material Biológico: - Yogurt - Vinagre - Agua estancada Equipos: - Microscopio óptico compuesto

-

Laminas Laminillas Gotero Pipeta Pasteur

Reactivos: Solución Salina Fisiológica

III. MÉTODO: 1. 2. 3.

Procese las muestras en estudio por las Técnicas de montaje húmedo y gota pendiente descritas en los párrafos anteriores. Examine al microscopio las muestras procesadas primero con lentes de menor aumento y luego con lentes de mayor aumento. Observe cuidadosamente los microorganismos presentes en cada una de las muestras y haga un estudio comparativo de la morfología, estructuras y movimiento de los microorganismos que logra observar.

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IV. RESULTADOS: Observación: Aumento: Preparado: Coloración: Muestra:

Observación: Aumento: Preparado: Coloración: Muestra:

Observación: Aumento: Preparado: Coloración: Muestra:

Observación: Aumento: Preparado: Coloración: Muestra:

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V. DISCUSIÓN:

Después de haber realizado su discusión escriba las respuestas a las siguientes preguntas: 1.

¿Qué ventajas ofrece un preparado en fresco?

2.

¿Qué objetivos del microscopio se utilizan para la observación de preparados en fresco?

3.

¿Qué desventajas ofrece un preparado en fresco por la técnica del montaje húmedo?

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PRACTICA N° 8 OBSERVACIONES DE PREPARADOS EN SECO I. INTRODUCCIÓN: Un preparado en seco es cuando entre la lente frontal del objetivo y el preparado existe una sustancia llamada aceite de cedro con un índice de refracción como el vidrio. En general las bacterias y otros microorganismos son transparentes, lo que dificulta su estudio cuando los exámenes se realizan en fresco. Por tal razón cuando se quiere conocer los detalles morfológicos, es necesario recurrir a tinción, es decir debido a que el índice de refracción de las bacterias y otros microorganismos es muy semejante al del medio de montaje, las bacterias pueden a menudo no ser visibles al microscopio óptico compuesto. Por ende, es necesario utilizar extensiones o frotices de muestras fijadas y teñidas. Las coloraciones bacterianas se realizan para estudiar la morfología, agrupaciones y estructuras como cápsula, esporas, flagelos y otros, que ayudan a la identificación de una especie o grupo particular. Las bacterias tienen afinidad por los colorantes derivados de la anilina o especialmente por aquellos de carácter básico. Estos colorantes llevan en su parte cromófora carga electro-positiva, la que tendría una fuerte afinidad por los electro-negativos que normalmente presentan las bacterias en su protoplasma, entre los cuales se encuentran los ácidos nucleicos y sus derivados. Colorantes son aquella sustancia que tiene la propiedad de comunicar color a tros cuerpos de cualquier naturaleza. Para que una sustancia sea colorante debe estar compuesta por: MOLÉCULA INCOLORA + CROMÓFORO + AUXOCROMO = COLORANTE CROMÓGENO Cromógeno: Son las moléculas que poseen potencialidad de coloración; esta potencialidad está conferida por un radical llamado cromóforo.

Cromóforo: Son grupos de átomos no saturados, susceptibles de dar coloración a las moléculas de las cuales forman parte: la fuerza de los cromóforos varía con la naturaleza de sus átomos y de su estructura. Algunos de estos grupos dan reacción básica. Ejemplo: Grupo Azo: Grupo indemínico:

-N=N-N=

Otros dan reacción ácida. Ejemplo: Grupo Nitro: -NO2 Auxocromo: Son grupos no saturados, debido a esta instauración influyen en el color. Pueden ser: a. Simples: Cuando cada uno encierra un átomo no saturado. Ejemplo: - OH; -SO3H; NH2 b. Compuestos: Cuando cada uno encierra dos átomos no saturados. Ejemplo: Grupo hidroxilaminados – NHOH Grupo hidroínicos - NHNH2 Grupo thiohidroxilaminado –SNH2 Los colorantes de mayor aplicación son los derivados de alquitrán de hulla (anilinas) Ejemplo: Cristal Violeta, Fucsina básica, Safranina, Azul de metileno y Verde de malaquita. Actúan mejor mediante la adición de mordientes, por que aumentan la permeabilidad de la pared celular y la membrana citoplasmática.

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Tipos de colorantes: a.

Por su origen: * Colorantes naturales: Son colorantes extraídos de organismos, animales y plantas. Ejemplo: Indigo, Orceina, carmín, tornasol, hematoxilina. * Colorantes artificiales: Llamados también sintéticos, son aquellos que se obtienen como productos derivados, generalmente se le conoce como anilina. de la destilación de la hulla

b.

Por su reacción Tintórea: Básicos: Son colorantes nucleares, muestran afinidad por las porciones ácidas de la célula. Ejemplo: Cristal violeta o violeta de genciana, azul de metileno, fuccina básica, y otros Ácidos: Son colorantes citoplasmáticos, presentan fuerte afinidad por las porciones básicas de la célula. Ejemplo ácido pícrico, eosina, fucsina ácida, safranina y otros. Neutros: Asocian un colorante ácido y un básico y poseen las propiedades de ambos. Ejemplo: Eosina de azul de metileno.

En general las bacterias tienen afinidad por los colorantes derivados de la anilina o especialmente por aquellos de carácter básico. Estos. Estos colorantes llevan en su parte cromófera carga electro-positiva, la que tendría una fuerte afinidad por los grupos electro-negativos que normalmente presentan las bacterias en su protoplasma, entre los cuales se encuentran los ácidos nucleicos y derivados. Los tipos de coloraciones son: Coloración Simple Coloración diferencial Coloración especial a) Coloración Simple: Es aquella en donde se utiliza un solo colorante en este caso las células se tiñen en forma uniforme. Este procedimiento es usado cuando se quiere revelar rápidamente presencia de microorganismos en diversas muestras y permiten examinar la morfología, estructura y agrupación de las bacterias. Para una buena tinción hay que tener en cuenta de la naturaleza bacteria, edad del cultivo o muestra, el carácter ácido o básico del medio y preferentemente una buena aplicación de la técnica. El objetivo de la presente práctica es reconocer, ejecutar los pasos de un preparado en seco y de una coloración simple II. MATERIAL: 1. Biológico: * Yogurt * Sarro dentario 2. Vidrio: * Lámina portaobjeto * Mechero de alcohol 3. Colorantes: * Azul de metileno *Cristal violeta 4. Metal: * Asa bacteriológica 5. Otros: *Alcohol *Algodón Blgo-Mblgo. Luis Castañeda Peláez, Mag. en Salud Pública

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III. METODO: Para obtener los preparados fijados y coloreados se deben realizar los siguientes pasos: 1. Extensión: Consiste en extender en un portaobjeto limpio y exento de grasa una gota de la suspensión bacteriana. Para ello se hace uso de asa bacteriológica. 2. Fijación: Consiste en pasar el preparado suavemente por la flama de un mechero hasta que seque. La finalidad es adherir la muestra a observar en la lámina portaobjeto y así evitar que se desprenda en los lavados posteriores. También se puede efectuar la fijación con alcohol etílico, alcohol metílico, mezcla de alcohol-éter, y otros. 3. Coloración: Es el proceso de aplicar uno o más colorantes de acuerdo a la técnica empleada. Las coloraciones son simples, diferenciales y especiales. * En el caso de la coloración simple los pasos son: - Cubra el preparado con gotas de colorante y dejar actuar, dependiendo del colorante, durante 30”, 1 a 3 minutos. 4. Lavado y secado: Para eliminar el exceso de colorante se lava el preparado ante un chorro de agua y luego se seca al medio ambiente o ante la llama de un mechero. 5. Observaciones: Se ubican los preparados primero con el objetivo de menor aumento y luego se examinan con el objetivo de inmersión utilizando una gota de aceite de cedro.

III. RESULTADOS:

Observación: Aumento: Preparado: Coloración: Muestra:

Observación: Aumento: Preparado: Coloración: Muestra:

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Observación: Aumento: Preparado: Coloración: Muestra:

Observación: Aumento: Preparado: Coloración: Muestra:

IV. Discusión: 1.

¿Qué ventajas ofrece un preparado en seco?

2.

¿Qué objetivos del microscopio se utilizan para la observación de preparados en seco?

3.

¿Qué desventajas ofrece un preparado en seco?

V. Bibliografía:

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