PREPARACIÓN EN FRESCO Y EN SECO

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a.) BASE TEÓRICA Los preparados en fresco o en seco, son métodos de análisis que nos van a permitir, gracias al microscopio y otras herramientas de laboratorio, la visualización de una complejidad de elementos que a simple vista no son captados por el ojo humano. Desde la invención del primer microscopio, se tenía una idea de la existencia de organismos cuantiosamente pequeños, pero con el tiempo surgió algo más sofisticado: ³el microscopio electrónico ´. Ahora sí era posible visualizar subestructuras, líquidos e incluso la verdadera forma del objeto e n observación; cosas que no se podían apreciar con verdadera exactitud antiguamente. Pero no solo este instrumento ayudaba en la visualización de elementos muy pequeños. Había que valerse de ciertos procedimientos que permitieran una mejor proyección de la imagen en la lente del microscopio. Uno de ellos vendría a ser ³los preparados´, ya sea en fresco o en seco, y que iban a jugar, por separado, un papel preponderante en una investigación microscópica. b.) IMPORTANCIA Si no hacemos ninguna especie de ³preparado´ antes de hacer una observancia de cualquier elemento al microscopio, no sería posible la completa visualización del objeto en mención. Por ejemplo, esto ha servido de gran ayuda en el campo de la medicina y la biología; principalmente en lo que a pruebas y análisis de sangr e se refiere, un ³preparado en fresco´ permitía hacer un recuento de sus diversos

elementos formes y así poder descartar cualquier anormalidad en el principal fluido corporal. A la vez, permitió hacer un reconocimiento del ADN de cada individuo con un simple ³raspado bucal´, gracias al gran aumento de la lente y al ³preparado en seco´, las cuales nos daban una identificación de cada persona con su respectivo código genético. La utilización de los instrumentos en el laboratorio, son de gran ayuda no solo en un campo científico sino en muchos, ya que cualquier método de observación microscópica va a tener como base a un preparado y a la utilización de materiales que se van a complementar con el microscopio. c.) OBJETIVOS þ

Describir y utilizar a los instrumentos que participan en un preparado e n fresco o en seco, y el procedimiento para su elaboración.

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Reconocimiento y manejo del microscopio en la visualización de microorganismos y elementos formes.

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Reconocer el campo de amplitud de un microscopio compuesto y qué utilidad le podemos aplicar.

  

  

a.) MATERIALES

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Aguja y jeringa.

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Liga.

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Láminas y Laminillas

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Tubo de ensayo.

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Centrífuga.

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Muestra de sangre.

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Azul de metileno

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Solución salina (NaCl) al 0.9 %

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Microscopio compuesto.


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b.) MÉTODO En el laboratorio se realizó la extracción de sangre venosa a un compañero para la demostración de cómo hacer un preparado en fresco, para ello se realizaron los siguientes pasos: 1.

En primer lugar, y por separado, se agregó en un tubo de ensayo el anticoagulante ³heparina´, y se hizo una pequeña sacudida a este para poder esparcir el anticoagulante por casi toda su área interna .

2.

Por otro lado, al compañero s e le sujetó una liga al brazo haciendo presión, para evitar un rápido retorno de la sangre y notar una hinchazón de la vena, esto iba a permitir saber cuál era el punto de aplicación de la aguja para la extracción de sangre.

3.

Por otro lado se le realizó asepsia al brazo con algodón y alcohol, tratando de limpiar toda la región cutánea donde se iba a realizar la extracción de sangre.

4.

Se colocó adecuadamente el casquillo de la aguja a la jeringuilla hasta encajar correctamente, tratando de que el bisel de la punta quedara expuesto hacia la parte superior cuando iba a ser penetrada en tejido cutáneo.

5.

Se extrajo cierta cantidad de sangre hacia la jeringuilla.

6.

En el tubo de ensayo anteriormente mencionado, se mezcló la sangre con la solución salina (NaCl) al 0.9% y el anticoagulante.

A partir de este punto, el procedimiento se divide en dos: Observación de la muestra en el microscopio sin ³azul de metileno´ 7.

Se colocó una gota de sangre en la lámina portaobjeto y luego se la cubrió con una laminilla, se presionó ligeramente para eliminar las burbujas que se pudieran formar, logrando así la expansión de la gota de sangre.

8.

Por último se llevó al microscopio para su visualización.

Observación de la muestra en el microscopio con ³azul d e metileno´ 9.

Nuevamente una gota de sangre se colocó en la lámina, esta vez se le agregó un pigmente denominado ³azul de metileno´, y al igual que el procedimiento anterior, se le cubrió con una laminilla .

10. Y este preparado se llevó al microscopio.

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procedimiento más usado para su

utilización es ³El raspado bucal´. Que consta de los siguientes pasos: þ

Se realiza un frotis de mucosa bucal con un hisopo de madera.

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Se coloca una muestra recogida por el hisopo en el porta objetos, y esta muestra se fija a temperatura ambiental o se lleva al fuego a 30º C .

þ

Se le aplica una coloración, un lavado, un secado y luego pasa a observación.

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Si se requiere una visualización con mayor aumento se puede utilizar el pigmento ³aceite de inmersión´ el cual nos permitiría realizar una observación en el microscopio de hasta ³1000 X´.

3. RESULTADOS En el microscopio se pudo observar con gran facilidad a los elementos formes de la sangre, ambos en solución salina (NaCl al 09%) . Pero por una parte se realizó una observación: 1) sin el pigmento respectivo; y 2) con el pigmento azul de metileno. 1) Observación realizada sin ningún pigmento: Se puedo apreciar una gran cantidad de glóbulos rojos pero demasiado juntos, no se logró distinguir muy bien uno de otros. 2.) Observación realizada con el pigmento ³azul de metileno´ : En esta caso se pudo ver con mayor exactitud a los glóbulos rojos, e incluso hasta la forma que tenían.

3.) Hubo una cantidad de sangre que con anterioridad a estos experimentos se depositó en un tubo de ensayo para ser llevada a centrifugación. Después de un lapso fue quitada la muestra de la centrífuga para su observación y se pudo visualizar dos fases en el tubo ensayo: en la parte superior un líquido de color claro amarillento que constituía el plasma y en la parte baja los glóbulos rojos.

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4. DISCUSIONES Los colorantes usados en el laboratorio son cierta especie de líquidos que tienen diferentes capacidades para dar color, permiten una mejor observación de los organismos vistos en el microscopio y mejor aún no alteran la composición o funcionamiento del objeto en cuestión. Gracias a estas propiedades es que se utiliza, en este caso, para muestras de sangre en un preparado en fresco, como se hizo en el laboratorio para la segunda muestra. El preparado en fresco hecho en el laboratorio nos permitió visualizar de manera significativa a los glóbulos rojos. Se mezcló la sangre con la solución salina al 0.9%, esto debido a que el plasma t iene la misma osmolalidad (concentraciones de sustancias disueltas en la sangre). Si bien es cierto, aún

con esta mezcla, la visualización en el microscopio era muy desordenada, pero una vez que se aplicó ³el azul de metileno´ la imagen quedó perfectamente distinguida, se podía observar a los glóbulos rojos más ordenados y separados que los vistos sin pigmentación. En lo que respecta a las muestras sanguíneas en estudios de laboratorio, existen diversos métodos para su obtención. En este caso la técnica empleada para la extracción de sangre, fue la de ³venopunción´, es decir, su extracción de una vena con una jeringa hipodérmica provista de aguja. Al sujetar la liga alrededor del brazo en plano proximal al sitio de la venopunción, la sangre se va a acumular en el vaso correspondiente a la pinchadura, este aumento de la volemia local hace que la vena sobresalga, lo cual se intensifica al abrir y cerrar el puño, y así facilitar la venopunción. 5. CONCLUSIONES U Cualquier elemento de laboratorio es indispensable para la obtención « U Cabe resaltar la importancia del microscopio como instrumento de laboratorio. Sin su utilización como objeto de visualización no se podría observar a los microorganismos más minúsculos que puedan existir. Sus partes y sus funciones están en especial, elaboradas para este tipo de experimentos. Con su amplia gama de aumentos nos es posible saber de mundos que el ojo humano no puede darnos a conocer. U La observación que haríamos con un microscopio compuesto nunca va a ser la misma de la que podríamos hacer con un microscopio electrónico. El segundo supera ampliamente al primero, incluso hasta en 1000 veces mayor su poder de resolución. Pero fue gracias al primero que permitió dar a conocer al hombre un micro mundo que nunca se hubiese podido imaginar.

6. BIBLIOGRAFÍA þ TORTORA GRABOWSKY. Principios de Anatomía y Fisiología. Novena

Edición. þ CHANG, REIMOND. Química. Novena Edición. þ Biblioteca Multimedia de Consulta Encarta 2008. Microsoft Corporation.