Preparacion de Medios de Cultivo

 

 

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERIA E.A.P AGROINDUSTRIAL  PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS.

CURSO

: MICROBIOLOGÍA GENERAL : MICROBIOLOGÍA

GRUPO

: “B” 

DOCENTE

: Blgo.Mblgo. Eterio Alva Muñoz

CÓDIGO

: 0201212035

INTEGRANTES

: Muñoz rojas Andrea Gisela

CICLO:

“IV” 

 

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NUEVO CHIMBOTE - PERÚ 

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

I. 

INTRODUCCION

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar un medio sólido, se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en:

  Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen



animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes presentes de cada uno de ellos.

  Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición química



definida cualitativa y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigación. De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

  Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de



un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que se quieren cultivar.

 

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  Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser



medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos.

  Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos deriva-



dos de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar características fisiológicas de los microorganismos. Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles. Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:

  Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedo-



res que suministren productos de calidad.

  Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisico-



química adecuada.   Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada o desmineralizada.



  Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización. Nun-



ca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.

II. 

OBJETIVOS Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de:

  Conocer los medios de cultivo.     Preparar adecuadamen adecuadamente te medios de cultivo a partir de sus ingredientes

 

y manejar adecuadamente la autoclave. 

OBJETIVOS GENERALES

  Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el



desarrollo de los microorganismos in vitro.   Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio de microbiología



OBJETIVOS ESPECIFICOS 

  Preparar medios de uso general en el laboratorio.



 

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  Conocer los nutrientes en cada medio preparado y su función que



ejerce cada uno.   Identificar colonias bacterianas en forma macroscópica. macroscópica.



  Conocer los materiales que utilizan en la preparación de medios de



cultivo.

  Conocer el modo de acción de la autoclave y su funcionamiento. funcionamiento.



III. 

FUNDAMENTO 

La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos en el laboratorio. Las bacterias en la naturaleza, según sus necesidades nutricionales, ocupan distintos nichos ecológicos que satisfacen las mismas. En el laboratorio, para conseguir que una determinada especie bacteriana se desarrolle adecuadamente es necesario proporcionarle un ambiente artificial que las satisfaga igualmente. Esto se consigue mediante el uso de los llamados “medios de cultivo”  cultivo”  Un medio de cultivo es cualquier sustancia líquida o sólida que puede utilizarse en el laboratorio para que crezcan los microorganismos. Cualquiera que sea el medio debe incluir todo lo necesario para el crecimiento, lo cual varía según el organismo que se quiere cultivar, pero que comprende: agua, compuestos nitrogenados, una fuente de energía y otros factores de crecimiento. Los requerimientos nutricionales de las bacterias varían desde los sencillos compuestos inorgánicos de las autótrofas hasta las complicadas vitaminas y factores de crecimiento de algunas heterótrofas. Algunos medios, como por ejemplo el “agar nutritivo” son capaces de soportar el crecimiento de muchas bacterias.

IV. 

MATERIALES 4.1.

MATERIAL Material de vidrio 

4.1.2.

  Balón de fondo plano   Bureta





4.1.3. 

Equipo

 

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  Balanza   Autoclave   Cocina eléctrica

  

4.1.4

Otros

         

 



Gasa Tijera



Papel



4.1.

Pectona

Algodón Pabilo

Reactivos para: Agar común, Caldo común y Agar Sabouraud. 

NaCl

INGREDIENTES Glucosa Agua Destilada

Extracto de Carne

Agar

 

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V. 

PROCEDIMIENTO 1° Caldo común

Peptona Cloruro de Sodio (NaCl) Extracto de Carne Agua Destilada

5 gr 5 gr 3 gr 1000 ml

(Bacteria)

- 

Preparación:

- 

Pesamos todos los productos para parte del agua destilada (50 ml) entonces:

Peptona para 50ml (agua destilada) 0.25 de Peptona

≈ 0.3g

NaCl para 50ml (agua destilada) 0.25g de NaCl ≈ 0.3  

 

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Extracto de Carne para 50 ml (agua destilada) 0.15 de Ext. De Carne ≈ 0.2g

- 

Medimos 50 ml de agua destilada en una probeta.

- 

Pasar aproximadamente la mitad de los 50 ml a un balón de fondo plano, donde se realizara la mezcla de lo anteriormente medido. 

Pasamos los productos medidos al balón de fondo plano Vaciamos la mitad del agua destilada al balón de fondo lano

 

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Mezclamos

- 

Sellar el balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave.

2° Agar común (Bacteria) - 

Preparación: Peptona 5 gr Cloruro de Sodio (NaCl) 5 gr Extracto de Carne 3 gr Agua Destilada 1000 ml Agar 15 gr

- 

Pesamos todos los productos para parte del agua destilada (50 ml) entonces:

Peptona para 50ml (agua destilada) 0.25 de Peptona ≈ 0.3g

 

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NaCl para 50ml (agua destilada) 0.25g de NaCl ≈ 0.3  

Extracto de Carne para 50 ml (agua destilada) 0.15 de Ext. De Carne ≈ 0.2g

Agar para 50 ml (agua destilada) 0.75 de Agar ≈ 0.8 g

- 

Medimos 50 ml de agua destilada en una probeta.

 

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- 

Pasar aproximadamente la mitad de los 50 ml a un balón de fondo plano, donde se realizara la mezcla de lo anteriormente medido. 

Pasamos los productos medidos al balón de fondo plano Vaciamos la mitad del agua destilada al balón de fondo plano

Mezclamos

Vaciamos el resto de agua destilada al balón de fondo lano

- 

Sellar el balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave.

 

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3° Agar Saboraud (Hongo) - 

Preparación: Glucosa 40 gr Peptona 10 gr Agua Destilada 1000 ml Agar 15 gr

- 

Pesamos todos los productos para parte del agua destilada (50 ml) entonces:

Peptona para 50ml (agua destilada) 0.5 g de Peptona

Glucosa para 50ml (agua destilada) 2g de Glucosa

Agar para 50 ml (agua destilada) 0.75 de Agar ≈ 0.8 g

 

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- 

Medimos 50 ml de agua destilada en una probeta.

- 

Pasar aproximadamente la mitad de los 50 ml a un balón de fondo plano, donde se realizara la mezcla de lo anteriormente medido. 

Pasamos los productos medidos al balón de fondo plano Vaciamos la mitad del agua destilada al balón de fondo plano

 

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Mezclamos

Vaciamos el resto de agua destilada al balón de fondo lano fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo.

- 

-  Sellar el balón de

Después de realizado los medio de cultivos se le iba colocando el nombre y cubriendo con papel bond para evitar que se pierda o contamine el medio de cultivo. 

 

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- 

VI. 

Procedemos a calentar los tres balones de fondo plano, con la intención de poder disolver totalmente los productos mezclados, para ello calentamos en el infernillo eléctrico hasta notar la presencia de burbujas en la superficie del cultivo (no hervir). 

RESULTADOS

 

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VII. 

CONCLUSIONES Al concluir la práctica se concluyó en lo siguiente:

  Se logró conocer los diferentes medios de cultivos para sembrar



microorganismos (Bacterias y Hongos).   Aprendimos los pasos para elaborar un medio de cultivo, sus cálculos respectivos de las cantidades necesarias para su preparación.   Se determinó la importancia que tiene los medios de cultivo en una investigación en el campo agrícola como en la medicina, industria alimentaria ya que gracias a ello se puede hacer el aislamiento de microorganismos tanto patógenos como benéficos y así identificarlos para su posterior uso.





  Con la realización de la práctica de preparación de medios para el



cultivo de tejidos vegetales, se lograron los objetivos establecidos en la misma, proporcionando al alumno gran conocimiento de cómo prepararlo y cuáles son los nutrimentos necesarios de acuerdo a la consistencia que el medio de cultivo obtuvo. Es importante mencionar que se obtuvieron buenos resultados ya que se pudo hacer la preparación del medio sin dificultad alguna 

VIII.  CUESTIONARIO a)  Glosario. Define los siguientes términos. 1. 

Elemento traza

 

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Un elemento traza es un un  compuesto químico que es necesario en cantidades ínfimas para el crecimiento, desarrollo y fisiología de un organismo. También puede ser referido como micronutriente. como  micronutriente.   2. 

Macronutrientes Los macronutrientes son aquellos nutrientes que suministran la mayor parte de la energía metabólica del organismo. Los principales son glúcidos, proteínas, y lípidos. Otros incluyen alcohol y ácidos orgánicos.

3. 

Micronutrientes Son sustancias que el organismo de los seres vivos necesitan en pequeñas dosis. Son indispensables para los diferentes procesos bioquímicos y metabólicos de los organismos vivos y sin ellos morirían. Algunos de los más importantes micronutrientes son el yodo, el hierro y la vitamina A. Existen otros micronutrientes como el zinc, el ácido fólico, el calcio y todas las vitaminas y minerales.

4. 

Reactivo grado reactivo o químicamente químicamente puro Son aquellos cuyo grado de impureza es mínimo, son utilizados en laboratorios.

5. 

Peptona Son una variedad de hidrolizados proteínicos derivados de caseína, carne y vegetales, que en su presentación final ofrecen una fuente efectiva de nitrógeno y carbono en otros nutrientes. En formulaciones adecuadas estimulan y promueven el crecimiento bacteriano. bacteriano.

6.

 

7. 

Cloruro de sodio El cloruro de sodio es un un  compuesto iónico formado por un un catión  catión sodio  sodio (Na+) y un  un anión cloruro (Cl-), y como tal, puede reaccionar para obtener cualquiera de estos dos iones. Como cualquier otro cloruro iónico cloruro iónico soluble,  soluble, precipita  precipita cloruros insolubles cuando es agregado a una solución de una sal una  sal metálica apropiada como nitrato como nitrato de plata Extracto de carne El extracto de carne es un un  caldo de carne muy concentrado, normalmente de vacuno. de vacuno.   Se usa para dar sabor a carne a diversas recetas, y para elaborar consomés elaborar  consomés y sopas.   sopas. 

 

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8. 

Glucosa La glucosa es un un monosacárido  monosacárido con  con fórmula molecular C molecular C6H12O6. Es una hexosa, una  hexosa, es  es decir, contiene 6 átomos de carbono, y es una una   aldosa,  aldosa,  esto es, el grupo carbonilo grupo carbonilo está en el extremo de la molécula (es un grupo aldehído) grupo  aldehído).. Es una forma de azúcar de azúcar que se encuentra libre en las frutas las  frutas y en la miel. la miel.  

9. 

Agar Agar o agar-agar es una gelatina una gelatina vegetal  vegetal de origen marino. origen marino.   Químicamente el agar es un polímero un polímero de subunidades de galactosa; de galactosa; en  en realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina polisacáridos:  agaropectina y agarosa.   agarosa.  El agar nutritivo es usado como medio de cultivo para el crecimiento de bacterias de bacterias y hongos,   hongos,  pero no para virus para virus (aunque los virus bacteriófagos virus  bacteriófagos crecen frecuentemente en bacterias cultivadas en agar).

10.  Autoclave Una autoclave es un recipiente un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre hermético que permite trabajar a alta presión alta  presión para realizar una reacción industrial, una cocción o una  esterilización una esterilización con vapor con vapor de agua. Su agua. Su construcción debe ser tal que resista la presión y temperatura desarrollada en su interior. La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100 °C. La acción conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulación proteínas de los microorganismos, los  microorganismos, entre ellasa las esenciales parade lalas vida y la reproducción de éstos, cosa  entre que lleva su destrucción.

 

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b) Haz un diagrama de flujo del procedimiento a seguir en esta práctica.  

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO 1.  Medio puro.

Peptona cloruro de sodio. 50g

pesar.

[Balanza analítica].

pesar.

[Balanza analítica].

añadir.

[Homogenizamos].

Extracto de carne agua destilada.

3g y1000ml

Agar. 15g

añadimos.

sellamos

calentamos

llevar a un autoclave.

anotar

[50 ml de aguapara disolver la sustancia]. [El balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave]. [Sometemos en una cocina eléctrica las mezclas de hicimos en el laboratorio].

 

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2.  Caldo común.

Peptona y cloruro de sodio. 0.25g

pesar.

[Balanza analítica].

pesar.

[Balanza analítica].

añadir.

[Disolverlas en la cantidad ].

Extracto de carne.

0.15g

.

añadimos.

sellamos

calentamos

llevar a un autoclave.

anotar

[50 ml de aguapara disolver la sustancia].

[El balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave]. [Sometemos en una cocina eléctrica las mezclas de hicimos en el laboratorio].

 

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3.  Agar común.

Peptona cloruro de sodio. 0.25g

pesar.

[Balanza analítica].

pesar.

[Balanza analítica].

añadir.

[Homogenizamos].

Extracto de carne agua destilada.

3g y1000ml

Agar. 0.75g

añadimos.

sellamos

calentamos

llevar a un autoclave.

anotar

[50 ml de aguapara disolver la sustancia].

[El balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave]. [Sometemos en una cocina eléctrica las mezclas de hicimos en el laboratorio].

 

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4.  Medio saboraud.

Peptona y glucosa. 0.5 y 2g

pesar.

[Balanza analítica].

pesar.

[Balanza analítica].

añadir.

[Homogenizamos].

Extracto de carne agua destilada.

3g y1000ml

Agar. 0.75g

añadimos.

sellamos

calentamos

llevar a un autoclave.

anotar

[50 ml de aguapara disolver la sustancia].

[El balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave]. [Sometemos en una cocina eléctrica las mezclas de hicimos en el laboratorio].

 

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IX. 

BIBLIOGRAFIA

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