preparación de cultivos

UNIVERSIDAD ANDINA NESTOR CACERES VELASQUEZ FACULTAD: INGENIERIAS Y CIENCIAS PURAS CARRERA ACADEMICA PROFESIONAL DE INGENIERIA SANITARIA Y AMBIENTAL

AISLAMIENTO Y SIEMBRA PARA BACTERIAS Y HONGOS

PRACTICA DE LABORATORIO N° 3 CATEDRA DE MICROBIOLOGIA SANITARIA Y AMBIENTAL DOCENTE Dr: PAURO ROQUE, Juan José. INTEGRANTES: AÑASCO QUISPE, Romeo Percy. HANCCO ACUÑA, Helber Fredy CAÑAZACA LARICO, keyko Yhomaira. CHURA VARGAS, Yandy Yachy. CENTENO CHURA, Zenaida. SEMESTRE: Segundo “D” JULIACA- PERU 2015

AISLAMIENTO Y SIEMBRA PARA BACTERIAS Y HONGOS CATEDRA: MICROBIOLOGIA SANITARIA Y AMBIENTAL

CARRERA ACADENICA PROFESIONAL INGENIERIA SANITARIA Y AMBIENTAL UNIVERSIDAD ANDINA NESTOR CACERES VELASQUEZ …………………………………………………………………………………………………...... RESUMEN: el objetivo de la presente práctica fue aislamiento y siembra para bacterias y hongos . teniendo dos placas petri con medios de cultivo apc y ams la metodología aplicada fue de estrías en el caso de bacteria y puntos el caso de hogos, que consiste en colocar a muestra con una asa de siembra previamente esterilizado por llameado directo (flameado hasta que alcance un rojo incandescente)introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de zigzag, en el caso de siembra por método de punto se realizó el misma método con la diferencia de a travesar el medio de cultivo , tras el proceso de incubación por …..dias se obtuvo el crecimiento de bacterias (staphylococcus aureus) y hongos(rhizopus sp.). PALABRAS CLAVES: - Cultivo - Aislamiento - Esterilización - Incubación - flameado ABSTRAC The purpose of this practice was to observe and distinguish microorganisms (bacteria, fungi, protozoa and algae) .the methodology was microscopy which involves placing a sample on a slide or coverslip or tape relatively eschost this according to the sample was achieved observe or see Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus (bacteria) sputum sample using the method of high staining, Stylonychia, paramecium caudatum (protozoa) rhizopus sp.muestra pumpkin decomposition and Fleischmann saccharomyce cerevisiae yeast (fungus). KEY WORD - Methodology - Displays - staining - Sputum - Decomposition

INTRODUCCION La siembra microbiológica es un procedimiento técnico que consiste en colocar una pequeña fracción o volumen de la muestra, sobre o dentro, de uno o varios medios de cultivo que contengan los nutrientes necesarios para las especias que presuntivamente contiene, con la finalidad de que puedan desarrollarse adecuadamente, para factibilizar su estudio y posterior identificación. El número de células microbianas que se encuentran en el volumen o fracción sembrada se denomina inóculo. (José González Alfaro., 2004) Este tipo de siembra, guarda estrecha relación con la siembra agrícola convencional, donde la semilla es equivalente a la bacteria y el terreno fértil al medio de cultivo, ; de la misma manera, los aperos de labranza, tales como la guataca, el azadón, etc, son sustituidos por los instrumentos de siembras, tales como: el asa, la aguja de platino, etc. (José González Alfaro., 2004) Si se toma un asa bacteriológica cargada con una muestra que contenga bacterias y se van haciendo estrías de ésta sobre una placa de agar nutritivo de tal manera que el material se vaya "diluyendo" sobre la superficie llegará un momento en que las bacterias depositadas en la estría estén bien separadas unas de otras, reproduciéndose cada una en progresión geométrica (1, 2, 4, 8, 16, 32,64, etc.). (Briones, ABRIL. DE 2009) Dependiendo del tiempo de generación, que varía según la especie bacteriana, después de cierto tiempo, cada una se habrá multiplicado muchas veces, formando sobre la superficie del medio un pequeño promontorio constituido por células bacterianas llamado "colonia", que se obtiene generalmente en unas 24 a 48 horas. (Briones, ABRIL. DE 2009) E tal sentido aislar y sembrar bacterias (staphylococcus aureus) y hongos(rhizopus sp.). Tienen mucha importancia en el ámbito sanitario y ambiental en tal sentido los objetivos planteados fueron: -

Adquirir conocimientos básicos teóricos y prácticos de la siembra y aislamiento de bacterias y hogos . Practicar las diferente técnicas de siembra para el desarrollo de cultivos y sub cultivos de hongos y bacterias

1.- ZONA DE ESTUDIO: Perú, Puno, Juliaca Región Suni. Zona Central: 3825 msnm. Ciudad Universitaria de la UANCV-Laboratorio Calidad Ambiental 2.- TIPO DE ESTUDIO: Descriptivo 3.- METODOLOGÍA: Para el inicio de la práctica se tenía que contar con: medios de cultivo sólidos, Agar Plate Count (APC) , Agar Manitol Salado(AMS) distribuidos en placas de "Petri" previamente Con un marcador indeleble se dividir la placa Petri en 2 sectores, de tal manera que al destaparla se pueda distinguir la sección ya cultivo para iniciar la siembra previamente dicha:

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Fig, [1] medios de cultivo sólidos izq. Agar Plate Count (APC) der. Agar Manitol Salado(AMS) [2] placa Petri divididas en 2 sectores

fig.

En los métodos de siembra se realizó en las proximidades de la llama del mechero y a que el calor emanado reduce el número de microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a favor del proceder aséptico. Para mantener el medios de cultivos en cajas de petri estéril , coloco la placa invertida sobre la mesada de trabajo y se levantó la parte que contiene el medio de cultivo, para abrir las placas petri se llevó a la proximidad de la llama del mechero para evitar que los microorganismos ambientales se depositen en la superficie del medio para ello se debe esterilizar los borde de la placa petri.

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Fig, [3] [4] [5] esterilizando los borde de la placa petri para poder abrir fig.[6] proximidad de la

llama del mechero

* Para las dos técnicas utilizadas de tuvo presento lo siguiente: Siembra microbiológica en medios de cultivos sólidos en placas Petri :1) Retirar la tapa de la placa petri ; 2) Flamear la asa de siembra ; 3) Introducir el instrumento de siembra con la muestra y realizar la siembra; 4) Retirar el instrumento 6) Taponar la placa petri. (José González Alfaro., 2004)

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Fig, [7] medios de cultivos sólidos en placas Petri fig. [8] ) Retirar la tapa de la placa petri [9] Flamear la asa de siembra

fig.

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Fig, [10] siembra con la muestra fig.[11] Retirar el instrumento

TECNICA DE SIEMBRAPOR PUNTO:

Este método de siembra se realizó sobre la superficie de medio de cultivo sólido, Agar Plate Count (APC), con muestra de zapallo en descomposición

I.

Introduzca el asa de alambre de platino directamente en la zona de color azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo.

II.

Retire el instrumento de la llama y se colocó al costa de la muestra de zapallo espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que el asa se enfríe.

III.

Realizo un raspado en la muestra donde se formó esporas

IV.

La particularidad que tenía este método, es que la asa (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo.

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Fig, [12] izquierda levantamos parcialmente la tapa de la placa de Petri Fig, [13]esterilización de la asa fig. [14] atravesado el medio de cultivo

TECNICA DE SIEMBRA POR ESTRÍAS:

 CON ASA DE SIEMBRA

Este método de siembra se realizó sobre la superficie de medio de cultivo sólido, Manitol Salado Agart (AMS), con muestra de agua de cebada en descomposición I.

Esterilizamos el asa de siembra flameándola girado 90°

II.

Tomando la muestra de agua de cebada

III.

Con la mano izquierda levantamos parcialmente la tapa de la placa de Petri y descargar el material en el sector, trazando una serie de zi g-zags muy cerrados a todo lo ancho del sector asignado.

IV.

Cerramos la placa petri.

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Fig, [15] trazando una serie de zi g-zags fig.[16] Tomando la muestra  CON HISOPO Esta técnica se realzo de manera similar a la técnica de estrías con asa de siembra  

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Tomamos la muestra mediante el raspado detrás de la oreja Descargar el material en el sector, trazando una serie de zi g-zags

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Fig, [17] raspado detrás de la oreja fig.[18] Agar Plate Count (APC) INCUBACIÓN Una vez realizada la siembra, sele proporciono a los cultivos la temperatura y las condiciones de adecuadas que favorezcan su desarrollo, durante un tiempo predeterminado que será variable para cada grupo de microorganismo por lo que se puso en la incubación a 18 CO RESULTADOS Y DISCUSIÓN TECNICA DE SIEMBRA POR PUNTO: Fig, [19] puntod dejados por la [20]bacteria resistente al de hongos fig.[20] hifas de1 Rhizopussp 9

Se observa enDE elSIEMBRA TECNICA Resultado los hongos ESTRÍAS: Rhizopus ps y bacterias que Ubicación en la placa Petri soportan la presencia de hogos .

en esta imagen se obtuvo un resultado negativo ya que la muestra no tuvo un buen desarrollo.

tecnca fig. presencia 2 0

POR

2 0 se observa la formación de colonias resultado obtenido por medio de la técnica de estrías.

La siembra se ha realizado el 20 de mayo del 2015 a horas 2pm por medio de la técnica al 4 de junio del 2015

CONCLUSIONES La metodología que se utilízo técnica de puntos y estrías logro adquirir destreza teniendo presente que se debe siguir los siguiente pasos 1) Retirar la tapa de la placa petri ; 2) Flamear la

asa de siembra ; 3) Introducir el instrumento de siembra con la muestra y realizar la siembra; 4) Retirar el instrumento 6) Taponar la placa petri.. Se logró preparar mediante dos técnicas obteniendo resultados favorables .

BIBLIOGRAFÍA Briones, M. T. (ABRIL. DE 2009). MICROBIOLOGÍA APLICADA. EDITORIALES DE LA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA UNIDAD AZCAPOTZAL.CO. José González Alfaro. (2004). MICROBIOLOGÍA Instrumentación y principios básicos. La Habana: Editorial Ciencias Médicas. Janeth Sanabria Gómez.–Microbióloga (2001)MICROBIOLOGIA AMBIENTAL UNIVERSIDAD DEL VALLE Pag.95 Standard methods for the examination of dairy products (16th ed. ed.). (1993). Washington,: American Public Health Association. Castañeda Briones, M. (2003). MICROBIOLOGÍA APLICADA (Vol. 240). BASICAS. Castañeda, M. T. (2003). MICROBILOGIA APLICADA. SECCiÓN DE PRODUCCiÓN y DISTRIBUCiÓN EDITORIALES.