Pre Informe. Laboratorio de Microbiologia. Jaime Orlando Puentes

MICROBIOLOGIA PRE INFORME DE LABORATORIO

JAIME ORLANDO PUENTES MARTINEZ

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS CARRERA DE ZOOTECNIA

UNAD

Santafé de Bogotá D.C Junio 1 de 1.996

OBJETIVOS

* Manejar conceptos y terminología propia del área de la Microbilogía aplicada a la carrera.

* Desarrollar habilidades para la manipulación de instrumentos y procesos realizados en el laboratorio

*

Comprender los diferentes tipos de pruebas empleadas en el laboratorio para

cultivar y / o detectar microorganismos.

* Conocer los usos de los microorganismos para el desarrollo de la agroindustria.

JUSTIFICACION

Las prácticas de laboratorio en el área de la Microbiología aplicada a la carrera de

Zootecnia, son importantes en las medidas que se busque determinar con exactitud los niveles mínimos de microbios existentes en los diferentes procesos Zootécnicos , con la finalidad de lograr mejores rendimientos, tanto a nivel de Campo ( P.ej, análisis de aguas para Piscicultura ), como para mejorar la calidad higienica de subproductos obtenidos a partir de explotaciones pecuarias, ( P.ej, obtención de Leche, Quesos, miel etc ).

Es tambien muy importante para comprender, la patogenicidad de Hongos, virus y Bacterias, que se puedan presentar dentro de una explotación, para mejorar las condiciones sanitarias dentro del mismo, ( P ej, piaras porcícolas, galpones de pollos, etc ).

INTRODUCCION

La microbiología, es la ciencia que investiga la vida de los microbios, sus toxinas o venenos y sus reacciones, se divide en el estudio de las Bacterias, Hongos y Virus.

El conocimiento de los microbios avanzó a partir de los descubrimientos de Pasteur en el siglo XIX, En la actualidad se emplean numerosos métodos para aislar los Microbios, cultivarlos en medios especiales que se llaman caldos, teñirlos para comprobar la coloración que adquieren y posteriormente llevarlos al microscopio.

De este modo se conoce la especie a que pertenecen, la enfermedad que producen, los venenos o toxinas que desprenden y la movilidad y forma de multiplicarse. La Microbiología, es una asignatura indispensable en todas las carreras de Ciencias Médicas y Agropecuarias.

El significado de la palabra Microbio, viene de micro = pequeño, y bios = vida, que significa pequeña vida, pero se ha adoptado mejor el termino microorganismo, que es otra manera de designar un enorme conjunto de seres vivos, casi siempre unicelulares, que desempeñan papeles importantes en el ecosistema del planeta.

Unos cuantos son muy utiles al hombre, como las levaduras que producen vino pan y cerveza, o como los hongos en la fabricación de la penicilina, o los fermentos lácticos.

Otros son parásitos del hombre, de otros animales y de las plantas. La mayoría, sin embargo, no interaccionan directamente con el hombre, pero tienen una gran importancia para nuestra comprensión de la diversidad de seres vivos que existen.

La humanidad ignoró durante milenios la existencia de los microorganismos, aunque, por desgracia, siempre tuvo presente el efecto de enfermedades infecciosas,

causadas por microorganismos transmisibles, bien de un hombre a otro, o de los animales al hombre,enfermedades zoonóticas,han sido con mucho la principal causa directa de muerte para nuestra especie hasta bien avanzado siglo XX.

La inmensa mayoría de los microorganismos tienen un tamaño menor de 0,2 mm, que es el límite del poder separador del ojo humano. En consecuencia, no pudieron ser vistos hasta que no se perfeccionó el microscopio.

PRE INFORME

1. BACTERIOLOGIA ( Laboratorio ).

1.1 Caracteríticas morfológicas de colonias.

Cuando las bacterias crecen en la superficie de un medio con agar o gelatina, las células que proliferan quedan prácticamente en posición fija y forman masas de muchos millones de células observables a simple vista. Las colonias así formadas tienen dimensiones desde las mínimas visibles, hasta masas de varios milimetros de diámetro. presentan características diferentes en cuanto a volumen, forma y textura y en algunos casos de color, que si bien es cierto depende de la naturaleza del medio

de cultivo y de la incubación.

Por ejemplo , las colonias de estreptococos son relativamente pequeñas, de 1mm o menos diámetro, como las de la mayor parte de del tipo de los neumococos relativamente similares, mientras que las colonias de estafilococos y bacilos entericos son algo mayores, y las otras especies de bacilos pueden tener varios milimetros de diámetro.

La forma de las colonias dependen de su borde y su espesor. El borde puede ser liso o irregular y aserrado en mayor o menor grado. Cuando el espesor es mucho mayor en el centro y disminuye uniformemente hacia el borde se dice que la colonia es elevada, en ocaciones que tiene forma hemisférica.

La consistencia y textura de la masa de las células tambien son características distintivas de la morfología de la colonia, pueden ser secas, humedas o viscosas.

Examinándola con la luz trasmitida la masa celular puede parecer amorfa o granular y varía desde traslúcida, quizá con tinte azulado , o pasando por opalecéncia hasta la opacidad blanca o amarillenta.

La coloración es más frecuente en las bacterias saprófitas, donde las masas celulares pueden tener colores rojo, naranja, o amarillo, ésto por la presencia de carotinoides, y es verde en caso de algunas bacterias fotosintéticas.

de las bacterias patógenas la más pigmentada es la Staphilococcus Aureus, cuyas colonias tienen color amarillo oro.

1.2 QUE ES UNA COLONIA EN BACTERIOLOGIA

Después de hacer la siembra sobre el medio de los microorganismos, y utilizando los metodos de siembra por estría, en placa, o por el metodo de siembra en masa de placa, de ésta forma las células microbianas quedan separadas individualmente. Al sometersen a incubación, las células individuales de reproducen rápidamente, haciéndose visibles masa de células entre las 18 y 24 horas. Estas son las que denominamos colonias.

1.3 CLASES DE MEDIOS

El cultivo de los microorganismos en el laboratorio, se hace sobre materiales nutritivos a los que en forma general se les denomina medios.

Existe una gran variedad de éstos, y la determinación de cual usar depende de múltiples factores, uno de ellos es la clase de microorganismo que va a cultivarse.

Los medios pueden ser líquidos ( caldos ), sólidos ( agares ), y semisolidos.

La diferencia de un medio líquido y uno solido, rádica en que al último se le adiciona agar ( extracto de algas marinas ) en proporción del 1.5% , y al semisólido un porcentaje menor.

Tanto los medios liquidos como los solidos, pueden ser medios de enriquecimiento o medios de selección, dependiendo del constituyente del mismo.

1.3.1 Medio de enriquecimiento

Es líquido, y en él se desarrolla la mayoría de las bacterias, predominan las que tienen mayor poder de multiplicación.

El medio más utilizado es el nutritivo ( líquido como sólido ) una modificación de éste es el agar sangre, que contiene 10% al 15% de globulos rojos de humano o de cordero, en el crecen la mayoría de las bacterias, además permite establecer la capacidad de hemólisis que tienen las bacterias.

1.3.2 Medios de Selección

Se selecciona manipulando factores de caracter nutricional, mediante siembra que nos lleve a obtener una colonia aislada.

( medios de cultivo ),

Manejando la temperatura ambiental podemos diferenciar las bacterias Psicrofílicas ( 7 grados C. ), bacterias mesofílicas ( 37 grados C. ), o termofílicas ( 52 - 54 grados C ) ; tambien se puede manejar el grado de humedad ( hongos ), el Ph ( los hongos requieren de un ph ácido, mientras las bacterias lo necesitan neutro ).

Tambien se puede manejar el punto de vista nutricional, los medios de cultivo juegan un papel importante, por ejemplo la presencia de sales biliares se inhibe el crecimiento de bacterias gram ( + ) y facilitan el desarrollo de las gram -

La presencia de sustancias quimicas, como las sales de tetrationate y selenita, inhiben el desarrollo de las gram + , pero no el de las gram -.

La presencia de colorantes como el eosin metilen blue, favorece el crecimiento de los coliformes.

1.3.3 Medios diferenciales

En estos medios observamos las reacciones bioquímicas propias de algunas bacterias, las cuales sirven para identificar un determinado tipo de bacteria, por ejemplo el medio urea que permite el crecimiento de bacterias, que posean la enzima ureasa ( desdoblando la Urea ), o el agar T.S.I ( triple azucar hierro ).

1.4 QUE ES UNA CELULA PROCARIOTICA

los organismos procarióticos ( aquellos que poseen celulas primitivas, procarióticas ), poseen pocas membranas que la delimiten como tal, tiene ausencia de núcleo delimitado, se reproducen por división binaria, a este grupo pertenecen los

actinomicetes, las mixobacterias, las bacterias fotosintetizadoras, las espiroquetas, los micoplasmas, las ricketstsias y clamidios.

1.5 QUE ES UNA COLORACION BACTERIOLOGICA Y CUANTAS CLASES HAY

Existen dos clases de coloración de las bacterias a saber : Tinción simple y tinción diferencial.

La coloración son técnicas empleadas para la diferenciación y estudio de las partes internas de una celula, en este caso las bacterias.

1.5.1 Tinción simple

Toma esta definición a la coloración que se realiza a las bacterias por la aplicación de una sola solución de un colorante a una pelicula fijada.

La pelicula se inunda en la solución durante un tiempo determinado y posteriormente se lava con agua y se seca con papel filtro, se emplea el azul de metileno y la céula se tiñe uniformemente.

1.5.2 Tinción diferencial

Este tipo de tinción pone de manifiesto las diferencias entre celulas microbianas, por medio de la adición de dos o más soluciones de colorantes o de reactivo.

1.5.2.1 Tinción de Gram

Una de las técnicas de tinción diferencial es la tinción de Gram, es la más utilizada en el reconocimiento de bacterias.

El preparado se somete a las siguientes soluciones ; primero a cristal violeta, posteriormente a solución de yodo, luego a alcohol y por último a la safranina u otro colorante de contraste.

Las bacterias teñidas con éste método se diferencian en dos grupos ; gram ( + ), y gram ( - ), las gram ( + ) conservan el color violeta, y aparecen de color violeta, las gram ( - ) aparecen de color rojo.

2. ANALISIS DE ALIMENTOS ( Laboratorio )

2.1 QUE ES UN ORGANISMO MESOFILO

Un organismo mesófilo es el que vive con temperaturas moderadas. Las bacterias mesófilas

con

apetencia

de

mamiferos

tienen

óptimos

de

crecimiento

correspondientes a temperaturas corporales, por ejemplo 37 grados C, para parásitos o bacterias del hombre.

2.2 CLASES DE LECHE

2.2.1 LECHE CRUDA

La leche de obtención al lado de la vaca , se considera leche cruda, es quizas insustituible.

La leche si no es enfriada rápidamente, pronto se acidífica y contrae germenes, de hecho habría que hervirla, pero éste procedimiento destruye vitaminas y nutrientes.

2.2.2 LECHE PASTEURIZADA

Para evitar que la leche se dañe, oséa que proliferen los microorganismos, se recurre a la pasteurización, proceso que consiste en calentar la leche a 70 o más grados centigrados, y enfriarla luego lo más rápido posible.

Los microorganismos perecen al no adaptarsen al cambio, mientras se conservan intactos elementos esenciales.

2.2.3 LECHE HOMOGENIZADA

Con el fín de que la leche, sea de mejor sabor, más agradable y se pueda digerir mejor por niños y enfermos, suele homogenizarse, proceso por el cual se logran romper los glóbulos grasos y logrando distribuir la crema en igual proporción por todo el líquido.

2.2.4 LECHE CONDENSADA

Se obtiene haciendola hervir en recipientes al vacío, hasta sacarle la mayor parte del agua, y luego se envasa en latas.

2.2.5 LECHE EN POLVO

contiene muy poca humedad, aunque conserva generosa cantidad de grasa. Actualmente se le adicionan vitaminas A y D, para compensar las que se pierden en el proceso.

2.3 PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR DILUCIONES

* Muestra 10

11 ml ( líquida ) + 99 ml de diluyente 11 gr sólida.

Diluyente : ( agua peptonada 0.1 esteril ). Agitar vigorozamente y dejar en reposo 10 minutos.

* 10 Transferir 1 ml de disolución 10 a un tubo que contenga 9 ml de diluyente. Mezclar por pipeteo 10 veces.

* 10 Transferir 1 ml de dilución a un tubo de ensayo con 9 ml.

2.3.1 Inoculación

Realizar por duplicado las siguientes operaciones :

* Transferir 1 ml de las diluciones a cajas de petri esteriles previamente marcadas.

* Inmediatamente vertir en las cajas de 10 a 15 ml de agar ( SPC ), mantenido a 45 50 grados C.

SPC = Standar plate count.

* Mezclar el inóculo con el medio así :

* Mover la caja de adelante hacia atrás cinco veces * Rotar la caja cinco veces en el sentido de las manecillas del reloj y cinco al contrario.

- Hacer control de esterilidad con el medio y el diluyente. ( sin muestra ).

- Dejar solidificar.

- Incubar a 35 grados C, más o menos 2 grados, por 48 más o menos 3 horas.

2.3.2 Lectura.

* Tomar las 2 cajas de la misma dilución que presenten entre 30 y 300 colonias.

* Contar todas las colonias en profundidad de caja.

* Hallar el promedio de colonias en las cajas y multiplicarlo por el factor dilución.

2.4 COMO SE PUEDE ALTERAR LA LECHE.

La

alteración

de

la

leche

pasteurizada,

se

debe

a

contaminaciones

postpasteurización, o al crecimieto de microorganismos, que han sobrevivido el proceso termico. Generalmente si ls flora microbiana que está produciendo la alteración son bacilos gram - , seguramente la contaminación se presento despues de la pasteurización.

Pero si son gram +, posiblemente la contaminación se debe a bacterias esporoformadoras, que han soportado el tratamiento térmico.

3. MICOLOGIA ( Laboratorio )

3.1 QUE ES UN ORGANISMO EUCARIOTICO

Organismo cuyo material genético ( ADN ), está rodeado por membranas ( la

envoltura nuclear ) que forma el núcleo.

3.2 QUE ES HIFA CENOCITICA Y SEPTADA

El cuerpo de de un hongo filamentoso, consta de dos partes, el micelio y las esporas. El micelio se denomina tambien hifas, cada hifa tiene 5 - 10 micras de ancho, las hifas tienen tres tipos.

3.2.1 Hifa cenocítica.

Estas hifas no presentan tabiques transversos o septos

3.2.1 Hifa septada

Los septos dividen a las hifas en compartimentos o células con un sólo núcleo en cada compartimento. En cada septo existe un poro central que permite la migración de los núcleos y del citoplasma desde un compartimiento a otro.

3.2.3 Hifa septada polinuclear

Los septos dividen a las hifas en células con más de un núcleo en cada compartimento.

3.3 QUE SON CONIDIOS Y SU CLASIFICACION

Los conidios son estructuras que se forman en los ápices o a los lados de una hifa, se dividen en dos clases, unicelulares o microconidios que son los conidios pequeños y

en pluricelulares o macroconidios.

BIBLIOGRAFIA

1. Tratado de Microbiología de Burrows ,Mexico, D.F 1.984

2.

Biología aplicada,

Gonzalo Téllez, Camilo Bohorquez,

UNISUR, Santafé de

Bogotá 1.992

3. Diccionario de Biología, editorial Norma , 1982 4. Enciclopedia Universitas, Salvat editores, tomo La vida 1, Barcelona 1.984.

5 Microbiología Julio Vera, UNISUR, Santafé de Bogotá 1.992

4. ANALISIS DE AGUAS ( Laboratorio )

4.1 QUE ES UN ORGANISMO COLIFORME

Los bacilos coliformes, se refieren a los generos Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter, pues presentan fermentación de la lactosa e incluyen en otra base Bioquímica, a los generos Edwarsiella , y Serrata, que no fermentan lactosa.

Estos organismos están distribuídos ampliamente en todas partes, se encuentran en las vías intestinales del hombre y animales, tanto de sangre caliente como de sangre fría. Algunas, son patógenas en las vías respiratorias altas y residen en ellas, mientras que otras tienen una vida libre. Algunos se encuentran en la tierra, el agua o como agentes patógenos de los vegetales.

Morfología y Tinción :

Los bacilos coliformes gramnegativos, frecuentemente, se encuentran en formas similares a cocos, cortas, ovales, algunas son encapsuladas, sobre todo las de procesos patológicos.

Las colonias en gelatinas nutritivas son más consistentes y de aspecto característico que las de agar. Son opacas o parcialmente transparentes, lisas, humedas, con bordes enteros y ondulantes.

Eventualmente se observan variedades pigmentadas. En ciertos medios diferenciales ,las colonias son por supuesto rojas, pero ademas tienen un brillo metálico curioso.

Fisiología Son anaerobios facultativos, crecen igualmente bien en condiciones aerobias o anaerobias, y lo hacen muy bien en los medios nutritivos ordinarios, pudiendo cultivarse en soluciones sintéticas, conteniendo una sál de amonio y una fuente orgánica de carbono, como la glucosa.

El crecimiento tiene límites entre 10 grados C y 46 grados C, es satisfactorio entre 20 grados C y 40 grados C, y óptimo a 37 grados C.

La mayoría de cepas son destruídas por expocisión a 60 grados, durante 30 minutos, pero eventualmente se encuentran variedades más resistentes.

La capacidad de los bacilos coliformes para crecer, en presencia de bilis tambien se usa en medios selectivos ( caldo de MacConkey ), para exámen bacteriológico del agua.

4.2 CLASE DE AGUAS

El agua la podemos clasificar en tres clases :

4.2.1 Agua potable Es limpia, inocua y de sabor y aspecto agradable

4.2.2 Agua contaminada Cuando tienen materias fecales de seres humanos o de animales, o sustancias químicas tóxicas.

4.2.3 Agua Poluta Cuando posee sustancias que alteren el sabor y el color o el olor.

A menudo se emplea el término polución tanto para el agua poluta, como para la contaminada.

4.2.4 Que es control de calidad y como se puede realizar.

El control de calidad del agua, es un proceso de análisis que se le realiza al agua, con el fín de evitar, infecciones por organismos coliformes a las poblaciones humanas e incluso animales.

Realización Se deben hacer muestreos del agua, estos muestreos dependerá de la población consumidora de la misma, pero debera contener cada muestra de 5 porciones de 10 ml , o 5 porciones de 100ml.

Los resultados podrán ser :

1. De todas las porciones de 10 ml examinadas mensualmente, no deben ser de mas del 10% positivas a coliformes.

2. Ocasionalmente, no más de 3 de las 5 porciones podrán tener coliformes, lo que no debe ocurrir en más del 5% de las muestras cuando se toman 20 por mes o más, o en 1 muestra cuando se toman menos de 20.

El agua debe cumplir con sus características de sabor, olor y color, y tener menos de las siguientes impurezas químicas : Plomo = 0.1 ppm ; Fluor 1.5 ppm ; Arsenico y Selenio 0.05 ppm ; cobre 0.03 ppm ; hierro y manganeso 0.3 ppm Magnesio 125 ppm ; Zinc 15 ppm ; Cloruro y sulfato 250 ppm ; solidos totales 500 ppm ; fenol 0.001 ppm.

El agua deberá purificarse antes de consumirla y tiene los prosedimientos ; Sedimentación , Coagulación y sedimentación y Cloración.