Praktikum Kultivasi Dan Isolasi

A. TUJUAN PRAKTIKUM

Tujuan praktikum kultivasi dan isolasi mikroorganisme dari tanah: 1. Melihat macam-macam koloni mikroorganisme yang berasal dari tanah d engan variasi kepekatan tanah 2. Memberikan ketrampilan k etrampilan kepada mahasiswa, agar mampu menumbuhk an dan memisahkan  bakteri atau jamur dari keberadaannya di dalam tanah. Tujuan praktikum kultivasi dan isolasi mikroorganisme dari jaringan tumbuhan: Memberikan ketrampilan kepada mahasiswa, agar mampu menumbuhkan dan memisahkan bakteri atau jamur dari asosiasinya dengan tumbuhan.

B. DASAR TEORI

Media berfungsi untuk menumbuhkan mikroba, isolasi, memperbanyak jumlah, menguji sifatsifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikroba, dim[ana dalam proses pembuatannya harus disterilisasi dan menerapkan metode aseptis untuk menghindari kontaminasi pada media. Nutrien agar adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. NA juga digunakan untuk    pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif, dalam artian mikroorganisme heterotrof. Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari ekstrak beef, pepton, dan agar. Na merupakan salah satu media yang umum digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air, sewage, produk pangan, untuk membawa stok kultur, untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan untuk mengisolasi organisme dalam kultur murni dengan cara disterilisasi dengan autoklaf pada 121°C selama 15 menit (Fathir, 2009).

Isolat bakteri yang diperoleh diamati morfologi koloni dengan melihat bentuk koloni, warna, tepian dan elevasi pada medium agar lempeng, agar tegak dan agar miring. Sedangkan morfologi sel ditentukan dengan melihat olesan biakan yang sudah diwarnai dibawah mikroskop dan melihat bagaimana bentuk sel, sifat gram dan kemampuan membentuk spora dari bakteri tersebut (Pelczar, 2006).

Bakteri hidup sukar untuk dilihat dengan mikroskop cahaya biasa karena bakteri itu tampak tidak    berwarna jika diamati secara sendiri-sendiri, walaupun biakannya secara keseluruhan mungkin   berwarna. Bakteri lebih sering diamati dalam olesan terwarnai daripada dalam keadaan hidup. Yang dimaksud bakteri terwarnai adalah organisme yang telah diwarnai dengan zat pewarna kimia agar mudah dilihat dan dipelajari. Pada umumnya, olesan bakteri terwarnai mengungkapkan mengungkap kan ukuran, bentuk, susu nan dan adanya struktur struktur internal seperti spora dan butiran (Volk, 1993).

Pengamatan bakteri itu dapat kita lakukan secara individual, satu per satu, maupun secara

kelompok dalam bentuk koloni. Besar kecilnya koloni, mengkilat tidaknya, halus kasarnya   permukaan, dan warna koloni merupakan sifat-sifat yang diperlukan dalam menentukan identifikasi spesies. Warna bakteri baru tampak jelas, jika bakteri itu diamati dalam kelompok. Kebanyakan bakteri mempunyai warna yang keputih-putihan, kelabu, kekuning-kuningan, atau hampir bening, akan tetapi ada juga beberapa spesies yang mempunyai pigmen warna yang lebih tegas. Adanya warna itu dipengaruhi juga oleh factor-faktor luar seperti temperatur, pH, oksigen   bebas. Ada beberapa spesies yang memerlukan fosfat, ada sp esies memerlukan sulfat guna menimbulkan pigmentasi. Pada umumnya pigmen itu menetap di dalam sel selama bakteri itu hidup; pigmen hijau pada Pseudomonas dapat larut dalam air serta meresap ke dalam medium yang

ditumbuhinya,

setelah

sel

mati

(Dwidjoseputro,

1994).

Koloni yang tumbuh di dalam suatu medium itu tidaklah selalu berasal dari satu sel mikroorganisme, karena beberapa mikroorganisme tertentu cenderung untuk berkelompok atau  berabtai. Bila ditumbuhkan pada suatu medium dengan lingkungan yang sesuai, maka kelompok    bakteri ini hanya akan menghasilkan satu koloni saja. Berdasarkan hal tersebut sering kali digunakan istilah Colony Forming Units (CFU) yang digunakan untuk perhitungan jumlah mikroorganisme hidup (Dwidjoseputro, 1994).

C. BAHAN DAN ALAT Bahan

1.

dan alat kultivasi dan isolasi mikroorganisme dari tanah

Bahan

: Medium kultur (PDA dan NA), + NaCl 50% + Na 2CO3 10%, Asam asetat 1%,

alkohol,aquades, tanah rizosfir. 2. Alat : waterbath, cawan petri,gelas ukur,gela Erlenmeyer, tabung reaksi,batang pengaduk, lampu spritus, entcase, stopwatch,timbangan, ruang inkubasi. Bahan

1.

dan alat kultivasi dan isolasi mikrooranisme dari jaringan tumbuhan

Bahan:

medium kultur PDA, NA, aquades steril,alkohol 90%,kapas,jaringan tanaman yang

busuk 2. Alat: waterbath, cawan petri,lampu spritus,entcase,scalpel,pinset,kertas saring steri,ruang inkubasi.

D. CARA KERJA

1) Disiapkan jarum OSE 2) Mengambil 2 tabung reaksi, tabung 1 sebagai medium steril dan tabung 2 sebagai biakan murni. Dipegang tabung tersebut di tangan kiri dan OSE di tangan kanan. 3) Memanaskan jarum OSE dengan Bunsen sampai pijar.

Digerakan naik turun supaya

 pemanasan terjadi sampai batas jarum. 4) Diangkat sumbat kedua tabung satu demi satu dengan kelingking kanan untuk tabung dua dan  jari manis untuk tabung satu. 5) Memanaskan mulut tabung dengan Bunsen. 6) Tuangkan PDA ke tabung 1 sambil mulut tabung didekatkan kea api dan masukan sedikit NA ke tabung 2 kemudian diratakan. 7) Setelah medium memadat, masukan potongan jaringan tanaman yang busuk ke dalam cawan Petri yang berisi medium, kemudian inkubasikan selama 72 jam. 8) Setelah 72 jam, koloni yang tumbuh pada potongan jaringan dipidah ke medium baru kemudian diinkubasikan lagi selama 72 jam. 9) Setelah 72 jam berikutnya diamati kemurnian koloni, kenmpakan koloni, bentuk koloni, warna koloni, ukuran koloni, morfologi mikroskopisnya dan menggambar skematis.

E. DATA HASIL PRAKTIKUM

Pengamatan pertama di dapat hasil seperti gambar dibawah ini:

Pengamatan kedua di dapat hasil seperti gambar dibawah ini:

Berdasarkan gambar terlihat jelas koloninya semakin hari semakin bertambah.

F. PERHITUNGAN DAN PEMBAHASAN

Isolasi suatu mikroba adalah memisahkan mikroba tersebut dari lingkungannya di alam bebas dan menumbuhkann ya sebagai kultur murni atau biakan murni dalam medium buatan. Pada saat isolasi mikroba perlu dilakukan inokulasi mikroba. Sebelum dan sesudah menginokulasikan mikroba jarum ose yang digunakan harus dipanaskan terlebih dahulu. Hal ini bertujuan agar jarum ose yang digunakan bersifat steril dan bebas kontaminasi dari mikroorganisme yang tidak diinginkan. Sedangkan pada cawan Petri, setelah sample dimasukan ked alam cawan Petri setiap membuka dan menutup cawan Petri harus terlebih dahulu dipanaskan untuk  meminimalkan terkontaminasinya sample. Wadah media yang menggunakan cawan Petri, pada saat inkubasi mikroba pada cawan Petri selalu dalam posisi terbalik.

Hal ini dimaksudkan untuk 

mencegah mikroba terkena uap air yang dihasilkan pada saat inkubasi. Sehinggah kualitas mikroba tidak rusak atau mengalami gangguan.

G. KESIMPULAN

Kesimpulan yang didapat dari percobaan ini adalah : 1) Komposisi media bahan sangat penting dalam memenuhi kebutuhan nutrisi bakteri demi mengoptimalkan pertumbuhannya, yang mana tiap -tiap komposisi harus setimbang jumlahnya. 2) 3) Pada kultivasi mikroba, harus dilakukan sterilisasi terlebih dahulu untuk mencegah kontaminasi. 4) Semua peralatan dan sarana dalam keadaan steril (bebas mikroorganisme hidup) atau bebas kontaminan (mikroorganisme yang tidak dikehendaki). 5) Dilakukan secara aseptic (tidak memberi kesematan untuk terjadimya kontaminasi).

H. DAFTAR BACAAN

Achmad. Dinoto. 2007. Media Agar: Ide Besar Istri Peneliti. http://www.nvtech.com Hadioetomo, R.

S..1993.

Teknik dan Prosedur Dasar Laboratorium Mikrobiologi.

Gramedia: Jakarta. Sutedjo. 1991. Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta: Jakarta Volk & Wheeler. 1993. Mikrobiologi Dasar, Jilid 1, Edisi kelima. Erlangga: Jakareta