Práctica No 4 - Proteinas I - Extracción y Cuantificación de Proteínas

 

 PRÁCTICA NO 4: PROTEINAS I: EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Daniela Ramirez Martínez 1116274799 Leonardo Velázquez lozano 1088341132

INTRODUCCIÓN La cuantificación exacta de proteínas es esencial para todos los experimentos relacionados con proteínas en una multitud de temas de investigación. Se han desarrollado diferentes métodos para cuantificar  proteínas totales, o alguna en particular. uno de los métodos métodos de cuantificación de proteínas proteínas totales es el ensayo de Bradford, en condiciones adecuadas los grupos ácidos o básicos de las proteínas pueden interaccionar con grupos orgánicos de determinados colorantes para dar lugar a precipitados con un color característico, Se basa en la unión uni ón de un colorante, Coomassie Blue G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las  proteínas se unen a la forma aazul zul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre.1 

Previamente en la experiencia de laboratorio se determinó la concentración de proteínas  presentes en distintas muestras mediante el método de Bradford utilizando curvas de calibración con un estándar, a cada muestra se le determinó su absorbancia, sobre la cual es  posible interpolar en la curva de calibración algún valor de absorbancia y relacionarlo con un valor de concentración, siendo el principio para el análisis de proteínas.1 

RESULTADOS Espinaca:

Microbiológica:

Blanco de la muestra: 1,380

Blanco de la muestra: 1,7494

Blanco fotométrico + muestra: 0,557

Blanco fotométrico + muestra: 0,675

Hígado: Blanco de la muestra: 1,749 Blanco fotométrico + muestra: 1,234

CURVA DE CALIBRACIÓN: Se realizó una curva de calibración de la proteína estándar BSA (tabla 1) y después se graficaron (figura 1) , con el fin de hallar la concentración de proteína presente en el hígado, espinaca y el cultivo microbiológico. A Continuación, se muestran los resultados obtenidos en dicha curva.

 

Patrón

BSA [mg/L]

Absorbancia

1

0,03

0,028

2

0,06

0,055

3

0,1

0,074

4

0,13

0,085

5

0,16

0,161

6

0,2

0,185

Tabla 1. Datos para la curva de calibración cali bración proteína estándar BSA.

 Figura 1. Curva de calibración BSA.

Una vez graficados los datos se puede obtener la concentración de las proteínas en estudio con la ecuación de la línea recta. r ecta. En la medición de la absorbancia de la muestra se util utilizaron izaron dos  blancos, uno uno el blanco blanco de la muestra muestra y otro el blanco fotométrico fotométrico + la muestra, muestra, para conocer la absorbancia absorbanc ia de la muestra se restan estas dos absorbancias.

Espinaca: Blanco de la muestra: 1,380 Blanco fotométrico + muestra: 0,557 Absorbancia de la muestra: 1,380 - 0,557 = 0,823

 

Ya conociendo la absorbancia real de la muestra se puede calcular la concentración de la siguiente manera: y=0,8799 x 0,823= 0,8799 x x=0,9353 siendo y= absorbancia y x= la concentración en (mg/L) De la misma manera se halla la concentración para el resto de las proteínas en estudio.

Microbiológica: Blanco de la muestra: 1,7494 Blanco fotométrico + muestra: 0,675 Absorbancia de la muestra: 1,7494 - 0,675 = 1,0744 Ya conociendo siguiente manera:la absorbancia real de la muestra se puede calcular la concentración de la y=0,8799 x 1,0744= 0,8799 x x=1,2210

Hígado: Blanco de la muestra: 1,749 Blanco fotométrico + muestra: 1,243 Absorbancia de la muestra: 1,749 - 1,243 = 0,506 Ya conociendo la absorbancia real de la muestra se puede calcular la concentración de la siguiente manera: y=0,8799 x 0,506= 0,8799 x x=0,5750

 

ANÁLISIS DE RESULTADOS: Para la cuantificación de proteínas mediante el método de Bradford se hallaron diferentes resultados, que nos indican que la muestra microbiológic mi crobiológicaa tiene la mayor cantidad de proteínas, cuanto a los resultados de concentración expresados podemos notar que la diferencia es significativa y esto se debe a que el reactivo de Bradford es algo sensible con la luz, por lo cual deducimos que ese fue el factor que influyó en la variación de nuestros datos. Las proteínas que tiene el hígado de pollo se usan en nuestro organismo para crear nuevas proteínas, responsables de construir tejidos, como los de nuestra masa muscular, y regular los fluidos del organismo entre otras funciones. Debido a la cantidad de proteínas del hígado de pollo, se puede decir proteínas.. Las proteínas de este alimento perteneciente a la categoría de que hígado de pollo es proteínas

de las vísceras, están formadas por aminoácidos como ácido aspártico, ácido glutámico, alanina, arginina, cistina, fenilalanina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina,  prolina, serina, tirosina, treonina, triptófano y valina. Estos aminoácidos se combinan para formar las proteínas del hígado de pollo. Nuestro cuerpo usa las proteínas del hígado de pollo  para construir los tejidos que forman nuestros músculos. Estas proteínas también son útiles y necesarias para mantener nuestros músculos ya que, sin un aporte adecuado de proteínas, como las que proporciona el consumo de hígado de pollo, nuestra masa muscular se debilitaría y reduciría paulatinamente. En comparación con otras proteínas estas cumplen funciones importantes y que no están presentes en otros alimentos. Las proteínas que posee las espinacas promueven el transporte y depósito de oxígeno en los tejidos, la espinaca es una excelente fuente de hierro. El hierro forma parte del grupo hemo o hem que forma parte de la hemoglobina y la mioglobina. Estas son proteínas que transportan y almacenan oxígeno en nuestro organismo. La hemoglobina, h emoglobina, proteína de las sangres, transporta el oxígeno desde los pulmones hacia el resto del organismo. La mioglobina juega un papel fundamental en el transporte y el almacenamiento de oxígeno en las células musculares, regulando el oxígeno de acuerdo con la demanda de los músculos cuando entran en acción. Según los resultados la espinaca posee una gran cantidad de proteínas incluso más que el hígado, lo cual puede traer beneficios a la salud y radica la importancia de su consumo.

CONCLUSIONES   Se pudo determinar el contenido proteico de la espinaca, hígado y cultivo microbiano a través de un método colorimétrico   La cuantificación de proteínas se realizó aplicando el método de Bradford el cual  permite determinar la concentración de proteína en una o varias muestras problema, que resultan al interpolar los valores de absorbancia en la curva de calibración.   Se pudo verificar que el método utilizado para determinar las proteínas es bastante eficiente. ●

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MEJORAS Sería bueno que se tomarán todas las curvas de calibración creadas en el laboratorio y escoger la que mejor queda para posteriores cálculos.

 

PREGUNTAS: 1. ¿Cuáles son los principales métodos que se utilizan para purificar proteínas a nivel industrial? Salazón: Las proteínas en un extracto crudo son purificadas después precipitándose en una solución de sal altamente concentrada, tal como sulfato del amonio. Esto trabaja en base b ase de la solubilidad más inferior de la l a proteína en las altas concentraciones de sal. Sin embargo, todas las proteínas no se precipitan en la misma concentración concentración de sal, que significa que la salazón también ayuda a fraccionar las proteínas. Puede también ser utilizada para concentrar las proteínas en la solución. Este paso aumenta la pureza tres veces y el 92% de la proteína en la solución se recupera. Diálisis: Las proteínas son moléculas grandes, y ésta significa que las sales de las proteínas serán conservadass pasando la solución a través de una membrana semipermeable. La celulosa es una conservada membrana típica de la diálisis. La diálisis no se puede utilizar para separar las proteínas de diversos pesos moleculares. Cromatografía: Otras técnicas usadas para quitar fueran saladas las proteínas incluyen la cromatografía y la filtración de la exclusión del gel. Éstos están disponibles ahora como estuches preformados  para muchas proteínas estándar, estándar, y son a menudo convenientes convenientes para los procesos en grande. grande. La filtración de gel trabaja en base de la separación de talla a través de una columna de las molduras porosas del polímero, tales como dextrano o agarosa. Las moléculas grandes pueden fluir solamente a través de los espacios entre las molduras, mientras que las más pequeñas ocupan estos espacios y el espacio dentro de las molduras, reduciéndose. Así el eluyente contiene las moléculas que emergen en orden de su talla, de la más grande a la más pequeño. la Reverso-fase o las técnicas de intercambio iónico de la cromatografía también se utiliza, operando en base de se propiedades hidrofóbicas y carga respectivamente. cromatografía inversa puede limitar en su uso diferenciadas debido a la desnaturalización posible de La la  proteína por los disolventes orgánicos. orgánicos. Diálisis y resultado de intercambio iónico en una solución que es 9 veces tan puras, pero con el solamente 77% de la proteína original ori ginal que está ahora disponible. Después de cromatografía de la exclusión del gel, el rendimiento es el solamente 50% pero la pureza es de cien veces.2 

 

2. Describa el procedimiento que aplicaría para purificar las proteínas de la espinaca teniendo en cuenta los elementos que dispone en la escuela de química.

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BIBLIOGRAFIA 1.

2. 3.

 

Informe proteinas - Quimica Quimica Biologica CB18 - UNSAM - StuDocu. https://www.studocu.com/es-ar/docume https://www.studocu. com/es-ar/document/universidad-nac nt/universidad-nacional-de-san-martinional-de-san-martinargentina/quimica-biologica/informe/informe-proteinas/2877422/view. Accessed October 1, 2019. • PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS . Precipitación por desnaturalización desnaturalización selectiva. http://www.calvo.qb.fcen.uba.ar/Precipitacion por desnaturalizacion selectiva.htm. Accessed September 25, 2019.