PRACTICA No 4 Cuantificacion de Acidos Nucleicos

PRÁCTICA No. 4 CUANTIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS 1. INTRODUCCIÓN Una vez se ha realizado la extracción de de ADN, Y ARN para muchas muchas aplicaciones, se requiere conocer la cantidad y/o la calidad del acido nucleico obtenido. Generalmente, se realiza mediante la medición de la cantidad de irradiación ultravioleta absorbida por las bases y para verificar la calidad se evalúa por electroforesis. 2. OBJETIVOS • •

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Identificar varios métodos de cuantificar ácidos nucleicos, Conocer la cantidad del ADN obtenido en la extracción realizada en clase Adquirir conocimiento básico para el manejo y funcionamiento del espectrofotómetro, para realizar la medición del acido nucleico en estudio

3. MARCO TEORICO Para cuantificar el material genético obtenido después de una extracción de ácidos nucleicos o la síntesis química de un un oligonucleico, se debe tomar una una lectura a longitudes de onda de 260 nm y 280nm. La lectura a 260nm permitirá calcular la concentración concentración de ácidos nucleicos nucleicos en la muestra. Se toma como referencia referencia que una O.D. ( Densidad Densidad Óptica), Óptica), medida a 260 nm, corresponde aproximadamente a: 1 2 3

50 ug/ml de ADN de doble cadena, 40 ug/ml de ARN o de ADN de cadena sencilla 20 ug/ml cuando se trata de oligonucleotidos. 1 (A260) unidad de dsDNA=50 µg /ml

La proporción de la lectura entre 260 y 280 (OD 260/OD280) proporciona proporciona una estimación de la pureza pureza del acido nucleico. nucleico. Es así así como preparaciones puras de ADN tienen OD 260/OD280 de 1.8. Cuando se trata de de ARN el valor OD 260/OD280 es muy cercano a 2.0. Si hay contaminación con proteínas, fenol u otras soluciones empleadas durante la extracción, el valor de la proporción es menor a 1.8 y no es posible cuantificar de manera precisa el DNA. Si no es posible cuantificarlo por este método por la poca cantidad de DNA obtenido (