Práctica No. 11. Obtención de Glucógeno A Partir de Hígado de Rata y Su Caracterización Química

 

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DEPARTAMENTO DEPAR TAMENTO DE BIOQUÍMICA B IOQUÍMICA PRÁCTICA NO. 11. OBTENCIÓN DE GLUCÓGENO A PARTIR DE HÍGADO DE RATA Y SU CARACTERIZACIÓN QUÍMICA ALUMNOS: HERNÁNDEZ VELASCO ARTURO, GUERRERO PADILLA FRIDA GRUPO: 2OM1

OBJETIVO Identificar la técnica de extracción, purificación y aislamiento del glucógeno a partir de hígado de ratón. Determinar cuál es el sitio de almacenamiento de glucógeno en el caso de los animales y sus características químicas. RESULTADOS.. Fig.1 RESULTADOS DISCUSIÓN El prim primer er pa paso so es el sa sacr crif ific icio io de la rata rata po porr el mé méto todo do de disl disloc ocac ació iónn cerv cervic ical al,, para para es esto to se debe debenn para parali liza zarr su suss ór órga gano noss conn ét co éter er ev evit itan ando do la ex exci cita taci ción ón del del anim animal al,, ya qu quee si esto esto suce sucede de la ra rata ta come comenz nzar aráá a libe libera rarr adre adrena nali lina na (e (epi pine nefr frin ina) a) que que es una hormona que regula el metabolism ismo del glucógeno al igual que la Insulina y glucagón. Lo que provocará la deg egrradac adació iónn del gluc glucóg ógen enoo y por cons consec ecue uenc ncia ia que que se obten btengga me meno noss pro rodu duct ctoo del del que que se es esti tima maba ba.. Ex Exis iste tenn otr otros métodos que evitan la excitación del animal y ayudan a que el glucógeno se degrade en menor cantidad. Desp De spué uéss de ha hace cerr el sa sacr crif ific icio io,, el pr proc oces esoo de extr extrac acci ción ón del del ór órga gano no hepá hepáti tico co se debe debe re real aliz izar ar rá rápi pida dame ment nte, e, ya qu quee si el  proceso tarda se empezaran a producir enzimas que degradan el glucógeno, el órgano se debe lavar para eliminar  impurezas como la sangre, ya que esta contiene proteinas y aminoacidos, que producirá errores en la muestra. Se tritura el hígado y se vierte en un tubo de centrífuga y se lle levva a cabo el proceso de centrifugación para que todas las impurezas que no solubilizan el TCA se precipitan y quedan en la parte de abajo del tubo. Po Post ster erio iorm rmen ente te se de deca cant ntaa el so sobr bren enad adan ante te qu quee es dond dondee se encu encuen entr traa el gluc glucóg ógen enoo y se pr proc oced edee a lava lavarr el mo mort rter eroo con con TCA par para re recu cupe pera rarr las las traz trazas as de hí híggado ado que que pud pudiero ieronn haber aber queda uedado do y así así obte obtene nerr la ma mayo yorr cant cantid idad ad de glu lucó cóge genno  posible. Una vez hecho esto se repite el proceso de centrifugación y se decanta el sobrenadante reuniéndose con el obtenido en la filtración anterior. Ahora ora se ce cenntrif trifuuga el tubo tubo par para que el glucó lucóggeno eno que de prec precip ipit itad adoo y pode poderr separ eparar arlo lo del del so sobr bren enad adan ante te y así pode oder  desecharlo pues no contiene ningún compuesto de interés. Finalm lmeente, el glucógeno. Se extrae del tubo de ensayo y se coloca en un recipiente pequeño y se le agrega etan tanol absoluto para promover la deshidratación del glucógeno y ayudar a que este cristalice Prueba de Seliwanoff  Los re resu sult ltad ados os fuer ueron posi positi tivo voss par para 5 tu tubo boss, el tubo tubo tes testig tigo del del gluc glucóógen geno dio dio neg negativ ativoo deb debid idoo a que que no se hid hidro roli lizo zo.. En esta prueba podemos diferenciar aldosas de cetosas, las cetosas dan rápido y las aldosas lento, por lo tanto,  podemos decir que el azúcar presente es una aldo aldosa sa (glucosa). Prueba de Fehling En la hidr hidról ólis isis is ác ácid idaa como como en la hidr hidról ólis isis is enzi enzimá máti tica ca se obtu obtuvi vier eroon re ressulta ultado doss posi positi tivvos en lo loss tubo tuboss hid hidro roli liza zaddos os,, egl sucos ta osíd pídic ruicos ebos a (azú sezúca rcare eares lizsaredu arctor a ores ides) e)ntgrac ifacia icaias r s laosesto bodemo nilmos os spdeci otecir nrcique alm ntenues ibtra reas mu questr e tra eastpr énobab iable nvleme olment ucrnte adeohay s yenpr eesen nenci laccia eas gluc (a repduct gr esctoarpode po de qu e een nulestr mues prob ha pres de glu luco cosa sa,, ma malt ltoosa o fru fruct ctos osa. a. En el tubo tubo tes testig tigo del del gluc glucóógen geno si sinn hidro idroli liza zarr dio nega negati tivvo, deb debid idoo a que que sus gr grup upoos están bloqueados debido a los enlaces alfa-1,4 y alfa-1,6; no posee iones libres l ibres para que se lleve a cabo la reacción. Prueba de Lugol Dio positiv tivo en el tubo testigo del glucógeno, debido a que al no ser hidroliza izado el glucógeno es capaz de atrapar al lugol por ser un polisacárido lineal, formando caltratos. Bi Biur uret et y Ninh Ninhid idri rina na nos dieron negativas debido a que el glucógeno no presenta grupos amino esto por ser un  polisacárido y no un aminoácido,péptido o proteína y en el caso de Molish da po posi siti tivo vo debi debido do a qu quee es esta ta pr prue ueba ba identifica carbohidratos en general. CONCLUSIONES Loss se sere ress vi vivo voss al alma mace cena nann gl glúc úcid idos os en fo form rmaa de po poli lisa sacá cári rido dos, s, qu quee si sirv rven en co como mo ma mate teri rial ales es de re rese serv rvaa co como mo es el ca caso so Lo del glucógeno en los animales. -El glucógeno contiene unidades de glucosa unidas por enlaces glicosídicos alfa-1,4 y alfa-1,6. -Se caracterizó al problema por reacciones químicas, dando como resultado la identificación del glucógeno.

 

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ●

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Herreros A, Lorre Z. 2014. Control de cali alidad en la preparació ción de test de ali alient ento para el diagnóstico de malabsorción de glúcidos.   Re Revista de la O.F.I.L 24: 4, 251-256. Recuperado de: https://ilaphar.org/wp-content/uploads/2014/11/ORIGINAL-6.pdf . McMurry J. 2008. Química Orgánica. 7a edición. Cengage learning. DF, México, 1347 p

ANEXO Tabla de resultados. Fig.. Caracterización química del glucógeno. Prueba

Resultados

Molish

Positiva

Biuret

Negativa

Ninhidrina

Negativa

Fig. 2. Caracterización química del glucógeno hidrolizado Prueba realizada

Blanco

Glucógeno sin hidrolizar

Hidrólisis ácida HCl 1 N

HCl 2 N

Hidrólisis enzimática HCl 4 N

Amilasa

Amilasa 1:2 +

- Neg.

-

+

+

+

conc. +

Seliwanoff  - Neg.

-

+

+

+

+

+

Lugol

+

-

-

-

-

-

Fehling

- Neg.