Práctica N°2 - Fisiología Gastrointestinal I

 

 

PRÁCTICA N°1

PH Y ACIDEZ GÁSTRICA Docente:  Dr. Wilson Becerra Llempen

 Alumnas: Rojas Soto Romina Vargas Tineo Luz 

Grupo horario:  8:00-9:30am

Fecha de la práctica:  09/03/2018

 

 

Práctica N°1 PH Y ACIDEZ GÁSTRICA EXPERIMENTO N° 3: Sofware Physio Ex 6.0. Digestión del almidón por amilasas salivales. Objetivo:  Enumerar las enzimas del sistema digestivo involucradas en la digestión de proteínas, grasas y carbohidratos; para indicar su lugar de origen; y para resumir las condiciones ambientales que promueven su funcionamiento óptimo.

 Actividad 1: Efecto de de Amilasa salival sobre el almidón almidón PRESENTACIÓN DE RESULTADOS 1. Arrastre individualmente siete tubos de ensayo a los soportes de los tubos de ensayo en la unidad de incubación.

2. Preparar los tubos 1 a 7 con las sustancias Indicadas.

 

  4. Haga clic en Hervir para hervir el tubo 1. Después de hervir por unos momentos, el tubo se elevará automáticamente.

5.Colocar los 7 tubos a incubar.

 

  6. Ver los resultados de IKI Y Benedic en relación a la temperatura y pH.

 

 

 ANALISIS DE LOS RESULTADOS

TUBO

Reactivo1

Reactivo 2

Reactivo 3

Tratamient  o

Tiemp o

1

amilasa

almidón

Buffer ph 7

Hervir

2

amilasa

almidón

3

amilasa

4

Agua des

Temp e ratura

IKI

Benedicts

60 min. 37 °C

marrón

 Azul

Buffer ph 7

60 min. 37 °C

amarillo   amarillo

anaranja do   do

Agua des hionizad a

Buffer ph 7

60 min. 37 °C

amarillo    Azul amarillo

almidón

Buffer

60 min. 37 °C

marrón

 Azul

 

hionizada

ph 7

5

Agua des hionizada

Maltosa

Buffer ph 7

60 min. 37 °C

amarillo amarillo  

anaranja do   do

6

amilasa

almidón

Buffer ph 2

60 min. 37 °C

marrón

Verde

7

amilasa

almidón

Buffer ph 9

60 min. 37 °C

marrón

Verde

En los tubos uno, tres y cuatro se observa un color azul, que se demuestra que hay presencia de almidón según el ensayo IKI. En los tubos dos, cinco se observa observa un color marrón rrojizo ojizo que indica la presencia de grandes cantidades azúcares reducidos según el ensayo de Benedict. En los tubos seis y siete se observa un color verde que indica la presencia de azúcares reducidos pero en menor cantidad que de los tubos dos y cinco según el ensayo de Benedict.

CONCLUSIONES En los ensayos enzimáticos realizados pudimos identificar la presencia o ausencia de los sustratos y productos de dos reacciones enzimáticas de hidrólisis (Hidrólisis del almidón por la amilasa salival);así como la importancia de la influencia del pH y la Temperatura en la digestión el cual tiene que ser óptimo para que la reacción química se lleve en condiciones óptimas y la enzima pueda actuar más efectivamente. En comparación los tubos 2 y 5 presentan una mayor cantidad de azúcares reducidos debido a una degradación más efectiva y óptima del almidón que los tubos 6 y 7 pero todos son resultados positivos por la coloración.

CUESTIONARIO ¿Qué efecto crees que tendrá la ebullición y congelamiento sobre la actividad de la enzima amilasa? Las enzimas actúan a una temperatura determinada; si hay una variación en esta puede probocar: a)  Ebullición: cuando los valores de temperatura son muy altos desnaturalizan la enzima en este caso la amilasa, no hay producción de hidrólisis y es irreversible. 2.Describe cómo averiguar el pH óptimo para la actividad de la amilasa   La influencia del pH del medio en la actividad enzimática de la α-amilasa, α-amilasa, podemos decir que a pH extremos (es decir, muy ácidos o muy básicos) la enzima no funciona, o al menos disminuye notablemente su actividad.

 

Todas las enzimas tienen un pH óptimo, en donde tienen mayor actividad, y a medida que se alejan de ese pH (para ambos lados) disminuyen su actividad. Esto se debe a que algunos restos aminoacídicos de las enzimas (en el caso de que sean proteínas) tienen cargas y pueden ser los responsables tanto de mantener la estructura tridimensional de la proteína como de interaccionar con el sustrato. El pH del medio (es decir, la presencia de iones H+ u OH- ) puede modificar las cargas de estos aminoácidos y de este modo incluso desnaturalizar a la enzima. Debemos aclarar que enzima tenga al pH dePara cadadeterminarlo persona (siempre entre 6y 8) aunque esto no la quiere decir queactividad éste sea su pHsalival ó óptimo. ptimo. experimentalmente, deberíamos haber medido la actividad enzimática a diferentes pH para realizar una curva, pero no podemos determinar el pH óptimo de la α-amilasa α-amilasa a partir de los resultados de este TP.

 Actividad 2: Efecto de la lipasa y las sales biliares biliares sobre la digestión de lípidos. PRESENTACIÓN DE RESULTADOS 1.  Colocamos las sustancias indicadas en cada tubo.

2. Incubamos los tubos

 

  3. Esperamos los resultados y medimos el pH de cada tubo

 ANALISI DE LOS RESULTADOS

 

  Tubo n°

1

2

3

4

5

6

Reactivos

Lipasa  Agua des Lipasa Lipasa Lipasa Lipasa  Aceite  Aceite vegetal  Agua des hionizad  Aceite  Aceite vegetal vegetal a hionizad vegetal  Agua des Sales Sales  Aceite a Sales hionizada vegetal Biliares Biliares Sales Biliares Buffer 7 Buffer 2 Buffer 9 Sales Biliares Buffer 7 Buffer 9 Biliares Buffer 7

Condicione 37°C 60 min. s Incubación

37°C 60 min.

37°C 60 min.

37°C 60 min.

37°C 60 min.

37°C 60 min.

Ph

6,21

6,72

9,00

7,00

2,00

8,97

Color

Morado  Amarrillo  Amarrillomor mor  Azul

Morado

Rojo

 Azul

ado (Interfase)

TUBO

IKI

Benedicts

1

+ Positivo a la prueba del almidón

-Negativo a la prueba de azúcares reductores

2

- Negativo a la prueba del almidón

+Positivo a la prueba de azúcares reductores

3

- Negativo a la prueba del almidón

-Negativo a la prueba de azúcares reductores

4

+ Positivo a la prueba del almidón

-Negativo a la prueba de azúcares reductores

5

- Negativo a la prueba del almidón

+Positivo a la prueba de azúcares reductores

6

+ Positivo a la prueba del almidón

+Positivo a la prueba de azúcares reductores

7

+ Positivo a la prueba del almidón

+Positivo a la prueba de azúcares reductores

 

  Obtuvimos 5 mezclas homogéneas y 1 mezcla en interfase(tubo2). La digestión del aceite vegetal por la lipasa liberará ácidos grasos, que disminuirán el pH de la solución. Para determinar si existe actividad lipasa se utilizó un medidor de pH que ayudó a detectar la presencia presencia de acidos grasos que evidencia la digestión.

CONCLUSIONES Los productos finales de la digestión serían los ácidos grasos. La bilis (ácidos biliares)se encarga de emulsificar las grasas permitiendo que la lipasa tenga mayor superficie de acción y más sustrato disponible La lipasa tiene un ph óptimo en 7 (duodeno) siendo menos activa en otros nivles de ph del medio e teóricamente activa en la boca.

CUESTIONARIO 1.  Describe cómo se mide la actividad de la lipasa en la simulación. En el experimento se ha medido la actividad de la lipasa de acuerdo a los resultados de ph debido a que la lipasa actúa a un pH óptimo óptimo de 2-6. El incremento de la acidez del medio, indica actividad de la lipasa debido a que los productos de su degradación son ácidos.

2. Se puede determinar si se produjo hidrólisis de las grasas en el tubo 5. La hidrólisis de grasas se da en la optimas condiciones del pH, a diferencia del tubo 5 que realizó una hidrólisis parcialmente , debido a que el pH no era el ó óptimo. ptimo.

REFERENCIAS : Hall,J.(2016).Tratado de Fisiología Médica.España: ELSEVIER.