Práctica N 4 Bioquimica

 

PRÁCTICA N°4 FACTORES QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS [S] [E] COFACTORES PH T°C TIEMPO INTRODUCCIÓN Las enzimas son compuestos de naturaleza proteica que tienen la propiedad de acelerar las reacciones químicas sin modificar la constante de equilibrio del sistema. Su actividad es afectada por diversos factores: • Concentración de sustrato  sustrato  • pH  pH  • Concentración de enzima  enzima  • Temperatura, inhibidores inhibidores • Fuerza iónica, constante dieléctrica, etc.  etc.     Aobtiene mayorlaconcentración del sustrato, a una Concentración sustrato.concentración fijadel de la enzima se velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentración del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción.

Concentración de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentración de la enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto límite.

Temperatura.- Un incremento de 10°C duplica la velocidad de reacción, hasta ciertos límites. El calor es un factor que desnaturaliza las proteínas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad.

pH.-  El pH óptimo de la actividad enzimática es 7, excepto las enzimas del estómago cuyo pH óptimo es ácido. Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofactores, la concentración del cofactor debe ser igual o mayor que la concentración de la enzima para obtener una actividad catalítica máxima.

OBJETIVO  

Establecer los factores que modifican la actividad enz enzimática. imática.

MÉTODO:   

Estudio experimental.

 

MATERIALES: - Amilasa salival o ptialina.

REACTIVOS - Solución de Almidón

- Buffer fosfato 0.14 pH 9.0

- Buffer fosfato 0.14 pH 4.6

- Solución de NaCl 0.2%

- Buffer fosfato 0.24 pH 6.8

- Agua Destilada

- Solución Enzimática 0.25%

- Solución yodo yodurado

PROCEDIMIENTO Reactivos

1

2

3

4

5

6

7

8

9

 S oluc olució ión n de A lmidón

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

B uffer Fos fa fato to 0 0.14 .14 pH 4 4.6 .6

-

-

-

5ml

-

-

-

-

-

B uffer Fos fa fato to 0 0.14 .14 pH 6 6.8 .8

5ml

5ml

-

-

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

B uffer Fos fa fato to 0 0.14 .14 pH 9 9.0 .0

-

-

5ml

-

-

-

-

-

-

 S oluc olucii ón de NaC l 0.2%

1.4ml

1.4ml

1.4ml

1.4ml

1.4ml

1.4ml

-

1.4ml

1.4ml

 A g ua Des tilada

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

1.5ml

3.4ml

2ml

2ml

Homogenizar bien cada tubo   Llevar llos os tubos del 1 al 7 a BM a 37°C por 5min   Llevar el tubo N°8 a 0°C por 5min   Llevar el tubo N°9 a 100°C por 5min

  

AGREGAR LA SOLUCIÓN ENZIMÁTICA  S oluc olució ión n E nzi nzimát mátii ca 0.25%

1

2

3

4

5

6

7

8

9

0ml

0.6ml

0.6ml

0.6ml

0.2ml

0.6ml

0.6ml

0.6ml

0.6ml

 

  Mezclar cada tubo sin retirar el baño maría.   Incubar por 20 min.

 

Reactivos

1

2

3

4

5

6

7

8

9

 A g ua Des tilada

2.5ml

2.5ml

2.5ml

2.5ml

2.5ml

2.5ml

2.5ml

2.5ml

2.5ml

 S oluc olucii ón Y odo Y Yodur odurado ado

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

Incubado A nte nteri ri or

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

  Mezclar y observar.



RESULTADOS            

La solució solución n yodo yodurado d da a color azul al almidón. La saliva viene con su cofactor y eso ayuda a que se catalice. S + enzima  producto Almidón + lugol   azul, el cual nos permite ver si el almidón se ha degradado. Almidón + ɛ  maltosa y α dextrinas.  dextrinas.  Almidón = amilosa + amilopectina  

TUBO1: Si no agrego enzima quiere decir que tiene color azul, sabemos que la enzima actúa cuando deja de ser azul.

 

TUBO2: No debe ser azul.

 

TUBO3: Como el pH óptimo actúa si todo se tiene igual se podría esperar que tuviera un poco azul y el resto de colorado.

 

TUBO4: Por no ser un pH óptimo no se manifestaría un color.

 

TUBO5: pH óptimo, cofactor y lo que varía es la reacción de la enzima. Si hay encima y mucho sustrato, el sustrato ocupa lo de la enzima.

 

TUBO6: El sustrato en mayor cantidad hay decoloración, porque la enzima se satura y el sustrato que queda no reacciona con la enzima, entonces se debe colorar con el yodo y da como resultado el color azul.

 

 

TUBO7: No hay cofactor, la enzima no tiene actividad catalítica y la amilasa que es el cloro, se ve menos azul.

 

TUBO8: La estructura terciaria se inactiva y cuando recupera su temperatura, aparece y trabaja en mínima cantidad y se ve de color azul (solo rasgos), por el almidón que no se ha degradado.

 

TUBO9: La estructura ya no se ve y la solución es de color azul.

DISCUSIÓN   

La amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina, ambos polisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de glucosas unidas por enlaces a- C1-C4, mientras que la amilopectina tiene, además de estos últimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas ramificadas. La a-amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas (oligosacáridos) como productos

 

En la hidrólisis del almidón (desdoblamiento), por acción de la amilas amilasa, a, se aprovechara el hecho de que el lugol (específicamente el yodo que contiene el lugol), se incorpore a la fracción helicoidal del almidón dando un color azul y a medida que la hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia.

 

La baja te temperatura mperatura inhibe el proceso hasta ser capaz de detenerlo. Un pH muy ácido o muy alcalino, también puede inhibir el proceso.

 

Es importante que c conozcamos onozcamos la estructura y propieda propiedades des químicas de los compuestos que se van a utilizar.

 

¿La temperatura b baja aja disminuye o influye en la actividad de la amilasa? La explicación es concreta: La amilasa requiere de una temperatura cálida (37 °C) para realizar una óptima actividad enzimática.

 

 

CONCLUSIÓN  

Este trabajo permitió que se apr aprendiera endiera que lla a actividad enz enzimática imática tiene una secuencia para actuar, en la cual la enzima actúa sobre el sustrato dando un producto.

 

También se conoció q que ue la enz enzima ima es un catalizador biológico que mejora la activación química en una reacción.

 

Diferentes factores a ambientales mbientales como la variación de pH, temperatura o presencia de inhibidores pueden afectar a la actividad enzimática.

 

A medida que s se e deja expuesto expuesto el sustrato c con on la enzima v va a a ser mejor su desarrollo enzimático.

 

Se pudo observar que factores c como omo la concentración de sustrato y temperatura influyen de gran manera hay en lamayor actividad enzimática, debido a que menor concentración de sustrato actividad enzimática y en mayor concentración de sustrato hay menor actividad enzimática, es decir, es inversamente proporcional; y la alta temperatura desnaturaliza la enzima.