Practica Microbiologia

 

 

PRACTICA I: INTRODUCCION AL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA  

Reconocimiento de equipos, aparatos y materiales de laboratorio, horno, autoclave y estufa de incubación.   Preparación de medios de cultivo.   Proceso de esterilización por calor seco y calor húmedo. I.

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Objetivo: Conocer y aprender la preparación de los diferentes medios de cultivo.

Equipos, materiales, medios y reactivos:   TSA   TSB   Agar- Agar   Agua destilada algodón    

Autoclave Cocinilla u horno microondas

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Frascos de vidrio   Papel Kraft   Placas Petri   Tubos de ensayo    

HCl 0.1 N NaOH 0.1 N

Procedimiento: Medio semisólido

Pesar el TSB en cantidad suficiente para el volumen volumen deseado y añadir agar- agar a la concentración de 2,5 g/l. adicionar agua destilada, mezclar y calentar hasta disolver (a 100º C), medir el pH pH y repartir en tubos en caliente, acondicionar y autoclavar. Resultados: Cálculos: TSB 30 g ⟹ 100 1000 mL mL  ⟹ 50 ml    = 1,5 

TSA  2. 2.5 5 g ⟹ 1000 000 mL mL  ⟹ 50 ml    = 1,25 

Figura 1. 10 tubos de ensayo los cuales serán llenados cada uno con 5 mL de medio semisólido.

 

 

CUESTIONARIO 1. ¿Qué técnicas se usan para esterilizar placas Petri de plástico y alimentos perecibles?

Las placas de plástico pueden ser esterilizadas sumergiendo las placas ya limpias en alcohol al 70% por un periodo de 30 minutos. Una forma más conveniente es la de exponer la parte interior de las placas (base y tapa) a la luz UV durante cinco minutos. Para evitar contaminación se ensamblan inmediatamente las placas y se guardan hasta su utilización. La esterilización elimina todos los microorganismos (patógenos o no) que puedan estar vivos en el alimento. Este método se relaciona con los productos que se envasarán de manera hermética en latas o frascos de vidrio; es un proceso muy drástico, en el que se somete al alimento a temperaturas entre 118ºC a 120ºC por tiempos muy cortos (1 min). Cuando se pasteuriza un alimento, éste se somete a temperaturas menores meno res de 100°C; y se denomina esterilización, cuando el alimento se somete a temperaturas que están por encima de los 100°C.   Por ello, entre los procesos térmicos para lograr la conservación segura de los alimentos, se originó el término de esterilización comercial, que se define como el “tratamiento térmico aplicado al producto para la destrucción de todos los microorganismos viables de importancia en la salud pública y aquellos capaces de reproducirse en el alimento bajo condiciones normales de almacenamiento y distribución, sin la condición de refrigeración”.  En general, este “método de conservación se realiza en autoclaves o en esterilizadores modernos”.  Este tratamiento se puede aplicar a productos ya envasados, o de manera previa a su envasado. Exponer a los alimentos a altas temperaturas, o que los productos experimenten más temperatura de la adecuada, puede provocar la pérdida de nutrientes y afectar su nutrimento y sabor.  

 

 

2. ¿Por qué razón es necesario agregar antibióticos cuando preparamos agar Dextrosa Sabouraud y que cuidados debe tener? Sabouraud Dextrose Agar es un medio de propósito general diseñado por Sabouraud para el cultivo de dermatofitos. Un bajo pH (de 5,6 aproximadamente) favorece el crecimiento de hongos, en especial los dermatofitos, con efecto ligeramente inhibidor para las bacterias contaminantes en muestras clínicas2-4. La adición de cloranfenicol

es una modificación diseñada para aumentar inhibiciónoportunistas bacteriana y que posibilitar el aislamiento de muestras contaminadas dela hongos causan infecciones clínicas similares a la dermatofitosis pero sensibles a la cicloheximida incluida en algunos medios fúngicos selectivos.  Al recibir los tubos, almacenarlos almacenarlos en un lugar oscuro a 2  –  8 °C. No congelar ni sobrecalentar. No abrir hasta que se vayan a utilizar. Reducir al mínimo la exposición a la luz. Los medios en tubos almacenados como se indica en sus etiquetas hasta momentos antes de su utilización pueden ser inoculados hasta la fecha de caducidad e incubados durante los períodos de incubación recomendados (un máximo de 6 semanas para los medios micológicos). Dejar que el medio se caliente a temperatura ambiente antes de la inoculación. 3. Aparte de la cinta indicadora de esterilización. ¿Qué otras formas practica practicas s existen para verificar verificar el correcto proceso de un autoclavado?

 

 

Los Indicadores biológicos son dispositivos preparados de esporas no patógenas y altamente resistentes (Bacillus stearothermophilus y Bacillus subtilis ) a los procesos de esterilización y por lo tanto son útiles y eficaces para establecer la capacidad del ciclo de esterilización para destruir destr uir microorganismos específi específicos, cos, que se sabe que son más resistentes al proceso que se está probando. Las esporas utilizadas provienen de Bacillus subtilis variedad Níger como control biológico de la esterilización por calor seco y óxido de etileno y de Bacillus stearothermophilus  para la esterilización por vapor a presión, plasma de peróxido de hidrogeno y formaldehído. Un indicador biológico será positivo cuando exista un fallo en el proceso de esterilización, esto incluye un mal funcionamiento del esterilizador, la calidad del vapor, si la humedad relativa del área de procesamiento no es la adecuada, el tipo y método de empaquetado, la configuración de la carga y si los parámetros del ciclo no son los apropiados para la carga que estamos esterilizando. Estos indicadores certifican la muerte de microorganismos una vez terminado el proceso de esterilización. Los indicadores biológicos pueden ser:   Tiras de papel inoculadas: en envases individuales que requieren procesamiento en el laboratorio.   Ampollas: con tiras de papel inoculadas en su interior y provistas de un medio de cultivo. Son las más empleadas.   Pruebas de lectura rápida: sustrato que tiene la peculiaridad de que, al detectar una enzima activa asociada a esporas de microorganismos, pasa a ser fluorescente, indicando un error en la esterilización. 

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4. En un laboratorio de Microbiología Microbiología solo le queda 85 g de agar TSA y le han pedido preparar 45 placas (20 mL por cada placa). Detalle el procedimiento completo de preparación, teniendo en cuenta c uenta que en su laboratorio hay TSB y agar- agar.

Disolver 36g de polvo deshidratado en 900mL de agua destilada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. Distribuir 20 mL en las 45 placas y esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121°C. CALCULOS: 40 g ⟹ 1000 1000 mL  ⟹ 900 ml    = 36 

 

 

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Aguilar J. Métodos de conservación de alimentos. [Monografía en en Internet]. Red tercer milenio. Primera edición. Estado de Mexico. 2012 [acceso el 10 de mayo del 2015]. Disponible en: http://www.aliatuniversidades.com.mx/bibliotecasdigitales/pdf/economico_administrat ivo/M%C3%A9todos_de_conservacion_de_alimentos.pdf    ivo/M%C3%A9todos_de_conservacion_de_alimentos.pdf  2. BBL Sabouraud Dextrose Agar with Chloramphenicol. [homepage on the Internet]. USA: Becton, Dickinson and Company. c2012. [acceso el 10 de mayo del 2015] Disponible en:  en: https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=22894 .  3. Esterilización. Procedimientos relacionados. [Monografía en Internet]. [185-203]. [acceso el 10 de mayo del 2015]. Disponible en: http://www.mcgrawhill.es/bcv/guide/capitulo/8448164180.pdf ..  hill.es/bcv/guide/capitulo/8448164180.pdf