PRACTICA ..

PRACTICA Nº 01 Manejo de Animales de Experimentación y Cálculo de Dosis OBJETIVOS  Conocer y aplicar las normas éticas para el manejo adecuado de los animales de laboratorio.  Manejar, inmovilizar y presentar sin riesgo para el animal, ni para el estudiante, las diferentes especies que se emplean en las prácticas de farmacología.  Comprender la trascendencia de efectuar experimentos en varias especies de animales, así como distinguir las más comúnmente utilizadas en el laboratorio. FUNDAMENTO TEORICO Tomando en cuenta los distintos tipos de experimentación que pueden realizarse en la materia, es necesaria la manipulación de los animales de laboratorio para la administración de algún medicamento y la obtención y recopilación de resultados según los efectos farmacológicos manifestados en cada animal. Por lo anterior, todos los individuos que estén en relación con la experimentación farmacológica, desde el estudiante, hasta el investigador formado, deben ser capaces de manejar y presentar adecuadamente las diferentes especies de animales de uso común en el laboratorio, así como emplear los métodos menos crueles para sacrificarlos en caso necesario. El manejo adecuado nos facilitará la recolección de los datos en los animales antes, durante y después de la administración de los fármacos, por lo tanto, si el manejo de los animales no es el adecuado, esto condicionará respuestas anómalas o alteradas a los fármacos administrados. Por otro lado, el desconocimiento de las técnicas del manejo de animales ocasionará respuestas agresivas por parte de estos hacia el experimentador, de quien sienten temor o desconfianza, por lo que se recomienda no manipular a los animales más de lo necesario, aun cuando se empleen las técnicas adecuadas de manejo. Básicamente el avance de los conocimientos científicos médico-farmacológicos dependen inicialmente de la experimentación en animales de laboratorio, por lo que se hace necesario el empleo de una gran variedad de ellos, considerando que dentro de las normas legales de la investigación farmacológica preclínica se establece que los nuevos fármacos deben someterse a la experimentación en por lo menos tres especies de animales, aunque el tipo de animal a utilizar dependerá de la rama o área de experimentación de que se trate. Tipos de Experimentación Los experimentos que se realizan para el estudio de los efectos de los fármacos se llevan a cabo en animales de laboratorio, ya sea en el animal íntegro o en alguno de sus órganos, por lo que los experimentos pueden ser de tres tipos: a) In vivo, cuando se utiliza al animal íntegro, manteniéndolo vivo, para observar y registrar los efectos de los fármacos. b) In situ, cuando se utiliza alguno de los órganos o tejidos del animal, exponiéndolo por cirugía en el sitio anatómico correspondiente, para lo que se requiere que el animal esté anestesiado y/o descerebrado. c) In vitro , cuando se efectúa el experimento en una muestra de un órgano o tejido que fue extraído de un animal el cual fue previamente sacrificado, manteniendo dichos tejidos en condiciones de temperatura y nutrición similares a las fisiológicas.

Normas Éticas en el Manejo de Animales Debemos hacer hincapié en las obligaciones que se tienen con los animales de experimentación dentro del laboratorio, las mismas que han sido postuladas por las sociedades protectoras de animales como normas éticas para su manejo adecuado: Tratarlos humanamente. Reducir al mínimo el dolor y la incomodidad. Evitar el sufrimiento innecesario. Manipularlos adecuadamente, firme pero con suavidad, para evitar desencadenar reacciones agresivas hacia el experimentador.  Un manejo cuidadoso de los mismos reduce al mínimo el sufrimiento y el estrés del animal.  Se deben evitar movimientos bruscos que puedan asustar al animal.  Se debe trabajar con decisión y sin miedo.    

Manejo de Animales de Laboratorio 1. Ratones Se cogen por la cola y se colocan sobre la mesa de laboratorio. Se pellizca la piel del dorso por detrás de las orejas y, así quedan inmovilizados. 2. Ratas A las ratas, si son pequeñas, se les deja subir a la mano y se las abraza con cuidado de no cortarles la respiración.

3. Conejo Tómelo por el dorso sujetando con toda la mano la piel; nunca lo tome por las orejas ya que puede dañar los nervios y vasos sanguíneos. 4. Sapo: Tome al animal firmemente con toda la mano, dejando expuesta la cabeza, ya que en este caso el animal deberá ser descerebrado y/o desmedulado, lo que se consigue doblando hacia abajo la cabeza, se introduce el estilete en el sitio localizado por detrás de las membranas timpánicas y a nivel de la línea media de la cabeza, haciendo un movimiento pendular se destruye el cerebro en el caso de descerebración, lo que se manifiesta con la pérdida del reflejo ocular; para la desmedulación se cambia la dirección del estilete y se dirige hacia abajo siguiendo la dirección del canal medular, la desmedulación se manifiesta con un estiramiento brusco de las extremidades inferiores, seguida de una relajación permanente.

PARTE PRÁCTICA 1. Calcular el volumen a administrar para cada ratón y de acuerdo a cada medicamento, según los siguientes cuadros: RATONES RATON 1 RATON 2 RATON 3 RATON 4 RATON 5 MEDICAMENTOS IBUPROFENO PARACETAMOL AMOXICILINA CLORFENAMINA PROPOFOL DIMENHIDRINATO CEFAZOLINA DOBUTAMINA TERAZOSIN ATROPINA

FF TAB SUSP SUSP TAB SOL. PARA INYECCION SOL. PARA INYECCION POL. PARA INYECCION SOL. PARA INYECCION COMP SOL. PARA INYECCION

PESO G 23.4 22.2 26.9 21.8 30.7 CONCENTRACION 400 MG 120MG/5ML 250MG/5ML 4 MG 10MG/ML 50MG/5ML 1G 250 MG/20ML 2.5MG 0.25MG/ML

PESO FF SOLIDA 0.958 G

0.230 G

1.250 G

DOSIS 5MG/KG 10MG/KG 50 MG/KG 0.05MG/KG 2.5 MG/KG 5 MG/KG 7.5 MG/KG 2 ug/KG 1MG/50KG 0.01MG/KG

CUESTIONARIO 1- Defina los siguientes términos: Dosis, período de latencia, TVM, sitio de acción, mecanismo de acción, modo de acción, absorción, dosis terapéutica, dosis letal, margen terapéutico 2- Enumere y explique brevemente las fases de desarrollo de un fármaco.

PRACTICA N° 2 VIAS DE ADMINISTRACION OBJETIVOS  Conocer y aplicar las diferentes vías de administración de un fármaco.  Evaluar las ventajas y desventajas que ofrece cada una de ellas.  Demostrar el efecto de la vía de administración sobre los parámetros farmacodinámicos. FUNDAMENTO TEORICO Se denomina vía de administración al lugar por donde se suministra el fármaco. Considerando que la zona de absorción no siempre coincide con la vía de administración. 1. Vía oral: Los fármacos se van a absorber en el estómago y/o, sobre todo, en el intestino delgado. Es la vía más fisiológica, aunque tiene el inconveniente de que no todos los fármacos se absorben por esta vía. Por esta vía se administran soluciones y suspensiones por medio de una sonda de pequeño calibre (Nelatón No. 8) que permite la introducción del fármaco a la cámara gástrica por el hocico del animal; se debe sumergir la sonda en agua para verificar que la sonda esté en estómago y no en pulmones, esto es, si la sonda burbujea en agua indica que se encuentra en los pulmones. Esta técnica se aplica con el conejo, la rata y el ratón. Para el ratón se utiliza una jeringuilla con una aguja de calibre grueso y con la punta redondeada (cánula de administración oral). El ratón se inmoviliza y se introduce la aguja por la boca. Conviene asegurarse de que la cánula se encuentra en el estómago. La administración de fármaco, por error, en las vías respiratorias puede provocar la muerte del animal.

2. Vía intravenosa: En el conejo se elige la vena marginal de la oreja, en donde se inserta la aguja con el bisel hacia arriba. En ratas y ratones se puede utilizar la vena marginal de la cola. Se utiliza para administración de fármacos que requieran rapidez de acción o para infusión continúa.

El ratón se inmoviliza en un cilindro de vidrio. La cola se coloca encima de la ranura del corcho. Se dilata la vena caudal con un algodón empapado en alcohol o por presión. Se introduce la aguja con el bisel hacia arriba con la mano derecha hasta estar en el vaso. Seguidamente se coloca la jeringa horizontalmente sobre la piel y se introduce en el vaso. Si el movimiento es correcto el émbolo comenzara a llenarse de sangre tras una ligera aspiración. La administración debe realizarse lentamente para evitar el shock de velocidad. 3. Vía intraperitoneal: Tomando en cuenta que la superficie de absorción es muy amplia, el tiempo de latencia muy corto y el fácil acceso a la misma, es una de las vías más utilizadas en el laboratorio. En el caso del conejo, se toma por el dorso, se vuelve hacia arriba presentando la región abdominal, se sujeta firmemente de las patas posteriores y se inyecta en la parte alta del cuadrante inferior izquierdo del área abdominal, insertando la aguja con una inclinación de 45 grados con respecto al plano corporal. En el ratón la punción se realiza en la mitad inferior del abdomen fuera de la línea alba con una aguja biselada. El ángulo de punción debe ser de 45º. Se debe aspirar para descartar que la punta se encuentre en un asa intestinal o en un vaso.

4. Vía intramuscular: En el caso de esta vía, se presenta el dorso del animal y el fármaco se deposita con una aguja de 27 X 13 mm en la parte posterior de los cuartos traseros.

MAXIMO VOLUMEN (ml) PERMITIDO DE SOLUCIONES DE FÁRMACO QUE PUEDEN SER ADMINISTRADOS ANIMAL

RATON (20-30 g.)

RATA (100 g.)

COBAYO (250 g.)

CONEJO (2.5 Kg.)

PERRO (50 Kg.)

I.V.

0.5

1

1

5.0 - 10.0

10.0 - 20.0

I.M.

0.05

0.1

0.25

0.5

5

I.P.

1

2.0 - 5.0

2.0 - 5.0

10.0 - 20.0

20.0 - 50.0

ORAL

1

5

10

20

100

PARTE EXPERIMENTAL Materiales biológicos:  03 Ratones albinos Otros materiales:  Pentobarbital sódico, sol. al 2 %,  Jeringas de tuberculina  Balanza Procedimiento  Pesar los ratones, y realizar los cálculos de acuerdo a la dosis de pentobarbital (30mg/Kg), sol al 2%.  Administrar las dosis determinadas a cada uno de los ratones por vía oral, IM e intraperitoneal  Tomar el tiempo desde la administración de la droga y observar la motilidad, sensibilidad y otros parámetros.  Completar la información en el siguiente cuadro: RATO

DOSIS DE

VIAS DE

Período

Duración

INTENSIDAD DE EFECTO

N N° (marca)

Pentobarbital sódico

ADMINIS

de Latencia

de efecto

Sin efecto

Sedante

Hipnótico sopor

Hipnosis profunda

ORAL I.M. I,P. Intensidad de efectos: Sin efecto o Sedante + Hipnótico (sopor) ++ Hipnosis profunda +++ Anestesia ++++

CUESTIONARIO 1. En función al cuadro anterior elaboré los respectivos gráficos comparativos y realice la explicación de los mismos 2. Explique el porqué de la diferencia en los períodos de latencia 3. ¿Cuál es el mecanismo de acción del pentobarbital? 4. Definir los siguientes términos: sedante, hipnotico (sopor), hipnosis profunda y anestesia 5. Explique brevemente cuales son las complicaciones de un tratamiento intravenoso 6. Explique en qué consiste la nutrición parenteral

Anestesia