Practica 7 Oxidaciones Biologicas Equipo 3 Fin

Instituto Politécnico Nacional Escuela Superior de Medicina

Bioquímica I: PRÁCTICA NO. 7 “Oxidaciones Biológicas”

EQUIPO 3 - Ramírez Hernández Verónica. - Rojo Arroyo Claudia Stephany. - Solís Noxpanco Zaira. - Trueba Chaparro Mireya. 2CM11 Dra. Eunice Dalet Farfán García

18-Junio-2015

Experimento 1. Oxidación por pérdida de electrones Evidencia de aprendizaje: 1 Registre sus resultados en la siguiente tabla para el reporte de laboratorio. Solución

K3fe(CN)6

KSCN

SULFATO FERROSO

Cambio a color azul

Color rojo

SULFATO FERRICO

Color azul

Color rojo

2 Escriba las reacciones de identificación que se han efectuado en cada caso.

1.- Al calentar (Fe) con H2SO4 obtuvimos sulfato ferroso

2.- en este caso se puedo observar la presencia de sales férricas al agregar (KSCN)

Al agregarle ferricianuro de potación se tiño de color azul lo cual indico la presencia de sales ferrosas.

En el segundo caso al oxidar la sal ferrosa a ferrica y repetir los dos casos anteriores se obtuvo en el primer caso al agregar un color azul , y en el otro un

3 Si el KMnO4 es capaz de oxidar al sulfato ferroso, ¿Qué compuesto se reduce?

KMnO4+FeSO4+H2SO4 = MnSO4+K2SO4+Fe2 (SO4)3 + H2O

El Fe se reduce 4 Escriba la reacción de óxido-reducción que se ha efectuado.

2KMnO4 + 10FeSO4 + 8H2SO4

K2SO4 + 2MnSO4 + 5Fe2(SO4)3+ 8H2

Experimento 2. Oxidación por deshidrogenación Evidencia de aprendizaje: 1 Registre los resultados en la tabla para el reporte de laboratorio.

Tubo

Tiempo de reoxidación del azul de metileno o número de gotas

1 “testigo”

2 “calor”

1 gota

2 minutos

3 “temp. Amb.”

5 minutos

4 “H2O2 ”

5 “FeCl3”

8 gotas

3 gotas

2 Escriba la reacción química que se ha efectuado en cada caso.

Tubo 4: La descomposición del peróxido de hidrógeno se puede considerar como la oxidación de una molécula por otra. La reacción es: 2H2O2→O2+ 2H2O Tubo 5:El cloruro férrico es un agente oxidante débil: 2FeCl3 + H2O → 2FeCl2 + HCl + O Se utiliza para transformar la hidrquinona en quinona, el naftol en dinaftol y los derivados de la hidroxilamina en compuestos nitrosos.

En la imagen podemos observar los 5 tubos de ensayo, donde el tubo uno como sabemos, es el testigo y no se le agrego algún otro reactivo. Lo que fue el tubo 2, regreso al azul de metileno en 2 minutos al estar en ebullición, en el tubo numero 3 tardo 5 minutos a su temperatura ambiente, en el tubo 4 se le agregaron 8 gotas de H2O2 y volvió al azul de metileno, en cambio al tubo 5 se le agregaron 3 gotas y regreso a un azul un poco más bajo del normal.

Experimento 3. Reacciones de Oxido- Reducción Biológicas. Evidencia de aprendizaje: 1 Registre sus resultados en la tabla para el reporte de laboratorio 2 ¿En cual de las fracciones de hígado deben encontrarse las mitocondrias y por qué? 3 Describa como actúa el malonato de sodio en esta reacción. 4 Explique sus resultados sobre la base del análisis del contenido de cada tubo.

Reactivo /Tubo. Azul de metileno 0.002 M. mL Succinato de sodio 0.1M. mL Malonato de sodio 0.1M. mL Agua destilada. mL Suspensión de Hígado. mL Sebrenada nte de Hígado. mL

Tubo 1.

Tubo 2.

Tubo 3.

Tubo 4.

Tubo 5.

Tubo 6.

0.3

0.3

0.3

0.3

0.3

0.3

-----

0.5

0.5

-----

0.5

0.5

-----

-----

0.5

-----

-----

0.5

1.5

1.0

0.5

1.5

1.0

0.5

0.5

0.5

0.5

-----

-----

-----

-----

-----

-----

0.5

0.5

0.5

Mezclar bien el contenido de cada tubo. Vaselina mL.

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

Incubar de 37° a 40° C. En la mitocondria se producen una serie de transferencias de electrones por reducción y oxidación de los componentes de la cadena, tratados de resumir en pequeños complejos. el azul de metileno que cuando se oxida por el O2 da un tono azul, pero este puede ser reducido de nuevo por el Succinato, ya que el azul de metileno es mediador entre electrones, protones, O2 y sustrato que se oxida (Succinato). El azul de metileno reducido es incoloro, mostrando la dinámica de reducción. Por otra parte con la Succínico deshidrogenasa se emplea un aceptor artificial de hidrógenos que es la P.F.D. ( Parafenilendiamina )con la cual se ve la cadena respiratoria en su etapa final pues esta se oxida en presencia del alfa - naftol quedando de un color azul llamado azul de indofenol. La reacción se llevo a cabo en el tubo dos.

Experimento 4. Localización y demostración de la actividad de la citocromo-oxidasa Evidencia de aprendizaje: 1 Registre sus resultados en la siguiente tabla para el reporte de laboratorio: Tiempo

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

0 minutos 5 minutos 10 minutos 15 minutos

Tubo 5

Tubo 6

Tubo 7

Tubo 8

Tubo 9

Tubo 10

X X

2 Escriba la reacción de formación del azul de indofenol.

Dimetil-p-fenilendiamina (insoluble en agua)

+

O2 oxidado a-naftol-------------- Azul

de

Citocromo C

3 Explique por qué no se usó vaselina en este experimento.

indofenol

(37)

No se utilizó la vaselina en este experimento, porque aislaría el oxígeno del azul de indofenol reducido y para la aparición del mismo, la solución debe oxidarse por acción del O2 del ambiente que entra al tubo. 4 Explique sus resultados sobre la base del análisis del contenido de cada tubo. TUBO1: coloración azul dispersa TUBO 2: no se llevo a cabo la reacción por falta de a-naftol TUBO3 : no se llevo a cabo la reacción TUBO 4: Sin suspensión de hígado se da una pequeña coloración (si reacciono) TUBO 5: debido a que se agrego KNC se inhibio, por lo cual fue lenta la reaccion TUBO 6: se presento la reacción a tiempo “estándar” TUBO 7: no se llevo a cabo TUBO 8: no tubo un indicador TUBO 9: se diluyo por el agua destilada, pero si reacciono (tonos claros) TUBO 10: por KNC se inhibio y fue lenta la reacción

Podemos observar que los tubos que cambiaron en dicho experimento, fueron los tubos 5 y 6, uno un poco más que el otro, por ejemplo, en el tubo 5 cambio a los 5 minutos, quedando un azul de indofenol, en cambio en el tubo 6 tardo 15 minutos y fue un azul más oscuro.

Conclusión Final Una reacción redox es aquella donde existe un intercambio de electrones entre sustancias químicas. Si en el intercambio de electrones el reactivo acepta los mismos, esta sustancia se reduce. En cambio si el reactivo químico pierde electrones, éste sufre una oxidación o simplemente se oxida. Ambos sucesos, oxidación y reducción, ocurren simultáneamente. El agente reductor es la sustancia que permite que otra se reduzca. Por lo tanto para que existe la reacción redox. El el caso de los dos experimentos se pudo comprobar la oxidación y reducción en el sulfato férrico a ferroso y en las coloraciones que indicaban las presencia de ciertas sales. En esta práctica experimentamos la transformación de energía, bajo varios comportamientos y métodos, uno de ellos fue la oxidación por deshidrogenación, donde Wieland consideraba el proceso básico en la oxidación de los metabolitos era la Activación del Hidrógeno, mediante la acción de enzimas llamadas

“Deshidrogenasas”, las cuales transportaban el hidrógeno al oxígeno u otros agentes oxidantes. Del mismo modo Szent Gyorgyi supuso que es necesaria la activación del hidrógeno y oxígeno. Así también, Keilin dijo que interviene como eslabón intermediario del citocromo, por lo tanto podemos comprobar que en las oxidaciones influyen una cantidad de aceptadores de hidrógeno. Lo que paso en el experimento 4 respecto a la citocromo oxidasa, sabemos que es la última enzima de la cadena respiratoria y es la responsable de la “activación del oxígeno para oxidar a los citocromos. Así, tanto los citocromos como la citocromo oxidasa, son metaloproteínas (porforinas), que se caracteriza por su sensibilidad al cianuro y al moxodo de carbono. Aquí, comprobamos que la enzima indofenol solo oxida al citocromo c, el cual a su vez oxida el indofenol, por lo tanto se conoce como citocromo-oxidasa.

Bibliografía -

Bioquímica Texto y Atlas KoolmanRohm Editorial Medica Panamericana México D.F.

-

Bioquímica Médica Pacheco Leal Editorial Limusa México D.F., 2014