Práctica 7 Crecimiento Microbiano. Método Cuantitativo en Placa

 

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO FACULTAD CIENCIAS BIOLOGICAS DEPARTAMENTO ACADÉMICO MICROBIOLOGÌA  –   PARASITOLOGÌA

ASIGNATURA VIRTUAL MI 401 FISIOLOGÍA Y GENÉTICA MICROBIANA TAREA 6

Ciclo académico: VII  Semestre: 2021-I  Tarea 6: Informe de práctica: Crecimiento Microbiano Método Cuantitativo en Placa (Práctica 7) 

Desempeño: Diferencia las fases del crecimiento microbiano y lo caracteriza en una representación gráfica. Aplica métodos de determinación del crecimiento microbiano para diferentes tipos de microorganismos y muestras según protocolos. Determina los parámetros del crecimiento microbiano mediante fórmulas en ejemplos propuestos

Informe de la Práctica Responsables:   Chupillón Silva César   De la Cruz Durand Joel

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  Ortiz Medrano Brayan

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  Purihuamán Rojas Lizandro

•

 

Práctica 7: Crecimiento microbiano. Método cuantitativo en placa ➢  Introducción:

Crecimiento es el aumento de la cantidad de constituyentes y estructuras celulares, cuando hay crecimiento en ausencia de división celular hay aumento en el tamaño y peso de la célula. Mientras que cuando el crecimiento es seguido de división celular hay un aumento en el número de células. Es importante distinguir entre el crecimiento de células individuales y el crecimiento de poblaciones, ya que en los microorganismos debido a su pequeño tamaño no se hacen estudios de crecimiento individual sino estudios de crecimiento de poblaciones. El crecimiento de una población ocurre de una manera exponencial. El principio de la escala McFarland es reaccionar iones sulfato con iones  bario para dar como producto un precipitado de Sulfato de Bario; estequiométricamente se determinó que el reactivo en exceso es el portador del ion sulfato. Permite determinar en suspensiones bacterianas el número de  bacterias/mililitro, o en UFC según una escala que va de 0.5 a 10. Los estándares  pueden ser visualmente comparados con suspensiones de bacterias en SSFe. Para asegurar la densidad correcta se puede usar espectrofotómetros.

➢  Objetivos: ✓  Determina el número de microorganismos por medio del Método cuantitativo en Placa. ✓  Grafica la Curva de Crecimiento.

✓  Determina los parámetros del Crecimiento microbiano (número de generaciones,

velocidad de crecimiento y tiempo de generación). ➢  Materiales: ❖  Cultivos de Escherichia coli en caldo nutritivo ❖  Agar nutritivo servido en tubos en plano inclinado ❖  150 mL de Caldo nutritivo en Erlenmeyer ❖  200 mL de Caldo nutritivo en balón ❖  50 tubos con 9.0 mL de solución salina fisiológica esterilizada

 

❖  Agar nutritivo servido en 24 placas de Petri ❖  Mechero de alcohol, bandeja, hisopos esterilizados, 60 pipetas de 1.0 mL., papel ❖  semilogarítmico o logarítmico ❖ 

Estufa graduada a 37°C  

➢  Metodología

1. Realizar la siembra de una cepa de  Escherichia coli en

agar nutritivo en plano

2.  Cosechar las células en 150 mL de caldo nutritivo e incubar a 37°C/24 h

inclinado e incubar a 37°C/24 h.

3.  Inocular 0.02 mL del cultivo anterior en 200 mL de 4.  Incubar el caldo nutritivo (200 mL) a 37°C/24 h, en agitación constante

caldo nutritivo, homogenizar y extraer 1.0 mL para la determinación de la población inicial (T0) haciendo diluciones según indicado en la tabla 1 y sembrar 0,1 mL de las dos últimas diluciones por duplicado por el método de siembra en superficie. Incubar a 37°C/24 h

5. A los tiempos 0, 2, 4, 6, 8 y 10 horas, hacer diluciones según tabla 1 y sembrar 0,1 mL

6. Graficar en papel semilogarítmico o logarítmico el recuento de las ufc/mL

de las dos últimas diluciones por duplicado  por el método de siembra en superficie. Incubar a 37°C/24 h.

versus el tiempo de incubación y trazar la curva de crecimiento.

7. Diferenciar las fases de crecimiento y calcular, con los datos de la fase logarítmica el número de generaciones, velocidad de crecimiento y tiempo de generación, aplicando las siguientes fórmulas:

 

  ➢  Resultados

  Tiempo de toma de muestra, diluciones y número de placas por sembrar.

•

Hora

Tiempo (n) X

N° de tubos

Dilución de siembra

N° de placas

7:30

0

4

10-3,10-4 

4

9:30

2

5

10-4,10-5 

4

11:30

4

7

10-6,10-7 

4

1:30

6

9

10-8,10-9 

4

3:30

8

12

10-12,10-13

4

5:30

10

15

10-14,10-15

4

 

•

Repetir a las 6, valores 8 y 10 tomados h e incubar 37°C/24 h en caday tiempo de diluciones Resultados con de laa figura presentadas aproximados y datos completos.

Tiempo (X)

X

0

Dilución

UFC

UFC/ml (y)

Log y

Ln y (y´)

XY´

0

10-4 

100

1 x 107

7

16.12

0

2

4

10-5 

40

4 x 107 

7.6

17.5

35

4

16

10-7 

1

1 x 108 

8

18.42

73.68

6

36

10-8 

2

2 x 109 

9.3

21.4

128.4

8

64

10-12

4 

4 x 1013 

13.6

31.32

250.56

10

100

10-14

20 

2 x 1016 

16.3

37.53

375.3

30

220

142.29

862.94

2

Calculación de datos:   Número de generaciones (g o n)

•

g = 3.3 (log 2x1016 - log 1x107) g = 3.3 (16.3  –  7)  7) g = 30.7 generaciones

 

 

  Tiempo de generación

•

G = 10ℎ / 30.7 G = 19´30’’ →  aproximado 20 minutos minutos

  Velocidad de crecimiento 

•

v = 30.7 / 10 v= 3.07 →  aproximado 3 generaciones generaciones por hora.

  Recta de Regresión 

•

a=12.89

B=2.16

Recta de Regresión: y= a + bx Y= 12.89 + 2.16x

x

y

0

12.89

2

17.21

4

21.53

6

25.85

8

30.17

10

34.49

 

Recta de Progresión 40 35

34,49 30,17 25,85

30 21,53

25 20 12,89 15

17,21

10 5 0

2

4

6

8

10

12

 

➢  Conclusiones: ✓  En esta práctica realizada se determinó que mediante el Método cuantitativo en Placa,

el número de microrganismos fue aumentando con el pasar de las horas, teniendo así que en el tiempo inicial había 1 x 10 7 UFC/ml y al cabo de las diez horas se obtuvieron 2 x 1016 UFC/ml.  ✓  Se graficó la curva de crecimiento presentando solo la fase exponencial.   ✓  Se determinó el número de generaciones, velocidad de crecimiento y tiempo de

generación, teniendo como resultados: 30.7, 20 min, 3 por hora, respectivamente.

➢  Referencias:

Mateos, P. (s.f). Crecimiento microbiano. Facultad de Farmacia. Universidad de Salamanca. http://webcd.usal.es/Web/educativo/micro2/tema07.html

Pedrique, M., y De Castro, N. (2008). Reproducción y crecimiento microbiano. Universidad Central de Venezuela. http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_T ema_6_crecimiento.pdf

Alvarez, E. (2015). Crecimiento microbiano. Universidad Autónoma de Querétaro. https://es.slideshare.net/rebecaoloarte/crecimiento-microbiano-46069543 Fiallos, J. (2017). Análisis de los métodos para medir la turbidez de los inóculos y su influencia en el antibiograma de la bacteria E.coli en urocultivos.   [Tesis para optar

el

título

de

Licenciado,

Universidad

Técnica

de

Ambato].

 

https://repositorio.uta.edu.ec/bitstream/123456789/10786/1/TESIS%20FREDD Y%20ULLOA.pdf

➢  Cuestionario:

1.  ¿Qué es un microorganismo viable? Es la habilidad de un microorganismo para multiplicarse y producir una colonia macroscópica en un medio de cultivo sólido o producir turbidez en un medio líquido apropiado.

2.  ¿Qué es una curva de crecimiento? Representación gráfica del crecimiento microbiano. Relaciona el log. del número de microorganismos Log Y y el tiempo (X). Y esta curva se divide en cuatro fases denominadas fase de latencia, fase exponencial o fase logarítmica, fase estacionaria y fase de muerte.

3.  ¿Qué es una generación? Es el intervalo que transcurre en la formación de dos células a partir de una célula. Es decir, una generación la formarían 2 células que se formaron a partir de 1, la siguiente si guiente generación será las 4 células que se forman a partir de las 2 ya existentes. Y así siguiendo exponencialmente.

4.  ¿Qué es velocidad de crecimiento? Es el incremento en el número de células o en la masa celular por unidad de tiempo. La velocidad específica de crecimiento es característica para cada tipo de microorganismo y medio de cultivo (sustrato).

5.  ¿Qué es tiempo de generación? Es el tiempo requerido para que, a partir de una célula, se formen dos células, es decir, es el tiempo que tarda una población microbiana en duplicarse. Este tiempo varía considerablemente con los microorganismos y las condiciones ambientales como la temperatura.