Practica 5 (inmunologia)

PRACTICA 5 ENSA ENSAY YO

COLO OLORIM IMET ETR RICO ICO

DEL

TETRA TRAZOLIUM IUM

NITR ITROBLUE BLUE

(NBT):EVALUACION DE LA PRODUCCION DE ANION SUPEROXIDO (O2-) I. INTRODUCCIÓN INTRODUCCIÓN Los neutróflos juegan un rol clave en proteger al cuerpo, utilizando una ampl amplia ia

vari varied edad ad

de

meca mecani nism smo os

micr microb obio ioci cida das s

depe depend ndie ient ntes es

e

independientes de oxigeno para eliminar los agentes inecciosos. Los meca mecani nism smos os depe depend ndie ient ntes es de oxige xigeno no impl implic ican an la prod produc ucci ción ón de especies reactivas de oxigeno (ROS, atravez de lo !ue se conoce como la explosión respiratoria oxidativa, !ue implica un elevado consumo de oxigen xigeno o por por estas estas c"lul c"lulas, as, # !ue !ue son escen escencia ciale les s para para la prot protecc ección ión cont contra ra

los los

patóg atógen enos os

inva invaso sorres. es.

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meca mecani nism smos os

inde indepe pend ndie ient ntes es de oxige xigeno no incl inclu# u#en en muc% muc%as as otra otras s unc uncio ione nes s del del neutr neutróf óflo, lo, tales tales como como !uimi !uimiot otaxa axais is , agoci agocito tosis sis,, desgr desgranu anulac lacio ion n # liberación de enzimas l&ticas # p"ptidos bactericidas 'l sistema sistema respon responsabl sable e de esta explo explosión sión respir respirator atoria ia oxidat oxidativa iva es la )*+ )*+  oxida xidasa sa,, !ue !ue es un sist sistem ema a de tran trans ser eren enci cia a elec electr trón ónic ica a mult multic icom ompo pone nent nte, e, !ue !ue cata catali liza za la reduc educci ción ón del del O - molecul molecular ar Los Los electro electrones nes son transeri transeridos dos desde desde el citosol citosol # entregad entregados os al oxigen oxigeno o presente en un compartitmiento intracelular (agosoma o extracelular 'l producto primario de la )*+ oxidasa es el O - # su metabolito metabolito inicial el -O-O-,a ,ade dem/ m/s s esto estos s ROS ROS son son meta metabo boli liza zado dos s en otr otros meta metabo boli lito tos s reactivos de oxigeno, !ue son uertes microbiocidas. La importan tancia cia de la producció ción de ROS por los neut eutróflos los es ejem ejempl plif ifca cada da

por por

la

ene enerrmeda medad d

gran granul ulom omat atos osa a

cró crónica nica

(01* (01*, ,

caracter caracterizad izada a por recurr recurrente entes s ineccio inecciones nes bacteria bacterianas nas # 2ngicas 2ngicas a lo largo de la vida # la ormación de granulomas tisulares

'l ensa#o del 34 se basa en la acumulación del precipitado ormazan azul oscuro 'l 34, permeable a la membrana es reducido al ormazan por el O- el cual es generado luego de la activación de los neutróflos 'ste ensa#o es colorimetrico, sensible # cuantitativo # puede detectar pe!ue5as cantidades de O -

II. OBJETIVOS 'valuar la producción de anion superoxido (O - por neutróflos activados

III. REACTIVOS Y MATERIALES Mat!"a#$ - 4ubos de centriuga de 67ml (alcon - 0entr&uga - $icropipetas - 4ubos eppendots - emocitometro - 'spectrootometro

Ra%t"&'$ - 8icoll 9 %#pa!ue - dextrano - medio de cultivo R+$: 9 6;