Practica #5 Aislar e identificar las características específicas de Enterococcus faecalis

Objetivo Aislar e identificar las características específicas de Enterococcus faecalis

Introducción Los enterococos, particularmente Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium, forman parte de la flora normal del tracto gastrointestinal tanto humano como animal y del tracto genitourinario femenino humano. En la última década, estos organismos han adquirido cada vez más importancia como patógenos nosocomiales, a pesar de su baja virulencia. El género Enterococcus tiene ciertas características que les facilita la diseminación entre los pacientes hospitalizados: • puede colonizar el tracto gastrointestinal de los trabajadores de la salud y de los pacientes, proveyendo un reservorio continuo para la diseminación intrahospitalaria; • es resistente a varios antibacterianos de uso frecuente; • la resistencia antimicrobiana le permite su supervivencia en un medio ambiente con alto uso de antibacterianos; • puede contaminar el medio ambiente hospitalario y sobrevivir en él por períodos prolongados; • puede contaminar las manos de los trabajadores de la salud, permaneciendo por más tiempo si los empleados no cumplen con las normas de lavado de manos. Estos factores hicieron que los enterococos emergieran como uno de los patógenos nosocomiales más importantes. Los enterococos son cocos gram positivos, que se encuentran aislados, de a pares, o formando cadenas cortas. Ellos pertenecieron, clásicamente, a los Streptococcus grupo D de Lancefield; sin embargo, a mediados de la década de 1980 fueron oficialmente clasificados en su propio género. Son catalasa negativa, anaerobios facultativos, capaces de crecer en condiciones un tanto extremas. Las características bioquímicas sobresalientes incluyen: la habilidad de crecer en presencia de NaCl al 6,5%, a temperaturas entre 10°C y 45°C, y hasta en un pH de 9,6. Tienen la capacidad de hidrolizar la esculina, crecer en presencia de bilis al 40%, sobrevivir 30 min a 60°C e hidrolizar la L-pirrolidonil ß-naftilamida (PYR); esta habilidad ha sido usada como parte de un test rápido

para detección de enterococos en el laboratorio. Las especies de enterococos clínicamente importante son: E faecalis, E faecium, E durans, E avium, E gallinarum, E casseliflavus, E raffinosus, E malodoratus, E hirae, E mundtii, E solitarius, E pseudoavium. Materiales y equipo Mechero Fisher Asa punta redonda Portaobjetos Bata, guantes y cubrebocas Cajas petri Cinta y marcador punto fino Microscopio Tubos de ensayo de 13 x 100 con tapón de rosca

Reactivos y medios de cultivo: Reactivos tinción Gram Agar Samgre Cultivo BHI Agar BEM Medio KF

Procedimiento.

Inocule una placa de agar de bilis esculina (BEM). Inocule un tubo con medio KF en pico de flauta.

Incube por 24 horas a 37C.

Tome el centro de una colonia esculina positiva e inocule un tubo de BHI que contenga un 7.5% de NaCl. Incube a 37C por 24 horas.

Hacer tinción Gram

Agregar una gota de Cristal violeta y esperar 1 min

Agregar una gota de Alcohol-Acetona y esperar 20 segundos

Agregar una gota de Lugol y esperar 1 min

Agregar una gota de Safranina y esperar 1 min

Realizar prueba catalasa.

Observaciones y resultados: 

Primer día de observación: a) Características macroscópicas:

Tamaño: puntiforme Forma: redonda Color: negro Elevación: plana Consistencia: cremosa Borde: liso Superficie: lisa Luz reflejante: brillante Luz transmitida: mate Fermentación de esculina: Positivo y evidenciado por el viraje de color amarillento a negro.

a) Características microscópicas:

Cocos en cadena corta

diplococo

Cocos Gram positivo con arreglos tales como pares o cadenas cortas (no se distingue bien la imagen, ya que se tomó una colonia muy pequeña)

Prueba de Catalasa:

Prueba catalasa negativa

Medio KF: *Crecimiento en pico de flauta. *Formación de ácido evidenciado por el viraje de color púrpura a amarillo.



Segundo dia de observación:

Caldo BHI salado: Crecimiento no confirmatorio ya que el medio no era el correcto.

NOTA: La prueba demostrativa de BHI salado ya había sido retirada cuando fuimos a observar.

Discusiones: Las pruebas fueron positivas de una manera muy clara. En el caso de agar BEM el crecimiento fue abundante y se evidenció la hidrólisis de

esculina en prácticamente toda la placa. En agar KF hubo crecimiento de colonias de un rosa oscuro y la producción de ácidos por la fermentación de carbohidratos. El mayor inconveniente que presentamos fue al momento de realizar un cultivo en caldo BHI salado puesto que el medio no era el indicado. Recomendaciones: Es necesario que las prácticas de laboratorio se realicen cuidadosamente desde el primer día en que se realiza la preparación de medios, esto facilita el trabajo y la identificación de microorganismos. Conclusiones: Logramos conocer las técnicas y medios utilizados para la identificación de Enterococcus. Podríamos concluir la presencia de Enterococcus Faecalis por las características selectivas de los medios utilizados, tanto la hidrólisis de esculina como el crecimiento de colonias rosadas en KF son típicas de dicho microorganismo. Sería recomendable realizar más pruebas para su certera confirmación. Bibliografía: 

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Acosta-Gnass, S. (actualizado agosto de 2005) “Enterococcus”. COdeINEP. Electrónico. Argenitina. Disponible en: http://www.codeinep.org/control/Enterococcus.pdf [Accesado 24 de febrero de 2016] MacFaddin, J. (2003) Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. Tercera edición. Buenos Aires. Médica Panamericana.