Practica 4 Tincion de Gram

UNIVERSIDAD POPULAR DELCESAR PROMAGA: LIC. EN CIENCIAS NATURALES AREA: LABORATORIO MATERIA: MICROBIOLOGIA PROF. IVONNE ACOSTA NIEVES Nombres y apellidos: Nataly Hernández Borrego, Karolay Jiménez Martínez, Alberto Jiménez Romero, José Miranda Camacho, Yenifer Valdés González. Grupo (02) Fecha de Entrega: 21/05/15 ACTIVIDAD PRÁCTICA Nº 4 OBJETIVOS GENERAL  Preparar correctamente un extendido para utilizarlo en la coloración y establecer una clara diferencia entre una bacteria Gram positiva y Gram negativa dependiendo de su pared celular en la tinción de Gram. OBJETIVOS ESPECÍFICO  Aprender a utilizar correctamente cada uno de los reactivos de la tinción de Gram.  Estudiar las características morfológicas y agrupaciones de las bacterias.  Observar una bacteria Gram positiva y Gram negativa y diferenciarla. INTRODUCCION Para visualizar mejor la morfología y agrupación de las células bacterianas, es indispensable realizar el extendido para colorear de manera correcta, ya que a pesar de que es un procedimiento supremamente sencillo, de obviar un solo así podríamos obtener coloraciones denominadas Gramvariables, esto es un Gram de difícil interpretación. Por otro lado, la coloración de Gram se convierte en el primer paso para el diagnostico microbiológico.

El tener claridad sobre la morfología y la agrupación de las bacterias es de suma importancia ya que la coloración de Gram se convierte en una herramienta valiosísima para el diagnostico preliminar y presuntivo de la bacteria observada, ya que nos puede dar una idea del posible agente infeccioso que esta causando la patología. PALABRAS CLAVES Tinción, extendido, bacterias, Gram positivas, Gram negativa, Gram variable. MATERIALES Y METODOS  Cultivos de S. áureos, Estreptococos, Basillus, E. coli, Klebsiella, Micrococcus  Porta objetos  Cristal violeta  lugol  alcohol cetona  safranina  solución salina  asa redonda  mechero  microscopio

1. Confección Del Frotis Para Colorear: abrimos una caja Petri con el cultivo sembrado, en este caso fueron 6 cultivos (S. áureos, Estreptococos,

Basillus, E. coli, Klebsiella, Micrococcus) tomamos una pequeña muestra y la diluimos en una gota de solución salina en un porta objeto y realizamos un extendido; fijamos la muestra flameando de 2 a 3 veces con el mechero de Bunsen. 2. Coloración de Gram: el frotis luego de estar fijado le realizamos la siguiente muestra: a) Cristal violeta: 1 minuto b) Lugol: 1 minuto c) Alcohol acetona: 30 segundos d) Safranina: 1 minuto Esperamos que seque la muestra a temperatura ambiente y visualizamos en el microscopio. RESULTADOS 1. S. AUREOS Bacteri a S. Áureos

5. KLEBSIELLA

6. MICROCOCCUS

Morfología

Agrupación

Tinción de Gram

Cocos

Estafilococo s

Gram variable

2. ESTREPTOCOCCOS

3. BACILLUS

4. E. COLI

DISCUSIÓN Identificación de las bacterias Gram positivas. Examinando el portaobjetos bajo el microscopio óptico, las bacterias Gram positivas se verán violetas debido al cristal violeta atrapado en sus gruesas paredes celulares. que tienen una gruesa capa de peptidoglicano y que presentan ácidos teicoicos en su superficie. Identificación de las bacterias Gram negativas. Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, lo que hace que estas no absorban el cristal violeta,

y se descolorizan con el alcohol acetona, tomando como único color el fucsia o rosado al agregarle la fucsina o safranina. 1. S. AUREOS Una bacteria Gram variable, es aquella que puede tomar tanto color violeta como fucsia luego de practicársele tinción de Gram; puede ser el resultado de un proceso erróneo, afectando así la certeza de los resultados. Sin embargo, la definición más aceptada de lo que en sí es una bacteria Gram variable es, que es una bacteria inicialmente Gram positiva que luego de ser cultivada o tratada se convierta en Gram negativa. Esto se debe a distinto factores que contienen éste tipo de bacterias que las hace variable. Bacteria S. Áureos:

Son cocos inmóviles, Gram positivos, se observa asociación en racimos irregulares (similar aún racimo de uvas), carecen de flagelos; son Gram positivas ya que el peptidoglucano forma aproximadamente el 50% del peso de la pared celular. Esta bacteria tiene un amplio espectro de factores que contribuyen para producir infecciones y enfermedad. Algunas cepas de S. aureus pueden producir un pigmento carotenoide que les da un color amarillo, el color es mas evidente en agares nutritivos. Las cepas habituales de S. aureus son resistentes a la penicilina, dejando como los antibióticos más eficaces para

combatirlos a los amino glucósidos, las cefalosporinas, la oxacilina o la nafcilina. 2. ESTREPTOCOCOS Es un grupo de bacterias formado por cocos Gram positivas, Estas bacterias crecen en cadenas o pares, donde cada división celular ocurre a lo largo de un eje.

La mayoría de las especies de Estreptococos son anaerobios facultativos (pueden adaptarse para crecer tanto en presencia como en ausencia de oxígeno), y algunos crecen únicamente en una atmósfera enriquecida con dióxido de carbono. Sus exigencias nutricionales son complejas, y su aislamiento requiere el uso de medios enriquecidos con sangre o suero. Son capaces de fermentar carbohidratos produciendo ácido láctico. 3. BACILLUS Es una bacterias en forma de bastón y Gram positiva (posee una gruesa capa de peptidoglicano),

Son aerobios estrictos o anaerobios facultativos. En condiciones

estresantes forman una endosporas, Viven en el suelo, agua del mar y ríos, aparte de alimentos que contaminan con su presencia. Aunque generalmente son móviles, con flagelos peritricos, algunas especies de interés sanitario son inmóviles. Hay especies productoras de antibióticos. 4. E. COLI La Escherichia coli (E. coli) es una bacteria Gram negativa, que no forman esporas, son móviles por flagelos.

Se encuentra en los intestinos de los animales y las personas. Existen muchas cepas de E. coli, y la mayoría resultan inofensivas, sin embargo, existe una variedad peligrosa,, que produce una poderosa toxina (Shiga) que puede originar graves enfermedades, como el Síndrome Urémico Hemolítico, que puede desencadenar un fallo renal. 5. KLEBSIELLA La bacteria Klebsiella es un bacilo Gram negativo, es anaeróbica facultativa, inmóvil, con una prominente capsula de polisacáridos.

Las bacterias Klebsiella pueden encabezar un amplio rango de estados infecciosos, sobre todo neumonía.

Entre ellos, cabe destacar los siguientes:  Klebsiella pneumoniae: infecciones del tracto urinario, septicemia, e infecciones de tejidos blandos.  Klebsiella ozaenae: rinitis atrófica.  Klebsiella rhinoscleromatis: infecciones en vías respiratorias, causando oescleroma. 6. MICROCOCCUS Son bacterias Gram positivas con células esféricas, tiene una gruesa pared celular que puede abarcar tanto como el 50% del materia celular. Su genoma es rico en guanina y citosina.

Se encuentran en ambientes diversos, incluyendo agua y suelo, también se encuentran en la piel de los mamíferos. Son anaeróbicos facultativos, aunque no forman esporas, las células de Micrococcus pueden sobrevivir durante largos periodos: cultivos no protegidos en muestras de suelo han revivido después de estar almacenados en un refrigerador durante 10 años. CONCLUSION Luego de dado por terminado este laboratorio podemos concluir que la tinción de Gram es un método muy importante ya que permite el estudio de las estructuras internas de la célula bacteriana, tales como paredes

celulares. Y estas se diferencian en su fundamento; ya que en las Gram negativas la capa de peptidoglucano es delgada, y por esta razón no sostienen el cristal violeta quedando de color fucsia y en las Gram positivas es gruesa y al agregarles el alcohol cetona si sostienen el cristal violeta quedando de color azul-violeta. INVESTIGACION 1. los pasos que se deben realizar para confeccionar correctamente un frotis para colorear a partir de cultivos sólidos, líquidos y secreciones corporales. a) En una placa limpia se adiciona media gota de solución salina. b) Con un haza redonda tomamos muestra del cultivo puro y se emulsiona en la placa. c) Se extiende por toda la placa de manera uniforme d) Fijamos el extendido flameándolo 3 veces y dejándolo secar. 2. Digas los pasos de la coloración Gram. a) Para confeccionar un extendido para colorear debemos seguir estos pasos: b) añadimos cristal violeta dejándolo actuar por 60 segundo, luego enjuagamos con abundante agua teniendo en cuenta no dañar el extendido. c) Adicionamos lugol durante 60 segundos y enjuagamos d) Agregamos alcohol cetona durante 30 segundos y enjuagamos. e) Añadimos safranina durante 60 segundos, enjuagamos y

ya es posible analizar el extendido. 3. ¿por qué razón no debe sobre calentarse el extendido en el proceso de su fijación? Al sobrecalentar la muestra se puede distorsionar o llegar a causar la muerte del microorganismo. 4. ¿Cuál es el paso más crítico en la coloración Gram y porque? El paso mas critico es la decoloración del extendido usando alcohol cetona ya que solo son 30 segundos que se debe dejar actuar, si nos pasamos de ese tiempo distorsionaríamos la muestra en este caso son llamadas Gram variable siendo difícil su interpretación. 5. ¿Cuál es la morfología típica y la agrupación de las células bacterianas? COCOS: diplococos estreptococos, estafilococos, tétradas y sarcinas.

BACILOS: diplobacilos, estrectobacilos, en v, empalizados y letras chinas.

ESPIRILO:

6. Averigüe que bacterias no se tiñen con la coloración Gram y porque. Las micobacterias son las únicas que no se tiñen con la coloración Gram. Con las micobacterias son de genero micobacterias, en algunos casos se considera como Gram positivas pero no parecen encajar en esta categoría ya que no retienen el colorante cristal violeta y se consideran como bacterias acido resistentes Gram positivas. 7. ¿Qué es la bacteria pleomorfica?

Son bacterias que no tienen una morfología definida sino que pueden tomar una forma u otra. El pleomorfismo en biología es un término que define la aparición de dos o más formas estructurales en un organismo. WEBGRAFIA  http://es.slideshare.net/tato762/t incin-de-gram-25801593  http://es.scribd.com/doc/516272 28/PRACTICA-3-La-Coloracionde-Gram#scribd  http://tareasmedicina.blogspot.c om/2010/08/procedimiento-yanalisis-deresultados_1110.html