Práctica 4 - Determinación de La Actividad Enzimática
July 4, 2022 | Author: Anonymous | Category: N/A
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@uía hg Zrádtedas hg Oenquímeda E E
Zrádteda K² 8 Hgtgrmekadeôk hg la adtevehah gkzemáteda Dnmplgtar la se`uegktg taola y glg`er uk dnlnr hg tgxtn pnr gstuheaktg (pgrsnkal) para traoabar gl cnrmatn dnmpartehn dnk su gquepn (Gl cnrmatn gstará hespnkeolg gk @nn`lg Hrevg para qug sga traoabahn pnr gl gquepn gk tegmpn rgal)
@rupn Mgsa
Ektg`raktgs _nsa Zarghgs (Wtelezará gstg dnlnr para tnhn gl traoabn, gvehgkdea qug sgrá utelezaha para su dalecedadeôk) dalecedadeôk)
E. EKX_NHWDDENK Las gkzemas snk prntgíkas (dnk gxdgpdeôk hgl pgqugñn `rupn hg mnlådulas hg _KA dnk adtevehah datalíteda) prgsgktgs gk tnhas las dålulas y nr`akesmns vevegktgs, qug adglgrak las rgaddenkgs químedas llgvákhnlas más rápehamgktg a su pnsedeôk hg gqueleoren. Aukqug las gkzemas gsták subgtas a las mesmas lgygs hg la katuralgza qug re`gk las prnpeghahgs hg ntras sustakdeas, hecegrgk hg la datáleses químeda nrhekarea gk varens aspgdtns empnrtaktgs2 1. Las rgaddenkgs qug datalezak las gkzemas snk maynrgs pnr uk cadtnr hg 1: 3 a 1:1? qug las rgaddenkgs químedas. ?. Las rgaddenkgs gkzemátedas ndurrgk a tgmpgratura dnrpnral, dnkhedenkgs knrmalgs hg prgseôk y a uk pF prôxemn a la kgutralehah, megktras qug uka gcedegktg datáleses químeda a mgkuhn rgquegrg tgmpgraturas y prgsenkgs glgvahas y uk pF gxtrgmn ekdnmpateolg dnk la veha 4. Las gkzemas tegkgk uka maynr gspgdecedehah pnr gl sustratn qug la datáleses químeda y raramgktg sg cnrmak prnhudtns dnlatgralgs. 8. La adtevehah datalíteda hg mudfas gkzemas gstá snmgteha a prndgsns rg`ulatnrens. Znr gbgmpln2 Zrntgek quekasa A. Xårmekns usahns gk gstuhens hg adtevehah gkzemáteda2
Sglndehah hg rgaddeôk2 Gs gl damoen hg daktehah (mnlgs n `ramns) hg sustratn n hg lns prnhudtns hg la rgaddeôk pnr ukehah hg tegmpn.
Gsdugla Zrncgsenkal hg Carmadea y Oenquímeda
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@uía hg Zrádtedas hg Oenquímeda E E
Apngkzema2 La apngkzema gs la partg prntgeda hg la gkzema y gs datalítedamgktg ekadteva9 la maynría hg gkzemas rgquegrg para su adtevehah dncadtnrgs n `rupns prnståtedns.
Dncadtnrgs2 Tnk mnlådulas nr`ákedas n eknr`ákedas qug las gkzemas rgquegrgk para su adtevehah. La ukeôk dncadtnr gkzema sg rgaleza gk uka cnrma muy laxa. Gbm2 Du?+, Rk?+, M`?+, CAH, KAH, gktrg ntrns.
@rupn prnståtedn2 Mnlådula nr`ákeda n eknr`ákeda qug sg gkdugktra cugrtgmgktg ukeha a la apngkzema. Gbm2 @rupn Fgm hg la detndrnmn nxehasa, qug para hesndearsg hg la gkzema rgquegrg ádehns cugrtgs.
Fnlngkzema2 La ahedeôk hgl dncadtnr n hgl `rupn prnståtedn a la apngkzema cnrma la fnlngkzema, qug gs la gkzema adteva.
Tustratn2 Gs la mnlådula snorg la dual adtòa la gkzema para cnrmar prnhudtns. GTZGDECEDEHAH GKREMÁXEDA U DGKX_N ADXESN La gspgdecedehah gs la prgcgrgkdea qug prgsgktak las gkzemas pnr degrtns sustratns. Gk al`ukns dasns gsta gspgdecedehah gs aosnluta9 así la adgteldnlekgstgrasa adtòa snorg la adgteldnleka, pgrn kn snorg ntrns åstgrgs hg dnleka más `rakhgs qug gl adgteln. Gk ntrns dasns, la gspgdecedehah gs más amplea y la gkzema adtòa snorg hecgrgktgs akáln`ns hg uk sustratn gspgdícedn9 así, la fgxnquekasa dataleza la cnscnreladeôk hg `ludnsa, crudtnsa, maknsa, `ludnsameka y ?-hgsnxe`ludnsa, pgrn a vglndehahgs hg rgaddeôk hecgrgktgs. La gspgdecedehah hg la gkzema rgsehg gk gl dgktrn adtevn, qug gs la rg`eôk hg la supgrcedeg gkzemáteda qug sg ukg al sustratn (y al `rupn prnståtedn se gxestg) y qug dnksestg gk uka a`rupadeôk hg rgsehuns hg ameknádehns qug partedepak gk la cebadeôk hgl sustratn y la cnrmadeôk y ruptura r uptura hg lns gkladgs. Gk gstg seten, la gstrudtura tgrdearea hg la gkzema gstá dnkce`uraha hg tal cnrma qug lns rgsehuns hg ameknádehns qug gsták muy lgbns gk la sgdugkdea lekgal pughgk qughar prôxemns g ektgrrgladenkarsg más gstrgdfamgktg qug ln rgsehuns ahyadgktgs, drgakhn así uka rg`eôk hnkhg fay uk nrhgkamegktn ôptemn hg `rupns eôkedns npugstns y rg`enkgs fehrôcnoas dnk hemgksenkgs mnlgdulargs aprnpeahas, para cnrmar uka gstrudtura qug adnmnhg al sustratn gspgdícedn para la datáleses.
DEKÅXEDA GKREMÁXEDA2 Gstuhea la vglndehah hg las rgaddenkgs datalezahas pnr gkzemas. Gstns gstuhens prnpnrdenkak ekcnrmadeôk hergdta adgrda hgl mgdakesmn hg la rgaddeôk datalíteda y hg la gspgdecedah hgl gkzema. La vglndehah hg uka rgaddeôk datalezaha pnr uka gkzema pughg mghersg dnk rglateva cadelehah, ya qug gk mudfns dasns kn gs kgdgsaren purecedar n aeslar la gkzema. La mgheha sg rgaleza segmprg gk las dnkhedenkgs ôptemas hg pF, tgmpgratura, prgsgkdea hg dncadtnrgs, gtd, y sg utelezak dnkdgktradenkgs saturaktgs hg sustratn. Gk gstas dnkhedenkgs, la vglndehah hg rgaddeôk nosgrvaha gs la vglndehah máxema (Smax). La vglndehah pughg hgtgrmekarsg oegk mehegkhn la aparedeôk hg lns prnhudtns n la hgsaparedeôk hg lns rgadtevns gk cukdeôk hgl tegmpn.
CN_MAT HG GVZ_GTA_ LA ADXESEHAH DAXALÍXEDA HG WKA GKREMA Lns kevglgs gkzemátedns sg mehgk pnr su adtevehah datalíteda gk dnkhedenkgs dnktrnlahas. Gxestg gk la letgratura hecgrgktgs cnrmas hg gxprgsar la adtevehah hg uka hgtgrmekaha gkzema. La multepledehah hg Gsdugla Zrncgsenkal hg Carmadea y Oenquímeda
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@uía hg Zrádtedas hg Oenquímeda E E
ukehahgs fa hahn lu`ar a dnkcuseôk y gl usn hg måtnhns muy vareahns pnr lns hestektns laonratnrens, gk vesta hg glln, la Wkeôk Ektgrkadenkal hg Oenquímeda gk 1531 hgcekg la Wkehah Ektgrkadenkal (WE) •
Wkehah hg gkzema (WE)2 daktehah hg gkzema qug dataleza la dnkvgrseôk hg 1 ·mnl hg sustratn gk prnhudtn(s) gk 1 mekutn hg rgaddeôk, oabn dnkhedenkgs pprgveamgktg rgveamgktg hgtgrmekahas.
Ntras cnrmas hg gxprgsar la adtevehah gkzemáteda •
Dnkdgktradeôk hg gkzema2 ukehahgs hg gkzema pnr ml hg snludeôk. (WE/ml)
•
Adtevehah gspgdíceda (WE/m`)2 adtevehah gkzemáteda gk WE pnr mele`ramn hg prntgíkas
•
Iatal2 daktehah hg gkzema qug dataleza la dnkvgrseôk hg 1 mnl hg sustratn gk prnhudtn (s) gk 1 sg`ukhn. Adtevehah gspgdíceda2 iatal/i` hg prntgíka.
Gk la prgsgktg prádteda semulargmns la prgparadeôk hg uk gxtradtn druhn hg pákdrgas pnrdekn para la hgtgrmekadeôk hg la adtevehah gkzemáteda hg la gkzema alca amelasa pakdrgáteda.
Alca amelasa pakdrgáteda La gkzema alca-amelasa sg gkdugktra prgsgktg gk dase tnhns lns nr`akesmns vevns, hgshg dålulas prndarentas (oadtgreas hgl `åkgrn Oadellus, Gsdfgredfea, Gsdfgredfea, gtd.) y gudarentas (nre`gk còk`edn hgl `åkgrn Aspgr`ellus, Taddfarnmydgs, Taddfarnmydgs, gtd), fasta plaktas supgrenrgs (maíz, tre`n, dgoaha, gtd.), artrôpnhns (Hrnsnpfela) y mamícgrns (dgrhns, ratnkgs, fumakns, gtd.). Gsta gkzema gs uka `lednprntgíka qug dataleza la fehrôleses hg la dahgka hg amelnsa y amelnpgdteka hgl almehôk, rnmpegkhn gkladgs (1.8) ektgrenrgs para har lu`ar a uka mgzdla hg hgxtrekas. Tu pgsn mnlgdular gs hg aprnxemahamgktg 7: iHa y rgquegrg Da+? y Dl-.
EE. MAXG_EALGT 2
Alca amelasa amelasa 1HFI
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Laonratnren hg gkzemas2 mykgwoytg.dnm
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gmael2 gWkmhsmJkgwoytg.dnm gWkmhsmJkgwoytg.dnm passwnrh2 gWkmhsm Artídulns degktícedns
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EEE. NOBGXESNT •
Hgsdreoer la gstrudtura prntgeda hg la gkzema alca-amelasa pakdrgáteda pnrdeka
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_gdnkndgr lns dnmpnkgktgs y las dnkhedenkgs hg rgaddeôk para hgtgrmekar la adtevehah gkzemáteda hg la alca-amelasa
Gsdugla Zrncgsenkal hg Carmadea y Oenquímeda
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Glaonrar uk clubn`rama para prgparar uk gxtradtn druhn a parter hg pákdrgas pnrdekn9 dnksehgrakhn lns duehahns para dnksgrvar la adtevehah gkzemáteda hg la alca amelasa pakdrgáteda.
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Hgtgrmekar la adtevehah gkzemáteda y gspgdíceda hg la alca amelasa gk gl gxtradtn druhn.
Gsdugla Zrncgsenkal hg Carmadea y Oenquímeda
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ES. ZA_XG Z_NDGHEMGKXAL 1. Gstrudtura prntgeda hg la alca amelasa Hgsdreoer la gstrudtura prntgeda hg la alca-amelasa pakdrgáteda pnrdeka. Wteledg al`ukns prn`ramas oenekcnrmátedns qug usô gk las dlasgs a aktgrenrgs 1.1. Zrgsgktar la ce`ura
1.?. Dnmplgtar la se`uegktg taola (kevglgs hg nr`akezadeôk hg la prntgíka y dnmpnkgktgs gstrudturalgs) Hgtallar Zremarea Tgdukharea Xgrdearea Duatgrkarea Ameknádehns qug dnkcnrmak gl dgktrn adtevn Apngkzema Fnlngkzema
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?. Dnmpnkgktgs hg la rgaddeôk gkzemáteda Ekhedar lns dnmpnkgktgs kgdgsarens para hgtgrmekar la adtevehah gkzemáteda hg la gkzema alcaamelasa. fttps2//www.se`maalhredf.dnm/dataln`/prnhudt/se`ma/a4103>lak`=gk&rg`enk=ZG Dnmpnkgktg hg la rgaddeôk Hgtallar dnkdgktradenkgs y pF hg sgr kgdgsaren Xampôk hg rgaddeôk Dncadtnr Adtevahnr Tustratn Gkzema
4. Mgdakesmn hg rgaddeôk hg la alca amelasa Ek`rgsar al laonratnren hg gkzemas2 gkzemas2 mykgwoytg.dnm
gmael2 gWkmhsmJkgwoytg.dnm gWkmhsmJkgwoytg.dnm passwnrh2 gWkmhsm Wtelezakhn gl prn`rama ekcnrmátedn gxplequg gl mgdakesmn hg rgaddeôk hg lg gkzema
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8. Mgkdenkg hecgrgktgs cugktgs hg notgkdeôk hg alca amelasa
7. Zrgparadeôk hg uk gxtradtn druhn para mgher la adtevehah gkzemáteda hg alca amelasa
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Zgsar aprnxemahamgktg 1 ` hg pákdrgas pnrdekn almadgkahn a —6: ºD snorg papgl paracelm (gvetar qug gl tgbehn sg hgsdnk`glg). Dnlndarln snorg uka luka hg rglnb cría, añaher rápehamgktg 1 mL hg tampôk hg leses crín (Ouccgr cnscatn ?: mM pF 3.5 y KaDl 3 mM) y dnk uka tebgra hg hesgddeôk hesmekuer gl tamañn hgl tgbehn.
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Xrasvasar la suspgkseôk uk tuon lempenhgyZnttgr, fnmn`gkezar snkedahnr, prgksa crakdgsa,gkfnmn`gkezahnr mnrtgrn gl dnktgbehn pelôk,utelezakhn gtd) snorg(mekeprndgsahnra, uk rgdepegktg dnk fegln (gl tegmpn y vglndehah sg gstaolgdgrá gk cukdeôk hgl gquepn). Añaher gl vnlumgk dnrrgspnkhegktg hg tampôk hg leses kgdgsaren para maktgkgr la prnpnrdeôk tgbehn/vnlumgk hg tampôk gk ?:: m`/mL hg tampôk. Dgktrecu`ar a 1::: ` huraktg 1: mek, sgparar gl snorgkahaktg.
Gl gxtradtn druhn hgog gstar dnksgrvahn tnhn gl tegmpn snorg fegln para gvetar la hgskaturalezadeôk hg las prntgíkas. Glaonrar uk clubn`rama hnkhg sg hgtallgk lns pasns para la prgparadeôk hg uk gxtradtn druhn a parter hg pákdrgas onvekn9 dnksehgrakhn lns duehahns para dnksgrvar la adtevehah gkzemáteda hg la alca amelasa pakdrgáteda.
Gsdugla Zrncgsenkal hg Carmadea y Oenquímeda
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Gsdugla Zrncgsenkal hg Carmadea y Oenquímeda
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8.1. Hgtgrmekadeôk Hgtgrmekadeôk hg la adtevehah gkzemáteda Hgtgrmekargmns la adtevehah gkzemáteda y gspgdíceda hg la alca amelasa gk gl gxtradtn druhn prgparahn. Dnmplgtar gk la taola lns rgadtevns rgqugrehns ekhedakhn las ukehahgs
_gadtevns
Olakdn
Mugstra
Xampôk hg rgaddeôk Dncadtnr Adtevahnr Tustratn Zrgekduoar lns tuons a 40 ºD huraktg 7 mek
_gadtevns
Olakdn
Gkzema
Mugstra ---
Ekduoar lns tuons a 40 ºD huraktg 1: mek
_gadtevns
Olakdn
Mugstra
HKT Gkzema
--
Ekduoar lns tuons a 1:: ºD huraktg 7 mek. Gkcrear a Xº amoegktg. A dnktekuadeôk, mgher la aosnroakdea a lns tuons hg rgaddeôk a 78: ʼnm. Gxpledar gl cukhamgktn hgl usn hgl rgadtevn HKT
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@uía hg Zrádtedas hg Oenquímeda E E
DÁLDWLNT Olakdn Aosnroakdea 78:
Mugstra
ʼnm
Aosnroakdea rgal Aos./mek
Durva hg Daleoradeôk utelezakhn maltnsa dnmn gstákhar.
Wkehahgs ektgrkadenkalgs (WE)
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Adtevehah gspgdíceda
Duaktecedadeôk hg la dnkdgktradeôk hg prntgíkas gk gl gxtradtn prgparahn
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