Práctica 3: Caracterización Del Género Pseudomonas.: Facultad de Ciencias Químicas de La B. U. A. P

 

Práctica 3: Caracterización del género P seudomo seudomonas nas. Número de cepa: 3.

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA.

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS DE LA B. U. A. P.

LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO.

 ASIGNATURA: LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA 1.

Práctica #3: “Caracterización del género

Pseudomonas”. 

FACILITADOR: MENESES SÁNCHEZ MARÍA DE LA CRUZ.

 ALUMNO: LÓPEZ PEÑA DAVID.

FECHA: 13 DE SEPTIEMBRE DE 2022.

OTOÑO 2022.

 

Práctica 3: Caracterización del género P seudomo seudomonas nas. Número de cepa: 3.

Introducción: Las especies de Pseudomonas  son bacilos aerobios gramnegativos que miden de 0.5 a 0.8 μm por 1.5 a 3.0 μm. La mot ilidad es por un solo flagelo polar. Las especies se distinguen mediante pruebas bioquímicas y de hibridación de ADN. Las especies de Pseudomonas   normalmente habitan en el suelo, el agua y la vegetación y pueden aislarse de la piel, la garganta y las heces de personas sanas.

 A menudo colonizan de la los comida, los fregaderos, fregader os, los grifos, trapeadores trapead y los equipos respiratorios hospitales. La propagación es delos paciente a ores paciente a través del contacto con fómites o por ingestión de alimentos y agua contaminados. Pseudomonas aeruginosa  y P maltophilia  representan el 80 por ciento de las infecciones oportunistas por Pseudomonas . La infección por Pseudomonas aeruginosa es un problema grave en pacientes hospitalizados con cáncer, fibrosis quística y quemaduras; la letalidad letalida d es del 50 por por ciento. Otras infecciones causadas por especies de Pseudomonas  incluyen endocarditis, neumonía e infecciones del tracto urinario, sistema nervioso central, heridas, ojos, oídos, piel y sistema musculo esquelético. El diagnóstico se establece mediante el cultivo, las colonias crecen rápidamente y producen pigmentos característicos; Pseudomonas   se identifica por las características de sus colonias y por pruebas bioquímicas sencillas:   La presencia de citocromo oxidasa en la especie de Pseudomonas   se emplea para distinguirla de las Enterobacteriaceae  y S tenotropho tenotrophomonas monas .    Las colonias son brillantes y pueden ser azules verdes o cafés (dependiendo del pigmento secretado).   Son oxidasa positiva.   Característicamente Característicam ente el cultivo muestra fluorescencia al exponerlo a la luz ultravioleta.   Olor a uvas o nixtamal por la producción de trietilaminas. trietilaminas .   Morfología: Grandes, lisas, rugosas, mucoides o secas, gelatinoides.   Algunas sepas presentan beta-hemolisis 

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Estas bacterias son resistentes a diversos antibióticos antibiótic os y poseen una gran capacidad para adquirir nuevos mecanismos de defensa. Frecuentemente se recomienda el tratamiento con ceftazidima en monoterapia o combinarlo con amikacina. El tratamiento de las Infecciones por P. aeruginosa es de lo más complicado; es necesario suministrar medicamentos con anti Pseudomonas   (carbenicilina o ticarcilina) combinadas con aminoglucósidos Medicamentos como: Penicilinas (anti Pseudomonas ) Cefalosporinas Carbapenemas Monobactámicos  Aminoglucósidos  Aminoglu cósidos (gentamicina (gentamicina,, trobamicina) trobamicina)

 

Práctica 3: Caracterización del género P seudomo seudomonas nas. Número de cepa: 3.

Objetivo: Demostrar las particularidades bioquímicas y de cultivo del género Pseudomonas . Materiales:

  Aza en punta.   Aza en círculo.

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Mechero. Tubo MIO. Tubo TSI. Tubos con O/F con glucosa. Tubo con agar Cetrimida. Equipos de tinción de Gram (cristal violeta, Lugol, alcohol cetona, safranina).

  Placas con agar sangre de carnero.

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Placas con agar Mac Conkey. Reactivo para catalasa. Portaobjetos. Benzal. Algodón. Cepas con diferentes especies de Pseudomonas .

Resultados:

Pseudomonas   logro tener crecimiento en ambas placas, aquí es importante declarar que placa con Mac Conkey no cambio (de rosita a amarillo) por lo que selaconcluye queagar Pseudomonas tiene de un color metabolismo fermentativo; del mismo modo, en la placa con agar sangre de carnero se observa que su coloración también cambio (de rojo a rojo oscuro con tonalidades café canela) por lo que se concluye que nuestra cepa produce hemólisis.

Ilustración 1: Crecimiento de nuestra bacteria en agar Mac Conkey, se observa un pigmento verdoso en el agar. 

Ilustración 2: Crecimiento de nuestra bacteria en agar gelosa sangre, se observan colonias blanquecinas cremosas. 

 

Práctica 3: Caracterización del género P seudomo seudomonas nas. Número de cepa: 3.

Para la prueba bioquímica TSI se obtuvieron resultados donde es un K/K o K/SC es decir alcalino/alcalino o alcalino/sin cambio lo cual indica que la bacteria no fermenta carbohidratos.

Ilustración 3: Crecimiento en TSI, indica que la bacteria no fermenta carbohidratos. 

Para la prueba del metabolismo se utilizó un medio O/F, donde los resultados son que la bacteria es de metabolismo oxidativo debido a la coloración amarillenta que generó en la superficie del tubo al ser cultivada.

Ilustración 4: Crecimiento en medio O/F, presencia de metabolismo oxidativo. 

Para la prueba de movilidad realizada en un medio MIO, se obtuvieron los resultados de una movilidad positiva ya que presento turbidez en la muestra.

Ilustración Crecimiento medio MIO,

5: en la

movilidad  positiva.  

es

  

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 A un tubo con agar cetrimida se le inoculo una parte del aislamiento aislamiento de Pseudomonas , el resultado fue la visualización de pigmentos verdes jade lo que indica la presencia de pioverdina (pigmento característico en Pseudomonas aeruginosa).

Ilustración 6: Pigmento verde jade visto en tubo con agar cetrimida. 

Ilustración 7: Visión, a luz UV, de tubos con agar cetrimida donde se ve mejor el pigmento verde jade.  

Ilustración 8: Prueba de catalasa positiva, indicada por la presencia de burbujeo 

Para la prueba de catalasa se utilizó el reactivo de catalasa (peróxido de hidrógeno), la cual arrojo un resultado positivo debido a que hubo presencia de burbujeo en el lugar en donde se aplicó el inoculo en el portaobjetos.

En la tinción de Gram, se obtuvieron bacilos Gram negativos en la muestra, como se logra observar en las imágenes.

Ilustración 9: Tinción de Gram, en la imagen se logran observar bacilos

Ilustración 10: Frotis teñido con los colorantes de Gram. 

 

Práctica 3: Caracterización del género P seudomo seudomonas nas. Número de cepa: 3.

Cuestionario:

1. ¿Cuál es la importancia del género Pseudomonas ? La persistencia de determinados microorganismos tales como Pseudomonas   la hacen de mayor importancia intrahospitalaria ya que, aunque es una patógena oportunista es la causa principal de mortalidad en pacientes con fibrosis quística, enfermedades neoplásicas y quemaduras severas, por lo mismo desarrolla gran resistencia ante algunos antibióticos. También es patógena cuando se introduce en zonas desprovistas de defensas normales. (por ejemplo, cuando hay solución de la continuidad de mucosas y de la piel por lesión directa del tejido; cuando se utilizan catéteres intravenosos o sondas urinarias; o cuando hay neutropenia, como en el caso de quimioterapia antineoplásica). 2. ¿Qué pruebas de laboratorio permiten diferenciar una enterobacteria del género Pseudomonas ? Prueba de oxidasa:  Todas las Enterobacteriaceae   son oxidasa negativa  mientras que Pseudomonas  es oxidasa positiva. Prueba de  mientras metabolismo:   E nteroba presenta un metabolismo nterobacteri cteriacea aceae e  un fermentativo que Pseudomonas  presenta metabolismo oxidativo. Agar MacConkey: Pseudomonas  no fermenta lactosa y se distingue fácilmente de las bacterias fermentadoras de lactosa.

3. ¿Para qué es útil el medio O/F O/F y cuál es su fundamento? El medio O/F o de fermentación de glucosa es un agar semi-sólido especialmente diseñado para el estudio del metabolismo oxidativo y fermentativo de los carbohidratos en un grupo importante de microorganismos diferente a las enterobacterias, denominados bacilos Gram negativos no entéricos. Este medio nos permite identificar si la bacteria a analizar realiza un metabolismo oxidativo o fermentativo anaerobiosis. y, por ende, si realiza respiración en condiciones de aerobiosis o Fundamento: El medio O/F contiene sustancias nutritivas que garanticen el crecimiento bacteriano; estas sustancias son las peptonas y el carbohidrato (dextrosa) proporciona energía y a la vez sirve para estudiar el comportamiento del microorganismo frente a él, es decir, permite clasificar a la bacteria como un organismo oxidativo, fermentativo o no inerte. Algunos microorganismos pueden utilizar los carbohidratos por la vía oxidativa o por la vía fermentativa, mientras que otros no toman ninguna de las dos vías. 4. ¿Por qué es importante utilizar el medio Seller´s, en la identificación de Pseudomonas ?

 

Práctica 3: Caracterización del género P seudomo seudomonas nas. Número de cepa: 3.

El Agar Sellers es un medio muy útil para identificar y diferenciar bacilos Gram negativos y no fermentadores, como Pseudomonas aeruginosa  y  A lcalig enes  faecalis . La diferenciación se basa en la detección de fluorescencia, oxidación de la glucosa, producción de nitrógeno gaseoso y cambios de pH, a partir de muestras clínicas y otros materiales. 5. ¿Qué pruebas de laboratorio son útiles para diferenciar especies de Pseudomonas ?   Prueba con piocianina.   Prueba con pioverdina.   Reducción de nitritos.   Crecimiento a temperatura de 42°C. 

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Conclusión:

Mediante la realización correcta de la metodología expuesta en el manual se logró identificar a una de las especies del género Pseudomonas : Pseudomonas

aeruginosa. La prueba confirmatoria nos la otorga el agar cetrimida, ya que Pseudomonas aeruginosa, al momento de ser iluminado ilum inado con luz UV, nos ofrece un pigmento color col or verde jade llamado pioverdina. Bibliografía:

Iglewski BH. Pseudomonas. En: Barón S, editor. Microbiología médica. 4ª edición. Galveston (TX): rama médica de la Universidad de Texas en Galveston; 1996. Capítulo 27. Disponible en:  en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK8326/   Cowan, S. T., Steel, K. J., Barrow, G. I., & Feltham, R. K. A. (2003) Cowan and Steel’s manual for the identification of medical bacteria. Cambridge: Cambridge University Press. Koneman, E. w. (Koneman diagnòstico microbiològico: Texto y atlas en color. Buenos Aires: Panamericana.