Práctica 1: Aplicación de Los Criterios de Cowan y Steel para La Identificación de Bacterias

 

Práctica 1: Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación d dee bacterias.  Número de cepa: 18.

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA.

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS DE LA B. U. A. P.

LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO.

 ASIGNATURA: LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA 1.

Práctica #1: “  Aplicación  Aplicación

de los criterios de Cowan y Steel

 para la identificación de bacterias”.

FACILITADOR: MENESES SÁNCHEZ MARÍA DE LA CRUZ.

 ALUMNO: LÓPEZ PEÑA DAVID.

FECHA: 30 DE AGOSTO DE 2022.

OTOÑO 2022.

 

Práctica 1: Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación d dee bacterias.  Número de cepa: 18.

Introducción:

Una de la tarea fundamental del laboratorio de microbiología es la aplicación de una metodología precisa que permita la identificación de los microorganismos implicados en procesos clínicos asociados a infecciones o de aquellos que tienen relación con el hombre. Cowan y Steel establecieron un grupo de pruebas prim arias primarias las cuales seson puede determinar género a los cuales pertenece; los criterios de con Cowan y Steel un conjunto de pruebas que agrupan a las bacterias dentro de un género especifico, lo cual va a ayudar al profesional en una orientación de las pruebas siguientes a realizar para llegar a la especie bacteriana y así poder dar un correcto diagnóstico y por consiguiente un tratamiento en los casos clínicos. La identificación de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de características y diferentes criterios en la evaluación de similitudes. Las pruebas que incluyen los criterios de Cowan y Steel son: 1. Tinción de Gram: Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana (cocos, bacilos, cocobacilos) como para poder realizar unaprimera aproximación a la diferenciación bacteriana por la estructura de su membrana (Gram + o Gram -). 2. Tinción de Shaeffer-Fulton: Es una tinción especifica que permite observar la presencia o ausencia de esporas en la muestra de bacilos Gram positivos. 3. Tinción de Zielh-Nelssen: Es una técnica de tinción diferencial, usada para la identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR)  y solo se realiza para bacilos Gram positivos 4. Metabolismo: Mediante esta prueba se va a determinar si la utilización de los hidratos de carbono por parte de un microorganismo se realiza por vía oxidativa (proceso aeróbico, presencia de oxígeno), por vía fermentativa (proceso anaeróbico, ausencia de oxígeno) o es inerte. 5. Producción de catalasa:  Permite observar la presencia de la enzima catalasa, bacterias que sintetizan catalasa hidrolizan hidrógeno las en agua y oxigeno gaseoso que se libera en formaeldeperóxido burbujas.de 6. Producción de oxidasa: Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. 7. Movilidad: Permite observar la movilidad o la no movilidad de una bacteria al inocularla por punción en un tubo. 8. Requerimientos de aerobiosis y anaerobiosis:  Las bacterias se clasifican en función de sus requerimientos atmosféricos: a. Aerobias estrictas, que crecen solo en presencia de oxígeno. b. Anaerobias estrictas, que solo crecen en ausencia de oxígeno. c. Facultativas, que crecen tanto en aerobiosis como en anaerobiosis. d. Microaerofilicas, Microaerofili cas, que crecen mejor en una atmosfera con reducida concentración de oxígeno.

 

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9. Producción de ácido a partir de glucosa: Se realiza en un medio TSI, mide la capacidad de producir ácido y gas a partir de glucosa u otro carbohidrato en el medio. Objetivo:

Realizar, tomando como base los criterios establecidos por Cowan y Steel, las pruebas bioquímicas fundamentales, que permiten la identificación presuntiva de las bacterias de interés médico. Materiales:

             

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Aza en punta. Aza en círculo. Mechero. Tubo MIO. Tubo TSI. Tubos con O/F con glucosa. Equipos de de tinción de Gram (cristal violeta, Lugol, alcohol cetona, safranina).

  Placas con agar nutritivo o soya tripticasa.   Reactivo para catalasa.   Portaobjetos.   Benzal.   Algodón.   Cepas de bacilos gramnegativos fermentadores y no fermentadores.

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Resultados:

La bacteria logro tener crecimiento en aerobiosis y anaerobiosis por lo que se concluye que es una bacteria anaeróbica facultativa.

Ilustración 1: La bacteria logró crecer en condiciones de anaerobiosis. 

Ilustración 2: La bacteria logró crecer en condiciones de aerobiosis. 

 

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Para la prueba bioquímica TSI se obtuvieron resultados donde es un A/A es decir ácido/ácido lo cual indica que la bacteria fermenta glucosa, lactosa o sacarosa.

Ilustración 3: Crecimiento en TSI, indica  presencia de ácido (A/A). 

Para la prueba del metabolismo se utilizó utili zó un medio O/F, donde los resultados son que la bacteria es de metabolismo fermentativo debido a la coloración amarillenta que genero al ser cultivada.

Ilustración 4: Crecimiento en medio O/F,  presencia de metabolismo fermentativo. 

 

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Para la prueba de movilidad realizada en un medio MIO, se obtuvieron los resultados de una movilidad positiva ya que presento turbidez en la muestra.

Ilustración 5: Crecimiento en medio MIO, la  presencia de turbidez indica movilidad  positiva. 

Para la prueba de catalasa se utilizó el reactivo de catalasa (peróxido de hidrógeno), la cual arrojo un resultado positivo debido a que hubo presencia de burbujeo en el lugar en donde se aplicó el inoculo en el portaobjetos. Ilustración 6: Prueba de catalasa positiva, la presencia de burbujeo confirma el resultado. 

En la tinción de Gram, se obtuvieron bacilos Gram negativos en la muestra como se logra observar en las imágenes.

Ilustración 7: Frotis teñido con los colorantes de Gram. 

Ilustración 8: Tinción de Gram, en la imagen se observan bacilos Gram negativos.

 

 

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Cuestionario:

1. ¿Cuál es la importancia de los criterios de Cowan y Steel?  Ayudar al profesional profesional de la salud en una orientación orientación para llegar a la especie bacteriana y así poder dar un correcto diagnóstico y por consiguiente consiguie nte un tratamiento en los casos clínicos. 2. ¿Para qué sirve la tinción de Ziehl-Neelsen y cuál es su fundamento? La tinción de Ziehl-Neelsen sirve para identificar ciertos tipos de microorganismos (bacterias ácido-alcohol ácido-al cohol resistentes, BAAR). Se basa en las propiedades de la pared celular de los microorganismos, la pared está formada por un tipo de ácidos grasos llamados ácidos micólicos, estos se caracterizan por presentar presen tar cadenas muy largas, cuando los ácidos grasos presentan estructuras muy largas, estos pueden retener los colorantes con mayor facilidad. En esta tinción se utiliza el compuesto fenólico carbol fucsina, un colorante básico, la cual es mejorada en presencia de calor, debido a que la cera se derrite y las moléculas de colorante se mueve con mayor rapidez hacia el interior de la pared celular, ce lular, el ácido que se usa posteriormente sirve para decolorar las células que no fueron teñidas porque su pared no era lo suficientemente afín al colorante. Las bacterias que resisten esta decoloración se llaman ácido alcohol resistentes (BAAR). 3. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de oxidasa y de catalasa y cómo se realiza en el laboratorio? La prueba de oxidasa determina la presencia del citocromo C, el citocromo C oxida al NNN´N´, tetrametil,1-4, fenilendiamina (solución acuosa al 1% (p/v). La oxidación se detecta como color azul. Esta se realiza con ayuda de una tira de oxidasa la cual ya tiene este reactivo, se coloca con ayuda de un aza de circulo en la parte donde se encuentra el reactivo y se esparce por toda la parte que indica la tira, posterior a esto se observa si existe un cambio de color o no. La prueba de catalasa se fundamenta en que la l a catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias. Descomponen el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva. Esta prueba se realiza con ayuda de un portaobjetos, un aza circular y peróxido de hidrógeno, primero se coloca una pequeña cantidad del inoculo en la parte central del portaobjetos, posterior a esto, se le agrega una gota de peróxido y se observa la reacción. Si existe la formación de burbujas es positivo. 4. ¿En qué medios se puede realizar la prueba de movilidad y cómo se interpreta? El Medio para la prueba de Movilidad (MIO)  es un medio semisólido utilizado utili zado para la detección de la motilidad bacteriana. La motilidad se manifiesta macroscópicamente por una zona difusa de crecimiento que se extiende desde la

 

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línea de inoculación. Las bacterias no móviles generalmente dan un crecimiento crecimien to que se limita a la línea de siembra, tienen márgenes claramente definidos. Por otro lado, un resultado positivo se indica por la presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra. El medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno por los microorganismos (SIM) es un medio de cultivo en el cual la tripteína y la peptona aportan nutrientes para el desarrollo microbiano. El agar es el agente solidificante y a esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde más allá de la línea de siembra del microorganismo en estudio. Las bacterias no móviles generalmente dan un crecimiento que se limita a la línea de siembra, tienen márgenes claramente definidos. Por otro lado, un resultado positivo se indica por la presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra. 5. De cada uno de los criterios de Cowan y Steel efectuados a la cepa d de e estudio durante la práctica, realiza dibujos y menciona tus resultados. a. Condiciones de aerobiosis y anaerobiosis:

b. Prueba TSI:

 

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c. Prueba MIO:

 

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d. Prueba O/F:

e. Prueba de catalasa:

f.

Tinción de Gram:

 

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Conclusión:

Con base a la morfología y las pruebas realizadas en el laboratorio se pudo llegar a la identificación del género de la cepa problema la cual presuntivamente se sospecha sobre Aeromonas o Chromobacterium; se logró en la identificación gracias a los criterios de Cowan Steel. Bibliografía: López. G. (2019). Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación de bacterias. SCRIBD. Consultado el 27 de agosto de 2022 de: https://es.scribd.com/document/424219070/Aplicacion-de-Los-Criterios-de-Cowany-Steel-Para-La-Identificacion-de-Bacterias  

Briceño. K. (2020). Tinción de Ziehl-Neelsen. Lifeder. Consultado el 28 de agosto de 2022 de:  de: https://www.lifeder.com/tincion-ziehl-neelsen/   MIO Medio. Britanla. Consultado el 29 de agosto de 2022 de: https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6070743f4ed75.pdf  https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6070743f4ed75.pdf