Pemeriksaan Kadar C-Peptida Dengan Metode ELISA

 

Pemeriksaan Kadar CPeptida dengan dengan metode ELISA Oleh: Indah Puspa Dewi (!"#$#!#%  &osanti Pitri Sagala (!"#$#'% uhammad Ardan (!"#$#")% *unuk +ida,anti (!"#$#"$% Pui .aha,u (!"#$#/%

 

De0nisi C-Peptida   C-peptida merupakan rantai tunggal " asam amino dengan 1erat molekul "#! dalton (Da%2 menghu1ungkan polipeptida A dan 3 pada molekul proinsulin4 Dalam proses 1iosintesa insulin2 C-peptida di1entuk se1agai suatu prosuk 1ersama-sama dengan insulin oleh peme5ahan proteolitik dari molekul pre5ursor insulin2 disimpan di dalam granul sekretori dalam kompleks golgi dari sel 1eta pan5reas4 Sedangkan proinsulin dipe5ah dari preproinsulin4

 

  ELISA (Enzim-Linked (Enzim-Linked Immunosorbent Assay %  

ELISA merupakan salah satu metode ,ang sensiti7 untuk mendeteksi anti1odi2 antigen2 hormon maupun 1ahan toksik4 etode ini merupakan pengem1angan dari sistem deteksi dengan imuno8uores5en5e atau radioakti74 Dalam teknik ini 1e1erapa en9im dapat dikonugasi pada antigen dan anti1odi4 Dalam praktikn,a2 en9im ,ang sederhana2 dan dapatdipilih diuimenunukkan dengan kinetika prosedur sederhana4 Pertim1angan lain dalam penggunaan teknik ini adalah murah2 ketersediaan dan kesta1ilan su1strat4

 

a5am-ma5am ELISA 1. direct  ELISA  ELISA !4 indirect  ELISA  ELISA 3. sandwich ELISA 4. capture ELISA $4 sel ELISA

 

. Direct ELISA   Direct  ELISA  ELISA adalah salah satu model ELISA ,ang langsung diikatkan antara antigen dan anti1odi2 dimana anti1odi harus dila1el dahulu 1aru diisualisasi dengan 5ara menam1ahkan su1strat

 

!4Indirect  !4 Indirect  ELISA  ELISA  

odel ini dilakukan dengan 5ara melapiskan anti1odi pada dasar mikroplate selanutn,a ditam1ahkan dengan antigen dan diinku1asi dalam waktu '$ menit pada temperature ") oC 1aru ditam1ahkan anti1od, mono5lonal dan akhirn,a ditam1ahkan su1strat ,ang dila1el dengan en9im alkalin 7os7atase atau peroksidase4

 

"4 Sandwich "4  Sandwich ELISA  

Sandwich ELISA Sandwich  ELISA adalah model tes ELISA ,ang menggunakan perangkat tiga ma5am anti1odi4 Anti1odi pertama 1iasan,a menggunakan anti1od, mono5lonal ,ang dilapiskan pada mikroplate dan selanutn,a direaksikan direaksik an dengan antigen4 Setelah dilakuk dilakukan an pen5u5ian 1aru ditam1ahkan anti1odi kedua atau sampel serum ,ang akan dideteksi dan selanutn,a direaksikan dengan anti1odi ketiga ,aitu 7ragmen immunoglo1ulin anti immunoglo1ulin ,ang akan dideteksi4

 

'4apture '4 apture ELISA  ELISA apture ELISA adalah model ,ang dikem1angkan untuk deteksi Ig karena untuk deteksi Ig sering teradi 7aktor negati7 ,aitu adan,a 7aktor rheumatoid2 sehingga sering teradi positi7 palsu4

 

$4 Sel ELISA   Sel ELISA dik dikem1angkan em1angkan untuk mendeteksi antigen atau agen ,ang terdapat dalam sel4 Sehingga pada model ini tidak diperlukan pelapisan antigen pada mikrop!ate mikrop!ate tetapi  tetapi dengan 5ara 0ksasi sel,ang ,angdideteksi diinokulasikan diinok ulasikan sampel agenn,a4

 

kolorimetri

 

;luoresen5e

 

A*ALISIS C-Peptida 4 Pra ra-- An Anal alit itik ik !4 Analitik "4 Pas5aAnalitik

 

4 Pra- Analitik enggunakan Serum darah puasa ataupun serum setelah stimulasi dengan glukosa atau glukagon ,ang diam1il melalui ena4 idase4 "4 Sample ( mL% '4 .e7eren5e Standard Set (#4)$ mL?ea5h%: +uman C-PEP@IDE4 .e7eren5es: #4$2 !4$2 $2 #2 !# ng?mL4 @he Standards nature is not sta1le and should 1e stored tightl, 5apped at B!#C in aliuot4 On5e opened2 it is sta1le 7or $ da,s 'C4 $4 Positie Control (#4)$ mL% =4 @3 Solution (mL%: 3uer solution 5ontaining h,drogen pero>ide pero >ide and @34 )4 ashing 3uer Con5entrate (##F% (# ( # mL%: Prepare working washing solution 1, adding # mL washing 1uer 5on5entrate into //# mL distilled water wate r4 G4 Stop Solution: ! * +Cl4 /4 ell holder 4

 

Prosedur Pr osedur : 4 Diam1il darah da dari ri enipun5tur enipun5ture e kemudian kemudian di sentri7uge dan diam1il serumn,a4 !4 Dia Diam1il m1il !$ HL HL ke ke dala dalam m well well "4 Ditam1a Ditam1ahka hkan n ## HL HL en9,m konugat konugat22 diaduk '4 $4 =4 )4 G4

selama $ detik Diink Diinku1asi u1asi "# "# menit menit di dalam dalam suhu ruangan Di5u5i dengan washing washing 1uer ("## HL?well% HL?well% Ditam1a Ditam1ahka hkan n ## HL larutan larutan @ @3 3 (tetrametil (tetrametil 1en9idin% Diink Diinku1asi u1asi selama selama $ $ menit dalam s suhu uhu ruangan ruangan Dita Ditam1a m1ahk hkan an $# HL laru larutan tan sto stop p

/4 Dimasu Dimasukkan dalam dalam mi5r mi5rowell owell'$# reader2 reader2 diatur dengankkan panang gelom1ang nm diatur

 

"4 Pas5a- Klinik

 

*ilai re7erensi kadar C-Peptida : 4 Puasa : #4)G- 4G/ ng?mL (#4!$- #4= nmol?L% !4 Stimulasi glukosa dan glukagon : !4)"- $4=' ng?mL (#4/- 4G) nmol?L% "4