Pathromtin SL

Pathromtin* SL Intended Use Reagent for the determination of the activated partial thromboplastin time (APTT) in citrated human plasma.

Summary and Explanation Pathromtin* SL Reagent enables rapid screening for disorders of the intrinsic coagulation system and sensitively detects Factors VIII and IX as well as the contact factors. In con junction with decient plasmas it enables enables the individual factors of the intrinsic intrinsic system to be quantied and permits diagnosis of hemophilia. In addition it can be used for monitoring 1 therapy with unfractionated heparin . The use of the APTT as a screening test for coagulation disorders is indicated particularly prior to surgical interventions as this allows potential hemophiliacs to be diagnosed and given special therapeutic protection. The presence of non-specic inhibitors such as the lupus-like anticoagulant may prolong the APTT, but this effect i s variable and generally recognized as being related more to the nature of the APTT reagent employed 2.

Principle of the Method Incubation of plasma with the optimal quantity of phospholipids and a surface activator leads to activation of factors of the intrinsic coagulation system. The addition of calcium ions triggers the coagulation process; the time to formation of a brin clot is measured.

Reagents

Note Pathromtin* SL can be used manually or on automated coagulation analyzers. Siemens Healthcare Diagnostics provides Reference Guides (Application Sheets) for several coagulation analyzers. The Reference Guides (Application Sheets) contain analyzer/assay specic handling and performance information which may differ from that provided in these Instructions for Use. In such a case, the information contained in the Reference Guides (Application Sheets) supersedes the information in these Instructions for Use. Please also consult the instruction manual of the instrument manufacturer! Materials provided 10 x 5 mL, [REF] OQGS 29 20 x 5 mL, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200 Composition Pathromtin* SL Reagent: Silicon dioxide particles (1.2 g/L), plant phospholipids (0.25 g/L), sodium chloride, HEPES, pH 7.6 Preservative: Sodium azide (< 1 g/L). Warnings and Precautions 1. For in-vitro- diagnostic diagnostic use. 2. Contains sodium azide (< (< 1 g/L) as a preservative. preservative. Sodium azide can react with copper or lead pipes in drain lines to form explosive compounds. Dispose of properly in accordance with local regulations. Preparation of the Reagents Pathromtin* SL Reagent must be gently inverted (5 to 8 times) to mix before rst use and must be used at room temperature (+15 to +25 °C). Every 24 hours of use, the reagent must be inverted to resuspend any sediment. Calcium Chloride Solution 0.025 mol/L: warm to +37 °C. Storage and Stability Stored unopened at +2 to +8 °C Pathromtin* SL Reagent may be used by the expiry date given on the label. Once opened Pathromtin* SL Reagent must be used within 2 weeks (store at +2 to +25 °C). Information regarding on-board stability is specied in the Reference Guides (Application Sheets) for the different coagulation analyzers. Materials required but not provided - Calcium Chloride (CaCl2) Solution 0.025 mol/L - Control Plasma N, or Dade ®  Ci-Trol ®  Level 1 as control for the normal range - Control Plasma P, or Dade ®  Ci-Trol ®  Level 2, or Dade ®  Ci-Trol ®  Level 3 as control for the pathological/therapeutic pathological/therape utic range - Pipettes for precise measurement measurement of of 0.1 mL - Plastic test tubes - Coagulation analyzer

Specimen Collection and Preparation To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/L) with 9 parts venous blood, avoiding the formation of foam. Immediately centrifuge for no less than 15 minutes at 1500 x g, remove the supernatant plasma and keep at +15 to +25 °C until use in the test (max. 4 hours). In the US please refer to the CLSI Document H21-A5, entitled “Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays”3.

Procedure

Manual Testing: Pipette into a test tube pre-warmed to +37 °C: Citrated plasma 100 µL Pathromtin* SL Reagent 100 µL Incubate for 2 minutes at +37 °C Calcium Chloride Solution (+37 °C!) 100 µL On adding the Calcium Chloride Solution start the stopwatch or timer on the coagulation analyzer and measure the coagulation time.

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Monitoring of Unfractionated Heparin Therapy with APTT When using the APTT for this purpose, the factors inuencing the test should be kept in mind. General considerations are listed below. A) Time of of collection collection is is important important since since the the in-vivo  half-life  half-life of unfractionated heparin is approximately 1.5 hours4. When it is administered, it has an immediate anticoagulant effect but the degree of this effect decreases rapidly with time. This is especially apparent with intermittent single intravenous injections. B) The anticoagulant anticoagulant used for sample collection collection can alter test test results. C) Platelet factor 4, a heparin heparin neutralizing factor in platelet alpha-granules, can be released released by platelet aggregation or damage. To prevent this occurrence in-vitro , the specimen should be collected with a minimum of trauma. Cold temperatures are known to induce platelet aggregation and release platelet factor 4; therefore, centrifugation at room temperature is recommended for heparin testing. D) Using APTT to monitor unfractionated unfractionated heparin heparin therapy is time-dependent. time-dependent. Delay in testing samples will result in prolonged APTT determinations. Therefore, it is imperative that the testing on all samples be performed as soon as possible. E) Increased contact contact activation times may result result in prolonged prolonged APTT in plasma contaicontaining heparin. It is imperative that the optimal heating-activation time of the Pathromtin* SL-plasma mixture be rigidly standardized5. F) Different test systems (i.e. manual, manual, photo-optical, photo-optical, etc.) will exhibit variable heparin heparin sensitivity. Interchanging of test systems should be avoided. G) Baseline data on on the APTT of each patient patient before the start of therapy therapy should be established where feasible to determine the respective patient APTT as it relates to the reference range established for the test in that laboratory. H) Studies have shown variability in original estimates estimates of the quality of of unfractionated unfractionated heparin from different sources and different manufacturers. In-vivo  reactivity  reactivity varies with the type of heparin administered, the metabolism of the individual and other coadministrated medications4,6. I) Becau Because se the APTT can can vary with techniqu technique, e, method, method, equipment equipment,, reagent reagent lot and heparin used, each laboratory must establish its own therapeutic ranges, or verify them whenever one or more of the aforementioned variables is changed. This can be done by simultaneously determining the APTT and the heparin concentration for samples from patients receiving heparin therapy. A dose response curve can be calculated from the data using regression analysis, and the APTT range corresponding to a heparin concentration of 0.3 - 0.7 U/mL (by a factor Xa inhibition assay) can be derived4,6,7. Internal Quality Control Normal range: Control Plasma N, or Dade ®  Ci-Trol ®  Level 1 Pathological range: range: Control Plasma P, or or Dade Dade ®  Ci-Trol ®  Level 2, or Dade ®  Ci-Trol ®  Level 3 Two controls (one in the normal range and one in the pathological/therapeutic range) must be measured at the start of the test run, after each change of reagent vial, and at least once during an 8-hour shift. The control material should be prepared and processed in the same manner as the patient samples. Each laboratory should establish its own condence intervals for the controls. This interval is generally ± 2 to ± 2.5 standard deviations from the mean control value. If the control values are outside of the condence interval, the controls, reagents and instrument must be checked. Before reporting the patient values, it is recom mended that all steps should be documented that were taken to identify and rectify the problem. New control ranges should be dened for each new lot of reagents or controls. Results The result is given in seconds.

Limitations of the Procedure Interferences of APTT are described in bibliography references 8-10. Therapeutic doses of hirudin or other direct thrombin inhibitors may prolong clotting times 11. The choice of anticoagulant (i.e. oxalate instead of citrate) and the condition of the specimen (e.g. hemolyzed, lipemic, parenteral feeding, etc.) may affect results. The latter is particularly true of optical instrumentation instrumentatio n measurements of the APTT. Preactivation of the sample due to poor phlebotomy technique can lead to false results. Referencing the Sample Handling and Collection section of CLSI Document H21-A5 it is recommended that test tubes with non-wetable surfaces (e.g., plastic) be used rather than glass test tubes.

Siemens has validated use of these reagents on various analyzers to optimize product performance and meet product specications. User dened modications are not supported by Siemens as they may affect performance of the system and assay results. It is the responsibility of the user to validate modications to these instructions or use of the reagents on analyzers other than those included in Siemens Application Sheets or these instructions for use. Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patient’s medical history, clinical presentation and other ndings.

Expected Values Reference intervals vary from laboratory to laboratory depending on the population served and the technique, method, equipment and reagent lot used. Therefore, each laboratory must establish its own reference intervals or verify them whenever one or more of the aforementioned variables are changed. In a study of ostensibly healthy individuals using a specic lot of Pathromtin* SL Reagent, the following values were obtained: Median

90 % Reference Interval 5th P  Peercentile 95th Percentile 100 individuals Sysmex ®  C  CA A-1500 30.9 sec. 26.4 sec. 37.5 sec. 111 individuals BCS ® System 30.2 sec. 25.9 sec. 36.6 sec. Reference ranges for other populations such as pediatric groups should also be established where warranted.

Specic Performance Characteristics Precision Using opto-densitometric detection, precision studies were run over a 5 day period, twice per day (n = 8 replicates per day), to total n = 40 for normal and pathological control plasmas as well as a heparin plasma pool. Intra-assay precision was calculated from the individual n = 4 precision values for the daily runs over the 5 days. Intra-assay precision ranged from 0.6 - 2.0 % CV, while the inter-assay precision ranged from 0.3 - 2.8 % CV. Method Comparison Results of a comparison of APTT determinations using Pathromtin* SL Reagent and another commercially available APTT reagent gave a correlation coefcient of 0.96 and a y-intercept of 2.1 sec., and a slope of 0.99.

Bibliography 1. Wagner C, Dati F. Activated partial thromboplastin time (APTT) test. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, 1998: 602-4. 2. Brandt JT, Triplett DA, Rock WA, et al. Effect of lupus anticoagulants on the activated partial thromboplastin time. Arch Pathol Lab Med 1991; 115: 109-14. 3. CLSI. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline – Fifth Edition. CLSI document H21-A5 (ISBN 1-56238-657-3). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2008.   4. Hirsh J, Raschke R. Heparin and low-molecular-weight heparin. The seventh ACCP Conference on Antithrombotic and Thrombolytic Therapy. Chest 2004; 126: 188S-203S. 5. Hattersley PG, Hayse D. The effect of increased contact activation time on the activated partial thromboplastin time. Am J Clin Pathol 1976; 66: 479-82. 6. Olson JD, Arkin CF, Brandt JT, et al. College of American Pathologists Conference XXXI on laboratory monitoring of anticoagulant therapy: laboratory monitoring of unfractionated heparin therapy. Arch Pathol Lab Med. 1998; 122: 782-98. 7. Bates SM, Johnston M, Hirsh J, Ginsberg JS. Use of a xed activated partial thrombo plastin time ratio to establish a therapeutic range for unfractionated heparin. Arch Intern Med 2001; 161: 385-91. 8. Poller L, Thomson JM. The activated partial thromboplastin time (aPTT) In: Jespersen J, Bertina RR, Haverkate F, eds. A Manual of Laboratory Techniques. Kluwer Academic Publishers, Hingham, MA, 1992: 35-40. 9. Brack MJ, More RS, Hubner PJ, Gershlick AH. The effect of low dose nitroglycerin on plasma heparin concentrations and activated partial thromboplastin times. Blood Coagul Fibrinolysis 1993; 4: 183-6. 10. Harder S, Gr aff J, Klinkhardt U, et al. Transition from argatroban to oral anticoagulation with phenprocoumon or acenocoumarol: effects on prothrombin time, activated partial thromboplastin time, and Ecarin Clotting Time. Thromb Haemost 2004; 91: 1137-45. 11. Boogen C, Niederau C, Reinauer H. Assessment of the inuence of r-hirudin on coagulometric factor assays. Ann Hematol 1999; 78 (Suppl): 73 (Abstract). BCS, Ci-Trol and Dade are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics. * Pathromtin is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex is a registered trademark of SYSMEX CORPORATION.

Edition June 2010

Pathromtin* SL Anwendungsbereich Reagenz zur Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) in mensch lichem Citratplasma.

Diagnostische Bedeutung Die Bestimmung der APTT mit Pathromtin* SL Reagenz ist ein schneller Suchtest auf Gerinnungsstörungen des endogenen Systems und erfasst empndlich die Faktoren VIII und IX sowie die Kontaktfaktoren. Zusammen mit Mangelplasmen ist Pathromtin* SL Reagenz geeignet für die Bestimmung von Einzelfaktoren des endogenen Systems und zur Diagnose einer Hämophilie. Außerdem kann es zur Überwachung der Therapie mit unfraktioniertem Heparin benutzt werden1. Die Messung der APTT ist indiziert als Suchtest auf Gerinnungsstörungen insbesondere vor chirurgischen Eingriffen, um potenzielle Bluter unter besonderen therapeutischen Schutz stellen zu können. Die Anwesenheit von unspezischen Inhibitoren, wie der des Lupus-ähnlichen Antikoagu lans, können die APTT verlängern. Dieser Effekt i st jedoch variabel und ist generell als ein natürlicher Effekt des verwendeten APTT-Reagenz bekannt 2.

Prinzip der Methode Inkubation von Plasma mit der optimalen Menge an Phospholipiden und einem Oberä chenaktivator führt zur Aktivierung von Faktoren des endogenen Gerinnungssystems. Durch Zugabe von Calcium-Ionen wird der Gerinnungsvorgang ausgelöst; gemessen wird die Zeit bis zur Bildung eines Fibringerinnsels.

Reagenzien Hinweis Pathromtin* SL kann manuell oder an automatischen Gerinnungsmessgeräten verwendet werden. Siemens Healthcare Diagnostics stellt für verschiedene Gerinnungsmessgeräte Referenzhandbücher (Applikationsvorschriften) zur Verfügung. Diese enthalten geräte-/  testspezische Informationen zur Abarbeitung und zu Leistungsdaten, die von den Infor mationen in dieser Gebrauchsanweisung abweichen können. In diesem Fall ersetzen die Informationen in den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften) die Informationen in dieser Gebrauchsanweisung. Bitte auch die Bedienungsanleitung des Geräteherstellers beachten! Inhalt der Handelspackungen 10 x 5 ml, [REF] OQGS 29 20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200

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Zusammensetzung Pathromtin* SL Reagenz: Siliciumdioxid-Partikel (1,2 g/l), panzliche Phospholipide (0,25 g/l), Natriumchlorid, HEPES, pH 7,6 Konservierungsmittel: Natriumazid (< 1 g/l) Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen 1. Nur zur in-vitro- diagnostischen Anwendung. 2. Enthält Natriumazid (< 1 g/l) als Konservierungsmittel. Natriumazid kann mit kupferoder bleihaltigen Abussrohren explosive Verbindungen eingehen. Entsorgen Sie bitte ordnungsgemäß entsprechend den örtlichen Richtlinien. Vorbereitung der Reagenzien Pathromtin* SL muss vor erstmaligem Gebrauch durch 5- bis 8-maliges Überkopfddre hen resuspendiert werden und wird bei Raumtemperatur (+15 bis +25 °C) eingesetzt. Das Resuspendieren muss alle 24 Stunden wiederholt werden, um Sedimentationseffekte zu vermeiden! Calciumchlorid-Lösung 0,025 mol/l auf +37 °C erwärmen. Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen Pathromtin* SL Reagenz ist, ungeöffnet bei +2 bis +8 °C gelagert, bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum verwendbar. Nach dem erstmaligen Öffnen ist Pathromtin* SL Reagenz 2 Wochen bei +2 bis +25 °C stabil. Die Angaben zur Stabilität auf dem Gerät sind in den Referenzhandbüchern (Applikations vorschriften) für die einzelnen Gerinnungsmessgeräte aufgeführt. Zusätzlich benötigte Materialien - Calciumchlorid (CaCl2)-Lösung 0,025 mol/l - Kontroll-Plasma N oder Dade ®  Ci-Trol ®  Level 1 als Kontrolle für den Normalbereich - Kontroll-Plasma P oder Dade ®  Ci-Trol ®  Level 2 oder Dade ®  Ci-Trol ®  Level 3 als Kontrolle für den pathologischen/therapeutischen Bereich - Pipetten für das genaue Abmessen von 0,1 ml - Teströhrchen aus Plastik - Gerinnungsmessgerät

Probenabnahme und -vorbereitung Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung (0,11 mol/l) mit 9 Teilen Venenblut sorg fältig unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort mindestens 15 Minuten bei 1500 x g zentrifugieren, überstehendes Plasma abhebern und bis zum Test bei +15 bis +25 °C aufbewahren (max. 4 Stunden). In den USA bitte auf das CLSI Dokument H21-A5 mit dem Titel „Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays“ beziehen3.

Testdurchführung Manuelle Durchführung: In ein auf +37 °C vorgewärmtes Teströhrchen pipettieren: Citratplasma 100 µl Pathromtin* SL Reagenz 100 µl 2 Minuten bei +37 °C inkubieren Calciumchlorid-Lösung (+37 °C!) 100 µl Mit Zugabe von Calciumchlorid-Lösung Stoppuhr bzw. Messstelle am Gerinnungsmessge rät starten und die Gerinnungszeit messen. Überwachung der Therapie mit unfraktioniertem Heparin mittels APTT Bei der Überwachung der Heparintherapie mittels APTT-Bestimmung sind die Faktoren zu berücksichtigen, die Einuss auf das T estergebnis haben können. Im Folgenden sind einige allgemeine Hinweise zusammengefasst: A) Da die Halbwertszeit von unfraktioniertem Heparin in vivo  ca. 1,5 Stunden beträgt, ist der Zeitpunkt der Blutentnahme von entscheidender Bedeutung 4. Verabreichtes Heparin besitzt eine sofort einsetzende gerinnungshemmende Wirkung, die rasch wieder abnimmt. Dieser Effekt ist besonders deutlich bei intermittierend verabreichten Einzelinjektionen i. v. zu beobachten . B) Das zur Blutabnahme verwendete Antikoagulans kann die Testergebnisse be einussen. C) Durch Aggregation bzw. Beschädigung der Plättchen kann der Heparin-neutralisierende Plättchenfaktor 4 aus den Alpha-Granula der Plättchen freigesetzt werden. Um derartige Prozesse in vitro  zu vermeiden, sollten die Proben möglichst vorsichtig abgenommen werden. Da niedrige Temperatur bekanntlich die Plättchenaggregation und damit die Freisetzung von Plättchenfaktor 4 auslöst, sollten Proben für Heparintests bei Raumtemperatur zentrifugiert werden. D) Die Überwachung der Therapie mit unfraktioniertem Heparin mittels APTT-Bestimmung ist zeitabhängig. Verzögerungen bei der Probenbearbeitung können eine Verlängerung der APTT bewirken. Die Proben müssen daher so bald wie möglich untersucht werden. E) Eine verlängerte Kontaktaktivierung kann bei heparinhaltigem Plasma zur Ver längerung der APTT führen. Die optimale Inkubationszeit des CephaloplastinPlasma-Gemischs ist daher einzuhalten5. F) Da verschiedene Testmethoden (z. B. manuell, photo-optisch) eine unterschiedliche Heparin-Empndlichkeit besitzen, sollte ein Wechsel der angewendeten Methode vermieden werden. G) Zur Ermittlung der patientenspezischen APTT sollte der APTT-Basiswert des Patienten möglichst vor Therapiebeginn bestimmt und mit dem laboreigenen Referenzbereich verglichen werden. H) Untersuchungen ergaben, dass die Eigenschaften von unfraktionierten Heparinen verschiedener Hersteller bzw. aus unterschiedlichem Ausgangsmaterial von den ursprünglich angenommenen Spezikationen abwichen. In vivo  hängt die Reaktivität vom Typ des verabreichten Heparins vom Stoffwechsel des Patienten und von anderen, gleichzeitig angewendeten Arzneimitteln ab4,6. I) Da die APTT in Abhängigkeit von den Arbeitstechniken, Methoden, Geräten, Reagenzchargen und dem eingesetzten Heparin variieren kann, muss jedes Labor seine eigenen therapeutischen Bereiche ermitteln bzw. nach dem Wechsel von einem oder mehreren der aufgeführten Parameter verizieren. Dies kann durch die gleichzeitige Bestimmung der APTT und der Heparinkonzentration in Proben von Patienten unter Heparintherapie erfolgen. Durch Regressionsanalyse der Daten kann eine Dosis-Wirkungs-Beziehung aufgestellt und der APTT-Bereich festgelegt werden, der einer Heparinkonzentration von 0,3 - 0,7 U/ml (durch Faktor Xa-Hemmung bestimmt) entspricht4,6,7.

Interne Qualitätskontrolle Normalbereich: Kontroll-Plasma N oder Dade ®  Ci-Trol ®  Level 1 Pathologischer Bereich: Kontroll-Plasma P oder Dade ®   Ci-Trol ®   Level 2 oder Dade ®  Ci-Trol ®  Level 3 Zu Beginn eines Testlaufs, bei jedem Reagenzaschenwechsel und mindestens einmal während einer 8-Stunden-Schicht müssen zwei Kontrollen (eine im Normalbereich und eine im pathologischen/therapeutischen Bereich) gemessen werden. Das Kontrollmaterial sollte wie die Patientenplasmen behandelt werden. Jedes Labor sollte seinen eigenen Vertrauensbereich für die Kontrollen ermitteln. Dieser beträgt in der Regel ±2 bis ±2,5 Standard abweichungen vom mittleren Kontrollwert. Liegen die Kontrollwerte außerhalb des Ver trauensbereichs, sind die Kontrollen, Reagenzien und das Gerät zu überprüfen. Es wird empfohlen, vor der Ausgabe von Patientenwerten alle Maßnahmen zu dokumentieren, die zur Feststellung und Behebung des Problems ergriffen wurden. Bei jeder neuen Reagenzien- oder Kontrollencharge sollten neue Kontrollbereiche deniert werden.

Ergebnisse Das Messergebnis wird in Sekunden angegeben.

Einschränkungen der Testdurchführung Über Störungen der APTT wird in der Literatur berichtet 8-10. Therapeutische Dosen von Hirudin oder anderen direkten Thrombininhibitoren können zu verlängerten Gerinnungszeiten führen11. Die Ergebnisse können außerdem durch das gewählte Antikoagulans (z. B. Oxalat anstelle von Citrat) beeinusst werden, sowie durch die Beschaffenheit der Probe (z. B. hä molytisch, lipämisch, künstliche Ernährung, usw.), welche insbesonders bei der optischen Bestimmung der APTT von Bedeutung ist. Eine abnahmebedingte Voraktivierung der Probe kann zu falschen Ergebnissen führen. Im Abschnitt über Probennahme und -handhabung des CLSI Dokuments H21-A5 wird empfohlen, Teströhrchen mit nicht-benetzbarer Oberä che (z. B. Plastik) anstelle von Glasröhrchen einzusetzen. Siemens hat den Einsatz dieser Reagenzien auf verschiedenen Analysengeräten auf optimale Produktleistung und Einhaltung der Produktspezikationen überprüft. Vom Benutzer vorgenommene Änderungen werden von Siemens nicht unterstützt, da sie die Leistung des Systems und die Testergebnisse beeinussen können. Es liegt in der Verantwortung des Benutzers, Änderungen an diesen Anleitungen oder die Verwendung dieser Reagenzien auf anderen als in den Applikationsvorschriften von Siemens oder diesen Gebrauchsanwei sungen genannten Analysengeräten zu validieren. Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten, dem klinischen Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden.

Referenzbereiche Referenzintervalle variieren von Labor zu Labor in Abhängigkeit von der zu untersuchenden Population und den angewendeten Arbeitstechniken, Methoden, Geräten und Reagenz chargen. Daher sollte jedes Labor auf der Grundlage der jeweils angewendeten Arbeitstechniken, Methoden, Geräte und Reagenzchargen eigene Referenzbereiche ermitteln, bzw. die Referenzbereiche nach einem Wechsel der aufgeführten Parameter verizieren. In einer Studie an offensichtlich gesunden Probanden wurden mit einer spezischen Char ge Pathromtin* SL Reagenz folgende Werte erhalten:

Median

90 % Referenzintervall 5. Perzentile 95. Perzentile 100 Probanden Sysmex ®  CA-1500 30,9 sec. 26,4 sec. 37,5 sec. 111 Probanden BCS ® System 30,2 sec. 25,9 sec. 36,6 sec. Für andere Kollektive, wie z. B. pädiatrische Patienten, sollten gegebenenfalls eigene Re ferenzbereiche ermittelt werden.

L'incubation du plasma avec une quantité optimale de phospholipides et d'un activateur de surface entraîne l'activation des facteurs du système endogène de la coagulation. L'addition d'ions calcium déclenche le processus de la coagulation. On mesure alors le temps écoulé  jusqu'à la formation du caillot de brine.

Réactifs Remarque Pathromtin* SL peut être utilisé manuellement ou sur un appareil automatisé de coagulation. Siemens Healthcare Diagnostics propose des guides de référence (ches d’ap plication) pour plusieurs analyseurs de coagulation. Les Guides de référence (ches d’application) contiennent des informations sur les performances et l’utilisation spécique des tests sur les analyseurs, qui peuvent différer de celles mentionnées dans la présente notice. Le cas échéant, les informations contenues dans les Guides de référence (ches d’application) annulent et remplacent celles contenues dans la présente notice. Veuillez également, consulter le manuel de formation du fabricant de l'analyseur! Contenu des coffrets 10 x 5 ml, [REF] OQGS 29 20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200 Composition Réactif Pathromtin* SL : particules de dioxyde de silicium (1,2 g/l), phospholipides végétaux (0,25 g/l), chlorure de sodium, HEPES, pH 7,6 Agent de conservation : azide de sodium (< 1 g/l) Mises en garde et précautions d’emploi 1. Ne doit être employé que pour un usage in vitro . 2. Contient de l’azide de sodium (< 1 g/l) comme conservateur. L’ azide de sodium peut réagir avec les tuyaux d’évacuation en cuivre ou en plomb et former des composés explosifs. L’évacuer conformément aux réglementations locales. Préparation des réactifs Avant son premier emploi, remettre le Réactif Pathromtin* SL en suspension en retournant le acon 5 à 8 fois, et l’utiliser à la température ambiante (+15/+25 °C). La remise en sus pension doit être répétée toutes les 24 heures pour éviter tout effet de sédimentation ! Porter la Solution de chlorure de calcium 0,025 mol/l à +37 °C. Stabilité et conditions de conservation Conservé non ouvert à +2/+8 °C, Réactif Pathromtin* SL peut être utilisé jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette. Après première ouverture, il reste stable 2 semaines à +2/+25 °C. Les données de stabilité sur analyseur sont indiquées dans les guides de référence (ches d'application) des différents analyseurs de coagulation. Autres réactifs nécessaires - Solution de chlorure de calcium (CaCl2) 0,025 mol/l - Plasma de contrôle N ou Dade ®  Ci-Trol ®  niveau 1 comme contrôle dans le domaine normal - Plasma de contrôle P ou Dade ®  Ci-Trol ®  niveau 2 ou Dade ®  Ci-Trol ®  niveau 3 comme contrôle dans le domaine pathologique/thérapeutique - Pipettes pour une distribution exacte de 0,1 ml - Tubes à essai en plastique - Automate de coagulation

Prélèvement et préparation des échantillons

Leistungsmerkmale des Tests Präzision Mit einem opto-densitometrischen Messverfahren wurden Präzisionsuntersuchungen an normalen und pathologischen Plasmen, sowie einem Heparin-Plasmapool, über 5 Tage, zweimal täglich (n = 8 Bestimmungen pro Tag), mit insgesamt 40 Bestimmungen durchgeführt. Der Variationskoefzient in der Serie wurde aus den einzelnen 4-fach-Bestim mungen berechnet. Er lag zwischen 0,6 und 2,0 %, während der Variationskoefzient von Tag zu Tag zwischen 0,3 und 2,8 % lag. Methodenvergleich Bei einem Vergleich von APTT-Bestimmungen mit Pathromtin* SL Reagenz und einem anderen APTT-Reagenz ergab sich ein Korrelationskoefzient von 0,96 bei einem y-Ach senabschnitt von 2,1 sec. und einer Steigung von 0,99.

Literatur Siehe englische Gebrauchsanweisung. BCS, Ci-Trol und Dade sind Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics. * Pathromtin ist ein Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex ist eine eingetragene Marke der SYSMEX C ORPORATION.

Ausgabe Juni 2010

Pathromtin* SL Domaine d’utilisation Réactif pour la détermination du Temps de Céphaline Activé (TCA) dans le plasma citraté humain.

Intérêt diagnostique La détermination du TCA à l'aide de Réactif Pathromtin* SL est un test de dépistage rapide des troubles du système endogène de la coagulation, sensible aux Facteurs VIII, IX, et aux facteurs de la phase contact. Utilisé en association avec des plasmas exempts, Réactif Pathromtin* SL permet le dosage des différents facteurs du système endogène de la coagulation, ainsi que le diagnostic d'hémophilie. Il peut également être utilisé pour la surveillance d'un traitement par héparine non fractionnée 1. La détermination du TCA est indiquée comme test de dépistage des troubles de la coagulation, en particulier avant une intervention chirurgicale, an de pouvoir prendre les mesures thérapeutiques appropriées chez les patients susceptibles de faire une hémorragie. La présence d’inhibiteurs non spéciques, tel l’anticoagulant de type lupus, peut allonger le TCA, même si cet effet est variable et généralement considéré comme lié à la nature du réactif TCA utilisé 2.

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Principe de la méthode

Pour obtenir les plasmas, prélever 1 volume de solution de citrate de sodium (0,11 mol/l) avec 9 volumes de sang veineux, et mélanger avec précaution en évitant la formation de mousse. Centrifuger aussitôt pendant au moins 15 min à au moins 1500 x g, prélever le plasma surnageant, et le conserver à +15/+25 °C (max. 4 heures) jusqu’au test. Aux USA, se reporter au document CLSI H21-A5 intitulé «Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays»3.

Réalisation du test Méthode manuelle : Distribuer dans un tube à essai préchauffé à +37 °C : Plasma citraté Réactif Pathromtin* SL Laisser incuber 2 min à +37 °C Solution de chlorure de calcium (+37 °C !)

100 µl 100 µl 100 µl

Déclencher le chrono mètre ou la chambre de mesure de l'automate de coagulation au moment de l'addition de la Solution de chlorure de calcium, et mesurer le temps de coagulation.

Surveillance d’un traitement à l’héparine non fractionnée par le TCA Dans le cadre de la surveillance d’un traitement à l’héparine par le TCA, il faut tenir compte des facteurs qui peuvent inuencer ce test. Quelques r emarques générales sont résumées ci-dessous : A) Dans la mesure où le temps de demi-vie de l’héparine non fractionnée est d’env. 1,5 heure in-vivo , du prélèvement est l'heure du prélèvement est important 4. Lors de son administration, l'héparine a un effet anticoagulant immédiat mais l'amplitude de cet effet décroît rapidement dans le temps. Ceci est particulièrement visible en cas d’injections intraveineuses intermittentes. B) L’anticoagulant utilisé pour le prélèvement peut fausser le résultat du test. C) L’agrégation ou l’endommagement des plaquettes peut libérer le facteur 4 plaquettaire 4 des granules alpha des plaquettes, facteur qui neutralise l’héparine. Pour éviter ce phénomène in-vitro , le prélèvement de l'échantillon doit être fait d'une manière non traumatique. Dans la mesure où l'on sait qu’une température basse favorise l’agrégation des plaquettes et déclenche ainsi la libération du facteur 4 plaquettaire 4, il est recommandé de centrifuger les échantillons devant être testés pour une surveillance d’héparine à la température ambiante.

D) La surveillance d’un traitement à l’héparine non fractionnée par un TCA est variable dans le temps. Si un échantillon n’est pas testé immédiatement, le TCA peut être allongé. Il est donc recommandé de tester les échantillons le plus rapidement possible après leur prélèvement. E) Une activation de la phase contact plus longue peut entraîner un allongement du TCA pour les plasmas contenant de l’héparine. Il est impératif que le temps d'incubation optimal du mélange Pathromtin* SL-plasma soit parfaitement respecté5.

F) Les différents systèmes de mesure (manuel, photo-optique, etc.) montreront une sensibilité variable à l'héparine. L'échange des systèmes de mesure doit être évité. G) Pour déterminer un TCA spécique au patient, il est recommandé de déterminer une valeur de base de TCA pour le patient avant le début du traitement et de la comparer au domaine de référence déni par le laboratoire. H) Des études ont montré que les propriétés des héparines non fractionnées des différents fabricants ou provenant de différentes préparations variaient par rapport aux spécications initialement indiquées. La réactivité in-vivo du type d’héparine administrée varie en fonction du métabolisme du patient et des autres médicaments simultanément administrés4,6. I) Le TCA pouvant varier selon les techniques de travail, les méthodes, les analyseurs, les lots de réactif et l’héparine utilisés, chaque laboratoire doit déterminer ses propres domaines thérapeutiques, et les vérier après chaque changement d’un ou de plusieurs de ces paramètres. Pour ce faire, mesurer simultanément un TCA et une concentration d’héparine sur des échantillons de patients sous traitement à l’héparine. Une analyse de régression permet de déterminer un rapport dose-effet ainsi que le domaine de TCA correspondant à une c oncentration d’héparine comprise entre 0,3 et 0,7 U/ml (obtenue par l’inhibition du facteur Xa) 4,6,7. Contrôle de qualité interne Domaine normal : Plasma de contrôle N ou Dade ®  Ci-Trol ®  niveau 1 Domaine pathologique : Plasma de contrôle P ou Dade ®  Ci-Trol niveau 2 ou Dade ®  CiTrol ®  niveau 3 Au début de chaque série, à chaque changement de acon de réactif, et au moins toutes les 8 heures de travail, mesurer deux contrôles (un dans le domaine normal et un dans le domaine pathologique/thérapeutique). Traiter les contrôles comme des échantillons de patients. Chaque laboratoire doit déterminer ses propres domaines de conance pour les contrôles. Ils sont généralement de ±2 à ±2,5 déviation standard (DS) par rapport à la valeur moyenne du contrôle. Si les valeurs obtenues pour les contrôles sortent de l eur domaine de conance respectif, procéder à une vérication des contrôles, des réactifs et de l’appareil. Il est recommandé de documenter toutes les mesures prises pour identier et résoudre le problème rencontré avant de rendre les résultats des patients. Etablir de nouveaux domaines de conance à chaque changement de lot de réactif ou de contrôle. Résultats Les résultats sont exprimés en secondes.

Limites de réalisation du test La littérature fait état de perturbations du TCA 8-10. Des doses thérapeutiques d’Hirudin ou d’autres inhibiteurs directs de la thrombine peuvent entraîner un allongement des temps de coagulation11. Les résultats peuvent également être inuencés par l’anticoagulant choisi (par ex. de l’oxalate au lieu du citrate), ainsi que par l’état de l’échantillon (par ex. hémolytique, lipémique, alimentation articielle, etc.), tout particulièrement en cas de détermination optique du TCA. Une préactivation de l’échantillon due à la technique de prélèvement peut entraîner de faux résultats. Selon le document CLSI H21-A5 sur le prélèvement et le traitement des échantillons, il est recommandé d’utiliser des tubes à essai non mouillables (par ex. en plastique) au lieu de tubes en verre. Siemens a validé l’utilisation de ces réactifs sur plusieurs analyseurs an d’optimiser les performances du produit et répondre à ses spécications. Les modications apportées par l’utilisateur ne sont pas sous la responsabilité de Siemens dans la mesure où elles peuvent affecter les performances du système et les résultats des dosages. Il est de la responsabilité de l’utilisateur de valider toutes modications apportées à ces instructions ou à l’utilisation des réactifs sur les analyseurs autres que ceux mentionnés dans les protocoles d’application Siemens ou dans la présente notice d’utilisation. Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec les antécédents médicaux du patient, les signes cliniques et autres constatations.

Domaines de référence Les intervalles de référence varient d’un laboratoire à l ’autre selon les populations étudiées, ainsi que selon les techniques de travail, les méthodes, les appareils et les réactifs utilisés. Aussi chaque laboratoire doit-il déterminer ses propres domaines de référence en fonction des techniques de travail et des méthodes qu’il applique, ainsi que des appareils et des lots de réactifs qu’il utilise, et vérier ses domaines de référence après tout changement d’un des paramètres. Dans le cadre d’une étude effectuée sur des sujets apparemment sains, les valeurs suivantes ont été obtenues avec un lot spécique de Réactif Pathromtin* SL : médiane

90 % de l’ intervalle de référence 5ème percentile 95ème percentile 100 échantillons sur Sysmex ®  CA-1500 30,9 sec 26,4 sec 37,5 sec 111 échantillons sur BCS ®  System 30,2 sec 25,9 sec 36,6 sec Pour d’autres collectifs de patients, par ex. pédiatriques, il peut être nécessaire de déterminer un domaine de référence spécique.

Caractéristiques du test Précision Une étude de précision a été effectuée selon un procédé photo-densitométrique sur des plasmas normaux et pathologiques, ainsi que sur un pool de plasmas héparinés. Les échantillons ont été testés sur 5 jours, deux fois par jour (n = 8 dosages par jour). Un total de 40 dosages a été effectué. Les coefcients de variation de répétabilité ont été calculés à partir des dosages en quadruple, et trouvés entre 0,6 et 2,0 %. Les coefcients de variation de reproductibilité ont été trouvés entre 0,3 et 2,8 % Comparaison avec d’autres méthodes La comparaison des dosages de TCA effectués avec Réactif Pathromtin* SL et de ceux effectués avec un autre réactif TCA a permis d’obtenir pour Réactif Pathromtin* SL un coefcient de corrélation de 0,96, avec une intersection de l’axe des y à 2,1 sec. et une pente de 0,99.

Pathromtin* SL Uso Previsto Reagente per la determinazione del tempo di tromboplastina parziale attivato (APTT) nel plasma citratato umano.

Riassunto e Spiegazione Il Reagente Pathromtin* SL permette una rapida valutazione dei disturbi legati al sistema endogeno della coagulazione e rivela con sensibilità decit dei fattori VIII, IX e dei fattori di contatto. Utilizzato con plasmi carenti, il Reagente Pathromtin* SL è adatto per la determinazione dei singoli fattori della via intrinseca e per la diagnosi di emolia. Oltre a ciò, può essere usato per monitorare la terapia con eparina non frazionata1. La misura dell'APTT è indicata per rilevare potenziali soggetti emolici, in modo da sottopor li ad un adeguato trattamento terapeutico prima di un intervento chirurgico. La presenza di inibitori non-specici, come l’anticoagulante lupus-like, possono prolungare l’APTT. Questo effetto, però, è variabile e generalmente noto come un effetto collegato alla natura del reagente APTT utilizzato2.

Principio del Metodo L'incubazione del plasma con una quantità ottimale di fosfolipidi e di un attivatore di supercie determina l'attivazione dei fattori del sistema endogeno della coagulazione. L’aggiunta di ioni calcio innesca il processo della coagulazione; viene quindi misurato il tempo di formazione del coagulo di brina.

Reagenti Nota Pathromtin* SL può essere utilizzato manualmente o su analizzatori per coagulazione automatici. Siemens Healthcare Diagnostics fornisce Guide di Riferimento (Protocolli Applicativi) per diversi analizzatori per coagulazione. Le Guide di riferimento (Protocolli Applicativi) contengono informazioni sulla manipolazione e sulle prestazioni speciche per i diversi analizzatori/test che possono essere diverse da quelle fornite nelle presenti Istruzioni per l'uso. In tal caso, le informazioni contenute nelle Guide di riferimento (Protocolli Applicativi) sostituiscono le informazioni contenute nelle presenti Istruzioni per l’uso. Consultare anche il manuale di istruzioni del produttore dello strumento! Materiali forniti 10 x 5 mL, [REF] OQGS 29 20 x 5 mL, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200 Composizione Reagente Pathromtin* SL: particelle di biossido di silicio (1,2 g/L), fosfolipidi vegetali (0,25 g/L), cloruro di sodio, HEPES, pH 7,6 Conservante: sodio azide (< 1 g/L) Avvertenze e Precauzioni 1. Solo per uso diagnostico in-vitro . 2. Contiene sodio azide (< 1 g/L) come conservante. La sodio azide può reagire con le tubazioni in rame o piombo nelle linee di scarico formando composti esplosivi. Provvedere allo smaltimento in modo appropriato e secondo le normative locali. Preparazione dei Reagenti Il Reagente Pathromtin* SL deve essere delicatamente capovolto (da 5 a 8 volte) per miscelarlo prima del primo utilizzo e deve essere utilizzato a temperatura ambiente (da +15 a +25 °C). Ogni 24 ore di utilizzo, i l reagente deve essere capovolto per risospendere l’eventuale sedimento. Riscaldare la soluzione di cloruro di calcio 0,025 mol/L a +37 °C. Conservazione e Stabilità Prima dell'apertura il Reagente Pathromtin* SL può essere utilizzato no alla data di scadenza indicata sull’etichetta del acone se conservato, sigillato, a +2 a +8 °C. Dopo la prima apertura il Reagente Pathromtin* SL è stabile per 2 settimane se conservato a +2 a +25 °C. Le informazioni riguardanti la stabilità on-board sono specicate nelle Reference Guides (Protocolli Applicativi) per i diversi analizzatori per coagulazione. Materiale necessario, ma non fornito - Soluzione di Calcio Cloruro (CaCl2) 0,025 mol/L - Control Plasma N, oppure Dade ®  Ci-Trol ®  Livello 1 come controllo nell’intervallo normale - Control Plasma P, oppure Dade ®  Ci-Trol ®  Livello 2, oppure Dade ®  Ci-Trol ®  Livello 3 come controllo per l’intervallo patologico - Pipette di precisione da 0,1 mL - Provette di plastica - Analizzatore per coagulazione

Raccolta e preparazione dei campioni Per ottenere il plasma mescolare accuratamente 1 parte di soluzione di citrato sodico (0,11 mol/L) con 9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di schiuma. Centrifugare immediatamente per 15 minuti a 1500 x g, rimuovere il plasma sovranatante e mantenerlo da +15 a +25 °C no all’utilizzo nel test (max. 4 ore). Negli USA fare riferimento al Documen to CLSI H21-A5, intitolato "Raccolta, Trasporto e Analisi di Campioni di Sangue per l’Analisi della Coagulazione e l’Esecuzione di Test Coagulativi"3.

Littérature Voir la notice d’utilisation en anglais. * Pathromtin est une marque commerciale de Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol et Dade sont des marques commerciales de Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex est une marque déposée de SYSMEX CORPORATION. OQGSG29E0503 (209) Édition juin 2010 OQGSG29E0503 (209) SD 4

Procedura Procedura Manuale Distribuire in una provetta preriscaldata a +37 °C: Plasma citratato 100 µL Reagente Pathromtin* SL 100 µL incubare per 2 minuti a +37 °C Soluzione di cloruro di calcio (+37 °C!) 100 µL Dopo l’aggiunta della soluzione di cloruro di calcio azionare il cronometro o il dispositivo di misura sull'analizzatore per coagulazione e determinare il tempo di formazione del coagulo. Monitoraggio della terapia con eparina non frazionata mediante APTT Quando si utilizza l'APTT per questo scopo, occorre tenere in considerazione i fattori che inuenzano il test. Le considerazioni generali sono elencate qui di seguito. A) L'orario del prelievo è importante poiché l'emivita in-vivo  dell'eparina non frazionata è di circa 1,5 ore4. Quando viene somministrata, ha un immediato effetto anticoagulante, ma il grado di tale effetto diminuisce rapidamente nel tempo. Ciò è particolar mente evidente per singole somministrazioni venose intervallate. B) L'anticoagulante utilizzato durante il prelievo del campione può alterare i risultati del test. C) Il fattore piastrinico 4, un fattore di neutralizzazione dell'eparina rilasciato dagli alfa-granuli piastrinici, viene rilasciato a seguito di aggregazione o danno piastrinico. Per prevenire tale fenomeno in-vitro , il campione deve essere prelevato riducendo al minimo il trauma. È noto che le basse temperature inducono aggregazione piastrinica e rilasciano il fattore piastrinico 4; pertanto, per i test sull'eparina, si raccomanda di centrifugare il campione a temperatura ambiente. D) L'utilizzo dell'APTT per monitorare la terapia con eparina non frazionata dipende dal tempo. Un ritardo nell'analisi dei campioni produce risultati di APTT prolungati. Quindi è basilare che le analisi su tutti i campioni siano eseguite il più presto possibile. E) Aumentati tempi di attivazione da contatto possono produrre APTT prolungati nel plasma contenente eparina. È basilare che il tempo di incubazione-attivazione della miscela di Pathromtin* SL/plasma sia rigidamente standardizzato5. F) Sistemi analitici diversi (manuale, foto-ottico, ecc.) mostrano sensibilità variabile all'eparina. Evitare quindi di scambiare sistemi analitici diversi. G) Ove possibile, è consigliabile determinare il valore basale dell'APTT di ogni paziente prima di avviare la terapia, al ne di determinare l'APTT di ogni paziente rispetto all'intervallo di riferimento denito per il test nel laboratorio specico. H) Degli studi hanno mostrato una variabilità nelle stime originali circa la qualità dell'eparina non frazionata proveniente da fonti e da produttori diversi. La reattività in vivo  varia in funzione del tipo di eparina somministrata, del metabolismo del soggetto e della somministrazione concomitante di farmaci4,6. I) Poiché il valore di APTT può variare a seconda della tecnica, del metodo, della strumentazione, del lotto di reagente e dell'eparina utilizzati, ogni laboratorio deve stabilire i propri intervalli terapeutici, oppure vericare tali intervalli al variare di una o più delle condizioni citate. Ciò può essere ottenuto determinando simultaneamente l'APTT e la concentrazione di eparina su campioni di pazienti in terapia eparinica. È possibile estrapolare dai dati una curva dose-risposta applicando l'analisi della regressione e determinare l'intervallo di APTT corrispondente a una concentrazione di eparina pari a 0,3 - 0,7 U/mL (tramite un test di inibizione del fattore Xa) 4,6,7. Controllo di Qualità Interno Intervallo normale: Control Plasma N, oppure Dade ®  Ci-Trol ®  Livello 1 Intervallo patologico: Control Plasma P, oppure Dade ®  Ci-Trol ®  Livello 2, oppure Dade ®  Ci-Trol ®  Livello 3 Due controlli (uno per l’ intervallo normale e uno per l’intervallo patologico/terapeutico) devono essere misurati all’inizio di ogni ciclo analitico, dopo ogni cambio di acone del reagente, e almeno una volta ogni 8 ore. Il materiale di controllo deve essere preparato e processato allo stesso modo dei campioni dei pazienti. Ogni laboratorio dovrebbe denire i propri in tervalli di accettabilità per i controlli. L’intervallo è generalmente da ±2 a ±2,5 deviazioni standard dal valore medio del controllo. Se i valori dei controlli sono al di fuori dell’intervallo di accettabilità, occorre vericare i controlli, i reagenti e lo strumento. Prima di refertare i valori dei pazienti, si raccomanda di documentare tutte le azioni intraprese per identicare e correggere il problema. Nuovi intervalli di controllo dovrebbero essere deniti per ogni nuovo lotto di reagente o di controllo. Risultati Il risultato viene dato in secondi.

Limiti della Procedura Le interferenze per l’APTT sono descritte nei riferimenti bibliograci 8-10. Dosi terapeutiche di irudina o di altri inibitori diretti della trombina possono allungare i tempi di coagulazione11. La scelta dell’anticoagulante (es., ossalato invece di citrato) e la condizione dei campioni (es. emolizzati, lipemici, nutrizione parenterale, ecc.) possono inuenzare i risultati. L’ultima condizione vale in particolare per le misurazioni dell’APTT con strumentazione ottica. La preattivazione del campione a causa della tecnica di prelievo carente può portare a falsi risultati. In riferimento alla sezione “Gestione e Raccolta dei Campioni” del documento CLSI H21-A5 si raccomanda di utilizzare provette con parete idrofobica (es. plastica) piuttosto che provette di vetro. Siemens ha validato l’uso di questi reagenti su vari analizzatori per ottimizzare le prestazioni e rispettare le speciche dei prodotti. Le modiche denite dall’utente non sono supportate da Siemens poiché possono inuire sulle prestazioni del sistema e sui risultati del test. Pertanto è responsabilità dell’utente validare tutte le modiche apportate a queste istruzioni, l’uso dei reagenti su analizzatori diversi da quelli inclusi nei fogli di istruzioni o nelle istruzioni d’uso fornite da Siemens. I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del paziente, del quadro clinico e valutando contestualmente l’esito di altri accertamenti.

Valori Attesi Gli intervalli di riferimento variano da laboratorio a laboratorio secondo la popolazione afuente e secondo la tecnica, il metodo, la strumentazione ed il lotto di reagente utilizzati. Pertanto, ogni laboratorio deve denire i propri intervalli di riferimento o vericarli qualora cambi una o più delle variabili menzionate.

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In uno studio su soggetti evidentemente sani utilizzando un lotto specico di Reagente Pathromtin* SL, sono stati rilevati i seguenti valori:

Mediana

Intervallo di riferimento al 90% 5° Percentile 95° Percentile 100 soggetti Sysmex ®  CA-1500 30,9 sec. 26,4 sec. 37,5 sec. 111 soggetti Sistema BCS ®  30,2 sec. 25,9 sec. 36,6 sec. Anche gli intervalli di riferimento per altre popolazioni quali i gruppi pediatrici devono essere deniti ove richiesto.

Caratteristiche del test Precisione Sono state eseguite delle veriche di precisione mediante procedimento di misurazio ne ottico-densitometrico su plasmi normali e patologici, e su un pool di plasmi eparinizzati, per 5 giorni, due volte al giorno (n = 8 determinazioni al giorno), per un totale di 40 determinazioni. La precisione intra-ciclo è stata calcolata dai valori di precisione di n = 4 soggetti su cicli quotidiani per 5 giorni. La precisione intra-ciclo è risultata compresa nell’intervallo CV 0,6 - 2,0 %, mentre la precisione inter-ciclo è risultata CV 0,3 - 2,8 %. Confronto tra Metodi Confrontando i valori di APTT ottenuti con il Reagente Pathromtin* SL e i valori ottenuti con altri reagenti per APTT è stato determinato un coefciente di correlazione di 0,96 con intercetta 2,1 sec. e coefciente angolare di 0,99.

Bibliograa Vedere le istruzioni per l’uso in lingua inglese. * Pathromtin è un marchio di Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol e Dade sono marchi di Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex è un marchio registrato di SYSMEX CORPORATION.

Edizione Giugno 2010

Pathromtin* SL Campos de aplicación Reactivo para la determinación del tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPa) en plasmas humanos citratados.

Signicado diagnóstico La determinación del APTT con Reactivo Pathromtin* SL es un test rápido para la búsqueda de anomalías del sistema endógeno de la coagulación, que además registra con precisión tanto los factores VIII y IX como los factores de contacto. Pathromtin* SL, en colaboración con plasmas decientes, es apropiado para la determinación individual de los factores del sistema endógeno y para el diagnóstico de la hemolia. Además, también puede emplearse para el control de la terapia con heparina no fraccionada1. La medida de APTT está indicada como prueba de detección de los trastornos de la coagulación, especialmente antes de intervenciones quirúrgicas, con el n de poder someter a tratamientos preventivos a posibles hemofílicos. La presencia de inhibidores no especícos, como los anticuoagulantes similares al lúpico, puede pro longar el APTT. Este efecto es, sin embargo, variable y es generalmente reconocido como un efecto más relacionado con la naturaleza del reactivo APTT empleado 2.

Principio del método La incubación del plasma con cantidades óptimas de fosfolípidos y un activador de supercie conduce a una activación de los factores del sistema endógeno de la coagulación. Mediante la agregación de iones de calcio se desencadena el proceso de coagulación; se mide el tiempo transcurrido hasta la formación de un coágulo de brina.

Reactivos Nota Pathromtin* SL puede utilizarse con métodos manuales o en analizadores de coagulación automáticos. Siemens Healthcare Diagnostics pone a su disposición Guías de Referencia (Hojas de Aplicación) para varios analizadores de coagulación. Las Guías de Referencia (Hojas de aplicación) contienen información especíca sobre el manejo y el procedimiento correspondiente a los analizadores/ensayos que puede diferir de la ofrecida en estas Instrucciones de utilización. En ese caso, la información contenida en las Guías de Referencia (Hojas de Aplicación) reemplaza la información de las presentes Instrucciones de utilización. Le recomendamos que consulte también el manual de instrucciones del fabricante. Contenido de los envases comerciales 10 x 5 ml, [REF] OQGS 29 20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200 Composición Reactivo Pathromtin* SL: Partículas de bióxido de silicio (1,2 g/l), fosfolípidos vegetales (0,25 g/l), cloruro de sodio, HEPES, pH 7,6 Medio de conservación: Azida de sodio (< 1 g/l) Advertencias y medidas de seguridad 1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in vitro . 2. Contiene azida sódica (< 1 g/l) como conservante. La azida sódica puede reaccionar con las tuberías de cobre y plomo y formar azidas metálicas explosivas. Cuando se eliminen los reactivos, enjuagar con agua abundante para evitar la acumulación de azidas, si la eliminación es a través de los desagües sanitarios de acuerdo con la normativa vigente. Preparación de reactivos El reactivo Pathromtin* SL, antes de usarse por primera vez, debe resuspenderse invertiendo el frasco de 5 a 8 veces y debe ser usado a temperatura ambiente (entre +15 y +25 °C). La resuspensión se debe repetir cada 24 horas, para evitar efectos de sedimentación. Calentar la solución de cloruro de calcio 0,025 mol/l a +37 °C.

Estabilidad y almacenaje El Reactivo Pathromtin* SL, conservado cerrado entre +2 y +8 °C, es estable hasta la fecha de vencimiento dada en la etiqueta. Una vez abierto Reactivo Pathromtin* SL es estable durante 2 semanas si se mantiene entre +2 y +25 °C. Los datos de estabilidad están especicados en el manual de referencia (hojas de aplica ción) para cada uno de los analizadores de coagulación. Materiales adicionales necesarios, pero no incluido - Solución de cloruro de calcio (CaCl2) 0,025 mol/l - Plasma control N o Dade ®  Ci-Trol ®  nivel 1 como control para el intervalo normal - Plasma control P o Dade ®  Ci-Trol ®  nivel 2 o Dade ®  Ci-Trol ®  nivel 3 como control para los intervalo patológico/terapéutico - Pipetas para la medida exacta de 0,1 ml - Tubos de ensayo de plástico - Analizador de coagulación

Extracción y preparación de las muestras Para obtener el plasma, mezclar cuidadosamente 1 parte de solución de citrato de sodio (0,11 mol/l) con 9 partes de sangre venosa, evitando l a formación de espuma. Centrifugar inmediatamente por lo menos 15 min a un mínimo de 1500 x g, separar el plasma sobrenadante y mantenerlo entre +15 y +25 °C hasta la realización de la prueba (máx. 4 horas). En EE. UU., por favor, referirse al documento H21-A5 del CLSI ®  (Instituto de Normalización clínica y de laboratorio, del inglés Clinical and Laboratory Standards Institute) con el título “Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays”3.

Método Procedimiento manual: En un tubo de ensayo precalentado a +37 °C, pipetear: Plasma citratado 100 µl Reactivo Pathromtin* SL 100 µl Incubar 2 min. a +37 °C Solución de cloruro de calcio (¡+37 °C!) 100 µl Agregar la solución de cloruro de calcio y simultáneamente accionar el cronómetro o el aparato de medida de la coagulación y medir el tiempo de coagulación. Monitorización de la terapia con heparina no fraccionada mediante la determinación del TTPa Para el control de la terapia con heparina por medio de la determinación del TTPa se deben tener en cuenta los factores que pueden inuir en el resultado de la prueba. A continuación se resumen algunas advertencias generales. A) El tiempo de la extracción es importante, puesto que la semivida in-vivo   de la heparina no fraccionada es, aproximadamente, de 1,5 horas4. Tras su administración, posee un efecto anticoagulante de acción inmediata que, sin embargo, disminuye rápidamente con el paso del tiempo. Este efecto se observa claramente cuando se inyecta por vía intravenosa en dosis única y aislada. B) El anticoagulante utilizado para la extracción de la sangre puede alterar los resultados de la prueba. C) El calcio plaquetario, contenido en los gránulos α de los trombocitos, es un factor neutralizante de la heparina y puede ser liberado por agregación o alteración trombocíticas. Para evitar este tipo de procesos in-vitro , las muestras deben ser extraídas con sumo cuidado. Dado que las bajas temperaturas desencadenan la agregación plaquetaria y la liberación del calcio plaquetario, las muestras con heparina deben ser centrifugadas a temperatura ambiente. D) El control de la terapia con heparina no fraccionada mediante la determinación del TTPa depende del tiempo de análisis. Si se retrasa el análisis de las muestras, los resultados de las determinaciones del TTPa se alargarán. Por lo tanto, es esencial que el análisis de todas las muestras se realice a la mayor brevedad posible. E) En plasmas que contengan heparina puede producirse una prolongación del TTPa debido al aumento del tiempo de la activación de contacto. Es esencial que se normalice de manera rigurosa el tiempo óptimo de activación por calor de la mezcla Pathromtin* SL-plasma5. F) Los diferentes métodos de análisis (p. ej., manual, luminiscencia, etc.) presentan diferente sensibilidad a la heparina. Por lo tanto, no deben alternarse. G) Antes de empezar el tratamiento y en la medida de lo posible, se deben determinar los valores de referencia del TTPa de cada paciente y compararlos con el intervalo normal para la prueba del propio laboratorio. H) Diversos estudios han demostrado que la calidad de la heparina no fraccionada varía respecto de las estimaciones iniciales en función de su origen y el fabricante. La reactividad in-vivo  de la misma varía en función de la heparina aplicada, del metabolismo del paciente y de otros medicamentos administrados simultáneamente4,6. I) Ya que el TTPa puede variar dependiendo de las técnicas de trabajo, los métodos, los instrumentos, el lote del reactivo y de la heparina utilizados, cada laboratorio debe determinar sus propios intervalos terapéuticos o vericarlos cada vez que se modique alguno de los parámetros mencionados anteriormente. Esto se puede llevar a cabo mediante la determinación simultánea del TTPa y la concentración de heparina en muestras de pacientes sometidos a un tratamiento con heparina. Por medio de un análisis de regresión de los datos se puede calcular una curva de dosis-respuesta y extrapolar el intervalo del TTPa correspondiente a una concentración de heparina de 0,3 a 0,7 U/ml (determinada por una prueba de inhibición del factor Xa)4,6,7. Control de calidad interno Intervalo normal: Plasma control N o Dade ®  Ci-Trol ®  nivel 1 Intervalo patológico: Plasma control P o Dade ®  Ci-Trol ®  nivel 2 o Dade ®  Ci-Trol ®  nivel 3 Se deben medir dos niveles de control (uno en el intervalo normal y uno en el intervalo patológico/terapéutico), al comienzo de cada serie de análisis, en cada cambio de frasco del reactivo y por lo menos cada 8 horas en un día de trabajo. El material de control debe ser tratado como las muestras de pacientes. Cada laboratorio debe determinar sus propios intervalos de conanza para los controles. Este intervalo, por lo general se encuentra entre ±2 a ±2,5 desviaciones estándard (s) del valor promedio del control. Si los resultados de las medidas del control se encuentran fuera del intervalo de conanza, se deben compro bar los controles, los reactivos y los instrumentos. Antes de comunicar los resultados de los pacientes, se recomienda documentar todas las medidas tomadas para identicar y eliminar el problema. Para cada nuevo lote de reactivos o de controles se debe denir un nuevo intervalo de referencia. OQGSG29E0503 (209) SD 6

Resultados Los resultados de las medidas se deben dar en segundos.

Limitaciones del procedimiento Sobre alteraciones del APTT se informa en la literatura8-10. Dosis terapéuticas de hirudina o de otros inhibidores directos de la trombina pueden conducir a tiempos prolongados de coagulación11. Los resultados pueden también ser inuenciados por el anticoagulante escogido (por ej., oxalato en lugar de citrato), así como también, por las condiciones de la muestra (por ej., hemolítica, lipémica, alimentación parenteral, etc), la cual es de gran signicado en la determinación óptica del APTT. Una preactivación dependiente de la toma de la muestra puede conducir a resultados falsos. En la sección sobre Toma y manejo de las muestras del documento H21-A5 del CLSI se recomienda usar tubos de ensayo con una supercie no mojable (por ej., plástico) en lugar de tubos de vidrio. Siemens ha validado el uso de los reactivos en varios analizadores para optimizar el rendimiento del producto y cumplir con las especicaciones del mismo. Las modicaciones denidas por el usuario no están garantizadas por Siemens dado que pueden afectar al rendimiento del sistema y a los resultados del ensayo. Es responsabilidad del usuario validar las modicaciones realizadas a estas instrucciones o el uso de los reactivos en analizadores distintos a los incluidos en las hojas de aplicaciones de Siemens o en estas instrucciones de uso. Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia clínica del paciente, la sintomatologia clínica y otras observaciones.

Rangos de referencia Intervalos de referencia El intervalo de referencia varía de laboratotio a laboratorio, dependiendo de la población investigada y de las técnicas de trabajo, métodos, instrumentos y lotes de referencia utilizados. Por esta razón, cada laboratorio debe determinar sus propios intervalos de referencia basados en las correspondientes técnicas de trabajo, métodos, instrumentos y lotes de referencia utilizados, como también el vericar el intervalo de referencia al cambiar alguno de los parametros arriba mencionados. En un estudio realizado con individuos presuntamente sanos, para un lote especíco del reactivo Pathromtin* SL , se obtuvieron los siguientes resultados: Mediana

90% Intervalo de referencia 5. percentil 95. percentil  ®  100 Individuos Sysmex  CA-1500 30,9 seg. 26,4 seg. 37,5 seg. 111 Indivicuos Sistema BCS ®  30,2 seg. 25,9 seg. 36,6 seg. Para otros colectivos, como por ej., pacientes pediátricos, se debe determinar, en cada caso, su propio intervalo de referencia.

Características de la prueba Precisión Con un procedimiento de medición optodensitométrico se realizaron medidas de precisión de plasmas normales, patológicos y de un pool de plasmas heparínicos durante 5 días, dos veces al día (n = 8 determinaciones por día), con un total de 40 determinaciones. El coeciente de variación en la serie se obtuvo a partir de los valores de una determinación cuádruple, dando un resultado entre 0,6 y 2,0 %, mientras el coeciente de variación día a día fue entre 0,3 y 2,8 %. Comparación de métodos Al comparar una determinación de APTT con Reactivo Pathromtin* SL y una con otro reactivo para APTT se encontró para Reactivo Pathromtin* SL un coeciente de correlación de 0,96 para un corte de eje-y de 2,1 seg. y una pendiente de 0,99.

Bibliografía Ver instrucciones de utilización en inglés. * Pathromtin es una marca comercial de Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol y Dade son marcas comerciales de Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex es una marca registrada de SYSMEX CORPORATION.

Edición Junio 2010

Pathromtin* SL Campo de aplicação

Reagente para determinação do tempo de tromboplastina parcial activado (TTPA) em plasmas humanos citratados.

Signicado diagnóstico A determinação do TTPA com Reagente Pathromtin* SL é um teste rápido para detecç ão de transtornos do sistema intrínseco da coagulação e que detecta de modo sensível os factores VIII e IX, assim como os factores de contacto. Usado com plasmas decitários, Reagente Pathromtin* SL é um instrumento apropriado para a determinação de factores singulares do sistema intrínseco e o diagnóstico da hemolia. Além disso, pode ser utilizado para o controlo da terapia heparínica.

Pode ainda ser usado para monitorizar a terapia com heparina não fraccionada 1.

A presença de inibidores não especícos, como os anticoagulantes lúpicos, pode prolongar o TTPA, mas este efeito é variável e geralmente atribuido à natureza do reagente de TTPA utilizado 2.

Princípio metodológico A incubação do plasma com quantidades óptimas de fosfolípidos e um activador de superfície leva a uma activação dos factores do sistema intrínseco da coagulação. Mediante a agregação de iões de cálcio é desencadeado o processo de coagulação. Mede-se o tempo transcurso até à formação de um coágulo de brina.

Reagentes Nota Pathromtin* SL pode ser utilizado manualmente ou em analisadores de coagulação automatizados. A Siemens Healthcare Diagnostics fornece guias de consulta (folhas de instruções de aplicação) para vários analisadores de coagulação. Os guias de consulta (folhas de instruções de aplicação) contêm informações especícas sobre o manuseamen to e desempenho do analisador/teste que podem diferir das fornecidas nestas instruções. Numa situação destas, as informações contidas nos guias de consulta (folhas de instruções de aplicação) substituem as informações nestas instruções. Consulte ainda o manual de instruções do fabricante do aparelho!

Conteúdo da embalagem comercial 10 x 5 ml, [REF] OQGS 29 20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200 Composição Reagente Pathromtin* SL: Partículas de dióxido de silício (1,2 g/l), fosfolípidos vegetais (0,25 g/l), cloreto de sódio, HEPES, pH 7,6 Agente de conservação: azida sódica (< 1 g/l) Advertências e medidas de precaução 1. Só para uso diagnóstico in-vitro . 2. Contém azida de sódio (< 1 g/l) como conservante. A azida de sódio pode reagir com os tubos de cobre ou de chumbo das canalizações de esgotos formando compostos explosivos. Elimine este produto de forma correcta e de acordo com as regulamentações locais.

Preparação dos reagentes Antes do primeiro uso, o Pathromtin* SL tem de ser resuspenso invertendo o frasco 5 a 8 vezes e é utilizado à temperatura ambiente (+15 a +25 °C) . A resuspensão tem de ser repetida a cada 24 horas, para evitar os efeitos da sedimentação! Aquecer a solução de cloreto de cálcio 0,025 mol/l a +37 °C. Estabilidade e condições de conservação Não aberto, e conservado entre +2 e +8 ° C, Reagente Pathromtin* SL mantém-se utilizável até à data de validade indicada no rótulo. Uma vez aberto, mantém-se estável durante 2 semanas à temperatura de +2 a +25 °C. As indicações sobre a estabilidade no aparelho estão mencionadas nos manuais de referência (instruções de aplicação) para os diferentes coagulómetros. Outros materiais necessários - Solução de cloreto de cálcio (CaCl2) 0,025 mol/l - Plasma de controlo N ou Dade ®  Ci-Trol ®  Level 1 como controlo para o intervalo normal - Plasma de controlo P ou Dade ®  Ci-Trol ®  Level 2 ou Dade ®  Ci-Trol ®  Level 3 como controlo para o intervalo patológico/terapêutico - Pipetas para a medição exacta de 0,1 ml - Tubinhos de ensaio em plástico - Analisador de coagulação

Colheita e preparação de amostras Para obter o plasma, misturar cuidadosamente 1 parte de solução de citrato de sódio (0,11 mol/l) com 9 partes de sangue venoso, evitando formação de espuma. Centrifugar, imediatamente, durante 15 min. no mínimo a 1500 x g, recolher o plasma sobrenadante e conservar até à realização do teste à temperatura entre +15 e +25 °C (4 horas, no máximo). Nos EUA, por favor consultar o documento CLSI H21-A5 com o título „Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays“3.

Procedimento Execução manual: Pipetar para um tubo de ensaio pré-aquecido a +37 °C: Plasma citratado 100 µl Reagente Pathromtin* SL 100 µl Deixar incubar 2 min a +37 °C Solução de cloreto de cálcio (+37 °C!) 100 µl Simultaneamente com a adição de solução de cloreto de cálcio, pôr em marcha o cronómetro ou o aparelho de medição da coagulação e determinar o tempo de coagulação. Monitorização da terapia da heparina não fraccionada com APTT Para a monitorização da terapia de heparina através da determinação de APTT, é necessário tomar em consideração os factores que podem ter inuência no resultado do teste. Seguidamente, apresenta-se o resumo de algumas indicações gerais: A) Uma vez que o valor de semi-vida da heparina não fraccionada in-vivo  é de aprox. 1h 30m4, o momento da colheita de sangue tem uma importância decisiva. A heparina administrada possui um efeito que provoca imediatamente a supressão da coagulação, efeito esse que diminui outra vez, rapidamente. Este efeito pode ser observado com especial evidência nas injecções individuais intravenosas administradas intermitentemente. B) O anticoagulante usado para a colheita da amostra pode inuenciar os resultados do teste. C) Com a agregação ou deterioração das plaquetas, o factor de plaqueta 4, um factor neutralizador de heparina, pode ser libertado dos grânulos alfa das plaquetas. Para evitar estes processos in-vitro , é necessário colher as amostras com o máximo cuidado. Uma vez que, como é sabido, as baixas temperaturas desencadeiam a agregação de plaquetas e, por conseguinte, a libertação do Factor de plaqueta 4, as amostras para os testes de heparina devem ser centrifugadas à temperatura ambiente. D) A monitorização da terapia com heparina não fraccionada através da determinação APTT depende do tempo. Os atrasos no processamento das amostras podem provocar um prolongamento do APTT. Por conseguinte, as amostras têm de ser analisadas o mais cedo possível. E) O prolongamento da activação do contacto no plasma que contém heparina pode provocar o prolongamento do APTT. Por isso, é preciso normalizar rigorosamente 5 o tempo de incubação optimizado da mistura de plasma Pathromtin* SL. F) Uma vez que os diferentes métodos de teste (p. ex., manual, foto-óptico) possuem sensibilidades à heparina diferentes, deverá evitar-se a mudança do método utilizado. G) Para a determinação do APTT especíco do paciente, o valor básico APTT do pa ciente deverá ser determinado e comparado com o i ntervalo de referência próprio do laboratório, de preferência antes do início da terapia. H) Estudos demonstraram que as características da heparina não fraccionada proveniente de diferentes fabricantes e fontes divergem das especicações admitidas ori ginalmente. A reactividade in-vivo  depende do tipo da heparina administrada, do metabolismo do paciente e dos outros medicamentos utilizados simultaneamente4,6. I) Como o APTT pode variar consoante a técnica, método, equipamento, lote de reagentes e heparina utilizados, cada laboratório deve estabelecer os seus próprios intervalos terapêuticos ou vericá-los sempre que uma ou mais das variáveis aci ma mencionadas for alterada. Isto pode ser feito determinando simultaneamente o APTT e a concentração de heparina em amostras de pacientes em tratamento com heparina. A curva de resposta à dose pode ser calculada a partir dos dados que utilizam a análise de regressão e o intervalo de APTT correspondente a uma concentração de heparina de 0,3 – 0,7 U/ml (por um teste de inibição do factor Xa) pode ser calculado4,6,7.

OQGSG29E0503 (209) SD 7

Controlo de qualidade interno Intervalo normal: Plasma de controlo N ou Dade ®  Ci-Trol ®  Level 1 Intervalo patológico: Plasma de controlo P ou Dade ®   Ci-Trol ®   Level 2 ou Dade ®  Ci-Trol ®  Level 3 No início de uma série de teste, em cada mudança de reagente e uma vez, no mínimo, durante um turno de 8 horas, deverão ser medidos dois controlos (um no intervalo normal e um no intervalo patológico/terapêutico). O material de controlo deverá ser tratado como o plasma do paciente. Cada laboratório deverá determinar o seu intervalo de conança próprio para os controlos. Normalmente, este apresenta desvios (s) standard de ± 2 a ± 2,5 em relação ao valor de controlo médio. Se os valores de controlo se situarem fora do intervalo de conança, é necessário controlar os controlos, os reagentes e o aparelho. É aconselhável documentar todas as medidas que foram tomadas para a constatação e eliminação do problema antes da divulgação dos valores do paciente. Para cada lote de reagente ou controlo novo deverão ser denidos intervalos de controlo novos. Resultados O resultado da medição é expresso em segundos.

Limitações do procedimento A literatura faz referências a perturbações de APTT 8-10. As doses terapêuticas de hirudina ou outros inibidores directos de trombina podem originar tempos de coagulação prolongados 11. Além disso, os resultados podem ser inuenciados pelo anticoagulante escolhido (p. ex., oxalato em vez de citrato), e pelas características da amostra (p. ex., hemolítica, lipémica, alimentação articial, etc.), que são importantes, sobretudo, para a determinação óptica do APTT. A activação prévia da amostra condicionada pela colheita, pode provocar resultados incorrectos. No capítulo sobre a colheita e manipulação de amostras do documento CLSI H21-A5 recomenda-se que sejam utilizados tubinhos de ensaio com superfície não humectante (p. ex., plástico), em vez de tubinhos de vidro. A Siemens validou a utilização destes reagentes em vários analisadores, com o intuito de optimizar o desempenho do produto e satisfazer as especicações do produto. As modica ções denidas pelo utilizador não são suportadas pela Siemens, na medida em que podem afectar o desempenho do sistema e os resultados do ensaio. Constitui responsabilidade do utilizador validar as modicações efectuadas nestas instruções ou em relação ao uso dos reagentes noutros analisadores que não os incluídos nas folhas de instruções de aplicação da Siemens ou nestas instruções de utilização. Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados em conjunto com o histórico médico do doente, estado clínico e outros dados de interesse.

Intervalos de referência

Os intervalos de referência variam de laboratório para laboratório em função da população a analisar, técnicas de trabalho, métodos, aparelhos e lotes de reagentes utilizados. Por isso, cada laboratório deverá determinar intervalos de referência próprios com base nas respectivas técnicas de trabalho, métodos, aparelhos e lotes de reagentes utilizados, ou vericar os intervalos de referência após mudança dos parâmetros acima referidos. Num estudo efectuado com indivíduos examinados aparentemente saudáveis, obtiveramse os seguintes valores com um lote especíco do reagente Pathromtin* SL: Média Intervalo de referência 90 % 5.º Percentil 95.º Percentil 100 Indivíduos examinados com Sysmex ®  CA-1500 30,9 seg. 26,4 seg. 37,5 seg. 111 Indivíduos examinados no sistema BCS ®  30,2 seg. 25,9 seg. 36,6 seg. Para os outros colectivos, como p. ex., pacientes pediátricos, também deverão ser determinados intervalos de referência próprios.

Características do teste

Precisão Com um processo de medição optodensitométrico foram efectuadas medições de precisão de plasmas normais, patológicos e de um pool de plasmas heparínicos durante 5 dias, 2 vezes por dia (n = 8 determinações por dia), com um total de 40 determinações. Os coecientes de variação intra-assay foram calcul ados a partir de cada uma das determinações quádruplas e obtiveram-se resultados compreendidos entre 0,6 e 2,0 %, enquanto que, para os coecien tes de variação inter-assay, foram achados valores situados entre 0,3 e 2,8 %. Comparação de métodos A comparação de uma determinação do TTPA com Reagente Pathromtin* SL com outra efectuada com outro reagente para TTPA revelou para Reagente Pathromtin* SL um coeciente de correlação de 0,96 com uma intersecção do eixo y de 2,1 seg. e um coeciente angular de 0,99.

Bibliograa Ver Instruções em inglês. * Pathromtin é uma marca comercial da Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol e Dade são marcas comerciais da Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex é uma marca registada da SYSMEX CORPORATION.

Edição Junho 2010

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