Pasos para La Fijacion de Una Muestra

 

P SOS P R L

FIJ CION DE UN MUESTR

Se denomina técnica histológica al conjunto de operaciones a que se somete una materia organizada (tejido biológico), biológico), a fin de que sea posible su estudio por medio del microscopio, microscopio,   posibilitando la observación de estructuras no visibles al ojo humano. La fijación es esencialmente un método para la preservación de la morfología y composición química de la célula.  célula.  Durante la fijación, las sustancias albuminoides del tejido pasan del estado sol, como se encuentran en vida, al de gel, cuyo contenido de agua es menor. De esta manera, se detienen los procesos posmortem y las estructuras se conservan con un mínimo de artificios, preparándolas para tratamientos ulteriores.

PASOS DE LA TECNICA HISTOLOGIA  Obtención

del material histológico para estudiar   Proceso de fijación   Lavados  Deshidratación   Aclaramiento  Infiltración   Inclusión   Microtomía   Tinción   Observación

(Este último no es considerado como un paso de la técnica histológica por varios autores).

Obtención del material histológico Los tejidos se pueden obtener de diferentes formas:   Biopsia

Biopsía excisional, biopsia incisional, biopsía endoscópica, biopsia colposcópica, punción aspiración con aguja fina (PAAF), biopsia por punción con aguja gruesa (Tru-cut).

 

 Abiopsia   Necrocirugía

Fijación Operación destinada a matar las células.

Lavados Se debe lavar el tejido para quitar el exceso de fijador.

Deshidratación Suena incoherente que se deba lavar el tejido y después deshidratarlo. El exceso de fijador al momento de la infiltración, incluso en la microtomía, podría afectar los cortes histológicos, histológicos,   y por ello se debe lavar. La deshidratación se hace empleando diferentes soluciones de alcohol de concentración concentració n creciente.

Aclaramiento En este paso se sustituye el alcohol por un disolvente de parafina. parafina. El  El más usado es el xilol el xilol (xileno) (xileno) ya  ya que como la muestra está deshidratada, el xilol entrará hasta lo más profundo del tejido. También el tejido pierde color y adquiere un tono acaramelado. acaramelado.

Infiltración En este paso la muestra se coloca en parafina líquida, cabe mencionar que se debe usar parafina histológica. Como se ha dicho en el paso anterior el tejido está completamente lleno de xilol, ahora debido a ósmosis sale el xilol y entra la parafina. La deshidratación, aclaramiento e infiltración pueden ser realizadas manualmente pero hoy en día se realizan de modo automático en máquinas específicas.

 

Inclusión  Aquí se forman bloques de parafina dentro de los cuales están las muestras a estudiar. También hay maquinas especializadas para la inclusión en parafina de tejidos. Después de su inclusión y posterior secado, estos se deben poner a enfriar en un congelador para su posterior corte.

Microtomía Se realizan cortes histológicos muy delgados según lo requerido o la costumbre del laboratorio donde se realice la técnica. Los cortes van desde 0,5 micras hasta 8 u 10 micras. Los cortes se echan al baño de flotación y se “pescan” con un portaobjetos, se marcan con la fecha, el tipo de tejido y la tinción con que se van a procesar. El ángulo de corte entre el cuchillo del micrótomo y el bloque ha de estar entre 10º y 15º. Una vez realizado el corte se da un baño de agua destilada, para que la parafina se estire. Un buen corte histológico debe tener un grosor aproximado de 3-5 micras para que sea fácilmente atravesado por la luz.

Tinción Hay muchos tipos de tinciones para diferenciar en los tejidos las diferentes estructuras. La tinción más usada o también llamada "de rutina" es la de hematoxilina de  hematoxilina y eosina (H&E). Se usa un colorante llamado hematoxilina que tiñe las sustancias ácidas o que las contengan, como el núcleo que contiene ácido desoxirribonucleico (ADN). (ADN). La eosina amarillenta tiñe las estructuras básicas como el citoplasma el citoplasma y demás orgánulos orgánulos eosinofílicos  eosinofílicos de la célula. la célula.   Como se mencionó anteriormente hay muchas tinciones Otros ejemplos son:

 

Masson PAS Perls Plata metenamina

 

Warthin-Starry

 

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Ziehl-Neelsen Van Gieson  Azul alcian Sudán III Rojo Congo

Observación Como se mencionó al principio algunos autores no consideran la observación como un paso de la técnica histológica sino el objetivo final de la misma. Como se puede deducir, se observa la laminilla al microscopio y se busca lo que se necesite ver para llegar a un diagnóstico. La técnica histológica es muy empleada en laboratorios y hospitales. Permite hacer diagnósticos de distintas enfermedades, como para saber si un tumor es maligno o beningno, etc.