Ovogenesis y Vitelogenesis

El ovocito: estructura, desarrollo y evaluación de la calidad de la puesta

M.Sc. Beatriz Angeles

Primera fase de desarrollo ovárico 

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Ovario en alevín de lubina ta= túnica albugínea (tejido conectivo con músculos de fibra lisa y vasos sanguíneos) Opn= folículos perinucleolares

Laminillas ováricas

50μ Carrillo et al, 2009

Previtelogénesis  

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ovogonias y ovocitos primarios Ovogonias: división mitótica (núcleo grande y un nucleolo) Ovocitos primarios: células somáticas separan ovocitos contiguos y forman unidad folicular definitiva (capa folicular o granulosa y lámina basal, y teca que rodea los folículos (tejido conjuntivo vascularizado)

opn= ovocito perinucleolar opnt= ovocito perinucleolar tardío CO= cavidad ovárica Carrillo et al, 2009

Previtelogénesis 

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Ovocitos primarios antes de iniciar vitelogénesis presentan transformaciones que afectan núcleo, nucleolo y citoplasma. Estado perinucleolar (aparición de nucleolos situados en la periferia del núcleo) Incremento del volumen (aprox. 100 veces) y se rodea de células foliculares. Se originan alveolos corticales (mucopolisacáridos y glicoproteínas) formando un anillo alrededor del núcleo y son desplazados hacia la periferia del ovocito  se liberan durante la fecundación

 Vitelogénesis  Acumulación de material de reserva (vitelo) por efecto del E2 y de la acción de la FSH plasmática.  La FSH estimula la actividad de la aromatasa de los folículos ováricos.   Vitelo (proteínas, glucógeno y lípidos) transportado por vía sanguínea, atraviesa envoltura folicular y membrana plasmática del ovocito. 

 Vitelogénesis a 

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 Acumulación de material de reserva en forma de vitelo Captación de vitelogenina (glicolipofosfoproteína hepática) por micropinocitosis de la sangre, y formación de gránulos de vitelo (Vg+glucógeno+glicolípidos). En huevos pelágicos coalescencia del vitelo y formación de gotas de grasa

zr gv

N

N

PV

V zr

Zr= zona radiata N = núcleo l= lípidos a= alveolos corticales gv= gránulos de vitelo Carrillo et al, 2009

Maduración final del ovocito 

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El ovocito continua y completa la primera división meiótica, y progresa hasta la metafase de la 2da división meiótica. Se da migración del núcleo o vesícula germinal al polo animal. Ruptura de la vesícula germinal, condensación de cromosomas y emisión del primer corpúsculo polar (fin de la primera división meiótica)

Maduración final del ovocito 

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Granulos de vitelo y vacuolas lipídicas sufren coalescencia y en peces marinos se incrementa el volumen ovocitario por hidratación En este proceso actúan las uniones entre el ovocito y la envuelta folicular.

Parenti, 2004

Maduración final del ovocito 

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MIH o EIM (hormona esteroide inductora de la maduración) está relacionado con la unión entre células foliculares y ovocito) permite paso de nutrientes y factores hormonales entre ambos Ovulación es la liberación del ovocito al lumen ovárico o al celoma abdominal. Ruptura de la cubierta folicular por acción de enzimas proteolíticas y por contracción del folículo

 Atresia Degeneración y absorción de ovocitos en cualquier fase de su desarrollo.  Los cuerpos atrésicos son más frecuentes en la postpuesta   Atresia= hipertrofia de las células foliculares, fragmentación de la capa radiada y posterior digestión Ocurre de forma natural o puede ser provocada por estrés ambiental o deficiencias hormonales 

Control hormonal de la vitelogénesis 

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E2 actúa a nivel gonadal para estimular el desarrollo ovocitario pero también para controlar la expresión de los genes de los tejidos no gonadales requeridos para el crecimiento de los ovocitos. E2 induce la producción en el hígado de la coriogenina H (formación del corion) y vitelogenina (complejo fosfolipídico para desarrollo ovocito y alimentación embrionaria).

 Vitelogenesis 17a, 20b dihidroxiprogesterona

Ng/ml

testosterona

Vitelogenina

estradiol

previtelogénesis

vitelogenesis maduración

ovulación

Vitelogénesis: Acumulación de reservas vitelinas en forma de gránulos Durante la vitelogénesis los ovocitos se mantienen en la primera profase meiótica

Control hormonal de la vitelogénesis  Vitelogenina, producida en mayor proporción por hembras, permite realizar ensayos para determinar el sexo fenotípico del pez o para evaluar el efecto feminizante de poluentes.  Tratamientos con estrógenos en machos pueden generar la síntesis de vitelogenina en pequeñas proporciones en el testículo (tilapia). 

Control hormonal de la vitelogénesis 

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Los andrógenos pueden inducir la producción de vitelogenina en hepatocitos en trucha, este efecto es bloqueado con el tamoxifen (bloqueador de receptores), indica que la estimulación ocurre a nivel de receptores de estrógenos. La vitelogenina se encuentra relacionada con el control de retroalimentación de los niveles de estrógeno. (>vitelogenina 50%) Porcentaje de fertilización de los huevos (>70%)  Aspecto del corion  Simetría en los 1ros estadíos de clivaje % de huevos eclosionados Supervivencia larvaria Composición química de los huevos Silva (Ed), 2005

Determinación de la calidad de los ovocitos 

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Las técnicas de evaluación permiten mejorar las condiciones de maduración de los reproductores y la producción de alevinos. Los factores paternos y maternos operan en diferentes tiempos y de diferentes manera.  Efectos paternos se observan la primera fase (densidad espermática, motilidad), y los maternos posteriormente (sobrevivencia embrionaria).

Determinación de la calidad de los ovocitos 

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Con fertilización externa: ovocitos pelágicos o demersales. Diferencia: estado de desarrollo larval al momento de la eclosión. Huevos pelágicos larvas ciegas con boca y ano cerrado. Huevos demersales huevos con ojo, larvas nadadoras con boca grande, pueden alimentarse de dietas formuladas (finalizada la reabsorción del saco vitelino).

Determinación de la calidad de los ovocitos 

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Periodo de incubación mayor en larvas demersales que en pelágicas (depende de Tº) (p ej. Trucha: 30 días, gamitana:12-18 horas), Desarrollo embrionario (sujetos a factores externos) Reabsorción del saco vitelino: trucha: 15-18 días, gamitana:3-5 días Los parámetros de calidad son diferentes entre ambos.

Evaluación en ovocitos extraídos manualmente

Evaluación de la calidad en desoves naturales

Evaluación de los ovocitos peces amazónicos Selección por Características

Obtención de muestras de ovocitos Solución de Gilson 30 min

Medición del diámetro De los oocitos (n>200) Calculo de la frecuencia de Distribución y valor modal

Solución de Serra 1-2 min

Observación de la posición Del núcleo en el ovocito (n> 200)

Realizar la inducción

Selección de reproductores peces amazónicos  

Por características externas Por biopsia ovárica (posición del núcleo en el ovocito) Solución aclaradora: Liq. Serra (etanol:formol:acido acético glacial= 7:2:1)

Núcleo ausente

Shoking 

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Sifoneo de los huevos y se dejan caer libremente desde una altura de 50cm. Eliminación de embriones débiles. Lote se coloca en salmuera (60-70 gr sal/L agua) por 10 min Se limpian las estructuras de incubación Se sigue el periodo de incubación (queda un 30% del tiempo) o se realiza el empaque y envío.