Mini Manual de Bio (1)

5.- Metabolismo Energético celular: 1*Experimento Presencia de pigmentos Fotosintéticos

extraídos de la hoja de cardenal . Cabe Se ponen en un tubo de ensayo los pigmentos fotosintéticos extraídos destacar que los pigmentos fotosintéticos fueron hervidos hervidos con alcohol, por lo tanto en la mezcla están presente tanto los pigmentos como el alcohol de 95º.  Al tubo de ensayo se le agrega un volumen, volumen, inferior al del extracto de pigmentos, de Bencina blanca.

Como sabemos, la Bencina blanca es un compuesto de tipo apolar o Hidrofóbico y por lo tanto se unirán a él, moléculas de tipo apolar. En cambio, el alcohol etílico es de tipo  polar, es decir, hidrofílico y por ende se unirán a él todos los componentes polares.

Cloroplastos Propósito: Observar los cloroplastos PARED

Tinción: S/T Descripción: Se ven los cloroplastos pegados o muy cerca a la pared celular esto porque esta la gran vacuola que tira a los cloroplastos a los extremos, llama la atención que son una gran cantidad de cloroplatos.

CELULAR

VACUOLA

21

¡¡¡Mini  M Manual  d de  B Biologí a!!!

Tabla Comparativa entre Apoptosis y Necrosis

Apoptosis

Necrosis

Mecanismo

Programada Genéticament Genéticamentee

Accidental

Restos Celulares

Son reconocidos y fagocitados

Inducen inflamación local

Fragmentación celular

En cuerpos apoptóticos por membrana

Los contenidos de los orgánulos se liberan

Fragmentación del DNA

Temprana, Fragmentos oligonuclesomales

Tardía, Fragmentos grandes

Orgánulos

Se preservan

Se desintegran

Membrana

Se mantiene

Se rompe

Tamaño celular

Disminuye

Aumenta 41

Índice: 1.- Microscopia……………………………………………………………………………..1 2.-Morfología de los seres vivos………………………………………………….. .3 3.-Métodos de estudio de biología celular……………………………………10 4.- Organización celular Eucarionte…………………………………………….14 5.- Metabolismo energético celular…………………………………………….21 6.- Ciclo celular y Apoptosis………………………………………………………. 28 7.- Meiosis ………………………………………………………………………………… 34 8.- Gametogénesis……………………………………………………………………. .36

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Nombre preparación: Aplastado de Meristemo de Cebolla

•

Propósito: Observación de nucleolos

•

Tinción: Argéntica (Sales de plata)

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Aumento Total: 400X

•

Descripción : Se observan células de color café claro, con hasta cuatro nucléolos  y un núcleo café oscuro. Las células alargadas son producto del mismo aplastado. Las células se ven cuadradas y bien definidas gracias a su pared celular.

La Mayoría de las células están en interfase, esto se sabe por la presencia de nucléolos.

Las células pueden tener uno o varios nucléolos en su núcleo, esto por la necesidad de síntesis de proteínas. Depende del momento de interfase en el que se encuentre.

•

Nombre preparación: Aplastado de Meristema de Cebolla

•

Propósito: Observación de estadíos Mitóticos

•

Tinción: Orceína Acética 2%

•

Aumento Total: 400X

•

Descripción: Se ve interfase, profase, metafase, anafase, telofase e incluso una citocinesis. Los cromosomas se distinguen de un color violeta, mientras que el contenido citoplasmático es calipso.

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•

Nombre preparación: C.T. de lombriz de tierra

•

Propósito: Fase “S” (inicial o terminal)

•

Tinción: H/E con técnicas de radioautrografia y sales de plata

•

Aumento Total: 400X

•

30

32

Descripción : Se ven regiones de color negro que corresponden a la presencia de la fase S. Se reconoce gracias a la Timidina Tritiada , pues reconoce a su base complementaria en el ADN y actúa como un marcador. Como sabemos, la fase S es aquella en la que se sintetiza material genético

A la lombriz se le inyecto Timidina Triteada en exceso (Timina marcada con tritio H3)

G1

2C

S

4C

G2

4C

M

2C

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Nombre preparación: C.T. de Prostata de rata

•

Propósito: Observar células Apoptóticas

•

Tinción: Hematoxilina Férrica

•

Aumento Total: 400X

•

La Célula en apoptosis se encuentra rodeada de una porción blanca y tiene puntitos más oscuros(el núcleo)

Descripción : Se indujo apoptosis de la célula, en donde se observa el contenido celular deteriorado y cuerpos apoptóticos, los cuales son fagocitados por células vecinas y degradados por los lisosomas de éstas. Las células se observan de color negro, ya que la hematoxilina férrica reconoce la cromatina.

33

35

7.- Meiosis: •

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Nombre preparación: C.T. del Lilium Propósito: Observación de las etapas de Profase I (Leptonema, Paquinema y Diplotema) y Metafase I

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Tinción: Hematoxilina Safranina

•

Aumento Total: 400X

•

Descripción : Hay células de la periferia que se tiñen de color calipso, en las cuales se observan núcleos de color morado, mientras que hacia el l umen, están las células violeta, en las c uales fijaremos nuestra atención. Estas células miden cerca de 15 mi crones y en su interior podemos ver las distintas etapas de la profase: Leptoteno, paquiteno, diploteno.

34

8.- Gametogénesis: •

Nombre preparación: C.T. de Testiculo de rata

•

Propósito: Observación Gametogénesis Masculina

•

Tinción: Hematoxilina

•

Aumento Total: 400X

•

•

Descripción : Observar distintos tipos celulares, y observar los tres tipos de compartimentos e n las gónadas masculinas. Descripción: Se ven tres grandes compartimentos tubulares. El bor de externo del túbulo se llama compartimiento peritubular  y el contenido se llama compartimiento intratubular . Entre cada

túbulo existe un compartimento llamado Intersticial. Dentro de las capas de un tú bulo podemos distinguir en orden las siguientes células: Espermatogonias, Espermatocitos I, Espermátidas (redondas y alargadas) y espermios. En el compartimento intersticial se ven células de Leydig y en el compartimento intratubular, luego de las células Mioides, se ubican en forma triangular, las células de Sértoli.

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•

Nombre preparación: C.T. de Ovario de rata

•

Propósito: Observación Gametogénesis Femenina

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Tinción: Hematoxilina - Eosina

•

Aumento Total: 400X

•

•

Descripción : Observar distintos tipos celulares, y observar los tres tipos de compartimentos en las gónadas masculinas. Descripción: Se ven folículos primordiales, Primarios (28 micrones) aún sin antro,

secundarios (30 micrones) o en formación y Terciarios (35-36 micrones) con un antro ya formado.

38

Tabla Comparativa entre Mitosis y Meiosis

40

Mitosis

Meiosis

Conservativa 2n 2n (2n=Diploide; n=Haploide)

Reducida 2n n (2n=Diploide; n=Haploide)

1 División  Producto: 2 Células Hijas

2 Divisiones  Producto: 4 Células Hijas

No hay Apareamiento de cromosomas Homólogos

Hay Apareamiento de cromosomas Homólogos

Células NO Gaméticas

Células Gaméticas

No hay Variabilidad Genética

Hay Variabilidad Genética

CÉLULAS MIOIDES

CÉLULAS DE LEYDIG CÉLULAS DE SERTOLI

ESPERMATOZOIDES

ESPERMÁTIDAS REDONDAS ESPERMATOCITO I ESPERMATOGONIAS

37

Folículo de Graff

39

Bencina+ clorofila Hidrofóbico Alcohol+ carotenos + antófilas  Hidrofílico Pigmentos fotosintéticos: carotenoides, antófilas, clorofila. Bencina: naturaleza apolar / Clorofila: naturaleza Antipática Finalmente, la mezcla de alcohol, pigmentos y bencina blanca se bate, para que sus componentes se separen en dos capas: 

La capa Superior corresponde a la Bencina blanca de tipo apolar, a la cual se han unido los pigme ntos de Clorofila .



En la fase inferior a ésta se observa una gran cantidad de alcohol etílico, al cual se han unido los carotenos , es decir, pigmentos fotosintéticos de otra naturaleza. Éstos son l os pigmentos que a la luz se ven de color rojo.

Sin embargo han quedado algunos pigmentos verdes de clorofila en la fase inferior. Esto ocurre debido a que la cantidad de

bencina blanca fue mínima en relación c on la gran cantidad de clorofila que había en el tubo de ensayo , por lo tanto, la bencina blanca se saturó y no pudo aceptar más clorofila.

22

2*Experimento Fermentación Alcohólica

Este experimento consiste en un matraz conectado a un tubo de ensayo que contiene  Agua de Barita Ba(OH)2. En el matraz se ha puesto cierta concentración de glucosa, agua y levadura. Como el matraz se encuentra sellado herméticamente, la levadura comienza a consumir el O2 y se desprende alcohol etílico y CO2 como consecuencia de la actividad metabólica de la levadura . El CO2 liberado llega mediante una conexión al tubo de ensayo

que contiene agua de Barita y reacciona con ella, de manera que se forman un precipitado de color blanco, que corresponden a Carbonato de Bario BaCO3, el nuevo compuesto formado por la reacción.

Nombre preparación: C.T. de Páncreas

•

•

Propósito: Observar RER

•

Tinción: Galocianina

•

Aumento Total: 400X

El RER se ubica en el ergastoplasmo

Islotes Pancreáticos

Descripción : Se identifican acinos (colonias celulares pancreáticas), con lumen, núcleo y RER, dispuesto hacia el lumen ara la síntesis roteica.

•



Grupos de ergastoplasmos forman el acino

*Glicosilación(es el proceso de adición de carbohidratos a una proteína) ocurre en el RER y posteriormente en el Golgi. 18

•

•

•

•

•

20

Nombre preparación: C.T. de Tráquea de rata Propósito: Observar cilios Tinción: Hematoxilina Férrica(Tiñe de negro el núcleo) Aumento Total: 400X Descripción: Se ven Condrocitos (células cartilaginosas que conforman la tráquea) de los cuales se suspenden prolongaciones largas llamadas Cilios. (cilios: estructura básica del axolema).

Se observan cilios, células caliciformes, tejido cartilaginoso, etc…

Tejido Cartilaginoso

3*Experimento Reconocer el almidón en la hoja

Para decolorar la hoja de cardenal se sumerge en alcohol etílico (95º) y agua , contenidos en un vaso precipitado, hirviendo a baño maría, así se extraen sus pigmentos fotosintéticos. Una vez decolorada la hoja de cardenal se tiñe con Yodo Yodurado (lugol) para reconocer los depósitos de almidón (amiloplastos), que se observan de un color café más oscuro en relación con el tejido vegetal de la hoja. Esto quiere decir, que la hoja tenía una función fotosintética, pues  por alguna razón, fue capaz de sintetizar carbohidratos.

5*Experimento 

En un tubo de ensayo hay Agua de Barita (1). Al insuflar aire en ella, se forma el mismo precipitado de carbonato de Bario que se formaba al experimentar con la levadura, pues cuando se insufla aire, también se recibe CO2. Por lo tanto, se ve la misma ecuación que en la reacción anterior.

25

4*Experimento 

Medio Basico Hidroxido de sodio+rojo fenol +CO2

Se agrego CO2 y se hizo un medio más acido

En un tubo de ensayo se contiene una solución de Ba(OH) 2 al 5% que además, tiene como indicador Rojo Fenol (1). Es importante comprender, que la mezcla está en estado básico pues se encuentra en agua y que el rojo fenol reacciona en soluciones ácidas. Al insuflar aire en el tubo de ensayo, el rojo fenol cambia su color a beige (2), pues al captar CO2 éste reacciona con la molécula de agua y finalmente el agua se disocia para formar un ácido llamado Ácido Carbónico H2CO3. 26

6.- Ciclo Celular y Apoptosis: •

Nombre preparación: C.T. de Hígado

•

Propósito: Observación de núcleos

•

Tinción: H/E

•

Aumento Total: 400X

•

Descripción : Se ven Hepatocitos humanos, con núcleos teñidos de un color morado. El borde más oscuro del núcleo corresponde a sitios en donde se encuentra la Heterocromatina. En el centro del núcleo, se observan unos gránulos morados oscuros que también corresponden a Heterocromatina, mientras que las porciones transparentes del núcleo corresponden a Eucromatina.

Los Hepatocitos tienen núcleos principalmente intermedios

Núcleo Vesiculoso Núcleo Intermedio Núcleo Macizo He: Heterocromatina Eu:Eucromatina

28

Eu > He

Eu = He

Eu < He

Nombre preparación: C.T. de intestino delgado

•

Propósito: Observar diferenciación de membranas

•

•

Tinción: H/E

•

Aumento Total: 400X

Microvellosidades

Descripción : Se identifican microvellosidades

•

Apical

Basal Lumen Chapa Estriada: Conjunto de microvellosidad Células Caliciformes: Secretan mucus

17

•

•

Nombre preparación: C.T. de Epidídimo Propósito: Observar Complejo de Golgi

•

Tinción: Método de Elfman

•

Aumento Total: 400X

•

Lumen

Descripción : : Es posible reconocer prolongaciones de color negro que corresponden al complejo de golgi, sitio de modificaciones proteicas

* El método de elfman aplica una solución de sales de plata (plata metálica) que tiñe el golgi de color negro. Esto porque posee azucares reductores.

Lumen Se pueden observar: núcleos, estereocilios, aparato de golgi, etc...

: Más soluto

4.- Organización Celular Eucarionte: •

Nombre preparación: Epidermis de catafilo de cebolla

•

 jos Propósito: Observación de permeabilidad células vegetales

•

Tinción: Sin tinción

•

Aumento Total: 400X

Hipertónico Sale agua  Plasmólisis Hipotónico  entra agua  Turgencia Concentración

Medio

Osmosis

: Menos Soluto

Ingresa Agua.

0,2 M

0,4 M

0,8 M

0,6 M

Sale Agua

Comportamiento

0,2

hipotónico

turgencia

0,4

isotónico

------------------

Se acerca al medio isotónico

0,6

hipertónico

plasmólisis incipiente

Comienza la plasmólisis

0,8

hipertónico

plasmólisis total

Plasmolisis avanzada

14

•

•

Nombre preparación: Frotis sanguíneo a diferentes concentraciones

Hipotónico

Hipotónico

0,1%

0,9% Tinción: Sin tinción

•

Aumento Total: 400X

Zona Bicóncava

No hay zona bicóncava

Propósito: Observación de permeabilidad células vegetales

•

0,5%

1,1% Crenación: Deshidratación de los Eritrocitos

Isotónico

En células vegetales

En Glóbulos rojos

Plasmólisis

Crenación

Lisis Celular

Hemolisis

16

Hipertónico

•

•

Nombre preparación: Pellet 1,2 o3 Propósito: Pellets obtenidos por fraccionamiento celular

•

Tinción: Azul de Metileno

•

Aumento Total: 400X

•

Descripción: Se observa: En el Pellet 1: La célula en sí. (Células completas) En el Pellet 2: Núcleos En el Pellet 3: Componentes del citoplasma (Restos de membrana y nucléolos)

Procedimiento: Moler en 1 mortero, se deja descansar y se traspasa el sobrenadante Pellet1 (se obtuvo dejándolo decantar). Se saca el sobrenadantePellet2 Centrifugar 10min 1200RPM  Pellet 3 10min. 5000 RPM , descartar el portanadante.

13

0,2 M

0,6 M

0,4 M

0,8 M

Reino Protista Diatomeas •

Nombre preparación: Mezcla de Diatomeas

•

Propósito: Observación representante del reino Protista

•

Tinción: Vital

•

Aumento Total: 400X

•

Descripción: Se observan dos tipos de diatomeas: unas

Penales

Centrales

Filamentosas

Naviculares

que tienen forma de hoja llamadas “Pennales” y otr as que tienen forma de esfera, llamadas “Centrales”.

Pinularias

Frustula: Capa externa de la Diatomea compuesta de sílice. Rafe: Función entrada y salida de agua 5

Reino Fungi •

Nombre preparación: Penicillium Sp.

•

Propósito: Observación representante del reino Fungi

•

Tinción: Vital

•

Aumento Total: 400X

•

Descripción: Se observa una madeja de hilos (Hifas) de las cuales las que están en el centro del cuerpo se llaman hifas vegetativas. Las hifas que llegan a la periferia corresponden a hifas que contienen en su extremo terminal un esporangio, estas son las hifas reproductivas.

Micelio: Conjunto de Hifas (reproductivas + vegetativas) Levadura (Saccharomyces cerevisiae) único Hongo unicelular que existe

Nombre preparación: Hilos entrecruzados

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Propósito: Uso y manejo del microscopio, poder de penetración

•



2

•

Tinción: Sin tinción

•

Aumento Total: 400X

El Poder de Penetración es inversamente proporcional al poder del aumento

•

•

•

•

•

Nombre preparación: Oscillatoria Sp Propósito: Observación representante del reino monera Tinción: Vital(Tiñe cuando el organismo esta vivo) Aumento Total: 400X Descripción: Se observan compartimentos o celdas unidas entre sí, formando una especie de hilo bacteriano que tiende a enrollarse u oscilar. Esta especie es llamada “Oscillatoria sp.” La

bacteria se tiñe de un color verde azulado.

Septo (división) Oscillatoria

Colonia 4

•

Nombre preparación: Amoeba Sp.

•

Propósito: Observación reino Protista

•

Tinción: Vital

•

Aumento Total: 400X

•

Pseudópodos: Extensiones del citoplasma + el citoesqueleto

Descripción: Se ven Amebas de color violeta y rosado, las cuales poseen brazos llamados pseudópodos. También posee: una vacuola contráctil y una vacuola alimenticia.

6

Liquen (No pertenece a ningún reino) Asociación de 2 organismos diferentes en el que ambos se ven beneficiados. •

•

Nombre preparación: Lichen tallus Propósito: Organismo simbionte entre un representante del reino protista o monera y un representante del reino fungi.

•

Tinción: Vital

•

Aumento Total: 400X

•

Descripción: El hongo degrada minerales de la roca, para que estos sean utilizados por las algas (ya que normalmente la simbiosis es con una alga) y el alga fotosintetiza para alimentar al hongo.

8 El liquen aparenta ser un tejido, pero en realidad es un Pseudo-tejido.

Capa Rizoide: Pertenece al hongo la función es adherirse al sustrato Capa Fúngica: Hifas modificadas

Estomas= Células oclusivas + poro + cámara subestomática.

Reino Plantae •

Nombre preparación: Corte Transversal de hoja

•

Propósito: Observación representante del reino plantae

•

Tinción: Vital

•

Aumento Total: 400X

•

Descripción: Se observa una capa celular superior, que corresponde a la epidermis superior. Luego, se observan líneas celulares que corresponden al clorénquima. Y para finalizar, una capa que almacena aire y en la cual se ubican las estomas llamada neumatenquima, la que inferiormente es sellada por una capa celular llamada epidermis inferior.

Clorénquima: Posee gran cantidad de cloroplastos. Función: fotosíntesis Neumatenquima: Almacenamiento de gases(ej: vapor de agua,co2...) Estomas: Permite el intercambio gaseoso 9

Método Mediato

Método Inmediato

Se pueden ver los leucocitos

NO

NO

Se puede observar el proceso de crenación (cambios fisiológicos)

Menos Rápido, Más Costoso

Más Rápido, Menos Costoso

Duran Años

Duran Horas

NO

Se observa apilamiento de Eritrocitos

In Vitro

In Vivo

Método Mediato

Proceso de crenación  Los glóbulos rojos se están deshidratando. En la célula vegetal a este proceso se le llama plasmólisis.

Ventajas: se logra ver con mayor detalle, gracias a su tinción.

Desventaja: No se observan procesos biológicos (como crenación) En el otro

Dura + tiempo

Preparación más compleja Mucho más costoso

método es lo mismo pero al revés.

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3.-Metodos de estudio de biología celular •

Nombre preparación: Frontis de sangre humana

•

Propósito: Ventajas y desventajas del método Inmediato

•

Tinción: Sin tinción

•

Aumento Total: 400X

•

Descripción: Se presentan gran cantidad de glóbulos rojos y se aprecia su forma, se notan todas las células iguales. Entrega la información de la agrupación en pilas de monedas

•

Nombre preparación: Frontis de sangre humana

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Propósito: Ventajas y desventajas del método Mediato

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Tinción: May grundwold giemsa

•

Aumento Total: 400X

•

10

Descripción: Permite observar glóbulos blancos, rojos y plaquetas. El glóbulo blanco es polimorfo nuclear más grande que el glóbulo rojo y mide de 9 a 10 micrones.También es posible diferenciar un linfocito, ya que su núcleo es grande y la célula se tiñe prácticamente completa.

•

Nombre preparación: Aplastado de Hígado

•

Propósito: ventajas y desventajas del método inmediato

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Tinción: sin tinción

•

Aumento Total: 400X

•

Descripción: Se observan hepatocitos y el espacio intersticio.

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Nombre preparación: C.T. de Hígado de rata

•

Glóbulo rojo crenado --> deshidratado

Al fijarse los glóbulos rojos no se superponen entre sí, están fijados. Esto sucede por la técnica histológica

Propósito: ventajas y desventajas del método mediato

•

Tinción: H/E

•

Aumento Total: 400X

Descripción: Se observan hepatocitos teñidos, los núcleos de estos y se logra diferenciar el espacio intersticio.

•

12

H/E: Hematoxilinacolorante básico tiñe de azul o purpura los elementos ácidos ej:Núcleo. Eosina  Tiñe de Rosado o Rojo los elementos básicos Ej: Citoplasma.

1.-Microscopia Nombre preparación: N°6 en papel milimetrado

•

Propósito: Uso y manejo del microscopio. Poder de las lentes

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Tinción: Sin tinción

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Aumento Total: 40X, 100X, 400X

Nombre preparación: Frotis de Sangre Humana

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Propósito: Calculo del tamaño celular. Uso del aumento de inmersión

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Tinción: May Grundwald Giemsa(MGG)

•

Aumento Total: 400X

1

2.- Morfología de los Seres Vivos Reino Monera •

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Nombre preparación: Frotis Bacteriano Propósito: Observación representante del reino Monera

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Tinción: Gram

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Aumento Total: 1000X

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Descripción: Se observan células teñidas(Gram+) de color violeta. Revelando morfología en forma de bastón, llamadas “Bacillus” y en forma esférica llamadas “Coccus”

Gram(+)

 Violeta

Gram(-)

 Rosado

Espirilos Cocaceas

Stafilo sp

Bacilos Streptococcusp 3