Micro Informe 2

 

 

“AÑO DEL CENTENARIO DE MACHUPICHU PARA EL MUNDO” 

Curso: Microbiología General

Docente: Mlgo. Jorge Cordero Azabache.

Integrantes:  



Montero   Bedriñana Castro Capcha MaríaAlejandra



  Zaravia

Guzman Ambar   De la Cruz Carhuallanqui Sheyla





HUANCAYO – PERÚ 2011 

1

 

 

ÍNDICE GENERAL I. 

INTRODUCCIÓN …………………………………………………………….………3 

……………………………………………………………………………..4 II. III.    OBJETIVOS MARCO TEORICO…………………………………………………………………..5 IV. MATERIALES MATERIALES Y REACTIVOS…………………………………………….….8 V.  METODOLOGIA ………………………………………………………………………15  VI. PROCEDIMIENTO……………………………………………………………………15  VII.  RESULTADOS……………………………………………………………................18  VIII.  DISCUSIÓN………………………………………………………………………………20  IX.  RESULTADOS DE LA DISCUSIÓN…………………………………….21  X.  CUESTIONARIO ………………………………………………………………………22 

 

XI.   XII. XIII.  XIV. 

……………………………………………………………………………24

CONCLUSIÓN   RECOMENDACIONES ……………………………………………………………….25  BIBLIOGRAFIA……………………………………………………………………………26  ANEXO……………………………………………………………………………………………27 

2

 

 

I. 

INTRODUCCIÓN

El presente informe ha sido elaborado por el fin de poder observar microorganismos que emplea el uso del microscopio, el cual nos ayudara a ver su morfología de ciertas bacterias, debido a que es difícil observar a simple vista por ser muy pequeños, se adicionara también a las muestras diferentes tinciones. En la práctica realizada tenemos tres diferentes métodos para un medio de cultivo; además se emplea diferentes reactivos para la fijación de color en las bacterias, lo cual nos permite identificar y diferenciar las diversas morfologías que existen en diferentes especies microbianas observadas. Las autoras.

3

 

 

II. 

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL:    Aislar bacterias bacterias aerobia aerobiass por tres difer diferentes entes métodos métodos (Estria (Estriado, do, disemin diseminación ación y



difusión) y evidenciar las diferentes estructuras microbianas mediante coloración Gram.

OBJETIVO ESPECIFICO:         





Emplear la metodología adecuada para cada tipo de muestra. Diferenciar bacterias Gram Gram (+) y Gram (-). ( -).  Realizar tinciones Gram (+) o (-) y describir cada bacteria observada.

Observar al microscopio distintas muestras con sus respectivas coloraciones. 

4

 

 

III.  MARCO TEORICO MEDIOS DE CULTIVO Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. Clasificación de los medios de cultivo.

En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar un medio sólido se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel.   Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en: 



  Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen

animal o vegetal, vegetal, las que son usualmente complementadas por por la adición de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.   Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición química definida definida cualitativa y cuantitativamente. cuantitativamente. Generalmente se se usan en trabajos de).investigación. (Para bacterias como: citrovorum

  De acuerdo al uso del medio 



Echerichia coli  y Leuconostoc 

de cultivo, éstos se clasifican en:

enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el   Medios de enriquecimiento:

crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar aumentar el número de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que se quieren cultivar. selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por    Medios selectivos: ser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de 5

 

 

microorganismos específicos. (Para bacterias como Salmonella typhi  y Clostridium botulinum). diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos   Medios diferenciales: derivados de la actividad actividad microbiana de los microorganismos. microorganismos. No contienen ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar  características fisiológicas de los microorganismos. (para bacterias como: Streptococcus pyogenes y Escherichia coli ). ).



  Por su composición los medios de cultivo se clasifican 





en:

  Líquidos: conocidos como caldos, estos son especialmente útiles para hacer 

diluciones, para para homogenizar mezclas de microorganismos, microorganismos, para enriquecer  cultivos y para rehidratar cepas liofilizadas.   Sólidos: Para separar microorganismos y favorecer el desarrollo de las colonias aisladas aisladas en las que es posible observar observar las características características típicas típicas de un solo tipo de microorganismo.   Semisólidos: Son aquellos medios líquidos a los que se adiciona agar en concentraciones de 0.4 a 0.8%. Estos se emplean para determinar determinar la movilidad de los microorganismos microaerofílicos.

Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes básicos o por simple rehidratación de productos asequibles comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles. Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos: 





 

  Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o

proveedores que suministren productos de calidad.   Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímica adecuada.   Utilizar materiales de vidrios bien lavados y enjuagados con agua destilada o desmineralizada.   Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización.   Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante. 6

 

   Almacenamiento de los medios medios de cultivo:

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las condiciones que señale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar  fresco (entre 15 y 25°C), con poca humedad y protegidos de la luz solar di recta. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor; Los medios de cultivo deshidratados se deben descartar cuando se hidraten o decoloren. Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado se debe almacenar  entre 2°C y 8°C, a menos que el medio requiera alguna condición diferente. Se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratación. Cuando se usa tapón de algodón se debe colocar por encima una envoltura de papel (Kraft). TINCIÓN DE GRAM Atinción pesardedeGram que esfuela desarrollada XIX la más utilizadaenenelelsiglo diagnóstico microbiológico. De hecho la información que ofrece relativa a la composición de la pared bacteriana es la base de todas las taxonomías en este reino. Se trata de una tinción diferencial que distingue entre bacterias con pared gruesa (Gram positivas) y bacterias con pared fina y membrana externa (Gram negativas). La mayoría de las bacterias presentan una de estas dos morfologías generales. La tinción de Gram utiliza violeta de genciana como colorante primario. Tras su aplicación todos los microorganismos se tiñen de violeta. Después el lugol actúa como mordiente, acentuando la penetración del colorante primario. El tercer paso consiste en la aplicación del decolorante, una mezcla de alcohol y acetona que elimina el violeta excepto en las bacterias con pared gruesa. Por último el colorante secundario o de contraste, la safranina, tiñe de rojo las bacterias decoloradas, es decir las de pared fina. En resumen las bacterias Gram positivas quedan teñidas de violeta y las Gram negativas de rojo. r ojo.

7

 

 

IV. 

MATERIALES Y REACTIVOS

DIA MARTES   EQUIPOS:

HORNO

BALANZA ELÉCTRICA

son dispositivos eléctricos utilizados para esterilización que forman parte del equipamiento de laboratorio Se utiliza para pesar  pequeñas cantidades de masa que se utiliza en los laboratorios para hacer  pruebas o materiales. análisis de determinados

  MATERIALES DE VIDRIO:

LUNA DE RELOJ

Es de material de vidrio, este instrumento nos ayudan para poder coger 

En laboratorio, la varilla de vidrio es de gran grosor y VARILLA DE VIDRIO de vidrio que sirve para mover, remover, coger  muestras, agarrar , pinchar, revolver, etc.

PLACAS PETRI

Cajas cilíndricas, se emplean como recipientes de medios de cultivo.

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Son de forma cilíndricas de vidrio por lo general, TUBOS DE ENSAYO cerrado por un extremo, hay de varios tamaños.

VASO PRECIPITADO PIPETAS

PROBETA

Es un recipiente que está hecho de vidrio graduado. DE Se usan principalmente para la preparación de disoluciones. Tubos cilíndricos delgados terminados se emplean en la medición de pequeñas cantidades de líquidos. Es un instrumento volumétrico, que permite medir volúmenes considerables con un ligero grado de inexactitud. Son de metal y plásticos pero antiguamente se

GRADILLA

ALGODÓN

utilizaba de madera. permite colocar tubos Nos de ensayo. Nos sirve para hacer las torundas, es decir, para cubrir y proteger las muestras que hagamos en el laboratorio.

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    MATERIA DE

METAL:

ESTUFA   ESTUFA

Es un instrumento que nos ayuda para poder realizar  varios tipos de calentamientos.

CUCHARILLA

Se utiliza para realizar  pequeñas combustiones de sustancias, para observar el tipo de flama, reacción, etc.

TARRO DE LECHE

Sirve para poder guardasy los tubos de ensayo llevas a la autoclave.

PINZA

son un tipo de sujeción ajustable, generalmente de metal, que forma parte del equipamiento de laboratorio,   laboratorio,

ASA DE SIEMBRA

es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio

MECHERO DE BUNSEN

Es un utensilio metálico que permite calentar  sustancias, proporciona una llama caliente de hasta 1500 grados centígrados. 10

 

    SOLUCIONES:

AGUA DESTILADA

Es aquella cuya composición se basa en la unidad de moléculas de agua.   agua.

ALCOHOL

Los alcoholes pueden ser  primarios, secundarios o terciarios, en función del número de átomos de hidrógeno. Nos sirve para hacer las

ALGODÓN

torundas, decir, para cubrir y esproteger las muestras que hagamos en el laboratorio.

  Muestras:

TIERRA AGRÍCOLA   Traer 100 gramos •

LECHE   Traer 10 mililitros •

11

 

 

ESTIÉRCOL DE VACUNO   Traer 5 gramos •

JUGO

  Traer 10 mililitros

•

AGUA DE REGADÍO   Traer10 mililitros •

12

 

 

DÍA JUEVES   Materiales:



PORTA OBJETOS

Pieza o lámina rectangular de cristal en que se coloca el objeto o preparación que va a ser observado en el microscopio.

Se aplica a la muestra para ACEITE DE poder observar la dicha INMERSIÓN muestra, reflecta a la luz y se logra enfocar a una gran ampliación. Es un instrumento que permite MICROSCOPIO observar objetos que son demasiados pequeños para ser  vistos a simple vista. Es un material que nos ayuda para poder realizar las ASA DE siembras adecuadamente, SIEMBRA tiene una punta de alambre que cuando lo calentamos estamos descontaminando.

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  Agares:



Medio para fines generales que promueve el crecimiento de la mayoría de los AGAR NUTRIENTE microorganismos poco exigentes Medio diferencial para la detección, aislamiento y enumeración de bacterias AGAR MCCONKEY coniformes y patógenas intestinales en aguas, productos lácteos y muestras biológicas.   biológicas. Medio para el cultivo y enumeración de levaduras y mohos a partir de alimentos y AGAR PAPA otros materiales. DEXTROSA   DEXTROSA   Reactivos: (Para la Tinción Gram):



CRISTAL VIOLETA

Es un colorante básico bacteriostático potente, especialmente contra microorganismos gran positivos, las bacterias gran negativas son

LUGOL

alterada en poco grado. grado. Es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico KI en agua destilada.

ALCOHOL

Se utiliza tanto para poder  referirse a la morfología celular  bacteriana como para poder  realizar una primera

ACETONA

aproximación bacteriana, a la diferenciación 14

 

 

SAFRANINA   SAFRANINA

Es un colorante biológico, de contraste que se utiliza en la Tinción de Gram para proporcionar un color violeta más intenso a las bacterias Gram+ y tiñe de rosa a las bacterias.

V. 

METODOLOGIA

Fecha de ejecución: martes 06- jueves 08 de setiembre del 2011. Lugar: Laboratorio de biología  – química, campus de la Universidad Continental de Ciencias e Ingenierías.

 

VI.

PROCEDIMIENTO

DÍA MARTES.-Medios de Cultivo

A.- AISLAMIENTO POR EL MÉTODO DEL ESTRIADO   PROCEDIMIENTO.-

1)  Coger una pequeña muestra de estiércol con el asa de siembra y con ayuda del mechero de Bunsen levantar con la mano izquierda la base de placa placa Petri. 2)  Con la mano derecha cargar el asa de siembra y depositar el inoculo sobre el medio medio.. 3)  Describir las ESTRÍAS simples o per planos, manteniendo casi vertical la placa, con la superficie del medio frente al operador. 4)  Regresar la base sembrada a su posición normal en la mesa de trabajo. t rabajo. 5)  Poner datos e incubar en igual forma a la anterior.

B.- AISLAMIENTO POR DISEMINACIÓN PROCEDIMIENTO.15

 

 

1.  Tomar el agua de regadío con la pipeta Pasteur y depositar una gota sobre el medio de la placa Petri, que descansa en posición normal sobre la mesa.

2. Devolver el sobrante al tubo de cultivo.  3. Destapar con la mano izquierda la placa Petri con agar Maconkey, lo necesario para introducir la espátula de Drigalsky y diseminar la gota por la superficie del medio, no pasando dos veces por el mismo plano.

4. Desechar la espátula en el frasco bactericida y rotular con el tipo de siembra. 

C.- AISLAMIENTO POR DIFUSIÓN. PROCEDIMIENTO.-

1.  Pesar en la balanza analítica la tierra agrícola 2.  Colocar en el vaso de precipitación un poco de agua destilada y luego echar la tierra agrícola y disolver. 3.  Con ayuda de la pipeta sacar del vaso de precipitación 1 ml de lo disuelto y ec echar har a uno de los tubos de ensayo que se encuentran con agua destilada y homogenizar (10 -1). 4.  Del primer tubo de ensayo sacar con la pipeta 1 ml de la nueva mezcla y colocarlo al segundo tubo de ensayo y homogenizar (10 -2). 5.  Finalmente sacar 1ml del segundo tubo y colocar al tercer tubo y homogenizar (10 -3).  6.  Prender el Mechero de Bunsen y abrir la placa Petri con agar nutricio y colocar 2 gotas del tercer tubo y esparcirlo con la espátula.  

DÍA JUEVES.-Tinción Gram A.  ESTIÉRCOL DE VACUNO  VACUNO  PROCEDIMIENTO.-  PROCEDIMIENTO.-  1.  Rotular el porta objeto y esterilizar el asa de siembra con el Mechero de Bunsen.  Bunsen.  2.  Coger una pequeña muestra de lo crecido en la placa petri con agar Maconkey del estiércol con el asa de siembra de vacuno y colocar a una porta objetos. 3.  Disolverlo con una gotita de agua destilada y agregar dos gotitas de cristal violeta, dejar por 1 minuto. 4.  Enjuagar con agua destilada o del caño y secar con ayuda del mechero de bunsen para, luego agregar una gota de lugol.  

5. de Enjuagar cony alcohol y hacer secar por uno minuto y agregar dos gotas safranina dejar poracetona unos minutos. 16

 

 

6.  Enjugar con agua y echar aceite de inversión y llevarlo al microscopio con lente de 100x. B.  AGUA DE REGADILLO PROCEDIMIENTO.1.  Rotular el porta objeto y esterilizar el asa de siembra con el Mechero de Bunsen 2.  Coger una pequeña muestra de lo crecido en la placa Petri con agar Maconkey del estiércol con el asa de siembra de vacuno y colocar a una porta por ta objetos. 3.  Disolverlo con una gotita de agua destilada y agregar dos gotitas de cristal violeta, dejar por 1 minuto. 4.  Enjuagar con agua destilada o del caño y secar con ayuda del mechero de bunsen para, luego agregar una gota de Lugol. 5.  Enjuagar con alcohol acetona y hacer secar por uno minuto y agregar dos gotas de safranina y dejar por unos minutos. 6.  Enjugar con agua y echar aceite de inversión y llevarlo al microscopio con lente de 100x.

17

 

 

VII.  RESULTADOS Medios de cultivo A.- AISLAMIENTO POR EL MÉTODO DEL ESTRIADO

Hubo crecimiento en el agar  McConkey de:   El estiércol.   Eran de diferentes tamaños.   Tenía una coloración verde.



B.- AISLAMIENTO POR DISEMINACIÓN No se encontró crecimiento en:   La leche   Agua de riego



C.- AISLAMIENTO POR DIFUSIÓN Hubo crecimiento en el agar nutricio en:   Tierra agrícola.   Gran cantidad de puntos blancos muy finos. 



18

 

 

Tinción Gram A.- ESTIÉRCOL DE VACUNO Se pudo observar: Estreptobacilos  Estreptobacilos   Tenían la forma muy alargada.   Largas cadenas.   Morfología muy pequeños.    Lente de 100x



Ir a anexo (Tinción Gram) B.- AGUA DE REGADILLO Se pudo observar:   Estafilobacilos   Tenian la forma muy alargada.   La forma de racimo de uva.   Muy pequeños.   Color rojo a rosado.   Lente de 100x Ir a anexo (Tinción Gram) 











19

 

 

VIII.  DISCUSIÓN MANUAL DE PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL    –PRACTICA –PRACTICA N°3

PREPARACIÓN, FIJACIÓN, Y COLORACIÓN SIMPLE DE FROTIS. Universidad Autónoma metropolitana. María de los Ángeles Aquiahuati Ramos, María de Lourdes Pérez Chabela

OBJETIVO: Que los alumnos aprenda las técnicas de preparación de frotis, de fijación y coloración más utilizadas en el estudio microscópico de cultivos bacterianos. Que identifique las principales formas de las bacterias. Materiales: 1 probeta 1 vaso de precipitación pr ecipitación 1 parilla de calentamiento 1 mechero 5 portaobjetos 1 piceta con agua destilada Cristal violeta Safranina PROCEDIMIENTO:





             

               

Lugol Solución de alcohol- acetona Verde de malaquita Tinta china Fenol 2% Aceite de inversión Microscopio

PREPARACIÓN DE FROTIS 1.  Lavar perfectamente los portaobjetos, secarlos con papel y etiquetarlos. 2.  Prender el mechero y esterilizar e sterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo. 3.  Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean destruidos, después acercar al mechero el tubo de cultivo, quitarle el tapón y flamear  rápidamente la boca del mismo y con el asa sacar el tubo una pequeña muestra. 4.  Colocar con mucho cuidado al porta objetos. Si es una solución solida hacer gotear 1 gota de agua destilada para disolver. 20

 

 

TINCIÓN DIFERENCIAL DE GRAM 1.  Cubrir el frotis con 2 gotas de cristal violeta violeta durante 30 segundos a 1 minuto. 2.  Lavar cuidadosamente el frotis con agua de la llave o destilada para eliminar el exceso de colorante. 3.  Sacudir un poco y dejar secar cubrir el frotis fr otis con 2 gotas de lugol por 30 segundos. 4.  Lavar cuidadosamente cuidadosamente el frotis con agua. 5.  Inclinar el portaobjetos y aplicar gota a gota el decolorante dejando que escurra hasta que no fluya la tintura. 6.  Inmediatamente lavar con agua. 7.  Aplicar 2 gotas de safranina durante 30 segundos. 8.  Lavar nuevamente con agua, eliminar cuidadosamente el exceso de agua con una toalla de papel y secar en el aire. 9.  Limpiar cuidadosamente los objetos y el ocular del microscopio con papel seda. 10. Colocar el portaobjetos en el microscopio con lente de 100x y colocar previamente una gota de aceite de inmersión sobre la preparación. p reparación. RESULTADOS: 1. Reportar las observaciones de forma, agrupación, color, tamaño relativo de cada muestra.

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IX. 

RESULTADOS DE LA DISCUSIÓN

Mencionaremos las semejanzas y diferencias que se pudo encontrar entre la discusión y la práctica elaborada con el profesor el día martes y jueves en la Universidad Continental.  Continental.  Semejanza con la práctica:   Materiales como: portaobjetos, safranina, safranina, Lugol, Solución de alcohol- acetona, Aceite



de inversión, Microscopio, Cristal violeta.   Tiempo de secado es de 1 minuto a 30 segundos.   Observación es con lente de 100x.

 

Diferencias con la práctica:   La metodología es casi igual.  igual. 



Conclusión: Existen diferentes tipos de métodos y materiales que se utilizan para realizar la tinción gram, pero con un mismo objetivo que es de observar la morfología de las bacterias.

22

 

 

X. 

CUESTIONARIO

1.- ¿Por qué el agar nutritivo es un medio de uso general para el cultivo de bacterias? Proponga algunas sustancias para que se haga selectivo para bacterias Gram negativos.  negativos.  El Agar nutricio es una sustancia extraída de un alga. Tiene como característica que toma una contextura gelatinosa y que no se derrite a temperaturas que si derretirían una gelatina normal, por ello pueden proliferar en ella colonias bacterianas que normalmente se cultivan a 37 grados centígrados y que requieren medios sólidos. Además en su preparación se puede mezclar con diversos nutrientes para beneficiar una bacteria en especial que se quiera cultivar; de allí tenemos entre otros el agar-sangre, agar-carne, etc. 2.- ¿Qué otras técnicas hay para el aislamiento de bacterias? Hay técnicas para crecer las bacterias a partir de una toma de muestras como lo son el sembrado masivo ya sea por extensión con varilla de vidrio o con hisopo. Pero para aislar estrictamente colonias de bacterias el método que se debe usar es la estría cruzada, ya que vas haciendo diluciones de la muestra. Técnicas de sembrado y aislamiento de colonias:   Estría recta  recta    Siembra masiva   Siembra cuadrantes (agotamiento o estría cruzada que es la que conoces como rombitos). 





La sencilla que hay queahí tener un pocoobserva de práctica no rasgar el agartécnica y queeslos losmuy cultivos no solo se contaminen ahí podremos observar r quepara están aisladas aisladas cuando las morfologías coloniales se presentan como bolitas (si es de un cultivo puro no debe haber diferencias entre estas, si es un cultivo mixto deben observase diferencias ya sea en color, forma, tamaño, consistencia, etc.) 3.- ¿Cuál es la diferencia entre la siembra de superficie en placa y el sembrado por  vertido en placa y en que prácticas lo podemos utilizar? Diferencias:

23

 

 

  El método de siembra por estría en placa Es el  el  método más fácil y el más usado



para obtener cultivos cultivos axénicos, realizando este método método se va va lograr separar separar las células individuales.

  Los métodos de vertido en placa y extensión en placa En estos métodos, las



suspensiones de células microbianas se diluyen antes de su siembra en placa. Se siguen estas técnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos, que la dilución no se puede realizar en una sola etapa.

Semejanza: En ambas técnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Como en el método de siembra por estría, no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensión o en el Agar solidificado sembrado por el método del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso.  proceso. 

24

 

 

XI. 

CONCLUSIÓN

Para realizar el cultivo de microorganismo y para la preparación de tinción Gram pueden emplearse diferentes métodos e instrumentos, lo importante es que logremos el objetivo que se tiene en cada práctica, en este caso era ver la morfología de los microorganismo.

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XII.  RECOMENDACIONES   Para el medio de cultivo hay que tener en cuenta que la asa de siembra debe



encontrarse estéril.   Para sembrar se debe encontrar dentro de los 30 cm alrededor del mechero de



 



      

bunsen. En muestras solidas se debe agregar de una u na gota a dos de agua destilada para poder  disolver la muestra y poder realizar la tinción Gram correctamente. En muestras liquidas no es necesario aumentar agua. Se recomienda usar la pinza para coger el portaobjetos para realizar el secado. Al terminar debemos lavarnos las manos y echarnos alcohol para eliminar cualquier  bacteria.

26

 

 

XIII.  BIBLIOGRAFIA   MANUAL DE PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA



GENERAL.-PRACTICA GENERAL.PRACTICA N°3 PREPARACIÓN, FIJACIÓN, Y COLORACIÓN SIMPLE DE FROTIS. Universidad Autónoma metropolitana. Autoras: María de los Ángeles Aquiahuati Ramos, María de Lourdes Pérez Chabela Páginas: 19- 25   Introducción a la microbiología



Edición: 9° Autor: Tortora Funke, Case.   http://perso.wan http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medio adoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.ht s_de_cultivo.htm m



  http://www http://www.danival.org/notas .danival.org/notasmicro/medioscult/_m micro/medioscult/_madre_medios.html adre_medios.html



27

 

 

XIV.  ANEXO Algunos cultivos realizados:

Sembrando en el Agar Mc Conkey   Debe estar dentro de los 30 cm del



mechero de bunsen.   Estiercol



Sembrando en el Agar Nutricio Nutricio  



 



28

Debe estar dentro de los 30 cm del mechero de bunsen. Agua de regadío

 

 

Tinción Gram Estiércol 



       

Color rojo Bacilos muy juntos y pequeños. Están en cadenas (streptobacilos) Lente de 100x

Agua de Regadío:   Color Rojo   Bacilos muy pequeños.   Están como un racimo de uva 

(estalilobacilos.)   Lente de 100 x



29

 

 

Algunos esquemas: Día martes-Medios de cultivo

A.- AISLAMIENTO POR EL MÉTODO DEL ESTRIADO   PROCEDIMIENTO.-

Coger una pequeña muestra de estiércol con el asa de de siembra y con ayuda del mechero mechero de Bunsen levantar levantar con la mano izquierda izquierda la base de placa Petri. 

Con la mano derecha cargar cargar el asa de siembra y depositar el inoculo sobre sobre el medio. Describir las ESTRÍAS simples o per planos, manteniendo casi vertical la placa, con la superficie del medio frente al operador. operador.

Regresar la base sembrada a su posición normal en la mesa de trabajo.

Poner datos e incubar en igual forma a la anterior.

30

 

 

B.- AISLAMIENTO POR DISEMINACIÓN  DISEMINACIÓN  PROCEDIMIENTO.-

1.   Tomar el agua de regadío con la pipeta Pasteur  1. y depositar una gota sobre el medio de la placa Petri, que descansa en posición normal sobre la mesa.

2.  Devolver el sobrante al tubo de cultivo y destapar con la mano izquierda la placa Petri con agar Maconkey, lo necesario para introducir la espátula de Drigalsky y diseminar  la gota por la superficie del medio, no pasando dos veces por el mismo plano. 

3.  Desechar la espátula en el frasco bactericida y tapar la placa Petri, rotular con su respectivo tipo de siembra.

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Día jueves-Tinción Gram A.- ESTIÉRCOL DE VACUNO

Rotular objeto Mecheroeldeporta Bunsen.   y esterilizar el asa de siembra con el

Coger una pequeña muestra de lo crecido en la placa petri con agar Maconkey del estiércol con el asa de siembra de vacuno y colocar a una porta objetos.

Disolverlo con una gotita de agua destilada y agregar dos gotitas de cristal violeta, dejar por 1 minuto.

Enjuagar con agua destilada o del caño y secar con ayuda del mechero de bunsen para, luego agregar una gota de lugol.

Enjuagar con alcohol acetona y hacer secar por uno minuto y agregar dos gotas de safranina y dejar por unos minutos.

Enjugar con agua y echar aceite de inversión y llevarlo al microscopio con lente de 100x.

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B.- AGUA DE REGADILLO

Rotular el porta objeto y esterilizar el asa con de siembra el Mechero de Bunsen

Coger una pequeña muestra de lo crecido en la placa petri con agar Maconkey del estiércol con el asa de siembra de vacuno y colocar a una porta objetos.

Enjuagar con agua destilada o del caño y secar con ayuda del mechero de bunsen para, luego agregar una gota de lugol.

Disolverlo con una gotita de agua destilada y agregar gotitas dos de cristal violeta, dejar por 1 minuto.

33

Enjuagar con alcohol acetona y hacer secar por uno minuto y agregar dos gotas de safranina y dejar por unos minutos.

Enjugar con agua y echar aceite de inversión y llevarlo al microscopio con lente de 100x