Métodos de Transformación Genética

 

Sánchez Salgado David

Métodos de Transformación genética

Agrobacterium [2] [1] 

Biobalística

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Descripción

Clasificación

Tipo de células en los que se usan

Estandarización

Agrobacterium modifica las Tplantas a travésdedeuna una región región particular llamada región con ayuda denominada Vir. El material genético del DNA-T, es removido en su mayoría y se inserta el gen de interés, el plásmido Ti o Ri, contiene uno o más genes de selección, para la bacteria, que contenga el plásmido, y para la planta, para que sea reconocida por ella, a partir de esto la transformación será mediada por la región Vir, que sucede de la siguiente forma: Se detectan señales provenientes de plantas por el sistema de reconocimiento VirA/VirG seguido de la

biológico

plantasy dicotiledóneas algunas monocotiledóneas de interés.

Se inducir estadopara de necrosis en debe el tejido de launplanta facilitar la infección (con pequeños cortes), preferiblemente una edad temprana en la planta, para inducir la transformación, algunos estudios han utilizado diferentes inductores de la transformación como son los compuestos glucosa, acetosiringona y azacitidina; los resultados en el porcentaje de plantas transformadas

activación de la locación (locus) vir y el acoplamiento la bacteria hacia la célula hospedera. La hebradede transferencia cortada del sitio de T-DNA por las endonucleasas VirD2/VirD1 y transferido, la incisión (cis) covalentemente unida a virD2 en transferencia (in trans) con otras proteínas Vir hacia el citoplasma a través del sistema de secreción tipo IV formado por VirB/D4. Al interior de la célula huésped el complejo VirD2-T-DNA es empaquetado por numerosas moléculas ViE2 para formar un complejo-T maduro. En la biobalística el ADN es introducido en las células por medio de partículas microscópica aceleradas a velocidades supersónicas, que atraviesan la pared y la membrana celular. Las partículas están hechas de materiales densos como oro, tungsteno o wolframio, y se recubren con el ADN que se desea transferir a las plantas. Para que las micropartículas puedan atravesar las membranas celulares y llegar al núcleo de las células blanco, son impulsadas a gran velocidad por explosión de pólvora seca, liberación de gas comprimido a alta presión

físico

Células vegetales, principalmente la modificación se realiza en los cloroplastos, aunque puede ser realizada en núcleo y mitocondrias

varían de acuerdo a la especie vegetal evaluada y a la concentración utilizada, y se presenta que la temperatura óptima para la inducción de los genes vir es de 25°C, mientras que la transferencia de DNA-T es óptima a 19°C. La fotoperiodicidad puede variar mucho y no esta estudiada a fondo, entre 8-16hrs luz/obscuridad Las partícula (de 0. a 1.2 micras de diámetro), en una concentración de 50 a 500 partículas por impacto a una velocidad de (3-600 m/s)

 

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Electroporación

(aire, helio, CO2 o N2 ), o por una descarga eléctrica de una gota de agua. Él método consiste en la trasferencia directa de ADN al

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interior de la célula el uso de que generan poros mediante en la membrana deimpulsos la célula eléctrico s

Microinyección [4] [3] 

La manipulación celular en este método es muy compleja, requiere de personal muy capacitado y consiste en la introducción de material genético al interior de la célula mediante una micropipeta (microcapilar) que se controla a partir de un micromanipulador y se visualiza por medio de microscopia

físico

Choque térmico

Se aplica un choque de calor a las células lo que provoca que algunas recolecten el material genético. La respuesta simple es que el choque de calor hace que la membrana de la célula sea más permeable a las moléculas de ADN, como los plásmidos. Al parecer, el choque térmico provoca la formación de poros en la membrana celular, a través de los cuales pueden pasar las moléculas de ADN.

físico

La Lipofección es una técnica que utiliza liposomas, los liposomas son complejos lipídicos catiónicos que tienen un espacio al interior donde se introduce el DNA. El complejo tiene afinidad por la membrana celular, y es fagocitado o adsorbido por la célula y una vez en el interior de la misma el liposoma libera la carga genética. El método químico más efectivo es el método que usa polietilenglicol (PEG) en combinación con cationes divalentes (Ca++ o Mg++). El mecanismo de la captación de DNA inducido por el PEG no está completamente

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Lipofección

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Polietilenglicol

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Puede utilizarse en los

Se utilizan campos eléctricos de

diversos celulares, pero tipos la eficiencia puede variar en algunos tipos celulares específicos Generalmente se usa para el establecimiento de líneas celulares, ya que se puede utilizar para la transformación de células embrionarias, zigotos y pronúcleos Se usa principalmente en bacterias

entre 2-102.2-4.6 kv/cm, ms durante de entre y +/-periodos 1.25 V dependiendo del organismo a transformar

químico

Preferentemente células con membrana fosfolipídica disponible

Se debe optimizar el ensayo para cada tipo celular, debido a la composición variada de la membrana

químico

protoplastos, células bacterianas

Muchos factores van a influir en la eficacia del proceso de transformación, principalmente la concentración de PEG, el pH del

físico

La Microinyección tiene eficacia transitoria en células de tejidos, por eso su mayor aplicación es en células germinales donde la influencia es mayor

La temperatura para el choque térmico puede variar dependiendo de la célula, esta temperatura ronda entre los 37°C y se lleva a cabo de entre 3-5 min

 

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Transfección viral [8] 

entendido, pero implica la contracción del volumen del protoplasto debido a la alta presión osmótica originada por el PEG, seguido de la creación de vesículas endocíticas que incorporan el complejo catión/DNA. Se producen partículas pseudovirales, ya sean virus con el material genético requerido, la cápside o parte de ella y se

tampón de transformación y la cantidad de cationes divalentes.

biológico

todas las células

introduce en las células para “infectar” a estas con el

material genético esperado

Los virus son muy particulares y específicos, por lo que la selección del vector viral debe ser profunda y adecuada

[1] Ana  Ana Milena et. All, (2005) Transformación mediada por Agrobacterium, Enlace: [1]   https://revista https://revistas.unal.edu.co s.unal.edu.co/index.php/r /index.php/refame/article/d efame/article/download/211 ownload/21171/22141 71/22141 

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[2] Hairy [2]  Hairy Root Cullture,  Cullture, http://nptel.ac.in/courses/102103016/module4/lec32/1.html

 

[3] [3] Narbón  Narbón Fernández Patricia, (2008), Transferencia génica en animales, Enlace:  https://www2.uned.es/experto-biotecnologiaalimentos/TrabajosSelecc/PatriciaNarbon.pdf    alimentos/TrabajosSelecc/PatriciaNarbon.pdf 

 

[4] Kuxulkab’ (2012), Revista de Divulgación división académica de ciencas biológicas, Enlace: http://ri.ujat.mx/bi tstream/20.500.12107/2336/1/-25 12107/2336/1/-257-190-A.pdf  7-190-A.pdf   http://ri.ujat.mx/bitstream/20.500.

 

[5] Transformación (2010), Laboratorio de genética molecular de eucariotas, Enlace:  Enlace: http://2012.igem.org/wiki/images/6/60/Transf.pdf   http://2012.igem.org/wiki/images/6/60/Transf.pdf   

 

[6] Aurora Galván Cejudo, Manuel Tejada, et. All, Transformación de Escherichia coli con un plásmido recombinante, Enlace:

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https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biolmol/pdfs/48%20TRANSFORMACION%20E%20COLI%20CON%20PLASMIDO%20RECOMBINANTE.pdf     

[7] [7] Khan  Khan Academy, (2015) Transformación y selección bacteriana, Enlace:  Enlace:  https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dnatechnology/dna-cloning-tutorial/a/bacterial-transformation-selection  

 

[8] [8] Anabel  Anabel Álvarez Julia (2017), Transfección en células eucariotas, Enlace: http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2017/BioCel/1502815731.pdf   

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