Método de Limpieza y Esterilización de Materiales de Vidrio y Precauciones de Seguridad

MÉTODO DE LIMPIEZA Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES DE VIDRIO y PRECAUCIONES DE SEGURIDAD 1. INTRODUCCIÓN La esterilización  es un tratamiento que deja el objeto libre de todos organismos vivo. Puede

lograrse mediante exposición a agentes letales físicos o químicos. El calor,  de cualquier forma, es utilizado extensamente como un agente letal bacteriano y se

puede aplicar a numerosos instrumentos, materiales y substancias, con el propósito de matar o eliminar a las bacterias o microorganismo que ellos contengan. Este proceso se denomina “Esterilización” y al material, cultivo ó medio de cultivo sometido a éste, se le denomina entonces “Estéril”, es decir, desprovisto de toda forma viviente.

Los métodos de esterilización se dividen en:

1. Métodos físicos tales como: calor, rayos ultravioleta, filtración, radiación, etc. 2. Métodos químicos, en donde se utilizan substancias bactericidas o bacteriostáticos como son alcoholes, fenoles, halógenos, detergentes, entre ot ros. La esterilización por calor es uno de los métodos más comúnmente utilizados en el laboratorio, es muy útil para la cristalería, los medios de cultivo y para la esterilización de los medios después de su utilización y este puede ser: a) Calor Húmedo b) Calor Seco

2. OBJETIVOS 

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Realizar la práctica de envoltura y acondicionamiento de los materiales para su posterior esterilización. Llevar a la práctica los pasos necesarios en el uso del autoclave (calor húmedo), esterilización (calor seco) y el mechero Bunsen. Mantener los materiales esterilizados.

3. INDICACIONES DE SEGURIDAD I.

Es obligatorio utilizar guarda polvo abrochadas siempre que se esté trabajando en el laboratorio. El guardapolvo no debe utilizarse fuera del laboratorio.

II. III.

Utilizar guantes apropiados para el manejo del autoclave o material recién esterilizado. Se debe lavar las manos con jabón antiséptico ante cualquier sospecha de contaminación y antes de marcharse del laboratorio.

IV.

Todos los materiales que hayan entrado en contacto con microorganismos (como pipetas usadas, placas petri o tubos), deben colocarse en el autoclave preparadas para tal efecto y proceder posteriormente a su esterilización.

4. Material y Sustancias Químicas 

Matraces

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Detergente

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Tubos de ensayo

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Agua destilada

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Pipetas de Vidrio

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Autoclave

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Cajas de petri

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Esterelizador (Horno Pasteur)

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Algodón

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Papel estraza o Kraf

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Escobillones

5. Marco Teórico 4.1 Empacado del Material Antes de iniciar un empaque del material que se desea esterilizar, es necesario que e n todas las prácticas que se realicen estén en condiciones de esterilidad y se debe, en primer lugar, limpiar el área de trabajo con alguna sustancia desinfectante (soluciones de hipoclorito de sodio) para desinfectar superficies. El material a esterilizar se deberá de empacar correctamente con papel estraza, una de las razones de la importancia del uso del papel de las características físicas que hacen que el papel se pueda adaptar a diferentes usos como: Impedir el ingreso de microorganismos al interior, sellar en forma completa para evitar contaminación, soportar la tracción y manipulación habitual sin sufrir deterioro. Para conocer a que alumno o grupo de alumnos corresponde se debe etiquetas o escribes los datos personales:

Nombre del Alumno:__________________________________Semestre______ Grupo______ Fecha____________________ Procedimiento empacado del material

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1. Lava el material de laboratorio, principalmente la cristalería con detergente y enjuaga con abundante agua de caño y en seguida con agua destilada. 2. Secar el material utilizando de preferencia en horno, si no es posible secar al aire. 3. Empaca el material correctamente

A) CAJAS DE PETRI Material: 

Papel estraza de 25 x 25cm o 30 x 30 cm  Caja petri Cortado el papel estraza, colócalas en la parte

central,

luego

se

toman

los

extremos de papel y se unen, con las salientes del papel estraza hacer tres dobleces. Se hace un nuevo los extremos se doblan

en forma triangular .Ya en

forma triangular se doblan hacia atrás quedando listas para esterilizar.

B) PIPETAS Material:  

Papel estraza de 5x40cm Pipeta

Introduce una pequeña porción de algodón en el cuello de la pipeta, procurando que quede lo suficientemente apretada. Con tiras de papel de 5 cm de ancho envuélvelas, comenzando por la punta y en forma de espiral gira hacia arriba hasta el final de la pipeta.

C) TUBOS DE ENSAYO. Se toma el tubo con la mano izquierda y con la derecha el tapón de algodón. Coloca algodón en la boca del tubo a 1/5 parte de la longitud del mismo procurando que quede bien apretado, deposítalos en recipientes adecuados, tápalos con papel estraza y átalos.

D) MATRACES. Gorro protector de matraz:  

Material: Papel estraza de 20x25cm

Tapa el cuello del matraz con algodón, lo suficientemente apretado para evitar que se destape (se tapa en la misma forma que el tubo). Como protección coloca un

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gorrito de papel estraza doblar el papel estraza por la mitad, doblar las dos puntas que hayan quedado unidas por el papel hacia adentro y átalo con hilo.

E) MATERIAL METÁLICO El asa de platino, tijeras, bisturí, material quirúrgico no es necesario empacarlo para su esterilización.

4.2

Esterilización(Agente físico): el calor El calor destruye a los microorganismos oxidando sus constituyentes químicos, desnaturalizando las proteínas y los ácidos nucleicos de las células así como fragmentando las membranas celulares. Los materiales deben permanecer secos sin aceites, polvos (por ser impermeables al vapor).

4.3

Formas Posibles de la Utilización del Calor Como Agente Esterilizante El calor puede ser aplicado para la e sterilización de dos maneras diferentes: a.

Calor Seco. Es aire a temperatura elevada. Existen dos tipos más conocidos: i. Fuego directo: Consiste en exponer directamente a la llama el material a esterilizar, lo que se logra por oxidación violenta. Este método se utiliza para ansas, agujas, flameado de bocas de tubos u otros recipientes y destrucción de material contaminado. En las llamas de los mecheros bunsen se alcanzan temperaturas superiores a los 2.500°C, por lo que una breve exposición es suficiente. Sin embargo, cuando las ansas de siembra están muy cargadas con microorganismos, la aplicación directa de la llama provoca la dispersión irregular del contenido de aquéllas, con el consiguiente peligro de la contaminación.

Figura N° 1. La esterilización adecuada del material es importante para obtener los resultados esperados. ii. Aire caliente (Horno Pasteur): Se emplean las estufas de calor seco (ver Figura), en las que el aire caliente circula por el espacio que existe entre la doble pared, transmitiendo así el calor a los objetos que se encuentran en su interior. Los microorganismos se mueren por oxidación de sus estructuras previa deshidratación, pudiéndose llegar a una ligera carbonización.

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Figura : Corte esquemático de Estufa de esterilización Descripción de la estufa: La estufa de esterilización a seco es una caja metálica de paredes triples. La pared interior es generalmente de acero inoxidable y presenta orificios para la libre circulación del aire caliente. La pared intermedia encierra, junto con la externa, el material aislante que puede ser lana de vidrio o amianto. La fuente de calor es una resistencia eléctrica aunque también existen estufas a gas. Viene provista de un termorregulador para graduar la temperatura deseada. En la cara superior de la estufa existen orificios para permitir la salida de gases y vapores, pudiendo existir otro para la co locación de un termómetro en caso de no traerlo incorporado. En el interior posee rejillas metálicas de altura graduable para acondicionar sobre ellas el material a esterilizar.

Uso: esterilización de material de vidrio y otros materiales termorresistentes que interese mantenerlos secos. Todo el material a esterilizar debe estar debidamente empaquetado con papel de estraza (papel kraft) o contenido dentro de caj as metálicas.

Tiempo requerido: dos horas, a una temperatura de 180 ºC. El tiempo se mide desde el momento e n que se alcanzó la temperatura indicada y está condicionado por la cantidad de material y su distribución dentro de la estufa. El aire caliente no tiene mucho poder de penetración, por esta razón es que se requiere mayor temperatura y tiempo que con otros métodos.

Aplicación: se utiliza preferentemente para este rilizar material de vidrio. 1. El material de vidrio debe encontrarse limpio y libre de sales. 2. Se procede a tapar el material ya sea con sus t apaderas ó fabricarlas con algodón ó gasa. 3. Envolver en papel y llevarlo al horno (evitando el contacto con las paredes del horno) porque alcanza temperaturas muy altas. Las extremidades de los objetos que llevan algodón deben colocarse hacia arriba. Recordar que todo el material debe permanecer envuelto en papel de modo tal que una vez retirado de la estufa, permanezca estéril hasta el momento de ser usado. 4. Para tubos de vidrio, pipetas (por separado) y cr istalería en general. 5. Una vez introducido el material, se cie rra el horno y se enciende, de jándolo calentar hasta 180 °C. 6. Transcurrido el tiempo de esterilización se apaga e l horno y se deja enfriar para sacar el material.

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b. Calor Húmedo. El vapor de agua es uno de los métodos más eficaces para destruir microorganismos y, a igualdad de temperatura, es mucho más eficaz que el calor seco (aire). Se utiliza principalmente la autoclave ó la olla de presión, es útil para medios de cultivo. i.

Descripción del autoclave: Una autoclave es un dispositivo que sirve para esterilizar el material de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presión y temperatura para ello. Por lo general, la utilización de una autoclave inactiva todos los virus y bacterias, aunque recientemente se ha llegado a saber de algunos microorganismos, así como los priones, que pueden soportar las temperaturas de autoclave.

El autoclave consiste en un cilindro de bronce, horizontal o vertical, con una tapa del mismo material que se apoya sobre una arandela de goma y se cierra por pestillos o cerrojos quedando herméticamente cerrado. Además, posee en la parte superior una llave de vapor (o espita), un manómetro y una válvula de seguridad. En el interior del autoclave se coloca un volumen de agua que se hace hervir, se cierra luego la tapa, se atornilla dejando abierta la espita hasta que todo el aire del interior haya sido desplazado por el vapor. Debe dejarse que el vapor salga por la espita unos 5 minutos antes de cerrarla. Es muy importante que la eliminación del aire ya que, de lo contrario, la presión marcada por el manómetro indicará la temperatura a la que se encuentra la mezcla vapor aire en el interior, que es menor a la esperada para el vapor saturado a esa presión. Una vez que se ha cerrado la llave de vapor (espita), comienza a elevarse la presión en el interior del autoclave; usualmente se fija la válvula de seguridad para que se abra a 15 libras/pulgada2, estas presiones corresponden a 121ºC.

Cuando el manómetro indica que se ha alcanzado la presión deseada, se calcula el tiempo durante 15 min. Luego se apaga el equipo ya que el calor necesario para mantener la presión es menor que el requerido para alcanzarla. No deben abrirse el autoclave ni la espita hasta que el manómetro indique “0” (cero). Si la presión se libera violentamente los líquidos en el interior del aparato hierven tumultuosamente, pudiendo aún reventar los elementos de vidrio. Una vez que el manómetro indique que no hay sobrepresión en el interior del aparato, se abre primero la llave de vapor y luego de algunos minutos se puede levantar la tapa del autoclave. No se debe retirar el contenido inmediatamente.

Tiempo requerido: usualmente, para esterilizar medios de cultivo son necesarias temperaturas de 107121ºC durante 10 a 15 minutos.

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Ciclo de 105 ºC para la desinfección de líquidos y objetos delicados. Por debajo de los 120 ºC sólo se puede hablar de desinfección, nunca de e sterilización.

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Ciclo de 121 ºC, Este se aplica para la esterilización general de instrumentos de laboratorio, guantes y tejidos clínicos.

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Ciclo de 134 ºC, En este se esteriliza el material quirúrgico o con riesgo.

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Ciclo de 143 ºC, Ciclo rápido, para esterilizar fundamentalmente instrumentos cuyo uso sea

inmediato o urgente. Limitaciones: en función de la termolabilidad de ciertos materiales y componentes de medios de cultivo. Además es inadecuado para sustancias que son inmiscibles en agua, como las grasas, en las que la penetración del vapor es muy limitada.

Válvula de seguridad.- Es útil cuando existe la posibilidad que la válvula de control no funcione bien. Si ello ocurre, no habrá escape del vapor y este podría subir tanto que podría explosionar. En ese caso, la válvula de seguridad permitirá el escape del vapor.

Figura : Corte esquemático del Autoclave

1. Tornillos móviles para el cierre hermético 2. Material a esterilizar 3. Vaciado de la caldera 4. Fuente de calor 5. Gas o energía 6. Agua 7. Apoyo para alejar el material del agua 8. Caldera 9. Manómetro 10. Cierre de la tapa 11. Válvula de seguridad 12. Espita

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