Medios de Cultivo Vegetal

 

Medios de cultivo vegetal

Un medio de cultivo es toda preparación artificial, sólida, semisólida semisó lida o líquida que suministra a los ex plantes (parte de la planta) cada una de las sustancias fundamentales para su desarrollo, fuente de carbono, nutrientes, minerales, vitaminas además de otras sustancias que pueden variar según el criterio o requerimientos de lo que se vaya a cultivar; estos pueden ser agentes gelificantes (Sólidos), Sustancias reguladoras de crecimiento, Otros compuestos. En general se hace referencia al conjunto de (Carbono) + (Nutrientes Minerales) + (Vitaminas) como el MEDIO BASAL (MB). Fuente de Carbono: Debido a que muy poco de los cultivos in vitro son autótrofos, y por lo

tanto es necesario agregar al medio fuente de carbono, dentro de las fuentes de carbono  podemos destacar la más utilizada, como lo es la sacarosa, también encontramos Maltosa y galactosa, azucares menos efectivas, La incorporación de mio-inositol (100 mg/litro)  permiten el desarrollo de callos y suspensiones celulares. cel ulares. Los medios de cultivo aportan de igual forma los nutrientes (MACRO Y MICRONUTRIENTES) que consideran esenciales para el crecimiento de las  plantas. Nutrientes y minerales:

Al medio es suministrado el Nitrógeno (N) en forma de nitratos o amonio, los cultivos pueden prosperar solo con nitratos o en el caso contrario con amonio, como fuente nitrogenada. Si solo se cuenta con una sola fuente se recomienda adicionar adiciona r ácido cítrico, succínico o málico. Otras fuentes de Nitrógeno pueden contener glutaminas, urea o caseína hidrolizada (CH). Fuentes de Nitrógeno:

Otros nutrientes esenciales:

Los medios de cultivo además contienen:

Fósforo (P), Calcio (Ca), Magnesio (Mg), Azufre (S). “El Hierro (Fe) se deb e adicionar con agentes quelantes (Na2EDTA) como para hacerlo disponible en rango amplios de pH”  Ejemplos de medios de cultivo:

 

Formulación de los distintos medios de cultivo

 

Vitaminas

Varios medios contienen distintas vitaminas que contribuyen al desarrollo de los tejidos vegetales, sin embargo, la incorporación de la TIAMINA es esencial para la preparación de los medios de cultivo. Agente gelificante

Los medios semi-sólidos y sólidos deben tener una concentración adecuada de agar. Generalmente a una concentración de 0.6% a 1%. El no exceder las cantidades ideales ya que pueden alterar las respuestas in vitro de los cultivos, los más comunes son agar-agar, gellgome, gelrite, cada uno puede manejar un concentración distinta. En algunos casos solo utilizando el MB se pueden obtener respuestas deseadas en el crecimiento vegetal. Es recomendable utilizar estos reguladores  para obtener ob tener una me mejor jor resp respuesta uesta en el desarrollo, desar rollo, generalmente son utilizados reguladores r eguladores del tipo auxinas, citocininas y gibelerinas. Reguladores de crecimiento:

AUXINAS

Para la preparación de los medios las auxinas más utilizadas son: 2,4 –  D  D (Ácido 2,4-dichlorofenoxiacético) ANA (Ácido Naftalenácetico) AIA (Ácido Indolácetico) AIB (Ácido Indolbutírico)

 

Citocininas (Citoquininas) y Gibelerinas

Los reguladores de crecimiento del tipo citocininas que más se utilizan para la preparación de los medios son: KIN (Cinetina = Kinetina o N –  6 6- furfurilaminopurina) BAP (Bencilaminopurina) ZEA (Zeatina) En cuanto a las gibelerinas la de mayor uso para el cultivo de meristemos es la AG3 (Ácido giberélico) y en ocasiones ABA (Ácido abscísico). Preparación de un medio de cultivo

Se recomienda preparar los medios con agua destilada o desmineralizada, Se debe prevenir el almacenamiento prolongado del medio para evitar su contaminación, todas las sustancias químicas utilizadas deben ser de origen aséptico para evitar la contaminación. El procedimiento para la preparación depende directamente del medio que se desee obtener, teniendo en cuenta el tipo, consistencia y presencia de nutrientes. Preparación

Su preparación consta básicamente de los siguientes pasos: Incorporación del medio basal (MB) Incorporación de los reguladores de crecimiento y otros compuestos Adición y dilución del agar Ajustar pH del medio Distribución en los recipientes de cultivo de tejidos (tubos de ensayo, cajas petri, tarros plásticos, etc.) Esterilización en la autoclave