MANUL DE BACTER

MAYRA TORRES GÓMEZ

Manual de bacter UACH UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Bacteriología Médica PRACTICA 1 “CEPAS DE REFERENCIA” TITULAR:

Norma Herrera Díaz

ALUMNA: Mayra Torres Gómez 190128 7mo “B”

Manual de bacter UACH

RESUMEN En este análisis se llevo acabo la identificación de Salmonella enteritidis, S. typhi, Shigella sonnei, Yersinia enterocolitica y Vibrio parahemolyticus, donde se utilizó el agar TCBS únicamente para V. parahemolyticus, el SB para salmonellas, por el hecho de ser un agar altamente selectivo para dichas bacterias y los agares MacConkey, XLD y SS para Salmonellas, Shigella y Yersinia, el agar XLD se utilizo debido a que permite diferenciar a través de la producción de acido sulfhídrico (H2S) a la Salmonella de la Shigella, el MacConkey fue utilizado por ser una agar que permite el crecimiento de las bacterias Gram negativas e inhibe a las Gram positivas. Para la identificación se inocularon las bacterias antes mencionadas a partir de cepas de referencia, después de 24 horas de incubación a 37°C se observaron las características microscópicas y microscópicas, para posteriormente realizar las pruebas bioquímicas de cada una de las diferentes bacterias para una identificación mas especifica, los resultados obtenidos en las pruebas bioquímicas tuvieron algunas variantes con respecto a los resultados reales. INTRODUCCION. ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES. Las enfermedades gastrointestinales ocupan una de las primeras causas de consulta médica y son también una de las primeras causas de muerte en México y en el mundo. No perdonan a nadie ni por edad ni por condición social, aunque el grupo más vulnerable a sus síntomas son los niños pequeños y los ancianos. Son ocasionadas por varios motivos que pueden ser desde orgánicos y psicológicos, pero principalmente son causadas por bacterias, virus o parásitos que penetran al organismo por medio de alimentos y agua contaminada principalmente con materia fecal que también se disemina por el ambiente, sobre todo en temporada de calor. Entre los principales microorganismos que las ocasionan están: la Salmonella, la Escherichia coli, la Shigella, las Giardias y las temibles amibas. Las principales manifestaciones son.  Fiebre.  Dolor estomacal o abdominal (cólicos).  Náuseas.  Vómito.  Diarrea.  Constipación o estreñimiento. Una de las consecuencias y complicaciones más graves cuando hay diarrea y vómito, es la deshidratación. Los órganos que son afectados con mayor frecuencia son: el esófago, estómago, duodeno, ano, recto, páncreas y los intestinos, el delgado y el grueso.

Manual de bacter UACH Entre los estudios para identificar exactamente el tipo de problema, están los de sangre, materia fecal, endoscopías, radiografías y ecografías, además de la exploración física y la historia clínica.

La fiebre tifoidea es una infección bacteriana caracterizada por diarrea, enfermedad sistémica y erupción cutánea, causada más comúnmente por la bacteria Salmonella typhi. La bacteria Salmonella typhi se propaga por alimentos, agua y bebidas contaminadas. Después de su ingestión, la bacteria se propaga desde el intestino hasta los ganglios linfáticos del intestino, hígado y bazo por la sangre donde se multiplica. Puede infectar directamente la vesícula biliar a través del conducto hepático o extenderse a otras áreas del cuerpo por medio del torrente sanguíneo. Los síntomas iniciales son generalizados e incluyen: fiebre, malestar general y dolor abdominal. A medida que avanza la enfermedad, la fiebre aumenta (por encima de 39,5° C/103° F) y la diarrea se hace más frecuente. Se observa debilidad, fatiga profunda, delirio, y aspecto de malestar general agudo de aparición repentina. Algunas personas pueden convertirse en portadores de la bacteria Salmonella typhi y continuar expulsando la bacteria en sus heces por años, diseminando la enfermedad. Salmonella enteritidis, se puede encontrar dentro de huevos en apariencia normales, pero que si se comen crudos o insuficientemente cocidos, pueden causar enfermedad. Esta bacteria infecta los ovarios de gallinas aparentemente sanas y contamina los huevos antes de que se forma la cáscara. Durante la evisceración de los animales se puede producir la contaminación de al carne a través de sus intestinos. Normalmente se transmite a los humanos por comer productos contaminados con excrementos animales. Los alimentos contaminados huelen y tiene una apariencia normal y son frecuentemente de origen animal, como la carne de vaca, de aves de corral, leche o huevos, pero todos los alimentos, incluyendo los vegetales pueden contaminarse. Esta bacteria también se puede encontrar en las heces de animales domésticos, y las personas se pueden infectar si no se lavan las manos después de entrar en contacto con las heces de estos animales. Se debe tener mucho cuidado en la elaboración casera de salsas, mayonesas etc. Las principales causas de salmonelosis son la recontaminación de productos cocinados (por contacto con superficies o utensilios no lavados adecuadamente tras utilizarlos con alimentos crudos, por manipuladores infectados que no guardan correctas medidas de higiene), y cocinado insuficiente. Las shigelas tienen como único reservorio al hombre y su dosis infectante mínima es pequeña, lo que permite su transmisión no sólo a través de los alimentos, sino también a través del agua y por contacto directo entre niños en las guarderías. Sin embargo, como todos los microorganismos de transmisión fecal-oral cuyo único reservorio es humano (shigelas y Salmonella bioser typhi), pueden llegar a erradicarse con medidas de higiene personal y ambiental.

Manual de bacter UACH Y. enterocolitica es una bacteria pequeña de forma redonda y Gram-negativa, la cual es aislada frecuentemente de los especímenes clínicos tales como las heridas, las heces fecales, el esputo o las glándulas linfáticas mesentéricas. Sin embargo, no forma parte normal de la flora humana. Por otro lado, Y. pseudotuberculosis ha sido aislada del apéndice infectado en los humanos. Ambos organismos han sido aislados frecuentemente de los animales, tales como los cerdos, las aves, los castores, los gatos y los perros. Solamente la bacteria Y. enterocolitica se ha encontrado en muestras ambientales de lagunas y lagos, y en alimentos como la carne, los helados y la leche. La mayoría de los organismos aislados no han sido catalogados como patógenos. Vibrio parahaemolyticus Este microorganismo es un bacilo corto, curvado, Gram negativo, móvil por un solo flagelo polar, anaerobio facultativo y algo halófilo, ya que cuando crece es en presencia de 3-6 % de NaCl, en un rango de temperatura entre 8 y 44°C, siendo la óptima la de 37°C; a esta temperatura la división celular ocurre a gran velocidad (cada 10-12 minutos). Este Vibrio prefiere condiciones alcalinas (crecimiento óptimo a pH de hasta 9,0), además es termosensible, destruyéndose fácilmente a temperaturas mayores de 50°C. Los síntomas de la toxiinfección alimentaría por V. parahaemolyticus, generalmente se presentan 10-18 horas después de ingerido el alimento contaminado. Los síntomas principales son náuseas, vómitos, dolor abdominal y diarrea. A veces se presenta fiebre escasa, siendo breve la duración de la enfermedad (1-4 días).

Manual de bacter UACH RESULTADO DE APRENDIZAJE. Identificar los diferentes microorganismos patógenos del tracto gastrointestinal presentes en la muestra. MATERIALES Y METODOS. 

MATERIAL Y EQUIPO. Bata de laboratorio, cubre boca, guantes látex. 2 Mecheros. Microscopio óptico de campo claro. Incubadora. Asa de nicromio redonda y asa de nicromio recta. Portaobjetos. Puente de tinción. Cristal violeta. Yodo lugol. Alcohol acetona. Safranina. • Solución salina estéril al 0.85%. • Reactivo de FeCl3. • Reactivo de Kovac’s. • Rojo de metilo. • α-Naftol • KOH al 40% • Cepas de referencia (Vibrio parahemolyticus, Salmonella typhi, Salmonella enteritidis, Shigella sonnei y Yersinia enterocolitica). 2 Agar McConkey. 2 Agar Salmonella-Shigella. 1 Agar sulfito de bismuto. 1 Agar TCBS. 21 Agar XLD. 5 Triple azúcar hierro (TSI). 5 Medio MIO. 5 Rojo de metilo. 5 Voges-Proskauer. 5 Caldo de urea. 5 Agar LIA. 5 Fenilalanina. 5 Citrato. 5 SIM. Papel estraza. Agua destilada. Aceite de inmersión. Gradilla.

Manual de bacter UACH 

METODOS. Sembrado de las cepas de referencia. Vibrio parahemolyticus. Agar TCBS. Salmonella typhi. MacConkey, Salmonella-Shigella, Sulfito de bismuto, XLD. Salmonella enteritidis. MacConkey, Salmonella-Shigella, Sulfito de bismuto, XLD. Shigella sonnei. MacConkey, Salmonella-Shigella, Sulfito de bismuto, XLD. Yersinia enterocolitica. MacConkey, Salmonella-Shigella, XLD. Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la cepa de referencia (Vibrio parahemolyticus, Salmonella typhi, Salmonella enteritidis, Shigella sonnei y Yersinia enterocolitica), se toma la caja petrí que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta en el primer cuadrante, después se estría en los demás cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas después del periodo de incubación. Después de que se hayan sembrado cada una de las sepas de referencia se colocan las cajas petrí en la incubadora durante 24 horas a 37ºC, después de este periodo de incubación se revisa la estructura microscópica de cada una de las sepas. NOTA: Este procedimiento se realiza de igual forma para cada una de las cepas de referencia en cada uno de los agares correspondientes.

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

• Tinción de Gram. En un portaobjetos se coloca una gota de solución salina al 0.85%, con el asa de nicromio se toma una colonia del cultivo y se homogeniza la muestra sobre el portaobjetos que contenga la solución salina, se deja reposar a temperatura ambiente, y se espera a que esta seque, depuse de que esta haya secado se procede hacer lo que es la tinción de Gram: Fijar el frotis con calor. Cubrir con cristal violeta por un minuto. Lavar con agua. Cubrir con yodo lugol por un minuto. Lavar con agua. Decolorar con alcohol acetona de 10 -15 segundos. Lavar con agua. Cubrir con safranina por un minuto. Lavar con agua y secar. Observar en el microscopio con los objetivos de 10X y 100X.

Manual de bacter UACH Pruebas bioquímicas. TSI (Triple azúcar hierro). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la caja petrí que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estría en la parte de arriba, se cierra y se incuba por 24 horas a 37ºC. Los resultados pueden dar de la siguiente manera: K/K Rojo arriba y abajo. K/A Rojo arriba y amarillo abajo A/A Amarillo arriba y abajo. Si se presenta un precipitado negro es que es productor de ácido sulfhídrico. CITRATO. Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la caja de petrí que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye que contenga el medio y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estría en la parte de arriba, se cierra y se incuba por 24 horas a 37ºC. Después del periodo de incubación se lee el resultado si el medio cambia de un color verde a azul Prusia es positivo y si este queda del mismo color es negativo. FEA (Fenilalanina). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la caja de petrí que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye que contenga el medio y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estría en la superficie, se cierra y se incuba por 24 horas a 37ºC. Después del periodo de incubación se revisa si hay crecimiento y se agregan de 3-4 gotas de FeCl3 y se lee el resultado si se presenta una coloración verde oscuro es una fenilalanina positiva y se forma una coloración amarillenta es una fenilalanina negativa. LIA (agar lisina hierro). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la caja de petrí que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye que contenga el medio y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estría en la superficie, se cierra y se incuba por 24 horas a 37ºC. Después del periodo de incubación se revisan los resultados, en este se revisa: Producción de H2S. Color negra (+). Desaminación. (Arriba) Color roja (+) Color amarillo (-) Descarboxilación (Abajo) Color morado (+) Color amarillo (-) MIO. Se toma una colonia con el asa de nicromio y se inocula el medio por picadura directa hasta el fondo, se cierra el tubo y se incuba por 24 horas a 37°C. Pasado el tiempo de incubación se agregan 4 gotas del reactivo de kovac’s. Los resultados se pueden dar de la siguiente manera: Desaminación: se lee en la parte de arriba del tubo, si al momento de agregar el reactivo kovac’s se presenta un anillo rojo es una desaminación (+) e indol (+) y si se presenta un anillo amarillo es una desaminación (-) e indol (-). Descarboxilación: Si se presenta una coloración morado-verdoso es una Descarboxilación (+) y si se presenta una coloración amarillenta o blanca es una Descarboxilación (-).

Manual de bacter UACH CALDO DE UREA. Se toma una colonia con el asa de nicromio de la cepa de referencia y se inocula por agitación, se cierra y se incuba por 24 horas a 37°C. Después del tiempo de incubación si la ureas queda de color naranja es una ureas (-) y si cambia a color rosa es una ureasa (+). ROJO DE METILO Y VOGES PROSKAUER. Se inoculan por agitación los tubos que contengan el rojo de metilo y el Voges Proskauer, después de haberlos inoculado se cierran los tubos de ensaye y se incuban a 37°C por 48 horas. Pasadas las 48 horas de incubación se toman los tubos de RM y VP y se agregan los reactivos correspondientes para cada una de estas pruebas bioquímicas. Al tubo que contenga el RM se la agregan 4 gotas de rojo de metilo, sin agitar si se presenta una coloración roja es un RM (+) y si no presenta cambio alguno es RM (-). Al tubo del VP se la agrega primeramente 12 gotas de α-naftol, después se agregan 4 gotas de KOH al 40%, se deja reposar durante 15 minutos, si se forma una anillo color salmón o rojo es un VP (+) y si no presenta cambio alguno es VP (-). SIM. Se toma una colonia con el asa de nicromio y se inocula el medio por picadura hasta el fondo, se cierra y se incuba por 24 horas a 37°C. Pasado el tiempo de incubación se agregan 4 gotas del reactivo de kovac’s si se presenta un anillo color rojo es un indol (+) y si se presenta un anillo color amarillo es un indol (-).

Manual de bacter UACH RESULTADOS. 

Morfología Macroscópica y Microscópica.

Forma Tamaño Borde Elevación Luz transferida Luz reflejada

Color Consistencia Afinidad tintoríal Forma Lactosa

Salmonella typhi

Vibrio parahemolyticus

Salmonella enteritidis

Shigella sonnei

Yersinia enterocolitica

Redonda Pequeña Entero Convexa Si

Redonda Pequeño Entero Convexa Sí

Redonda Pequeña Entero Convexa Si

Redonda Pequeña Entero Convexa Si

Redonda Pequeña Entero Convexa Si

Si Incolora (McK) Negra (SS, XLD, sulfito de bismuto).

Si Incolora (McK) Incolora (SS, XLD, sulfito de bismuto)

Si Incolora (McK, SS) Blancas (XLD)

Si Incolora (McK) Negra (SS, XLD, sulfito de bismuto)

Incolora (TCBS)

Cremosa G (-)

Cremosa G (-)

Cremosa G (-)

Cremosa G (-)

Cremosa G (-)

Bacilos -

Bacilos

Bacilos -

Bacilos -

Bacilos -

Morfología macroscópica. AGAR XLD

Salmonella Typhi

Shigella sonnei

Salmonella enteritidis

Yersinia enterocolitica

Manual de bacter UACH AGAR MacConkey

Shigella sonnei

Yersinia enterocolitica

Salmonella sp AGAR SS

Shigella sonnei

Yersinia enterocolitica

Salmonella sp AGAR TCBS

AGAR SB

Vibrio parahemolyticus

Salmonella typhi

Manual de bacter UACH Morfología microscópica.

Salmonella enteritidis

Salmonella typhi

Yersinia enterocolitica

Shigella sonnei

Vibrio parahemolyticus

Pruebas Bioquímicas. Salmonella typhi TSI A/A

gas

H2S

-

+

Salmonella enteritidis

A/A

gas

H2S

+

+

Shigella sonnei

A/A

gas

H2S

-

-

Citrato

-

+

-

FEA

-

-

-

LIA MIO Caldo de urea RM/VP 37ºC SIM 37°C

+

-

-

-

+

+

-

-

-

Ornitina

Indol

Movilidad

Ornitina

Indol

Movilidad

Ornitina

Indol

Movilidad

+

-

+

+

-

+

+

-

-

RM +

VP -

RM +

VP -

RM +

VP -

Indol

Movilidad

Indol

Movilidad

Indol

Movilidad

+

-

+

-

+

-

Manual de bacter UACH

TSI Citrato FEA LIA MIO

Vibrio parahemolyticus gas H2S K/A + + -

Yersinia enterocolitica gas H2S A/A -

-

-

-

Ornitina

Caldo de urea RM/VP 37ºC SIM 37°C

+ Indol

-

-

Movilidad

Ornitina

+

-

negativo

-

-

Indol

Movilidad

+ negativo

-

RM -

VP +

RM +

VP -

Indol

Movilidad

Indol

Movilidad

-

+

+

+ 25ªC

DICUSIÓN DE RESULTADOS En este análisis se puedo observar a las diferentes cepas de referencia que se nos proporcionaron donde se puedo confirmar que se trataba de los microorganismos que efectivamente nos habían proporcionado, esto se logro gracias a las pruebas metabólicas que se realizaron en donde, los resultados arrojados no variaron con respecto a los que se menciona en la referencia consultada, asi que es de dicha importancia tener en cuenta las características bioquimicas CONCLUSIÓN El estudio de la morfología macroscópica y microscópica es de gran importancia debido a que a través de este estudio se pude ir identificando que tipo de bacteria es la que se esta estudiando y así saber cuales pruebas bioquímicas son las adecuadas para poder confirmar si se trata de la bacteria que se sospecha, y así poder dar un resultado confiable el cual podrá ayudar a dar un tratamiento adecuado y a tiempo. Las pruebas bioquímicas son de gran importancia ya que estas nos permiten determinar características especificas de la bacteria a estudiar, y estas características nos ayudan a determinar o identificar que tipo de bacteria es la que se esta estudiando, los resultados obtenidos en esta practica fueron los esperados ya que al compararlos con las tablas de referencia estos coincidieron en los resultados obtenidos en las pruebas realizadas. BIBLIOGRAFIA.  Braude, A. (1984) Microbiología Clínica. Capítulos 31 Enterobacteriaceas,. Ed. Médica Panamericana S.A., págs. 394, 395, 397, 399,451.

Manual de bacter UACH  Cabello, R. (1999) Manual de Microbiología Clínica. Ed. Médica Panamericana. 4ta edición. México, págs. 374-376.  Forbes, Sahm, Weissfeld. (2004). Bailey & Scout Diagnostico Microbiológico. Ed. Panamericana. 11va edición. Me´xico. , págs. 441-444.  Koneman E. Allen S. (2004) Diagnostico Microbiológico. Ed. Médica Panamericana S.A., págs. 197, 200,215.  http://www.esmas.com/salud/enfermedades/infecciosas/434933.html http://docum.azti.es/RIESGOS.nsf/0/a72cd92e979db075c1256b370044bf63? OpenDocument

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Laboratorio: Bacteriología Médica Práctica # 2

Manual de bacter UACH

“Análisis de Coprocultivo” TITULAR: Norma Herrera Díaz

ALUMNA: Mayra Torres Gómez 190128 7mo “B”

15 de Febrero de 2007

Manual de bacter UACH Resumen. Se realizó el análisis bacteriológico de una muestra diarreica con la finalidad de identificar al microorganismo causante de la misma. Realizando primeramente la siembra en agares propios para enterobacterias (McK, XLD), posteriormente en Sulfito de Bismuto, después de haber sido preenrriquecida la muestra con Caldo de selenito. Posteriormente se realizó el análisis macroscópico y microscópico, para luego realizar las pruebas bioquímicas correspondientes. Mismas que fueron incubadas 24 horas a 37°C para después del tiempo definido se procedió a su interpretación, para confirmar o descartar la posible presencia de algún patógeno. En el análisis realizado determinó la presencia de Kluyvera ascorbata o Kluyvera georgiana, por falta de pruebas; no se pudo definir la especie. Introducción. El grupo de las Enterobacterias, nombre común utilizado para referirse a la Familia Enterobacteriacea, incluye a bacilos Gram (-), aerobios y anaerobios facultativos, la mayoría de ellos móviles mediante flagelos perítricos, que como característica microbiológica fenotípica común tienen la capacidad de fermentar la glucosa y reducir los nitratos a nitritos. (2) (3) Tienen como hábitat el intestino de animales inferiores y del hombre. Además tienen una amplia distribución en el ambiente; entre las numerosas especies que constituyen esta familia, encontramos algunos grupos que en su relación con el hospedero humano son comensales, como es el caso de Escherichia coli constituyente importante de la microbiota intestinal normal aerobia, especialmente a nivel de la porción distal del intestino delgado y fundamentalmente a nivel del intestino grueso. En esta localización la presencia de E. coli resulta en un beneficio para el hospedero, pues como parte de su metabolismo sintetiza vitaminas y esta microbiota participa en la degradación de ácidos y sales biliares. Debido a la presencia masiva de E. coli a nivel intestinal, la detección de E. coli se utiliza como marcador de contaminación fecal. (3) (5) Otros integrantes de este grupo en cambio son patógenos intestinales como el género Salmonella, Shigella, Yersinia y un subgrupo de E. coli con factores de virulencia específicos que afectan el intestino y por ello se denominan E. coli diarreogénicos. Estos grupos o Géneros bacterianos causan infecciones gastrointestinales que pueden expresarse clínicamente como diarrea acuosa, diarrea con sangre (también denominada diarrea enterocólica o síndrome disentérico) y en algunos casos a partir de la infección intestinal estas bacterias pasan al torrente sanguíneo y se puede producir una infección sistémica o bacteremia, como por ejemplo la fiebre tifoidea. (5) En 1956, hacen la primera identificación del género Kluyvera, describiéndolo como bacilos, gram negativos, con flagelados polares y los clasificaron dentro de la Familia Enterobacteriaceae. Producían grandes cantidades de ácido alfa-cetoglutárico en la fermentación de la glucosa. En 1962 se identificó a estos gérmenes como perítricos. Fermentan la mayoría de azúcares y son sensibles a distintos antibióticos.

Manual de bacter UACH Se han aislado tres grupos de Kluyvera: K. ascorbata, K. georgiana y K. species. Las dos primeras están cercanas bioquímicamente aunque se diferencian, como es por la respuesta al irgasán entre otras. Inicialmente fue considerado el género Kluyvera un microorganismo comensal de las vías respiratorias altas y del aparato digestivo. Paulatinamente van apareciendo nuevos casos en la literatura en los que se aísla este germen atribuyéndosele en muchos casos un papel patógeno como en pielonefritis agudas y trastornos gastrointestinales en pacientes ancianos inmunodeprimidos. (1)

Manual de bacter UACH Material:  Portaobjetos y cubreobjetos.  Asa de nicromio punta recta.  Asa de nicromio punta redonda.  Mechero de Bunsen.  Papel estraza.  Puente de tinción.  Gradilla y piseta.  Cajas petri.  Hisopo estéril.

Equipo:  Microscopio óptico de campo claro.  Incubadora a 37ºC.

Equipo de protección personal:  Cubreboca.  Guantes de látex.  Bata. Reactivos:  Tinción de Gram. » Cristal violeta. » Yodo lugol. » Alcohol acetona. » Safranina.  Solución salina fisiológica isotónica al 0.85%.  Aceite de inmersión.  Cloruro Férrico al 10%  Kovak’s.  α-Naftol.  KOH al 40%.  Rojo de Metilo. Agares:  MacConkey.  XLD.  Sulfito de Bismuto.  Caldo de selenito.

Pruebas Bioquímicas:  TSI  MIO  SIM  Citrato  Caldo de Urea  FeA  RM-VP  LIA  Caldo de Malonato

Manual de bacter UACH Metodología:  Primera sesión 1. Descargue muestra en primer cuadrante de medios de cultivos: McK y XLD. 2. Estriar en las cajas esterilizando el asa en cada cuadrante. 3. Colocar el hisopo con muestra en el caldo de selenito. 4. Incubar los medios de cultivo incluyendo el caldo de selenito a 37ºC durante 24 horas.  Segunda sesión 1. Pasado el tiempo de incubación, revisar los medios de cultivo, realizando el análisis microscópico y macroscópico de las colonias. 2. Realizar pruebas bioquímicas de las diferentes colonias encontradas, seleccionar estas de acuerdo a la morfología microscópica que se observó. 3. Tomar el hisopo del caldo de selenito y descargar en el agar de Sulfito de Bismuto, realizar el estriado con el asa de nicromio e incubar a 37ºC por 24 horas.  Tercera sesión: 1. Leer pruebas bioquímicas. 2. Observar el medio Sulfito macroscópicas y microscópicas.

de

Bismuto,

identificar

las

características

Pruebas Bioquímicas. Se siembran con asa recta estéril. • Citrato. Sembrar en el pico • FEA: Sembrar en pico • LIA: Sembrar en fondo y pico • TSI: Sembrar en fondo y pico • MIO: Sembrar con el asa recta con picadura hasta el fondo de forma derecha. (después en la lectura se le agrega 4 gotas del reactivo de kovac´s) • SIM: Sembrar con el asa recta con picadura hasta el fondo de forma derecha. (después en la lectura se le agrega 4 gotas del reactivo de kovac´s) • Caldos: Malonato, RM-VP y Urea. Se siembran disolviendo colonias en el caldo. *en el VP se le agrega 3 gotas de KOH al 40% y una gota de alfa naftol al momento de la interpretación de resultados. En el rojo de metilo se agrega 3 gotas del reactivo rojo de metilo. En la FeA se adicionan 3 gotas de cloruro férrico para interpretar. Observación microscópica  Colocar una gota de solución salina en un portaobjetos.  Tomar una colonia con el asa recta estéril y homogenizarla en el portaobjetos, dejar secar a temperatura ambiente.  Fijar a la flama del mechero pasando tres veces el portaobjetos de la punta hacia la base.  Colocar el portaobjetos en el puente de tinción y añadir cristal violeta, dejar actuar por 1 minuto.  Enjuagar y adicionar yodo lugol, esperar 1 minuto y enjuagar.  Añadir alcohol acetona y dejar actuar de 10-15 seg., enjuagar.

Manual de bacter UACH  

Adicionar safranina, esperar un minuto y enjuagar y secar con papel estraza. Observar al microscopio a 10x y 100x (con aceite de inmersión).

Manual de bacter UACH Resultados. Macroscópicas: Agar XLD

Agar MacConkey

Kluyvera ascorbata

Kluyvera ascorbata Agar SB

Kluyvera ascorbata Agar:

XLD

MacConkey

Forma Tamaño Borde Elevación Consistencia Luz transmitida

Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa

Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa

Sulfito de Bismuto Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa

Luz reflejada Color

Positiva Blancas

Positiva Moradas

Positiva Moradas

Microscópicas:  Bacilos cortos, Gram negativos.  Móviles, por medio de flagelos polares.

Manual de bacter UACH

TSI

Kluyvera ascorbata Pruebas Bioquímicas. Kluyvera ascorbata Gas H2S A/A -

Citrato FEA MIO SIM

+ Movilidad

Indol

Ornitina

+

+

+

Movilidad

Indol

+

+

LIA

H2S

RM-VP

+

-

RM

VP

+

-

Caldo de Urea Caldo de Malonato

+ (4)

Desaminación Descarboxilación

Manual de bacter UACH Discusión. En el análisis de coprocultivo, se pretendía aislar las enterobacterias que causan enfermedades gastrointestinales, como pueden ser: Salmonella, Vibrio, Shigella y Yersinia. Los agares utilizados fueron: Agar XLD, MacConkey y Sulfito de bismuto, donde crecieron colonias redondas, con borde entero, cremosas, convexas, en el agar MacConkey se observaron colonias rosas por lo que indica que la bacteria aislada, es lactosa positiva, por lo que se descarta la posibilidad de haber encontrado alguna de las bacterias anteriormente mocionadas, ya que estas, a excepción de Vibrio, no fermentan la lactosa, solo que Vibrio no crece en los agares utilizados. Así que se procedió a realizar pruebas bioquímicas, en donde se pudo diferenciar a la bacteria aislada, cuyo genero es; Kluyvera, aunque por falta de pruebas su especie no se pudo definir. Kluyvera es una bacteria que también pertenece a la familia de enterobacterias.

Conclusión. Se llego a la conclusión de que la bacteria aislada, es proveniente de la Familia de las Enterobacterias, siendo por lo regular un microorganismo comensal de las vías respiratorias altas y del aparato digestivo. Se llego a esta por el motivo de al revisar la morfología macroscópica y microscópica, hubo una variable la fermentación de la Lactosa, siendo la única que la fermenta el Vibrio cholerae, pero este ultimo no crece en este tipo de agar por ser un microorganismo que necesita alcalinidad para crecer.

Bibliografía. 1. www.actasurologicas.info/v25/n01/2501NC03.htm 2.

www.netropica.org/Presentaciones/ENTEROBACTERIAS%20FINAL.pdf

3.

www.apuntes.rincondelvago.com/microbiologia_18.html

4.

Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout “Diagnostico Microbiológico”. Ed.

Médica Panamericana. 11va edición. México. 5. Lennette, E. (1987). Microbiología Clínica. Ed. Médica Panamericana. edición. México.

3ra

Manual de bacter UACH

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Bacteriología Médica Practica 3 “Cepas De Referencia Que Causan Enfermedades Del Tracto Urinario” TITULAR:

Norma Herrera Díaz

ALUMNA: Mayra Torres Gómez 190128 7mo “B”

22 de febrero de 2007

Manual de bacter UACH Resumen En esta práctica se realizó un cultivo para identificar a las bacterias que causan enfermedades del tracto urinario; estas son: E. coli, Enterobacter cloacae, Proteus, Pseudomona auriginosa y Streptococcus faecalis. Para lo cual se utilizaron los agares: sangre, MacConkey, ENDO y cetrimide, el agar cetrimide se utilizo para identificar únicamente a la Pseudomona, así como el MacConkey, solo que en este agar también se inocularon las bacterias de E. coli, E. cloacae y Proteus al igual que el ENDO y sangre, en este ultimo también se inoculo el S. feacalis, una vez que todas las cepas de referencia fueron inoculadas en los agares correspondientes se procedió a incubar a 37°C por 24 horas, trascurrido dicho tiempo se hizo la identificación macro y microscópicamente para luego realizar las pruebas bioquímicas, pruebas que permiten identificar y diferenciar a las bacterias, los resultados arrojados no variaron con las características citadas en las referencias, solo en el Enterobacter cloacae no coincidió, por lo que se cree que la cepa fue contaminada al momento de ser inoculada.

Manual de bacter UACH Introducción Más los de 80% de las infecciones humanas de la zona urinaria (UTI) son debido a la bacteria, Escherichia coli, pero también se encuentran infecciones urinarias debido a Proteus, entre otras Enterobacterias que infectan el riñón las más comúnmente encontradas son E. coli y en segundo termino esta el Proteus, que también pertenecen a los Enterobacteriaceae y son bacterias móviles gramnegativos. Se encuentran a menudo como organismos vivos libres en suelo y agua pero son también parásitos en la zona urinaria superior de los seres humanos. Escherichia coli Se encuentra generalmente en los intestinos animales, incluido el humano y, por ende, en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodor von Escherich, bacteriólogo alemán, quién la denominó Bacterium coli. Posteriormente la taxonomía le adjudicó el nombre de Escherichia coli, en honor a su descubridor. Ésta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo. Además produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram, es anaerobio facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--. Pseudomonas aeruginosa (o Pseudomonas pyocyanea) es una bacteria Gramnegativa, aeróbica, con motilidad unipolar. Como otros Pseudomonas, P. aeruginosa secreta una variedad de pigmentos, como piocianina (azul verdoso), fluoresceína (amarillo verdoso fluorescente), y piorubina (rojo pardo). P. aeruginosa es frecuentemente y preliminarmente identificada por su apariencia perlada y olor a nixtamal. La identificación definitiva clínica de P. aeruginosa frecuentemente incluye identificar la producción de ambas piocianina y fluoresceína como su habilidad de crecer a 42 °C. Este es un patógeno oportunista de individuos immunocomprometidos, P. aeruginosa infecta el tracto pulmonar, el urinario, tejidos, heridas, y también causa otras infecciones de sangre. La piocianina es un factor de virulencia de la bacteria y se ha conocido que puede hasta causar muerte. Streptococcus faecalis es una bacteria Gram-positiva comensal, que habita el tracto gastrointestinal de humanos y otros mamíferos. Como otras spp. Del género Enterococcus, E. faecalis puede causar infecciones comprometidas en humanos, especialmente en ambiente de hospital. El hábitat normal de estos es el tubo digestivo, y puede causar endocarditis, infecciones de la vejiga, próstata y epidídimo.

Enterobacter cloacae es una bacteria, gram negativa en forma de bacilo. Es responsable de varias infecciones, incluyendo infecciones más bajas de la zona

Manual de bacter UACH respiratoria, piel e infecciones suaves del tejido fino, infecciones de la zona urinaria (UTIs). Tiene flagelos peritricos, mide 0.3-0.6 x 0.8-2.0 µm, es oxidasa-negativa, catalasa-positive, y es facultativo anaerobia. Es un patógeno oportunista al igual que otras bacterias de la familia enterobacteria. El género Proteus pertenece a la tribu Proteae de la familia Enterobacteriaceae, junto con los géneros Morganella y Providencia. El género está compuesto por 8 especies: Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Proteus penneri, Proteus hauseri, Proteus myxofaciens y las genomoespecies. Las tres últimas y P. vulgaris forman el complejo P. vulgaris. P. mirabilis y con menor frecuencia P. vulgaris y P. penneri han sido reconocidos como agentes etiológicos de distintos procesos infecciosos, tales como infección urinaria, infección quirúrgica, neumonías, bacteriemias, septicemias e infecciones óticas. Asimismo, genero se ha relacionado en infecciones nosocomiales. Resultado De Aprendizaje. Identificar los diferentes microorganismos patógenos del tracto urinario.

Manual de bacter UACH

Material:         

Portaobjetos y cubreobjetos. Asa de nicromio punta recta. Asa de nicromio punta redonda. Mechero de Bunsen. Papel estraza. Puente de tinción. Gradilla y piseta. Cajas petri. Hisopo estéril.

Equipo:  Microscopio óptico  Incubadora a 37ºC.

Equipo de protección personal:  Cubre boca.  Guantes de látex.  Bata. Reactivos:  Tinción de Gram. » Cristal violeta. » Yodo lugol. » Alcohol acetona. » Safranina.  Solución salina fisiológica isotónica al 0.85%.  Aceite de inmersión.  Cloruro Férrico al 10%  Kovak’s.  α-Naftol.  KOH al 40%.  Rojo de Metilo. Agares:  Bilis esculina  MacConkey.  ENDO.  Sangre.  Cetrimide.

Pruebas Bioquímicas:         

TSI MIO SIM Citrato Caldo de Urea FeA RM-VP LIA Caldo de Malonato

Manual de bacter UACH

Métodos. Sembrado de las cepas de referencia. E. coli Agar sangre, MacConkey y ENDO Enterobacter cloacae. MacConkey, ENDO y Sangre Proteus. MacConkey, ENDO y Sangre Pseudomona aureginosa. MacConkey, y Cetrimide. Streptococcus feacalis. Agar Sangre. Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la cepa de referencia (E.coli, Enterobacter cloacae, Proteus, Pseudomona aureginosa y Streptococcus feacalis), se toma la caja petrí que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta en el primer cuadrante, después se estría en los demás cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas después del periodo de incubación. Después de que se hayan sembrado cada una de las sepas de referencia se colocan las cajas petrí en la incubadora durante 24 horas a 37ºC, después de este periodo de incubación se revisa la estructura microscópica de cada una de las sepas. NOTA: Este procedimiento se realiza de igual forma para cada una de las cepas de referencia en cada uno de los agares correspondientes.

4. Pasado el tiempo de incubación, revisar los medios de cultivo, realizando el análisis microscópico y macroscópico de las colonias.( se realiza una tinción de Gram) 5. Realizar pruebas bioquímicas (MIO, SIM, TSI, Malonato, RM-VP, FeA, LIA, UREA y Citrato) de las diferentes colonias encontradas, seleccionar estas de acuerdo a la morfología microscópica que se observó. 6. Incubar las pruebas bioquímicas una vez inoculadas a 35ºC por 24 horas 7. trascurrido el tiempo se procede a leer.

Manual de bacter UACH

Resultados Morfología Macroscópica bacterias E. coli

A. Sangre Colonias redondas, chicas, borde entero, grises, cremosas, convexas y no trasmiten luz

A. ENDO Colonias chicas redondas con borde entero, rojas metálicas convexa no trasmite luz

A. MacConkey Colonias redondas, medianas, color rosa, con borde entero, cremosas, convexa y no trasmiten luz.

E. cloacae

Colonias redondas, chicas, borde entero, grises, cremosas, convexas y no trasmiten luz

Colonias redondas, medianas, trasparentes, aplanadas, con borde entero y no trasmite luz

Colonias redondas, trasparentes, chicas, con borde entero, convexa, cremosa y no trasmite luz.

Proteus

Colonias redondas grises, con borde entero, convexas, cremosas, no trasmiten luz y producen efecto de suarming

Colonias redondas chicas, trasparentes, borde irregular, aplanada, cremosa y no trasmite luz.

Colonias redondas, medianas, con borde entero, elevación aplanada, cremosa y trasmite luz.

P. aureginosa

S. faecalis

Colonias redondas, chicas, trasparentes, borde entero, convexa, no trasmite luz y tiene olor a nixtamal. Colonias redondas, pequeñas, blancas, borde entero, convexa, cremosa y no trasmite luz.

Morfología Microscópica bacteria E. coli Proteus E. cloacae P. aureginosa S. faecalis

morfología microscópica Bacilos gram negativos, cortos, en arreglo simple Bacilos gram negativos, cortos, simples Bacilos gram negativos, cortos, simples Bacilos gram negativos, medianos, simples Cocos en cadena, gram positivos.

A. cetrimide

Colonias redondas, chicas, color verde, borde entero, cremosa, convexa y no trasmite luz.

Manual de bacter UACH

Morfología Macroscópica Agar MacConkey

E. cloacae

E. coli

P. aureginosa

Proteus

Agar sangre

S. faecalis

Proteus

E. coli

E. cloacae Agar cetrimide

Manual de bacter UACH

P. aureginosa Morfología Microscópica

E. coli

Proteus

E. cloacae

P. aureginosa

S. faecalis

Manual de bacter UACH

Pruebas Bioquímicas E. coli TSI A/A Citrat o FEA LIA MIO Caldo de urea RM/VP 37ºC SIM 37°C

Enterobacter cloacae

gas

H2S

-

-

gas

H2S

-

-

A/A

Proteus

K/A

gas

H2S

-

+

-

+

+

-

-

+

H2S

gas

-

-

+

-

H2S

gas

-

-

+

-

H2S

gas

+

-

+

Ornitina

Indol

Movilidad

Ornitina

Indol

Movilidad

Ornitina

Indol

Movilidad

+

+

+

+

-

+

-

-

+

-

-

RM +

VP -

RM -

+ VP +

RM +

VP -

Indol

Movilidad

Indol

Movilidad

Indol

Movilidad

+

+

-

+

-

+

TSI Citrato FEA MIO SIM

Pseudomona aureginosa Gas H2S K/K -

+ + Movilidad

Indol

Ornitina

+

-

+

Movilidad

Indol

+

-

LIA

H2S

RM-VP

RM

+

VP

Manual de bacter UACH

+ Caldo de Urea Oxidasa

+

Discusión De Resultados En la realización de este cultivo de identificación para las bacterias que causan enfermedad o infección en las vías urinarias, se obtuvieron resultados bastante específicos para poder diferenciar entre las enterobacterias relacionadas a las ITU ya que todos los resultados arrojados durante su análisis coincidían con las características que en las lecturas no referían, solo cambio un poquito el resultado del Enterobacter cloacae, esto debido a una contaminación que se propicio a la hora de inocular dicho microorganismo en las pruebas bioquímicas, esta contaminación se debió a la falta de esterilizar o quemar el asa de nicromio utilizada, ya que la misma se había utilizado para inocular a otra bacteria. Conclusión Para poder identificar cada una de las bacterias, es necesario utilizar las pruebas mas especificas, en este caso las pruebas bioquímicas, ya que estas permiten diferenciar, por medio de su metabolismo a las bacterias, debido a que cada bacteria utiliza sus propios nutrientes para poder desarrollarse, es por ello, que aun después de haber realizado el cultivo se realicen estas pruebas, además de su identificación macro y microscópica. Es así, como se llega ala identificación especifica de un microorganismo, logrando identificar su género y especie por lo menos. Se no ser así, las bacterias pueden ser confundidas; por no tener las pruebas suficientes para diferenciarlas.

Bibliografía Braude, A. (1984) Microbiología Clínica. Capítulos 31 Enterobacteriaceas,. Ed. Médica Panamericana S.A. Lennette, E. (1987). Microbiología Clínica. Ed. Médica Panamericana. 3ra edición. México. http://cienciasbiologicas.uniandes.edu.co/lema/nodo.php?id=37 http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S032575412006000300002&lng=en&nrm=iso&tlng=es http://es.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli http://www.scielo.org.pe/scielo.php? pid=S172646342003000300002&script=sci_arttext http://student.ccbcmd.edu/courses/bio141/labmanua/lab8/simenter.html

Manual de bacter UACH

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Laboratorio: Bacteriología Médica Práctica # 4 “urocultivo” TITULAR:

Norma Herrera Díaz

ALUMNOS: Eloy Ricardo Borjas Sáenz 175211 Mayra Torres Gómez 190128 7mo “B”

Manual de bacter UACH

1 de marzo de 2007

Resumen En este análisis, se realizó un urocultivo para determinar si el paciente, presenta una infección urinaria, esta técnica se realizó utilizando los métodos cualitativo y cuantitativo, así como la identificación de la bacteria causal de la infección y la resistencia que dicho microorganismo presenta ante antibióticos como: gentamicina, oxacilina, ceftriaxone, tetraciclina. Para el método cuantitativo; se utilizó solución salina, en la cual se realizaron diluciones de 1:10 hasta 1:10000, posteriormente se paso 1ml de la muestra, 1ml de la dilución 1:100 y 1ml de 1:10000 en cajas pretri, adicionando agar plate count; luego se incubaron a 37°C por 24horas.Otro método utilizado fue el de asa calibrada; donde se utilizó el agar sangre y un asa de 0.01. Para el método cualitativo se utilizó: el agar MacConkey y el Sal Manitol. Donde, como resultado, se obtuvo; en el análisis cuantitativo colonias mayor de 100000 o incontable, en la identificación; colonias redondas convexas, color rosa indicativo de que fermentan la lactosa, y de consistencia cremosa; esto en agar MacConkey y en el Sal Manitol no hubo crecimiento, microscópicamente fueron bacilos gram negativos, por lo que se procedió a realizar las pruebas bioquímicas o metabólicas para determinar el tipo de microorganismo asilado. El cual resulto ser, una enterobacteria comúnmente relacionada a infecciones del tracto urinario: E.coli. Resistente a todos los antibióticos probados.

Manual de bacter UACH

Introducción Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato urinario o urogenital, como también en otros tipos de afecciones. La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los primeros 10 a 15 ml. de orina emitidos por personas normales de cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias, las que proceden de la flora corriente de la uretra anterior, prepucio, región vulvovaginal o de contaminación fecal. La flora de estas localizaciones es variada y está constituida por estafilococos coagulasa-positivo y negativos, estreptococos diversos, bacilos difteromorfos, enterobacterias, lactobacilos, micoplasmas, bacterias anaerobias, levaduras y muchos microorganismos. En la presencia de esta flora influyen localización anatómica, sexo, edad, hábitos de higiene y factores patológicos propios del huésped. En la etiología de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos. Los procesos agudos y crónicos son provocados por E. coli y por especies de los géneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas, etc. De estos agentes, E. coli se aísla en 80% de los casos. El examen microbiológico de una muestra de orina se denomina Urocultivo. Éste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo. Material:  Portaobjetos y cubreobjetos.  Asa de nicromio calibrada.  Asa de nicromio punta redonda.  Mechero de Bunsen.  Papel estraza.  Puente de tinción.  Gradilla y piseta.  Cajas petri.  Hisopo estéril. Equipo de protección personal:  Cubreboca.  Guantes de látex.  Bata. Reactivos:  Tinción de Gram. » Cristal violeta. » Yodo lugol.

Equipo:  Microscopio óptico de campo claro.  Incubadora a 37ºC.

Manual de bacter UACH » Alcohol acetona. » Safranina.  Solución salina fisiológica isotónica al 0.85%.  Aceite de inmersión.  Cloruro Férrico al 10%  Kovak’s.  α-Naftol.  KOH al 40%.  Rojo de Metilo.  Agares:  MacConkey.  Sangre.  Sal Manitol.  Plate Count.

Pruebas Bioquímicas:  TSI  MIO  SIM  Citrato  Caldo de Urea  FeA  RM-VP  LIA  Caldo de Malonato

Metodología Toma De La Muestra El método más recomendado para realizar la recogida de muestra para un urocultivo es la toma, durante el periodo medio de la micción, siempre que el paciente sea capaz de limpiarse y recogerla, ya que la muestra de orina requiere una cuidadosa limpieza de los genitales externos. Esta técnica impone los siguientes requisitos: • •

El paciente debe tener como mínimo de tres a cuatro horas de retención de orina, y la muestra más representativa es la primera orina de la mañana. El paciente no debe haber recibido tratamiento antimicrobiano durante los tres días anteriores a la recolección, exceptuando los casos de control de tratamiento, y paciente gravemente enfermos.

Esta técnica no es apropiada para niños que no controlan sus esfínteres, en cuyo caso se procede a hacer limpieza de los genitales y a fijar un recolector de orina estéril (especial para bebés). Se deja en esta posición hasta que el niño realice su micción; se despeja el recolector y se sella inmediatamente. No debe dejarse colocado el recolector por tiempo prolongado. La alta probabilidad de contaminación en muestras de orina de lactantes, obliga a realizar el estudio en tres muestras sucesivas de micción espontánea.

Manual de bacter UACH En ciertas ocasiones se justifica el sondeo uretral o la aspiración suprapúbica. No obstante, existe un pequeño riesgo de infección tras sondeo uretral, el cual varía según el tipo de paciente. Debido a la colonización por bacterias de la uretra, suele ser difícil definir si los microorganismos aislados a partir de orina tomada con sonda son de origen urinario o uretral. En los pacientes con sonda uretral permanente con drenaje cerrado, la orina para cultivo se recoge después de desinfectar la pared de la sonda en su punto de unión con el tubo de drenaje. Se aspira la orina por medio de punción en la sonda con una aguja 21. En ningún momento deberá sacarse de la bolsa de drenaje material para cultivo. Conservación y/o Transporte En lo que respecta al transporte y conservación de muestras de orina, hay que tener en cuenta que la orina constituye un excelente medio de cultivo para casi todas las bacterias, por lo que una vez recogida, la muestra debe enviarse de inmediato al laboratorio, previa colocación del envase en un recipiente que contenga cubos de hielo. Este procedimiento permite que el número de bacterias permanezca relativamente constante por un tiempo considerable. Examen cuantitativo  Método de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminación, se realiza de la siguiente manera: •

Se homogeneiza la muestra mediante agitación.

•

Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiológico, estériles.

•

Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilución al 1:100.

•

Se deposita 1 ml. de cada dilución en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vacía un medio Plate Count, fundidos y enfriados. Mediante rotación suave, se favorece la distribución homogénea de la siembra.

•

Se incuban todas las siembras a 37° durante 24 a 48 horas.

Para calcular el número de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Contadas éstas, basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total.  Método del asa calibrada. Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar-sangre una muestra de orina, sin centrifugar, empleando asa calibrada. Después de incubar las siembras a 37° durante 24 a 48 horas, se cuenta el número de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que la asada contiene 0.01 ml. de orina.

Manual de bacter UACH Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera: •

No hubo desarrollo microbiano.

•

Menos de 10 000 colonias por ml.

•

Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml.

•

Más de 100 000 colonias por ml.

Examen cualitativo El estudio cualitativo, que conduce a la identificación del agente, se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada, en placas con agar-sangre, Sal manitol y MacConkey. La identificación final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioquímicas y características serológicas. Empleando un asa estéril se extiende la toma de la muestra a modo de estrías en el primer cuadrante. A continuación se hace lo mismo en el segundo cuadrante pero en una dirección diferente a la anterior. En el tercer y cuarto cuadrante hacemos lo mismo.

Manual de bacter UACH

Resultados Morfología Macroscópica

Agar:

Sangre

MacConkey

Forma Tamaño Borde Elevación Consistencia Luz transmitida

Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa

Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa

Luz reflejada Color

Positiva Grises

Positiva Rosas

Morfología microscópica •

Bacilos cortos, Gram negativos y en arreglo simple o par.

Manual de bacter UACH

Pruebas Bioquímicas medio TSI Citrato FEA MIO SIM

E. coli Gas A/A

+ -

-

Movilidad

Indol

Ornitina

+

+

Indol

+

+ H2S

Caldo de Urea Caldo de Malonato

-

Movilidad

LIA

RM-VP

H2S

+

-

RM

VP

+

-

Discusión De Resultados En nuestro estudio el agente que se identifico como agente causal de infección fue la E.coli uno de los principales microorganismos relacionados con las infecciones del tracto urinario, dicha identificación se determino gracias alas características metabólicas identificadas en las pruebas bioquímicas realizadas, también se puedo determinar con ayuda del antibiograma que esta bacteria es resistente a los antibióticos como son: gentamicina oxaxilina ceftriaxone, tetraciclina y penicilina; ya que no presento ningún alo de inhibición donde se colocaron los cencidiscos penetrados con dichos antibióticos.

Manual de bacter UACH Conclusión Se llegó a la conclusión de que el paciente, presenta una infección urinaria, a causa de la bacteria E. coli, puesto que en el análisis cuantitativo arrojo valores por encima de los 100000 UFC (unidades formadoras de colonias), el microorganismo fue identificado por medio de pruebas bioquímicas, también se determino que el paciente no puede ser tratado con antibióticos como son la gentamicina, oxacilina, ceftriaxone, tetracliclina o penicilina puesto que este microorganismo es resistente a estos antibióticos por lo que es recomendable realizar nuevamente un antibiograma utilizando antibióticos de mayor concentración inhibitoria. Bibliografía http://www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulos/CLUR9797110051A.PDF http://html.rincondelvago.com/bacteriologia_2.html www.actasurologicas.info/v25/n01/2501NC03.html

Borrows William Dr. Tratado de microbiología, Vigésima edición. Interamericana. México 1974. pp. 376,422-427. García Rodríguez JJ. Microbiología Médica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996. pp 105-117.

Manual de bacter UACH

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Laboratorio: Bacteriología Médica Práctica # 5 “Cepas de referencia de Candida albicans y de Streptococcus agalactiae” TITULAR:

Norma Herrera Díaz

ALUMNA: Mayra Torres Gómez 190128 7mo “B”

Manual de bacter UACH

8 de marzo de 2007

Manual de bacter UACH Resumen. Esta practica estuvo dividida en tres sesiones, en la primera sesión se cultivaron las bacterias Streptococcus agalactiae y Candida albicans para después proceder hacer la identificación macroscópica y microscópica y las pruebas bioquímicas correspondientes,solo que no hubo crecimiento de Candida albicans también se realizo la prueba de CAMP la cual salio negativa debido a que no se presento crecimiento por lo que esta se repetirá mas adelante par ser reportada en esta practica y por ultimo se reviso el tubo germinativo, para la identificación del pseudomicelio. Introducción. Las enfermedades de transmisión sexual (ETS) -también conocidas como infecciones de transmisión sexual (ITS) o enfermedades venéreas-, son aquellas enfermedades infecciosas que (generalmente, aunque en algunos casos puede ser por otras vías) se transmiten de persona a persona por contacto íntimo (que se produce, casi exclusivamente, durante las relaciones sexuales). Los agentes productores de las enfermedades de transmisión sexual incluyen bacterias, virus (como el del herpes), hongos e incluso parásitos. Aunque casi todas tienen tratamiento, algunas de ellas, como las producidas por virus, nunca curan de manera definitiva, sino que el agente causal permanece en estado latente, sin manifestarse, dentro del organismo al que ha infectado, reapareciendo cíclicamente. Este tipo de relación entre el organismo y el agente infeccioso facilita la transmisión de éste, es decir, su infectividad. Neisseria gonorrhoeae: Es un agente etiológico de gonococia, una enfermedad de transmisión sexual. Es un diplococo Gram negativo, oxidasa positivo. Requiere medios muy nutritivos para el crecimiento, como agar chocolate o Thayer-Martin (específico para Neisseria). Igualmente para su cultivo requiere una atmósfera con 5% de CO2. La gonorrea se mantiene actualmente, como una de las más importantes enfermedades de transmisión sexual. Esta enfermedad se manifiesta en una infección en los hombres como uretritis aguda y en las mujeres como cervicitis. Gardnerella vaginalis: Es un bacilo implicado en la producción de una condición clínica llamada Vaginosis Bacteriana, que esta caracterizada por un desbalance en la flora normal de la vagina habiendo una disminución de lactobacillus spp y un aumento en Gardnerella vaginalis y otros bacterias aerobias y anaerobias. La vaginosis bacteriana es la principal causa de secreción y mal olor vaginal aunque el 50% de las mujeres pueden ser asintomáticas. Aún no se ha comprobado que sea una enfermedad de transmisión sexual, aunque es más común que se presente en mujeres sexualmente activas, siendo calificada como causa de este tipo de enfermedad. El término vaginosis viene dado ya que ha diferencia de la Cándida y Trichomona, la gardnerella no produce signos de inflamación en la mucosa vaginal ni migración linfocitaria, por consiguiente no es clasificada como una vaginitis.

Manual de bacter UACH Candida albicans: Hongo dimorfo que forma largas seudohifas, hifas y blastoconidios (células gemantes subesféricas de 3-8 x 2-7 µm). Asimilan y fermentan azúcares. Numerosas clamidosporas unicelulares, redondas u ovaladas, con gruesa pared refringente (8-16 µm de diámetro), situadas al final de las hifas, seudohifas o laterales sobre blastoconidios ovalados. La candidiasis es una enfermedad causada por un hongo oportunista que puede tener expresión cutánea del género Candida, de los cuales Candida albicans es el más frecuente. Se puede transmitir por ropas, objetos y también por contacto sexual. Estos hongos están siempre presentes en la piel y en el tracto digestivo de la mayoría de las personas, pero se encuentran controlados por otros microorganismos no patógenos. Cuando se produce un desequilibrio, el aumento desmedido de la población de hongos produce esta u otras micosis. Streptococcus agalactiae o estreptococo b-hemolítico del grupo B de Landcefield (EGB), es un coco Gram positivo, catalasa y oxidasa negativo, anaerobio facultativo, que se presenta formando cadenas de longitud variable, puede crecer en medios simples, aunque los medios suplementados con sangre o suero favorecen su crecimiento e identificación. El Streptococcus agalactiae es causa importante de sepsis neonatal y de infecciones en gestantes y adultos inmunocomprometidos. Se trata de una bacteria encapsulada cuya virulencia se atribuye a una toxina polisacárida y se caracteriza por presentar una alta concentración inhibitoria mínima (CIM) a la penicilina. Su papel como patógeno potencial se ha reconocido ampliamente en países industrializados donde en la actualidad se desarrollan estrategias de diagnóstico y prevención dada su alta morbimortalidad; sin embargo, en países en desarrollo no se informa con frecuencia la infección por este germen, básicamente debido a la circulación de serotipos menos virulentos y la falta de una búsqueda y diagnóstico adecuados.

Resultado de aprendizaje. Cultivar e identificar bioquímicamente las siguientes cepas Gardnerella vaginalis, Candida albicans, Streptococcus del Grupo B.

Manual de bacter UACH MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS Equipo:  Microscopio óptico de campo claro  Incubadora a 37°C  Equipo de seguridad (bata para el laboratorio, guantes de látex, lentes de seguridad y cubre bocas) Material:  Mechero de bunsen  Asa de nicromio circular y recta estériles  Cajas de petri  Tubos de ensayo de 13x100 mm con tapa de rosca  Portaobjetos  Puente de tinción  Pizeta  Hisopos estériles  Papel estraza  Gradilla  Vela  Frasco para carboxifilia Reactivos:  Agar BIGGY  Agar sangre de carnero  Tubo germinativo (con 1 mL De plasma)  Cristal violeta  Yodo lugol  Alcohol-acetona  Safranina  Aceite de inmersión Muestras: Cepas de referencia en caldo BHI:  Candida albicans Cepas de referencia en agar sangre:  Streptococcus agalactiae  Staphylococcus aureus 33862

Manual de bacter UACH Métodos. Primera sesión. Sembrado de las sepas de referencia. Streptococcus agalactiae: Agar sangre. Candida albicans: Agar Biggy. Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la cepa de referencia (Streptococcus agalactiae y Candida albicans) se toma la caja petrí que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta en el primer cuadrante, después se estría en los demás cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas después del periodo de incubación. Después de que se hayan sembrado cada una de las sepas de referencia se colocan las cajas petrí en la incubadora durante 24 horas a 37ºC, después de este periodo de incubación se revisa la estructura microscópica de cada una de las sepas. Segunda sesión. 1. Análisis macroscópico y microscópico de Streptococcus agalactiae y Candida albicans. 2. Para Streptococcus agalactiae realizar las pruebas de catalasa, hemolisinas y prueba de CAMP (pendiente). 3. Para Candida albicans realizar la prueba de tubo germinativo y leerlo en 24horas e incubar a 37OC. Prueba de CAMP: 1. Con el asa recta, estriar Staphylococcus (β-hemolítico A) en una línea recta que atraviese el centro del agar sangre. 2. Estriar el Streptococcus agalactiae (β-hemolítico B) a cada lado del centro del inoculo estafilocócico en una línea recta de 2-3 cm. de largo y perpendicular (es decir en un ángulo recto) al inoculo del estafilococo sin tocar éste ultimo. Prueba del KOH AL 3%. En un portaobjetos se coloca una gota de KOH al 3% y con el asa de nicromio se toma una colonia y se homogeniza durante un minuto, y se observa la consistencia de esta solución. Si se forman hebras al levantar el asa de nicromio se trata de un Gram negativo y si no se observa la viscosidad es Gram positivo.

Manual de bacter UACH Resultados.

Forma Tamaño Elevación Borde Luz reflejada Luz transmitida Color Consistencia Hemólisis

Streptococcus agalactiae (agar sangre de carnero) Redonda Pequeño Plana Entero Positiva Negativa Blanquecino Cremosa Β hemolítico

No hubo crecimiento de Candida albicans en el agar BIGGY

Morfología macroscópica.

Morfología microscópica.

Streptococcus agalactiae Catalasa: negativo Oxidasa: negativo

Candida albicans

Manual de bacter UACH Discusión. En el estudio realizado para las cepas de referencia se puede discutir que la falta de crecimiento de la cepa de Candida albicans se pudo deber a que no habia suficiente cepa para iniciar su crecimiento, por lo que se realizara en otra sesión su siembra. El Streptococcus agalactiae tubo un óptimo crecimiento en el agar sangre, y su identificación se hizo evidente por medio de la Tinción de Gram.

Conclusión. Se puede concluir que en el análisis macroscópico de Candida albicans no se pudo observar por la falta de crecimiento en el agar BIGGY; por lo tanto no se pudo efectuar el análisis microscópico; mientras que en el Streptococcus agalactiae creció bien en el agar y en las pruebas resulto negativo como era previsto para su identificación. La prueba de CAMP no resulto, ya que no salio nada.

Bibliografía. 6. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout “Diagnostico Microbiológico”. Ed. Médica Panamericana. 11va edición. México. 7.

Lennette, E. (1987). Microbiología Clínica. Ed. Médica Panamericana. 3ra

edición. México. 8.

Borrows. W. (1974). Tratado de microbiología, Interamericana 20ª edición..

México., págs. 422-427. 9.

www.apuntes.rincondelvago.com/microbiologia_18.html

10.

www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulo/CLUR9797110051A.PDF

Fecha de consulta de las páginas de Internet: 6 de marzo de 2007

Manual de bacter UACH

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Laboratorio: Bacteriología Médica Práctica # 6 “Análisis microbiológico de una muestra de Exudado Cervicovaginal y Uretral”

TITULAR:

Norma Herrera Díaz

ALUMNOS: Mayra Torres Gómez 190128 7mo “B”

15 de marzo de 2007

Manual de bacter UACH Resumen. En esta práctica se realizó un cultivo de un exudado cervicovaginal de un paciente con una posible infección en el aparato genital. Para su diagnostico se sembró una porción de la muestra en agares Casman, Sangre, MacConkey, Biggy, Sal Manitol y Thayer Martin. Se efectuaron dos tipos de frotis uno con Gram y otro sin teñir (fresco) tomando una porción directamente de la muestra para su análisis microscópico, observando bacterias Gram + representantes de la flora normal. Pasado el tiempo de incubación se obtuvo un crecimiento colonial que marco la pauta de la investigación. Se realizo el análisis macroscópico y microscópico de cada una de las colonias para saber la morfología de los posibles microorganismos, y como se obtuvo crecimiento en agar Sangre, Casman y Sal Manitol y sabiendo que era un Gram + se efectuaron las pruebas bioquímicas adecuadas para su identificación, obteniéndose que se trataba de Staphylococcus aureus. Introducción. Las enfermedades de transmisión sexual (ETS) -también conocidas como infecciones de transmisión sexual (ITS) o enfermedades venéreas-, son aquellas enfermedades infecciosas que (generalmente, aunque en algunos casos puede ser por otras vías) se transmiten de persona a persona por contacto íntimo (que se produce, casi exclusivamente, durante las relaciones sexuales). Los agentes productores de las enfermedades de transmisión sexual incluyen bacterias, virus (como el del herpes), hongos e incluso parásitos. Aunque casi todas tienen tratamiento, algunas de ellas, como las producidas por virus, nunca curan de manera definitiva, sino que el agente causal permanece en estado latente, sin manifestarse, dentro del organismo al que ha infectado, reapareciendo cíclicamente. Este tipo de relación entre el organismo y el agente infeccioso facilita la transmisión de éste, es decir, su infectividad. Staphylococcus aureus es una bacteria que se encuentra en la piel y fosas nasales de las personas sanas, que causa gran variedad de infecciones, desde infecciones menores de la piel (forunculos, ampollas, vejigas) y abscesos cutáneos hasta enfermedades que pueden poner en peligro la vida como neumonía, meningitis, endocarditis, síndrome del shock toxico (SST) y sepsis. Resultado de aprendizaje. Análisis Microbiológico de una muestra de Exudado cervicovaginal, para determinar Enfermedades de Transmisión Sexual (ETS).

Manual de bacter UACH Material, Equipo y Reactivos Equipo:  Microscopio óptico de campo claro  Incubadora a 37°C  Equipo de seguridad (bata para el laboratorio, guantes de látex, lentes de seguridad y cubre bocas) Material:  Mechero de bunsen.  Asa de nicromio circular estéril.  Cajas de petri  Tubos de ensayo de 13x100mm.  Portaobjetos.  Puente de tinción.  Pizeta.  Papel estraza.  Frasco para anaerobios con vela.

Reactivos:  Agar BIGGY.  Agar Casman.  Agar Sal manitol.  Agar Thayer Martin.  Agar MacConkey.  Agar Sangre.  Cristal violeta.  Yodo lugol. Alcohol-acetona.  Safranina. Aceite de inmersión.  KOH 3% Agua oxigenada. Medio de transporte (Stuart).

Muestra:  Exudado Cervicovaginal. Métodos. Primera sesión. Sembrado de la muestra de Exudado Cervicovaginal. 1. En todos los agares (Sangre, MacConkey, Casman, BIGGY, Thayer Martin, Sal Manitol), tomar el hisopo con la muestra que se encuentra en el medio de Stuart, y se descarga en una de los cuadrantes, después se procede a estriar con el asa de nicromio con el fin de obtener colonias aisladas. Incubar a 37oC por 24horas. El agar Casman y el agar Sangre, se incuban por el mismo tiempo y temperatura, con excepción de que deben estar en condiciones parciales de anaerobiosis. Segunda sesión. 1. Análisis macroscópico y microscópico de las colonias crecidas en los diferentes agares. 2. En caso de haber crecimiento en el agar BIGGY; siendo indicio del crecimiento de Candida albicans realizar la prueba de tubo germinativo y leerlo en 24horas e incubar a 37OC. Realizar la Prueba del KOH AL 3%. Realizar la prueba de la catalasa. Realizar la prueba de la coagulasa. NOTA: todas estas pruebas para los agares que tengan crecimiento bacteriano.

Manual de bacter UACH Resultados. Agar Casman Forma Redondas Tamaño Grandes Elevación Aplanada Borde Irregular Luz reflejada Sí Luz transmitida No Color Blancas Consistencia Cremosa Hemólisis ---------

Agar Sangre Redondas Medianas Convexa Entero Sí No Grises Cremosa No presentó -----

Agar Sal Manitol Redondas Chicas Convexa Entero No Sí Amarillas Cremosa ----Manitol (positivo)

Agar BIGGY Redondas Chicas Convexa Entero No Sí Café oscuro Cremosa ---------

 No hubo crecimiento de Candida albicans en el agar BIGGY. Pero se agrego en los resultados, ya que en la práctica anterior no se pudo observar; y en la práctica de este día salio negativo el crecimiento.  No hubo crecimiento en el agar Thayer-Martín.  No hubo crecimiento en el agar MacConkey. Morfología macroscópica. g r

Sal Manitol

Agar Casman

A a

Agar Sangre

Morfología microscópica.

Staphylococcus aureus Catalasa: positiva Oxidasa: negativa Coagulasa: positiva

Candida albicans

Manual de bacter UACH Discusión. En el estudio realizado al exudado cervicovaginal se obtuvieron resultados similares en la morfología microscópica, dando así un menor margen de error en la comprobación del agente bacteriano que resulto; siendo este Staphylococcus aureus. Comprobandosé esta hipotesis por medio de las pruebas confirmatorias para descartar otras posibilidades, entre ellas se encuentran la utilización del Manitol, la Coagulasa positiva esta es especial para diferenciarse del Staphylococcus epidermidis.

Conclusión. La aparición de Staphylococcus aureus en la región cervicovaginal no es muy frecuente pero cuando se da su aparición, se puede deber cuando hay presencia del Síndrome de choque tóxico especialmente después del uso de tampones vaginales; incluye fiebre, prurito, descamación, vómito, diarrea; el choque toxico esta relacionado con la producción de toxinas.

Bibliografía. 11. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout “Diagnostico Microbiológico”. Ed. Médica Panamericana. 11va edición. México. 12.

Lennette, E. (1987). Microbiología Clínica. Ed. Médica Panamericana. 3ra

edición. México. 13.

Borrows. W. (1974). Tratado de microbiología, Interamericana 20ª edición..

México., págs. 422-427. 14.

www.apuntes.rincondelvago.com/microbiologia_18.html

15.

www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulo/CLUR9797110051A.PDF

Fecha de consulta de las páginas de Internet: 6 de marzo de 2007

Manual de bacter UACH

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Laboratorio: Bacteriología Médica

Práctica # 7 “cepas de referencia” TITULAR: Norma Herrera Díaz

ALUMNA: Mayra Torres Gómez 190128 7mo “B”

22 de marzo de 2007

Manual de bacter UACH Resumen. Esta practica se dividió en tres secciones el la primera sección se inocularon las cepas (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella pneumoniae y Corynebacterium difteria) proporcionadas en los diferentes medios de agar, estas se pusieron a incubar durante 24 hrs. a 37ºC, en la segunda sección se hizo una revisión de la morfología macroscópica y microscópica de las colonias obtenidas en los diferentes medios, además se realizaron las pruebas bioquímicas de acuerdo a cada microorganismo, realizando la prueba de la coagulasa entre los dos Staphylococcus. Introducción. El Streptococcus pyogenes da lugar a colonias blancas o grises, de 1 a 2 mm de diámetro, rodeadas de zonas de lisis completa de los eritrocitos presentes en el medio de cultivo (hemólisis tipo ß ), aunque es posible, en raras ocasiones, aislar cepas que no expresan la hemolisina en la superficie. Algunas cepas, las que producen en grandes cantidades ácido hialurónico capsular, crecen con la apariencia de una gota de agua en la placa, pero esto ocurre también de forma excepcional. Por lo general, las cepas menos mucosas asumen un aspecto arrugado denominado mate, mientras que las colonias pequeñas y opacas que carecen de cápsula y proteína M detectable se denominan brillantes. Es incapaz de oxidar azúcares y posee un metabolismo fermentativo de la glucosa y otros carbohidratos produciendo ácido láctico, aunque nunca gas. Produce además leucina-aminopeptidasa (LAP) y pirrolidonil-arilamidasa (PYR). Esta última característica rara vez es compartida por otros miembros de su mismo género. Además, es uniformemente sensible a la bacitracina. Streptococcus pneumoniae. Es una bacteria Gram positiva de 1,2-1,8 µm de longitud, que presenta forma oval y la extremidad distal lanceolada, es inmóvil, y no forma endosporas, alpha-hemolítico miembro del género Streptococcus. Es un comensal común del tracto respiratorio superior humano, aislándose en un 5-70% de la población adulta sana. El estado de portador sano varía con la edad, ambiente y época del año. Este porcentaje es mucho más alto durante los meses de invierno, en los niños (30-35%) que en los adultos (18-19%) y en comunidades cerradas (50-60%) que en la población general urbana (27%). A partir de la puerta de entrada respiratoria, S. pneumoniae es capaz de producir diferentes cuadros clínicos que afectan al tracto respiratorio superior, como la otitis media, mastoiditis y sinusitis, o al tracto respiratorio inferior, como la neumonía. Entre los cuadros clínicos extrarrespiratorios destaca la meningitis, que puede ser debida a la entrada directa del microorganismo a través de una fístula que comunique la nasofaringe con el espacio meníngeo o bien puede ser una complicación de la neumonía bacteriemia, mastoiditis, sinusitis o endocarditis. Otras localizaciones de la enfermedad neumocócica son el empiema, la endocarditis, la artritis y la peritonitis espontánea. Staphylococcus aureus. Es un coco que crece agrupado en racimos, que responde positivamente a la tinción de Gram, es aerobio y anaerobio facultativo por lo que puede crecer tanto en una atmósfera con oxígeno y también sin el mismo, no presenta movilidad ni forma cápsula. Es capaz de crecer hasta con un 10 % de sal común. Por esto puede crecer en el agua del mar. Produce la fermentación láctica. Es catalasa positivo y coagulasa positivo.

Manual de bacter UACH Es un microorganismo muy resistente a las condiciones ambientales y extremadamente difícil de erradicar. Pese a que no es esporulado (formas de resistencia elaboradas de forma natural por algunos microorganismos), soporta bien condiciones extremas aunque se inactiva a temperatura de congelación y puede eliminarse con una cocción correcta. Staphylococcus epidermidis. Los estafilococos coagulasa-negativo son las bacterias mas comúnmente aisladas en los laboratorios microbiológicos. Entre ellos el S. epidermidis que se caracteriza por ser coagulasa negativo y novobiacina sensible, fue considerado por mucho tiempo como un germen contaminante de cultivos. Sin embargo, ahora se le reconoce como un patógeno importante y es considerado el agente causal de diferentes entidades clínicas, entre ellas: Infecciones urinarias intrahospitalarias, osteomielitis, endocarditis de válvula nativa, bacteriemia en pacientes inmunosuprimidos, infecciones de dispositivos médicos o cuerpos extraños (catéteres endovenosos). Otra característica importante de esta bacteria es la susceptibilidad antimicrobiana que presenta, ya que el S. epidermidis ha desarrollado resistencia a la meticilina en forma paralela al desarrollo de resistencia del S. aureus, pero mostrando tasas mucho mas elevadas que esta última, y que se ha ido incrementando de una manera importante en los últimos 20 años. Corynebacterium. El género Corynebacterium fue creado por Lehmann y Neumann (1896) para clasificar taxonómicamente a los bacilos de la difteria. El género fue definido en base a características morfológicas: Corynebacteria proviene del griego corunë (bastón nudoso) y bacterion (bastoncillo). A partir de estudios de RNAr 16S se ha agrupado a las corinebacterias en la subdivisión de eubacterias Gram positivas de alto contenido en G+C, en estrecha relación filogenética con Arthrobacter, Mycobacterium, Nocardia e incluso Streptomyces. Las características más relevantes del género Corynebacterium fueron descritas por Collins y Cummins (1986). Se trata de bacterias Gram-positivas, no esporuladas, que carecen de movilidad, bacilos rectos o ligeramente curvados cuyo tamaño oscila entre 2-6µm de longitud y 0,5µn de diámetro, a menudo con la típica forma de V (lo que también se denomina “forma de letras chinas”), aunque también aparecen formas elipsoidales, son aerobias o anaerobias facultativas, catalasa positivas, quimioorganotrófos, con un contenido en G+C entre 51–65%.

Resultado de aprendizaje.  Cultivar e identificar bioquímicamente las siguientes cepas del tracto respiratorio: Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium spp y Klebsiella pneumoniae.

Manual de bacter UACH Material, equipo y reactivos. Equipo:  Microscopio óptico de campo claro.  Incubadora a 37°C.  Equipo de seguridad (bata para laboratorio, guantes de látex y cubre bocas). Material:  Mechero de bunsen.  Frasco de vidrio con tapadera para carboxifilia con vela pequeña.  Asa de nicromio circular y recta estériles.  Puente de tinción y pizeta.  Hisopo estéril.  Papel estraza.  Gradilla. Reactivos:  Agar Sangre con Telurito de Potasio.  Agar Sangre de Carnero.  Agar Sal Manitol.  Caldo de Urea.  Caldo rojo de fenol con glucosa.  Caldo rojo de fenol con xilosa.  Caldo rojo de fenol con maltosa.  Caldo rojo de fenol con sacarosa.  Caldo de nitratos.  1ml de plasma estéril.  Sensidisco de Bacitracina.  α -Naftilamina.  Ácido sulfanílico.  Cristal violeta.  Yodo lugol.  Alcohol acetona.  Safranina.  Solución salina fisiológica al 0.85%.  KOH 3%.  α -naftol.  H2O2 3%.  Aceite de inmersión.  Bactericida para limpieza. Cepas de Referencia:  Streptococcus pneumoniae.  Streptococcus pyogenes.  Staphylococcus aureus.  Staphylococcus epidermidis.  Corynebacterium difteria.  Klebsiella pneumoniae.

Manual de bacter UACH

Manual de bacter UACH Método. Primera sesión. Sembrado de las diferentes cepas. Medios: Agar sangre, Agar Sal Manitol, Agar sangre + telurito de potasio. Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la cepa de referencia (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Corynebacterium spp.), se toma la caja petrí que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta en el primer cuadrante, después se estría en los demás cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas después del periodo de incubación. Después de que se hayan sembrado cada una de las cepas de referencia se colocan las cajas petrí en la incubadora durante 24 horas a 37ºC, después de este periodo de incubación se revisa la estructura microscópica de cada una de las cepas. NOTA: Esto se realiza de igual forma para cada uno de los medios. Segunda sesión.  Análisis macroscópico y microscópico de las colonias presentes en los medios inoculados en la sección anterior, así como realizar las pruebas bioquímicas correspondientes de acuerdo al microorganismo.  Tinción de Gram.  Prueba de la Catalasa.  Prueba de la oxidasa.  Además de las pruebas bioquímicas ya mencionas para Corynebacterium realizar las siguientes pruebas bioquímicas: ♦ Catalasa. ♦ Reducción de nitritos a nitratos. ♦ Siembre en medios O/F con glucosa, lactosa, maltosa y sacarosa. ♦ Rojo de metilo. ♦ Ureasa. Tercera sección.  Realizar la lectura de las pruebas bioquímicas.  Leer halos de inhibición.

Manual de bacter UACH Resultados.

Forma Tamaño Elevación Borde Tipo de luz Color Consistencia Hemólisis Lactosa

Forma Tamaño Elevación Borde Tipo de luz Color Consistencia Hemólisis Manitol Forma Tamaño Elevación Borde Tipo de luz Color Consistencia Hemólisis Manitol Forma Tamaño Elevación Borde Tipo de luz Color Consistencia Hemólisis

Corynebacterium Corynebacterium Klebsiella difteria. difteria. pneumoniae (agar Chocolate) (agar Sangre c/Telurito) (agar McK) Redondas Redondas Redondas Pequeñas Pequeñas Medianas Convexa Convexa Convexa Entero Entero Entero Reflejada Reflejada Reflejada Blancas Gris Rosa-fuschia Cremosa Cremosa Cremosa -----No presenta ---------------Lactosa positiva Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus aureus aureus aureus (agar Sangre) (agar Sal Manitol) (agar S-110) Redondas Redondas Redondas Pequeñas Pequeñas Pequeñas Planas Planas Planas Entero Entero Entero Reflejada Reflejada Reflejada Dorado Amarillo Negras Cremosa Cremosa Cremosa Beta hemólisis --------------Manitol positivo -----Staphylococcus epidermidis Staphylococcus (agar Sal Manitol) epidermidis (agar Sangre) Redondas Redondas Pequeñas Pequeñas Planas Planas Entero Entero Reflejada Reflejada Blancas Blancas Cremosa Cremosa -----No presenta Manitol negativo -----Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae (agar (agar Sangre) Sangre) Redondas Redondas Medianas Medianas Planas Planas Entero Entero Reflejada Reflejada Blancas Gris Cremosa Cremosa Beta hemólisis Alfa hemólisis

Manual de bacter UACH

Morfología Microscópica

S. pyogenes (cocos, en cadena, gram positivos)

S. aureus (cocos, gram positivos en racimo)

Bacilos, gram positivos) C. difteria

S. epidermidis(cocos gram positivos)

K. pneumoniae ( bacilos, gram negativos)

(cocos, gram positivos en cadena) S. Pneumoniae.

Manual de bacter UACH

Morfología Macroscópica

S. pyogenes(vacitracina)

S. pneumoniae( optoquina)

S. aureus (sangre)

S. aureus (110)

S. pyogenes

S. pneumoniae

S. aureus (sal manitol)

K. pneumoniae

Manual de bacter UACH

C. difteria(chocolate)

S. epidermidis(sangre)

C. Difteria (sangre c/telurito)

S. aureus y S. epidermidis (sal manitol)

Manual de bacter UACH

Discusión. En el cultivo de las cepas de referencia de las bacterias mencionadas al inicio, solo se obtuvo dificultad para el crecimiento de S, pyogenes y S. pneuminiae, por o q ue la titular realizo un cultivo de ambos que proporciono al grupo para realizarle las pruebas necesarias para su identificación, en donde S. pyogenes obtuvo un halo de inhibición a la vasitracina y el S. pneumoniae un halo para optoquina lo cual confirma que efectivamente estabas tratando con dichas bacterias , en las pruebas bioquímicas de Corymebacteriun se obtuvo una discrepancia con respecto a la fermentación y oxidación de la xilosa debido a que esta dio un resultado negativo, locuaz con respecto a la teoría esta debió ser positiva, otra discrepancia se obtuvo con la K. pneimoniae al dar el rojo de metilo positivo y vogues poskauer negativo, lo cual debía de ser a la viceversa. Por lo demás todo coincidió con las características mencionadas en las referencias. Conclusión. Se logro identificar a cada una de las bacterias de las cepas de referencia proporcionadas, debido a que no hubo gran diferencia con las características morfológicas y metabólicas de los microorganismos analizadas en la práctica, con respecto ala teoría que mencionan las referencias, es por eso de suma importancia realizar cada una de las pruebas tanto microscópica, macroscópicas como metabólicas a cada uno de los microorganismos para poder dar un resultado confiable, de que efectivamente, se trata de la bacteria que se sospecha, evitando la contaminación de otros microorganismos. Bibliografía. http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/fenotm.htm http://www.esmas.com/salud/enfermedades/infecciosas/434933.html Madigan michael y Co. Brock Biología de los microorganismos 10ª edición pearson prentice hall. Madrid 2004. Lennette Edwin H. Manual de Panamericana. Buenos Aires 1987.

microbiología

clínica

4ª

edición,

editorial

Tay Zavala Jorge Dr. Microbiología y Parasitología médicas. Segunda edición. Méndez editores. México.1994.

Manual de bacter UACH

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Laboratorio: Bacteriología Médica

Práctica # 8 “Mycobacterium tuberculosis” TITULAR: Norma Herrera Díaz

ALUMNA: Mayra Torres Gómez 190128 7mo “B”

Manual de bacter UACH

29 de marzo del 2007

Resumen En esta practica se analizo una muestra de esputo, donde se pretendía hacer un diagnostico para Mycobacteium tuberculosis, este diagnostico se realizo, mediante la utilización de la basiloscopia; utilizando la tinción de Zielh-Neelsen y el cultivo en medio de Lowes-Jensen; donde como resultado obtuvimos una muestra negativa; posteriormente se analizo un frotis positivo proporcionado por la titular, donde; se obtuvo un conteo de 1 bacilo por campo. En el medio de cultivo (Lowestein-Jensen), puesto que es una bacteria de crecimiento lento; en la muestra aun no se obtiene un resultado. Introducción La tuberculosis es causada por una bacteria acido alcohol resistente Mycobacterium tuberculosis. Este microorganismo fue aislado, descrito y responsabilizado de la tuberculosis en 1882 por el microbiólogo alema Robert Koch. La propiedad de acido alcohol resistente es debida a la presencia en la superficie de la Mycobacteria de unos componentes lipiditos únicos demonizados ácidos micólicos. Esta bacteria es de crecimiento lento, de modo que las colonias se observan en la placa después de varios días o semanas. Cunado crecen en medio sólido, forman colonias apretadas y arrugadas que se elevan sobre la placa en lugar de extenderse, esta formación es debida al alto contenido lipidito y a la naturaleza hidrofobica de la superficie celular. Estos bacilos se trasmiten fácilmente a través de las vías respiratorias, incluso en el simple acto de hablar es suficiente para la trasmisión de persona a persona. La interacción de esta bacteria con las células del hospedero, es extremadamente compleja, siendo determinada en parte por la virulencia de la cepa. Es importante diferenciar entre dos tipos de infección de tuberculosis en humanos: primarias y post primario o reinfección; la primaria es cuando en individuo adquiere la infección como consecuencia de la inhalación de pequeñas gotitas de liquido que contiene bacterias viables. La bacteria se localiza en los pulmones donde se multiplica, luego se forman agregados de macrófagos activados, llamados tubérculos, característicos de los tuberculosos. La postprimaria es aquella tuberculosis que se desarrolla de fuentes exógenas o por reactivación de bacterias que han permanecido quiescentes dentro de los macrófagos pulmonares.

Resultado de aprendizaje.- identificar a los bacilos acido alcohol resistentes; Mycobacterium tuberculosis

Manual de bacter UACH

Material, equipo y reactivos. Equipo:  Microscopio óptico de campo claro.  Incubadora a 37°C.  Centrifuga  Tubo de ensaye  Equipo de seguridad (bata para laboratorio, guantes de látex y cubre bocas). Material:  Mechero de bunsen.  Puente de tinción y pizeta.  Papel estraza. Reactivos:  Agra Lowestein-Jensen.  Carbol fuschina  Alcohol acido  Azul de metileno  Aceite de inmersión. Bactericida para limpieza Metodología Tinción de Zielh-Neelsen • Realiza un frotis con la muestra de esputo y deja secar. • Fija al mechero pasándolo de arriba hacia abajo por la llama por tres veces. • Cubre el frotis con carbol fushina por 5 min. • Enjuaga el carbol fushina con agua destilada, permitiendo que esta corra a través del frotis. • Enjuaga el frotis con alcohol acido durante 1 min. • Y enjuaga con agua. • Cubre el frotis con azul de metileno durante 1min. • Enjuaga el frotis con agua. • Seca suavemente con papel estraza. • Observar en el microscopio con el objetivo de 100X. Cultivo • El esputo se trata con 1N NaOH durante 30 min. Para eliminar las bacterias de la flora normal. • La muestra centrifuga y se tira el sobrenadante. • Una vez neutralizada se siembra sobre el medio de aislamiento (LowesteinJensen), en una campana de extracción con las medidas necesaria para evitar contaminación del medio y evitar infectarse.

Manual de bacter UACH

Resultado Muestra: Baciloscopia…………………………………………………..Negativa Frotis: 4901 0 0 0 0 0 0 1 5 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 5 0 0 0 8 3 0 0 0

1 0 4 2 0 1 3 1 6

0 0 1 0 0

0 1 0 0 1

0 0 0 2 0

0 0 0 0 0

0 0 0 0 0

14 0 0 1 3

0 0 0 1 2 4 2 0 0 0 0 0 0 0 4 0 0 3 0

0 0

0 0 4 0 0

0 0

0 0 0 2 1 4

Morfología Microscópica Mycobacterium tuberculosis form color a bacilo Rosa(alcohol resistente)

arreglo Simple o agrupados

Morfología Macroscópica Mycobacterium tuberculosis colonias tamaño color borde luz redondas mediano Blanca/crema entero No trasmitida

Manual de bacter UACH

Discusión De Resultados En el análisis de muestra de esputo, se obtuvo un resultado negativo, ya que no se encontró ningún bacilo acido alcohol resistente en la baciloscopia. En el frotis proporcionado por el titular se obtuvo como resultado mas de un bacilo por campo lo que significa que la muestra fue obtenida de un paciente tuberculoso, ya que una muestra de considera positiva cuando se encuentra aunque sea solo un bacilo en 100 campos. Conclusión Al observar los resultados obtenidos, se concluye que el paciente no tiene una infección causada por Mycobacterium, debido a que no se encontró un solo bacilo en el frotis analizado. En el frotis proporcionado por el titular se observo, una muestra positiva a Mycobacterium tuberculosis, esto se determina debido a la gran cantidad de bacilos acido alcohol resistentes que se observaron en el frotis por lo que la muestra se reporta como positiva BAAR (++).

Bibliografía http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/fenotm.htm http://www.esmas.com/salud/enfermedades/infecciosas/434933.html http://www.monografias.com/trabajos10. html http://es.wikipedia.org/wiki/Mycobacteium-tuerculosis http://www.escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/TemasMedicinaInterna/pdf/Enf Tr Fecha de consulta: 27-marzo-2007 Madigan michael y Co. Brock Biología de los microorganismos 10ª edición pearson prentice hall. Madrid 2004. Lennette Edwin H. Manual de Panamericana. Buenos Aires 1987.

microbiología

clínica

4ª

edición,

editorial

Manual de bacter UACH

Tay Zavala Jorge Dr. Microbiología y Parasitología médicas. Segunda edición. Méndez editores. México.1994. Borrows William Dr. Tratado de microbiología, Vigésima edición. Interamericana. México 1974.

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Laboratorio: Bacteriología Médica Práctica # 9 “Análisis microbiológico de una muestra de Exudado Faringeo”

TITULAR:

Norma Herrera Díaz

Manual de bacter UACH

ALUMNOS: Mayra Torres Gómez 7mo “B”

19 de abril de 2007

Manual de bacter UACH Resumen. En esta práctica se realizó un cultivo de un exudado fraringeo. Para su diagnostico se sembró una porción de la muestra en agares: Sangre, MacConkey, Chocolate y Sal Manitol. Se efectuo un frotis con tincion Gram, para su análisis microscópico, observando bacterias Gram + representantes de la flora normal. Pasado el tiempo de incubación se obtuvo un crecimiento colonial que marco la pauta de la investigación. Se realizo el análisis macroscópico y microscópico de cada una de las colonias para saber la morfología de los posibles microorganismos, y como se obtuvo crecimiento en agar Sangre, Chocolate y Sal Manitol y sabiendo que era un Gram + se efectuaron las pruebas bioquímicas adecuadas para su identificación, obteniéndose que se trataba de Staphylococcus aureus. El manitol positivo demostrado en la caja de agra sal manitol es una prueba de identificacion que ayudo para determinar que era dicho mocroorgamismo. Introducción. Las infecciones respiratorias son estados anormales en los cuales un germen o agente infeccioso invade el cuerpo y permanece en él provocándole algún tipo de daño. Los agentes infecciosos pueden ser de diferentes clases: virus, bacterias u hongos. Su entrada al cuerpo es por alguna de las "puertas" o superficies de contacto externas del aparato respiratorio. Pueden penetrar en ocasiones estando éstas superficies intactas, aunque es más fácil si se encuentran previamente dañadas ó inflamadas ó a través de heridas.7 Los dos factores más importantes que hacen posible una infección son: la habilidad natural del agente infectante para pasar las barreras naturales y los tejidos, lo que se conoce como virulencia, y por otro lado el grado de labilidad ó eficiencia del sistema general de defensa del individuo durante las diversas fases del ataque del germen (susceptibilidad).7 Los staphylococos son miembros de la flora microbiana normal en humanos. Constituyen un genero de bacterias esféricas, sin movimiento y no esporuladas. Son catalasa-positivo y capaces de crecer y producir ácido a partir de la glucosa por vía anaerobia, se tiñen fácilmente en tinciones básicas comunes y son intensamente grampositivos. Su crecimiento es abundante, y las colonias sobre la superficie de agar son medianas, redondas, lisas y brillantes. En forma característica, se divide en más de un plano y pertenece en conjuntos irregulares que asemejan racimos de uvas. 5 y 6 Staphylococcus aureus es una bacteria que se encuentra en la piel y fosas nasales de las personas sanas, que causa gran variedad de infecciones, desde infecciones menores de la piel (forunculos, ampollas, vejigas) y abscesos cutáneos hasta enfermedades que pueden poner en peligro la vida como neumonía, meningitis, endocarditis, síndrome del shock toxico (SST) y sepsis.1,2,3. Resultado de aprendizaje. Análisis Microbiológico de una muestra de Exudado faringeo, para determinar Enfermedades del tracto respiratorio.

Manual de bacter UACH Material, Equipo y Reactivos Equipo:  Microscopio óptico de campo claro  Incubadora a 37°C  Equipo de seguridad (bata para el laboratorio, guantes de látex, lentes de seguridad y cubre bocas) Material:  Mechero de bunsen.  Asa de nicromio circular estéril.  Cajas de petri  Tubo de ensayo de 13x100mm.  Portaobjetos.  Puente de tinción.  Pizeta.  Papel estraza.  Frasco para anaerobios con vela.

Reactivos:  Agar Chocolate.  Agar Sal manitol.  Agar MacConkey  Agar Sangre.  Cristal violeta.  Yodo lugol. Alcohol-acetona.  Safranina. Aceite de inmersión. Agua oxigenada. Medio de transporte (Stuart).

Muestra:  Exudado Faringeo. Métodos. Toma de muestra Toma de muestra: Se pide al paciente que se siente y coloque su cabeza hacia atrás. Se ilumina bien la cavidad orofaríngea y con un abatelenguas se empuja la lengua hacia abajo para facilitar el acceso a la parte posterior de la faringe. Con un hisopo de algodón se hace un raspado de las áreas hiperémicas, purulentas o necróticas, así como de las membranas o manchas de Koplic, si es que las presenta. Medio de transporte: •

•

Agentes virales: El hisopo con la muestra se introduce en un tubo de tapón de rosca con 1 a 2 mL de solución salina isotónica estéril. Se rompe la varilla de madera a la altura del tapón y se tapa herméticamente. Agentes bacterianos: El hisopo con la muestra se introduce en un tubo de tapón de rosca con medio de Amies o de Stuart. Se rompe la varilla de madera a la altura del tapón y se tapa herméticamente.

Manual de bacter UACH

Primera sesión. Sembrado de la muestra de Exudado Faringeo. 2. En todos los agares (Sangre, MacConkey, Chocolate, Sal Manitol), tomar el hisopo con la muestra que se encuentra en el medio de Stuart, y se descarga en una de los cuadrantes, después se procede a estriar con el asa de nicromio con el fin de obtener colonias aisladas. Incubar a 37oC por 24horas. El agar chocolate y sangre se incuban en condiciones de carboxifilia. Segunda sesión. 1. Análisis macroscópico y microscópico de las colonias crecidas en los diferentes agares. Realizar la prueba de la catalasa. Realizar la prueba de la coagulasa. NOTA: todas estas pruebas para los agares que tengan crecimiento bacteriano.

Manual de bacter UACH Resultados.

Forma Tamaño Elevación Borde Luz transmitida Color Consistencia Hemólisis



Agar Sangre

Agar Sal Manitol

Redondas Medianas Convexa Entero No Blanca Cremosa No presentó -----

Redondas Medianas Convexa Entero no Doradas Cremosa ----Manitol (positivo)

Agar Chocolate Redondas Medianas Convexa Entero no Blancas Cremosa ---------

No hubo crecimiento en el agar MacConkey.

Morfología macroscópica.

agar sangre

Agar sal agar chocolate

manitol

Morfología microscópica.

Staphylo

Catalasa: positiva Oxidasa: negativa Coagulasa: positiva

coccus aureus

Manual de bacter UACH Discusión. En el estudio realizado al exudado faringeo se obtuvieron resultados con un menor margen de error en la comprobación del agente bacteriano que resulto; siendo este Staphylococcus aureus. Comprobandosé esta hipotesis por medio de las pruebas confirmatorias para descartar otras posibilidades, entre ellas se encuentran la utilización del Manitol, la Coagulasa positiva.

Conclusión. El aislamiento de S. aureus a partir del exudado faríngeo no tiene importancia diagnóstica, ya que se considera parte de la flora normal de la faringe y nasofaringe, por lo que no tiene significado clínico.

Bibliografía. 16. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout “Diagnostico Microbiológico”. Ed. Médica Panamericana. 11va edición. México. 17.

Lennette, E. (1987). Microbiología Clínica. Ed. Médica Panamericana. 3ra

edición. México. 18.

Borrows. W. (1974). Tratado de microbiología, Interamericana 20ª edición..

México., págs. 422-427. 19.

http://www.salud.gob.mx/indre/mues.htm#M3.%20EXUDADO%20FARINGEO

20.

http://html.rincondelvago.com/bacteria-staphilococcus-aureus.html

21.

http://html.rincondelvago.com/flora-bucal.

22.

http://www.alergia.ws/ot_infecciones.htm

Fecha de consulta de las páginas de Internet: 18 de abril de 2007

Manual de bacter UACH

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Laboratorio: Bacteriología Médica Práctica # 10 “Infecciones De La Piel” TITULAR:

Norma Herrera Díaz

ALUMNA: Mayra Torres Gómez 190128 7mo “B”

26 de abril de 2007

Manual de bacter UACH Resumen En este análisis, se realizó un hisopado de la herida para determinar si el paciente, presenta una infección, esta técnica se realizó utilizando cultivos de la muestra en agares; sangre, MacConkey y en un medio para anaerobios en agar Liver Veal, así como la identificación de la bacteria causal de la infección. Donde, como resultado, se obtuvo; en el análisis; colonias redondas convexas, color trasparentes, y de consistencia cremosa; esto en agar MacConkey y en el Sal Manitol no hubo crecimiento, en sangre se observo el efecto de swarming y en agar Liver Veal fueron colonias pequeñas de color gris. Microscópicamente fueron bacilos gram negativos, por lo que se procedió a realizar las pruebas bioquímicas o metabólicas para determinar el tipo de microorganismo asilado. El cual resulto ser, Proteus, comúnmente relacionada a infecciones de la piel en pacientes tratados con antibióticos. La muestra fue proporcionada por el laboratorio clínico Universidad. Introducción La piel representa una barrera notablemente eficaz contra las infecciones bacterianas. A pesar de que muchas bacterias viven sobre la piel, normalmente son incapaces de provocar una infección. Las infecciones bacterianas de la piel pueden afectar a una sola zona y tener el aspecto de un grano o bien propagarse en unas horas y afectar a un área mucho más extensa. Las infecciones cutáneas pueden presentar un grado de gravedad variable, desde una acné sin importancia hasta una enfermedad potencialmente mortal, como el síndrome de la piel escaldada producido por estafilococos.

Muchos tipos de bacterias pueden infectar la piel. Los más frecuentes son los Staphylococcus y los Streptococcus. En los hospitales o las residencias pueden producirse infecciones causadas por bacterias menos comunes, al igual que cuando se realizan trabajos de jardinería o se nada en un estanque, un lago o en el mar. Algunas personas presentan un riesgo específico de contraer infecciones de piel; por ejemplo, los diabéticos, que poseen una irrigación cutánea disminuida, en especial la de las manos y de los pies, y los enfermos de SIDA, que presentan un sistema inmunológico deprimido. La piel dañada por los rayos del sol, las rascaduras u otra irritación también tiene más posibilidades de infectarse. De hecho, cualquier lesión en la piel predispone a una persona a sufrir una infección. Por lo general, mantener la piel intacta y limpia evita las infecciones. Resultado De Aprendizaje Cultivar e identificar al microorganismo causal de una infección de la piel.

Manual de bacter UACH Material: Equipo:  Portaobjetos y cubreobjetos.  Microscopio óptico de campo claro.  Asa de nicromio calibrada.  Incubadora a 37ºC.  Asa de nicromio punta redonda.  Mechero de Bunsen.  Papel estraza.  Puente de tinción.  Gradilla y piseta.  Cajas petri.  Hisopo estéril. Equipo de protección personal:  Cubreboca.  Guantes de látex.  Bata. Reactivos:  Tinción de Gram.  Cristal violeta.  Yodo lugol.  Alcohol acetona.  Safranina.  Solución salina fisiológica isotónica al 0.85%.  Aceite de inmersión.  Cloruro Férrico al 10%  Kovak’s.  α-Naftol.  KOH al 40%.  Rojo de Metilo.  Verde de malaquita  Agares: Pruebas Bioquímicas:  MacConkey.  TSI  Sangre.  MIO  Sal Manitol.  SIM  Nutritivo  Citrato  Liver veal.  Caldo de Urea  FeA  RM-VP  LIA  Caldo de Malonato o Nitratos o Maltosa o Sacarosa o Glucosa o Xilosa o Manitol

Manual de bacter UACH

Metodología Toma De La Muestra HERIDAS SUPERFICIALES Y ABSCESOS ABIERTOS. A. MATERIAL NECESARIO. - Suero fisiológico. -Jeringa y aguja estériles. -Recipientes estériles con tapa de rosca. -Hisopos con medio de transporte tipo Stuart-Amies. B. TECNICA. - Lavar con suero fisiológico estéril cuidadosamente la superficie de la herida para retirar la flora colonizante. - Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas. - Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solución de Ringer lactato y aspirarlo nuevamente en la jeringa. - Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podrá efectuarse un frotis de los bordes de la herida con un hisopo. C. NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN. Para muestras líquidas se intentara obtener 1-10 ml. En el resto de las ocasiones se enviará la máxima cantidad posible. D. TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN. El envío al laboratorio debe ser inmediato. Se utilizará para el envío tubos estériles con tapa rosca. La jeringa de la extracción será evacuada en el recipiente en que se hará el envío. La práctica de colocar un tapón de goma en la aguja (usando la jeringa como recipiente de transporte) debe desecharse por el riesgo para el personal de sufrir un pinchazo con una aguja contaminada con líquidos orgánicos. No olvidar identificar la muestra adecuadamente y si no puede procesarse antes de 2 horas usar medio de transporte. E. OBSERVACIONES. Las muestras recibidas en hisopo son de escasa rentabilidad y deben obtenerse sólo en circunstancias muy excepcionales, cuando no se pueda recoger la muestra por otros métodos. Es importante especificar sitio anatómico de donde se realizó la toma de muestra. ABSCESOS CERRADOS. Es un procedimiento médico A. MATERIAL NECESARIO. - Gasas estériles. - Alcohol etílico o isopropílico al 70%. - Yodo povidona al 10%. - Jeringa estéril. - Aguja IM.

Manual de bacter UACH - Medio de transporte para anaerobios. B. TECNICA. - Realizar antisepsia de la zona a puncionar con alcohol al 70%, de forma concéntrica comenzando por el centro. Abarcar una zona de unos 10 cm. - Repetir la operación con Yodo povidona. En pacientes con hipersensibilidad al yodo, se utilizará alcohol 70 % dos veces consecutivas. - Dejar secar al menos 1 minuto para que el antiséptico ejerza su acción. - Realizar una punción-aspiración del absceso con jeringa y aguja, la muestra más útil es la obtenida contra la pared del absceso y puncionando en el lado superior para evitar la fistulización espontánea. - Traspasar la muestra a un contenedor estéril. Si se requiere búsqueda de anaerobios introducir en un medio de transporte para anaerobios. C. NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN. Deberá enviarse un volumen de muestra entre 1-5 ml. D. TRANSPORTE Y CONSERVACION. Las muestras deben enviarse al laboratorio tan pronto como sea posible. Hasta que esto suceda, mantener las muestras y el medio de transporte a temperatura ambiente. E. OBSERVACIONES. Es muy importante especificar en la solicitud la localización del absceso con vistas a la interpretación de los resultados. Si se carece de recipiente para transporte de muestra para anaerobios consultar al laboratorio. HERIDA QUIRÚRGICA La toma de muestra se realizará con técnica aséptica luego de limpieza de la zona con suero fisiológico para eliminar la contaminación superficial. Se realizará por punción y se colocará la muestra en recipiente estéril con tapa de rosca, si se sospecha presencia de anaerobios comunicarse con el laboratorio para solicitar medio de transporte. Sí la muestra es obtenida con hisopo realizar primero la limpieza de la zona y luego embeber en el pus el mismo. QUEMADURAS El tipo de toma de muestra es controvertido, pero los mejores resultados se han logrado con punch de tejido de 3 o 4 mm para realizar cultivos cuantitativos. Se transportan en tubos con tapa rosca estériles. Primera sesión. Medios: Agar sangre, Agar Sal Manitol, chocolate y Agar Liver Veal. Con el hisopo se descarga l muestra en el primer cuadrante, después se estría en los demás cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas después del periodo de incubación. Después de que se hayan sembrado cada una de las cepas de referencia se colocan las cajas petrí en la incubadora durante 24 horas a 37ºC, después de este periodo de incubación se revisa la estructura microscópica de cada una de las cepas. NOTA: Esto se realiza de igual forma para cada uno de los medios. Segunda sesión.  Análisis macroscópico y microscópico de las colonias presentes en los medios inoculados en la sección anterior, así como realizar las pruebas bioquímicas correspondientes de acuerdo al microorganismo.  Tinción de Gram.

Manual de bacter UACH ♦ Además de las pruebas bioquímicas Tercera sección.  Realizar la lectura de las pruebas bioquímicas. Resultados Morfología Macroscópica Proteus mirabilis Agar: Forma Tamaño Borde Elevación Consistencia Luz transmitida Luz reflejada Color

Sangre

Liver veal

MacConkey

Efecto swarming ----------------Cremosa Negativa

Redonda Pequeñas Entero Convexa Cremosa Negativa

Redonda pequeñas Entero Convexa Cremosa positiva

Positiva Grises

Positiva Grises

negativa trasparentes

Sangre

nutritivo

irregular Grandes Irregular Aplanadas Cremosa Negativa

irregular Grande Irregular Aplanada Cremosa Negativa

Positiva Grises

Positiva Blanca

Bacillus cereus

Agar: Forma Tamaño Borde Elevación Consistencia Luz transmitida Luz reflejada Color

Manual de bacter UACH

Morfología microscópica Proteus mirabilis •

Bacilos cortos, Gram negativos y en arreglo simple o par.

Agar sangre

Agar Mc Conkey

Agar Liver Veal

Manual de bacter UACH

Bacillus cereus Bacilos gram positivos, en cadena.

Agar Nutritivo

Agar sangre

Pruebas Bioquímicas medio TSI Citrato FEA MIO SIM

Proteus mirabilis Gas H2S A/A

+

+

Movilidad

Indol

Ornitina

+

-

-

Movilidad

Indol

+

-

LIA

H2S

+ RM-VP Caldo de Urea Caldo de Malonato

-

-

RM

VP

+

+ -

Manual de bacter UACH

Bacillus cereus *Los resultados obtenidos todos fueron negativos, los que se presentan a continuación son los valores de la referencia. medio Nitrato Maltosa Sacaros a Glucosa Xilosa Manitol

Negativo Positivo Positivo Positivo Negativo negativo

Discusión De Resultados En nuestro estudio el agente que se identifico como agente causal de infección fue la Proteus, dicha identificación se determino gracias alas características metabólicas identificadas en las pruebas bioquímicas realizadas. Proteus vulgaris es indol positivo mientras que Proteus mirabilis es indol negativo. Por lo tanto mediante esta prueba podemos hacer la identificación presuntiva de Proteus mirabilis. Proteus penneri y P. myxofaciens también son indol negativo pero raramente se encuentran en infecciones de heridas. Por lo tanto para este análisis, la recuperación de una especie de Proteus, indol negativo en una muestra de hisopado de la piel puede identificarse como Proteus mirabilis. Podría confundirse con Proteus penneri solo que este se diferencia por que no produce sulfuro de hidrogeno en el TSI, a diferencia de P. mirabilis Conclusión Se llegó a la conclusión de que el paciente, presenta una infección, a causa de la bacteria Proteus, puesto que en el análisis microbiológico fue el microorganismo que se pudo recuperar, este microorganismo es común encontrarlo en personas que están tratados con antibióticos. El microorganismo fue identificado por medio de pruebas bioquímicas.

Manual de bacter UACH

Bibliografía http://html.rincondelvago.com/bacteriologia_2.html http://www.eprodig.com/dermlink/Paginas/consejos_enfermedades_bacteriana.htm http://www.msd.es/publicaciones/mmerck_hogar/seccion_18/seccion_18_201.html Koneman. W Elmer y Co. Diagnostico microbiológico texto y atlas. 5° edición. Panamericana. Buenos Aires. 2004 Borrows William Dr. Tratado de microbiología, Vigésima edición. Interamericana. México 1974. García Rodríguez JJ. Microbiología Médica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996.

Manual de bacter UACH

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Laboratorio: Bacteriología Médica Práctica # 11 “Hemocultivo” TITULAR:

Norma Herrera Díaz

ALUMNOS: Eloy Ricardo Borjas Sáenz 175211 Mayra Torres Gómez 190128 7mo “B”

Manual de bacter UACH

3 de mayo de 2007

Resumen Se realizó un hemocultivo, el cual se estuvo revisando por tres días para observar como se presenta un cultivo negativo, después de esto se le inoculo una bacteria problema, esta técnica se realizó utilizando cultivos de la muestra en agares; sangre, MacConkey y Chocolate. Donde, como resultado, se obtuvo; en el análisis; colonias redondas convexas, y de consistencia cremosa con una pigmento verde; esto en agar MacConkey y, en sangre se observo colonias redondas, presentando una hemólisis beta, y colonias blancas, redondas y convexa en chocolate. Microscópicamente fueron bacilos gram negativos, por lo que se procedió a realizar las pruebas bioquímicas o metabólicas para determinar el tipo de microorganismo asilado. El cual resulto ser, Pseudomona, comúnmente relacionada a bacteriemias. Introducción Un hemocultivo es un examen para determinar si microorganismos como bacterias, micobacterias u hongos están presentes en la sangre. Se coloca una muestra de sangre en una preparación especial de laboratorio y se incuba en un ambiente controlado por 1 a 7 días. En este examen es importante que la muestra sanguínea no se contamine con organismos de la piel o del equipo utilizado para preparar el examen. Se debe seguir una técnica estricta con antisépticos para obtener y preparar la muestra. La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte anterior del codo o del dorso de la mano. El sitio de punción se limpia con un antiséptico y luego se coloca una banda elástica alrededor del antebrazo con el fin de aplicar presión y hacer que la vena se llene de sangre. Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco hermético o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira la banda para restablecer la circulación y, una vez que se ha recogido la sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de punción para detener cualquier sangrado. Se examina el cultivo por varios días en búsqueda de la presencia de microorganismos y, si éstos están presentes, se pueden realizar otros cultivos para identificarlos. También se puede realizar una tinción de gram para clasificar el organismo de forma que se pueda iniciar la terapia con antibióticos antes de que los resultados del cultivo final estén disponibles. Un hemocultivo se realiza cuando hay sospecha de infección en la sangre (bacteriemia o septicemia) debido a síntomas tales como fiebre, escalofríos o presión sanguínea. Pseudomonas aeruginosa El término Pseudomona significa 'falsa unidad', procede del griego pseudo, que significa 'falso', y monas, que significa unidad simple. El nombre fue usado inicialmente en la historia de la microbiología como sinónimo de gérmenes. Aeruginosa es el nombre latino para el cardenillo u 'óxido de cobre'. Esto

Manual de bacter UACH describe el pigmento azul verdoso bacteriano, visto en los cultivos de laboratorio " de P. aeruginosa”.Es una bacteria Gram-negativa, aeróbica, con motilidad unipolar. Es un patógeno oportunista para los humanos. Resultado De Aprendizaje Cultivar e identificar al microorganismo causal de una bacteriemia. Material: Equipo:  Portaobjetos y cubreobjetos.  Microscopio óptico de campo claro  Asa de nicromio punta redonda. Incubadora a 37ºC  Mechero de Bunsen.  Papel estraza.  Puente de tinción.  Gradilla y piseta.  Cajas petri . Equipo de protección personal:  Cubreboca.  Guantes de látex.  Bata. Reactivos:  Tinción de Gram.  Cristal violeta.  Yodo lugol.  Alcohol acetona.  Safranina.  Solución salina fisiológica isotónica al 0.85%.  Aceite de inmersión.  Cloruro Férrico al 10%  Kovak’s.  α-Naftol.  KOH al 40%.  Rojo de Metilo.  Agares: Pruebas Bioquímicas:  MacConkey.  TSI  Sangre.  MIO  Chocolate.  SIM  Citrato  Caldo de Urea  FeA  RM-VP  LIA  Caldo de Malonato

Manual de bacter UACH

Metodología Toma De La Muestra La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte anterior del codo o del dorso de la mano. El sitio de punción se limpia con un antiséptico y luego se coloca una banda elástica alrededor del antebrazo con el fin de aplicar presión y hacer que la vena se llene de sangre. Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco hermético o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira la banda para restablecer la circulación y, una vez que se ha recogido la sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de punción para detener cualquier sangrado. Inoculación De Las Botellas Se debe descontaminar el tapón de goma antes de puncionar la botella con alcohol y esperar que se seque, ya que el fabricante no garantiza la esterilidad de éste. Existen controversias respecto al cambio de aguja antes de inocular la muestra en la botella, sin embargo un meta-análisis reciente demuestra que el cambio de aguja disminuye el porcentaje de contaminación se debe tener máxima precaución en no tocar las paredes exteriores de la botella con la aguja.

Medios: Agar sangre, chocolate y Agar Mac Conkey. Con la jeringa se descarga la muestra en el primer cuadrante, después se estría en los demás cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas después del periodo de incubación. Después de que se hayan sembrado cada una de las cepas de referencia se colocan las cajas petrí en la incubadora durante 24 horas a 37ºC, después de este periodo de incubación se revisa la estructura microscópica de cada una de las cepas. NOTA: Esto se realiza de igual forma para cada uno de los medios.  Análisis macroscópico y microscópico de las colonias presentes en los medios inoculados en la sección anterior, así como realizar las pruebas bioquímicas correspondientes de acuerdo al microorganismo.  Tinción de Gram. ♦ Además de las pruebas bioquímicas  Realizar la lectura de las pruebas bioquímicas.

Manual de bacter UACH

Resultados Morfología Macroscópica Pseudomona aeruginosa Agar: Forma Tamaño Borde Elevación Consistencia Luz transmitida Luz reflejada Color Hemólisis

Sangre

Chocolate

MacConkey

Redondas Grande Entero Planas Cremosa Negativa

Redonda Mediana Entero Convexa Cremosa Negativa

Redonda Mediana Entero Planas Cremosa positiva

Positiva Blancas Beta

Positiva Blancas --------

negativa Pigmento verde ---------

Manual de bacter UACH

Morfología •

Bacilos cortos, Gram negativos y en arreglo simple o par.

Agar Mc Conkey

Agar Sangre

Agar chocolate

Manual de bacter UACH

Pruebas Bioquímicas medio TSI Citrato FEA MIO SIM

pseudomona Gas k/k

+ -

-

Movilidad

Indol

Ornitina

+

-

+

Movilidad

Indol

+

-

LIA

H2S

RM-VP Caldo de Urea Caldo de Malonato

H2S

+

-

RM

VP

+

+

Oxidasa: positiva Discusión De Resultados Con las pruebas realizadas en este análisis se pudo identificar a la bacteria que fue inoculada en el hemocultivo; gracias al pigmento que produjo la bacteria en agar Mac Conkey y a el característico olor a maíz se hace un diagnostico presuntivo de que es Peudomona, este diagnostico se confirma con el montaje de pruebas bioquímicas en donde se observa que no fermenta carbohidratos y con la prueba de oxidasa que arroja un resultado positivo. Conclusión Gracias a las pruebas y medios de cultivo utilizadas en este análisis se determina al microorganismo capaz de crecer en un hemocultivo, el cual se identifico como una bacteria gram negativa, no fermentadora de carbohidratos, conocida como Pseudomona aeuruginisa

Manual de bacter UACH

Bibliografía http://html.rincondelvago.com/bacteriologia_2.html http://www.eprodig.com/dermlink/Paginas/consejos_enfermedades_bacteriana.htm http://www.msd.es/publicaciones/mmerck_hogar/seccion_18/seccion_18_201.html

http://es.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas_aeruginosa#Patog.C3.A9nesis Koneman. W Elmer y Co. Diagnostico microbiológico texto y atlas. 5° edición. Panamericana. Buenos Aires. 2004 Borrows William Dr. Tratado de microbiología, Vigésima edición. Interamericana. México 1974. García Rodríguez JJ. Microbiología Médica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996.

Manual de bacter UACH

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Laboratorio: Bacteriología Médica Práctica # 12 “Líquido Cefalorraquideo”

TITULAR:

Norma Herrera Díaz

ALUMNA: Mayra Torres Gomez 190128 7mo “B”

Manual de bacter UACH

11 de Mayo de 2007

Manual de bacter UACH Resumen. En esta práctica se realizó un cultivo de una muestra de Líquido Cefalorraquideo. Para su diagnostico se sembró una porción de la muestra en agares: Sangre, MacConkey y Chocolate. Se efectuo un frotis con tincion Gram, para su análisis microscópico, observando bacterias Gram negativas. Pasado el tiempo de incubación se obtuvo un crecimiento colonial que marco la pauta de la investigación. Se realizo el análisis macroscópico y microscópico de cada una de las colonias para saber la morfología del posible microorganismo, y como se obtuvo crecimiento en agar Sangre, Chocolate y MacConkey; y sabiendo que era un Gram (-) se efectuaron las pruebas bioquímicas adecuadas para su identificación, obteniéndose que se trataba de Proteus mirabilis. Introducción. El líquido cefalorraquídeo, conocido como LCR, es un líquido claro como cristal de roca que baña al cerebro y a la médula espinal que circula por los ventrículos cerebrales y el canal medular y se almacena en las cisternas cerebrales. (1) Presenta una presión de 10-20 cm de agua, un volumen total de 150 ml, un volumen intra ventricular de 20-30 ml, está compuesto mayoritariamente por agua, por proteínas 15-45 mg/100 ml, glucosa 50-75 mg/100 ml, cloruros 120-130 nmol/l y leucocitos < 4-5 células por milímetro cúbico. (2) El líquido cefalorraquídeo puede enturbiarse por la presencia de leucocitos o la presencia de pigmentos biliares. Numerosas enfermedades alteran su composición y su estudio es importante y con frecuencia determinante en las infecciones meníngeas, carcinomatosis y hemorragias. También es útil en el estudio de las enfermedades desmielinizantes del sistema nervioso central o periférico. El líquido cefalorraquídeo tiene tres funciones vitales importantes: 1. Mantener flotante el tejido cerebral, actuando como colchón o amortiguador, dentro de la sólida bóveda craneal. Por lo tanto, un golpe en la cabeza moviliza en forma simultánea todo el encéfalo, lo que hace que ninguna porción de éste, sea contorsionada momentáneamente por el golpe. 2. Servir de vehículo para transportar los nutrientes al cerebro y eliminar los desechos. 3. Fluir entre el cráneo y la medula espinal para compensar los cambios en el volumen de sangre intracraneal, manteniendo una presion. (la cantidad de sangre dentro del cerebro) (5) Existen diferentes formas de obtener una muestra de líquido cefalorraquídeo. Una punción lumbar, comúnmente llamada punción espinal, es el medio más común para recolectar una muestra de LCR y generalmente se realiza de la siguiente manera:

Manual de bacter UACH •

• • • •

El paciente debe acostarse de lado con las rodillas encogidas hacia el abdomen y la barbilla pegada al tórax. Algunas veces, este procedimiento se realiza con la persona sentada y doblada hacia adelante. Después de limpiar la espalda, el médico inyecta anestésico local en la parte inferior de la columna. Se inserta la aguja espinal, generalmente entre la tercera y cuarta vértebra lumbar. Una vez que se ha insertado la aguja adecuadamente, se mide la presión del líquido espinal y se recoge la muestra. Luego, se retira la aguja, se limpia el área y se aplica un vendaje sobre el sitio. El paciente debe permanecer acostado por un período de 20 minutos a 1 hora después del examen. (4)

Resultado de aprendizaje. Análisis Microbiológico de una muestra de Líquido Cefalorraquideo, para la determinación de algunas enfermedades, debidas al causas de un daño en el . líquido cefalorraquideo. Material, Equipo y Reactivos Equipo:  Microscopio óptico de campo claro  Incubadora a 37°C  Equipo de seguridad (bata para el laboratorio, guantes de látex, lentes de seguridad y cubre bocas) Material:  Mechero de bunsen.  Asa de nicromio circular estéril.  Cajas de petri  Tubo de ensayo de 13x100mm.  Portaobjetos.  Puente de tinción.  Pizeta.  Papel estraza.  Frasco para anaerobios con vela.

Muestra:  Líquido Cefalorraquideo

Reactivos: .  Agar Chocolate  Agar MacConkey  Agar Sangre.  Cristal violeta.  Yodo lugol. Alcohol-acetona.  Safranina. Aceite de inmersión. Agua oxigenada.

Manual de bacter UACH Métodos. Toma de muestra. •

• • • •

• •

El paciente debe acostarse de lado con las rodillas encogidas hacia el abdomen y la barbilla pegada al tórax. Algunas veces, este procedimiento se realiza con la persona sentada y doblada hacia adelante. Después de limpiar la espalda, el médico inyecta anestésico local en la parte inferior de la columna. Se inserta la aguja espinal, generalmente entre la tercera y cuarta vértebra lumbar. Una vez que se ha insertado la aguja adecuadamente, se mide la presión del líquido espinal y se recoge la muestra. Luego, se retira la aguja, se limpia el área y se aplica un vendaje sobre el sitio. El paciente debe permanecer acostado por un período de 20 minutos a 1 hora después del examen. Proceder con el análisis microbiológico. Reportar los resultados.

Primera sesión. Sembrado de la muestra de Líquido Cefalorraquideo. 3. En todos los agares (Sangre, MacConkey, Chocolate), tomar el asa de nicromio con la muestra que se encuentra en eltubo de ensaye, y se descarga en una de los cuadrantes, después se procede a estriar con el asa de nicromio con el fin de obtener colonias aisladas. Incubar a 37oC por 24horas. El agar chocolate y sangre se incuban en condiciones de carboxifilia. Segunda sesión. 1. Análisis macroscópico y microscópico de las colonias crecidas en los diferentes agares. 2. Realizar las pruebas bioquímicas, dependiendo del resultado obtenido en la Tinción de Gram. Incubar las pruebas y leer a las 24horas. 3. Reportar los resultados obtenidos, para la determinación de la cepa problema. NOTA: todas estas pruebas para los agares que tengan crecimiento bacteriano.

Manual de bacter UACH Resultados.

Forma Tamaño Elevación Borde Luz transmitida Color Consistencia Hemólisis

Agar Sangre Redondas Medianas Convexa Entero No Blanca Cremosa No presentó

Agar MacConkey Redondas Medianas Convexa Entero no Grises Cremosa -----

Agar Chocolate Redondas Medianas Convexa Entero no Blancas Cremosa -----

Pruebas Bioquímicas medio TSI Citrato FEA MIO SIM

Proteus mirabilis Gas H2S A/A

+

+

Movilidad

Indol

Ornitina

+

-

-

Movilidad

Indol

+

-

LIA

H2S

+ RM-VP Caldo de Urea Caldo de Malonato

-

-

RM

VP

+

+ -

Manual de bacter UACH Morfología macroscópica.

Agar MacConkey Morfología microscópica.

Proteus mirabilis Catalasa: positiva

Agar Sangre

Agar Chocolate

Manual de bacter UACH Discusión. En el estudio realizado a la muestra de Líquido Cefalorraquideo se obtuvieron resultados con un menor margen de error en la comprobación del agente bacteriano que resulto; siendo este Proteus mirabilis. Comprobandosé esta hipotesis por medio de las pruebas confirmatorias para descartar otras posibilidades, entre ellas se encuentran la utilización de la urea, ya que este microorganismo tiene la capacidad de la reducción de nitritos muy efectiva.

Conclusión. El aislamiento de Proteus mirabilis, a partir de la muestra de Líquido Cefalorraquídeo tiene importancia diagnóstica, ya que no es considerada como parte de la flora normal de esta porción de cercana de la columna vertebral,

Bibliografía. 23. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout “Diagnostico Microbiológico”. Ed. Médica Panamericana. 11va edición. México. 24.

Lennette, E. (1987). Microbiología Clínica. Ed. Médica Panamericana. 3ra

edición. México. 25.

Borrows. W. (1974). Tratado de microbiología, Interamericana 20ª edición..

México., págs. 422-427. 26.

http://www.umm.edu/esp_ency/article/003428.htm

27.

http://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%ADquido_cefalorraqu%C3%ADdeo

Fecha de consulta de las páginas de Internet: 9 de Mayo de 2007

Manual de bacter UACH