Manual de Procedimientos Pro Fa Hem 015

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTANDARIZADOS HEMATOLOGIA Y COAGULACION CONTROL DE COMUNICACION FECHA DE APROBACION: FECHA DE COMUNICACIÓN: CONTROL DE EMISIÓN

Nombre

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Firma Fecha

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 2 de 971112-2

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

INDICE 1. Objetivos 2. Alcance 3.Responsables 4. Condiciones/normativas 5. Descripción de las actividades Definiciones, Conceptos y actividades. I. Recuento de eritrocitos. II. Cuantificación de hemoglobina. III. Determinación de hematocrito. IV. Determinación de índices hematimetricos. V. Recuento de reticulocitos. VI. Determinación de hierro sérico y su capacidad de combinación. VII. Recuento de leucocitos. VIII. Determinación de la fórmula leucocitaria. IX. Recuento de plaquetas. X. Velocidad de sedimentación o Eritrosedimentación XI. Determinación de grupos sanguíneos y Rh. XII. Prueba de Coombs (directa e indirecta). XIII. Análisis por citometría de flujo. XIV. Hemostasia y coagulación. XV. Determinación de Proteína C y Proteína S. XVI. Determinación de Dímero D. XVII. Determinación de Tiempo de tromboplastina parcial activado XVII. Determinación de Tiempo de protrombina. XIX. Determinación de Anticoagulante lúpico. 6.Referencias de consulta y registros 7. Registros 8.Glosarios 9. Anexos

3 3 3 3 3 3 3 8 12 16 20 23 29 32 41 45 41 52 56 68 71 75 79 83 88 91 91 92 93

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 3 de 971113-3

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE COAGULACION 1. Objetivo Instruir a los responsables de los análisis hematológicos, mediante directrices específicas para la realización apropiada de los métodos descritos en el presente manual. 2. Alcance El procedimiento operativo estandarizado tiene como alcance a todo el personal responsable y asignado al Area de Hematología y coagulación de LABCLINICS. 3. Responsables a. Responsables y auxiliares designados según calendario de actividades para la realización de análisis de Hematología y coagulación de LABCLINICS. b. Gerente de Calidad. 4. Condiciones/normativas: a. Norma NB ISO 15189 :2004 b. Norma NB ISO 9001:2000 c. Manual de Calidad de LABCLINICS 5. Descripción de las actividades

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 4 de 971114-4

Norma NB ISO 15189:2004

I.

e97 97

RECUENTO DE HEMATÍES Ó GLOBULOS ROJOS Ó ERITROCITOS

1. Propósito del análisis: El propósito del análisis es el recuento de glóbulos rojos. Estas células sanguíneas tienen forma de discos redondeados, bicóncavos y con un diámetro aproximado de 7,5 micras. En el ser humano y la mayoría de los mamíferos los eritrocitos maduros carecen de núcleo; en algunos vertebrados son ovales y nucleados. Los eritrocitos, o glóbulos rojos de la sangre, son los transportadores primarios del oxígeno de las células y de los tejidos corporales. La forma bicóncava del eritrocito es una adaptación que hace el área superficial, para facilitar el intercambio del oxígeno por dióxido de carbono, en condiciones óptimas. Su forma y la membrana plasmática flexible del eritrocito, le permite penetrar en los capilares más pequeños. 2. Principio del procedimiento: Se basa en realizar una dilución sanguínea en una pipeta dilutora y proceder al recuento de células en cámara de Neubauer con la ayuda de un microscopio. 3. Sistema de muestra primaria: La muestra debe ser sangre total obtenida con anticoagulante EDTA K3, preferentemente. 4. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo al vacío con tapa color lila y que contiene anticoagulante EDTA K3. 5. Equipo y reactivos requeridos: a) b) c) d)

Líquido de dilución.(Neutro o isotónico o de Hayen) Pipetas dilutoras. Cámara cuenta-glóbulos. Microscopio óptico. CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 5 de 971115-5

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

6. Procedimiento de calibración: La pipeta de Thoma debe encontrarse bien calibrada. 7. Pasos del procedimiento:  Primeramente aspirar la sangre total hasta la marca 0.5 de la pipeta de Thoma sin formar burbuja alguna.  Enrasar con el líquido de Hayen hasta la marca 101 de la pipeta de Thoma, logrando una dilución de 1/200.  Agitar muy suavemente por 45 a 60 segundos y dejar en reposo por no menos de 5 minutos. Antes de vaciar a la cámara, eliminar las 3 primeras gotas.  Cargar la cámara de Neubauer y dejar reposar por 5 minutos.  Observar en el microscopio con el objetivo de 40 X.  El recuento se realiza contando los hematíes depositados sobre 80 cuadraditos pequeños de cualquiera de los retículos, lo cual se consigue de distinta forma según sea la cámara utilizada; si se emplean las cámaras de Neubauer o de Thoma se encuentra 5 grupos de 16 cuadraditos cada uno, incluyendo los 4 de las esquinas y el central en uno de los retículos. 8. Procedimientos de control de calidad: Realizar un doble recuento para verificar la resultados similares entre sí. 9. Interferencias y reacciones cruzadas: -

Durante el embarazo existe disminución fisiológica. Las personas que viven a grandes alturas presentan un recuento alto de eritrocitos. La deshidratación incrementa el número de eritrocitos.

10. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre. El número de eritrocitos contados se calcula de la siguiente forma: Área total de los cuadrados analizados =80 x 1/400mm 2 = 1/5mm2 Volumen de la cámara =1/10mm=1/5mm 2x1/10mm =1750mm2

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento:

CODIGO: POE-FA-HEM015

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE COAGULACION

Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 6 de 971116-6

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

Se han contado, por tanto todos los eritrocitos contenidos en un volumen de 1/50mm2, por lo que si el número obtenido es de 50 bastará multiplicar este valor (A x 50) por 65 (como factor de dilución) para obtener el número de eritrocitos presentes en un milímetro cúbico de sangre total. 11. Intervalos biológicos de referencia: ERITROCITOS SEXO MASCULINO FEMENINO NIÑOS

VALORES 4.7 – 6.4 4.3 – 5.7 3.8 – 5.5

UNIDADES *1003 I :1 *1003 I :1 *1003 I :1

12. Valores de alerta o críticos: Menor de 4.000 o mayor a 6.500 *1003 I :1 13. Interpretación del laboratorio: 1. El aumento de número de glóbulos rojos se denomina policitemia. Puede presentarse en la diarrea grave, en la policitemia vera, en ciertas enfermedades crónicas del corazón, en intoxicaciones agudas y en personas que viven en la altura (policitemia de altura). 2. La disminución de los glóbulos rojos constituye la oligocitemia. Se observa en todas las anemias, en la leucemia y después de las hemorragias, cuando el volumen sanguíneo ha sido recuperado. 14. Precauciones de seguridad: Se debe seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y de Bioseguridad. 15. Fuentes potenciales de variabilidad:  Pipetas dilutoras mal calibradas o sucias.  Llenado incompleto o deficiente de la pipeta dilutora. CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 7 de 971117-7

Norma NB ISO 15189:2004

      

e97 97

Falta de suficiente agitación del a la sangre diluida en la pipeta. No desechar las tres primeras gotas de la pipeta. Cámara cuenta-glóbulos mal ajustada Llenado incompleto de la cámara cuenta-glóbulos. Células mal distribuidas en el fondo de la cámara. Recuento de un número insuficiente de células. Errores al efectuar el cálculo.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 8 de 971118-8

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

II. CUANTIFICACION DE HEMOGLOBINA 1. Propósito del análisis: El propósito del análisis es la cuantificación de la hemoglobina, proteína pigmentada de los glóbulos rojos que tiene como función principal el transporte de oxígeno desde los pulmones a las células del organismo, captando a su vez dióxido de carbono que es transportado a los pulmones para ser eliminado hacia el exterior. Normalmente interviene en todo análisis hematológico, porque da una pauta de salud o enfermedad; en combinación con la cifra del hematocrito se obtiene un índice muy importante en todo proceso clínico. La determinación de la concentración de hemoglobina es el criterio fundamental para el diagnóstico de una anemia; debido a ello la metodología empleada debe ser precisa y fiable. 2. Principio del procedimiento: Los métodos empleados hasta la actualidad se han basado siempre en determinadas propiedades fisicoquímicas de la hemoglobina destacando entre ellos los colorimétricos basados en la medida de la absorbancia lumínica de la propia hemoglobina o de algunos de sus derivados en solución, mediante fotocolorímetro o espectrofotómetro. Este método tiene como fundamento la trasformación previa de la hemoglobina en cianmetahemoglobina, cuya absorbancia es determinada mediante un fotocolorímetro o espectrofotómetro con lectura a 540 nm y comparada con la de un patrón cuyo valor corresponde a una concentración conocida de hemoglobina. La transformación de la hemoglobina en cianmetahemoglobina tiene lugar según el siguiente proceso: 

Hemoglobina + ferricianuro potásico = metahemoglobina (meta-Hb)



Meta-Hb + cianuro potásico = cianmetahemoglobina (cianmeta-Hb)

3. Especificaciones de desempeño: Linealidad: hasta 25 g/L CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 9 de 971119-9

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

4. Sistema de muestra primaria: Sangre total 5. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo tapa lila con anticoagulante EDTA K3. 6. Equipo y reactivos requeridos: a) Espectrofotómetro o fotocolorímetro capaz de leer a longitud de onda de 540 nm. b) Tubos de ensayo 12 x100mm. c) Pipetas volumétricas calibradas. d) Reactivo de Drabkin modificado (absorbancia 540 nm). 7. Procedimiento de calibración: Elaboración de la gráfica o recta de calibración. La gráfica de calibración tiene como finalidad calibrar un instrumento para una lectura determinada calculando la corrección existente entre los valores de absorbancia leídos por el mismo y los valores correspondientes de concentración hemoglobínica. Para elaborar la gráfica patrón se preparan 5 soluciones de concentración de cianmetaHb conocida y decreciente a partir del patrón de cianmetaHb, mediante diluciones sucesivas de la misma en reactivo de Drabkin modificado. La concentración de hemoglobina correspondiente de cada tubo es determinada a partir del grado de dilución y del valor indicado en la ampolla del patrón de cianmeta Hb. Una vez preparada las soluciones patrón, se inicia la lectura a 540nm del tubo que contiene solo reactivo y se ajusta a cero la absorbancia del instrumento. A continuación y partiendo de las soluciones de cianmetaHb concentrada, se leen las restantes soluciones patrón. Finalmente, la relación entre los valores de absorbancia obtenidos y los correspondientes a una concentración de

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 10 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

hemoglobina se representan en una gráfica colocando en ordenadas los valores de absorbancia transitoria y en abscisas, los de hemoglobina. 8. Pasos del procedimiento: 

Homogenizar bien la muestra de sangre mediante agitación suave con un sistema automatizado. Pipetear 5 ml de reactivo de Drabkin, en un tubo de vidrio, luego añadir 20 microlitros de sangre homogenizada, agitar bien 4 o 5 veces el tubo que contiene la muestra y el reactivo. Esperar 15 minutos para que se vaya a producir una hemólisis total y se complete la transformación de toda la hemoglobina en cianmeta hemoglobina. Luego leer la absorbancia a 540 nm.

  

9. Procedimientos de control de calidad: Para realizar el control de calidad con precisión debemos usar controles comerciales con valores conocidos y procesarlos como si fuera la muestra de un paciente más. Las soluciones de cianuro de hemoglobina obtenidas con este estándar cumplen las especificaciones del International Committee for the Standardization in Haematology (ICSH): relación DO= 1,61; turbiedad: menor que 0.002 D.O. y concuerdan con la preparación de referencia de Cianuro de Hemoglobina obtenida del “Rijksinstituut voor Volksgezondheid”. 10. Interferencias y reacciones cruzadas: -

Durante el embarazo los niveles bajan levemente. La vida a grandes alturas eleva los niveles. Algunos fármacos.

11. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre: La concentración de Hb (g/dl) = Abs muestra X (St) Abs estandar

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento:

CODIGO: POE-FA-HEM015

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE COAGULACION

Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 11 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

12. Intervalos biológicos de referencia: Abs estándar

SEXO MASCULINO FEMENINO NIÑOS

VALORES 14 -19.4 12.5 – 17.0 11.0 – 16.0

UNIDADES g/dl g/dl g/dl

13. Intervalo reportable de los resultados del paciente: De 11 a 19.4 g/dl ó 110 a 194 g/L. 14. Valores de alerta o críticos: Menor de 5 g/dl o mayor a 20 g/dl (ó menor de 50 g/L ó mayor a 200 g/L. 15. Interpretación del laboratorio: 1. Cuando se detectan niveles bajos de hemoglobina pueden ser consecutivos a: problemas de alimentación, linfomas, embarazo, cáncer, anemias primarias, enfermedades renales ó autoinmunes, hemorragias, etc. 2. Encontramos niveles altos de hemoglobina cuando existen cardiopatías, enfermedades pulmonares crónicas, deshidratación, etc.

16. Precauciones de seguridad: CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 12 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

Se debe seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y de Bioseguridad. 17. Fuentes potenciales de variabilidad: o Coagulación parcial de la sangre. o Empleo de pipetas volumétricas mal calibradas. o No eliminación del exceso de sangre adherida a las paredes externas del microcapilar antes de introducir el reactivo. o Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o caducado. o Lectura con antelación al tiempo necesario para la completa transformación de la hemoglobina en cianmeta-Hb. o Lectura a una densidad óptica inapropiada. o Errores de extracción o Empleo de anticoagulante no recomendado. III.

DETERMINACION DE HEMATOCRITO O VOLUMEN GLOBULAR

1. Propósito del análisis: El propósito del análisis es la obtención del valor del hematocrito que corresponde a la relación entre el volumen ocupado por los hematíes y el correspondiente a la sangre total, dependiendo principalmente de la concentración de hemoglobina. 2. Principio del procedimiento: Tras una centrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el depósito de los glóbulos rojos, principalmente, y otro nivel del plasma total. La relación porcentual entre ambos es la que describe el hematocrito reflejando el porcentaje de células transportadoras de oxígeno con respecto al volumen total de sangre. El análisis del hematocrito se realiza normalmente en un estudio completo de CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 13 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

hematimetría, con el recuento de glóbulos rojos o hematíes. Es de uso constante en toda actividad médica, para valorar globalmente la condición general de la sangre de un paciente. No siempre el hematocrito refleja el número de glóbulos rojos, porque éste depende de su tamaño que es pequeño en las anemias microcíticas y más grande en las macrocíticas. 3. Sistema de muestra primaria: Sangre total. 4. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo tapa lila con anticoagulante EDTA K3. 5. Equipo y reactivos requeridos: a. Tubo capilar de vidrio desechable de 1 mm de diámetro interior, 7.5 cm de longitud y paredes de 0.2 mm de grosor. b. Cera o plastilina para cerrar uno de los extremos del tubo capilar una vez lleno de sangre. c. Centrífuga de microhematocrito con radio superior de 8 cm, que permite aplicar fuerza centrifuga que varia entre 10.000 y 15.000 r.p.m. durante un tiempo de control automático. d. Sistema de lectura o lector de hematocrito. 6. Pasos del procedimiento: Se realiza por centrifugación. Procedimiento de la técnica:  Obtenida la sangre venosa o capilar, el tubo se llena hasta 1 cm. del otro extremo, y este se cierra a la llama o se tapona con arcilla o plastilina.  Se centrifuga a alta velocidad de 5.000 a 10.000 r.p.m. durante 4 minutos.  Después se lee la proporción del volumen ocupado por los hematíes con una regla milimétrica o el dispositivo que acompaña a la centrifugadora.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 14 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

7. Procedimientos de control de calidad: La determinación del hematocrito debe realizarse por duplicado y la diferencia entre los dos valores obtenidos deben ser: ±1% 8. Interferencias y reacciones cruzadas: a) Extracción de sangre en condiciones defectuosas (hemoconcentración, hemodilución o hemólisis) b) Oxigenación excesiva de la sangre (descenso erróneo del hematocrito). c) Retraso en la relación de la determinación después de extraída la sangre (falso incremento del hematocrito) d) Cuando la sangre se colecta directamente de un catéter puede producirse su dilución por el suero o liquido de perfusión. e) Homogenización defectuosa de la sangre antes de llegar al tubo capilar. 9. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre: Finalizada la centrifugación se emplea un lector de hematocrito colocando el extremo inferior de la columna de sangre en la línea correspondiente a 0 y el extremo superior en la línea correspondiente al 100% 10. Intervalos biológicos de referencia: HEMATOCRITO SEXO MASCULINO FEMENINO NIÑOS

VALORES 43 -58 40 – 53 31 - 43

UNIDADES % % %

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 15 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

11. Valores de alerta o críticos: Menor a 15 o mayor a 60%.

12. Interpretación del laboratorio: Un valor bajo de hematocrito puede deberse a: anemia, insuficiencia medular, embarazo, hemorragias, hipotiroidismo, hemólisis de distinta naturaleza, leucemias, trastornos reumáticos con manifestaciones extra-articulares, desnutrición. Un valor alto de hematocrito puede deberse a: cardiopatías cianógenas, deshidratación, eclampsia, trastornos pulmonares crónicos, eritrocitosis, policitema vera, choque (no hipovolémico). 13. Precauciones de seguridad: Se deben seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y de Bioseguridad. 14. Fuentes potenciales de variabilidad: 1. 2. 3. 4.

Mala proporción de sangre/ anticoagulante. Sangre con coágulos. Muestra mal agitada al momento de cargar el tubo capilar. Centrifugación breve o a bajas revoluciones.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 16 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

IV.

e97 97

DETERMINACION DE INDICES HEMATIMETRICOS

1. Propósito del análisis: El propósito del análisis es la obtención de los índices hematimetricos para la identificación del tipo de anemia. 2. Principio del procedimiento: Es indispensable el estudio de la serie roja en el hemograma; los índices eritrocitarios proporcionan una información sobre el tamaño del hematíe (VCM), la cantidad (CHM) y la concentración (CHCM) de hemoglobina de los hematíes. Estos datos se obtienen rutinariamente en todo hemograma completo. Para calcularlos es necesario e indispensable tener el dato del número de hematíes, el hematocrito y la determinación de la hemoglobina; los índices eritrocitarios permiten clasificar las anemias en normocíticas, microciticas o macrociticas. 3. Sistema de muestra primaria: Sangre total. 4. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo tapa lila con anticoagulante EDTA K3. 5. Pasos del procedimiento: CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento:

CODIGO: POE-FA-HEM015

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE COAGULACION

Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 17 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

Cálculo de los índices hematimétricos mediante fórmulas utilizando valores de hematocrito, número de glóbulos rojos y hemoglobina. 6. Interferencias y reacciones cruzadas: a) Cálculo erróneo de las fórmulas respectivas. b) Obtención equívoca de valores de hemoglobina, hematocrito y recuento de glóbulos rojos. 7. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre: Tomar los valores adecuados para calcular con la fórmula. 7.1. Volumen corpuscular medio (VCM) El VCM es el valor medio del volumen de cada hematíe; se calcula a partir del hematocrito y del número de hematíes mediante la siguiente fórmula: Volumen de cada hematíe (VCM) =

hematocrito Nº glóbulos rojos

X 100

7.2. Hemoglobina corpuscular media (HCM) La HCM expresa el valor medio del contenido de hemoglobina que existe en cada hematíe; se determina mediante la siguiente fórmula: Hemoglobina de cada hematíe (HCM) =

hemoglobina X 100 Nº de hematíes

7.3. Concentración corpuscular media de hemoglobina (CCMH) La CCMH corresponde a la concentración de hemoglobina en los hematíes. CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 18 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

CCMH = Hemoglobina X 100 Hematocrito 8. Intervalos biológicos de referencia: VCM SEXO MASCULINO FEMENINO NIÑOS

VALORES 86 – 96 88 – 98 80 – 95

UNIDADES fL fL fL

HCM SEXO MASCULINO FEMENINO NIÑOS

VALORES 27-34 26 -33 31 – 37

UNIDADES pg pg pg

CHCM SEXO MASCULINO FEMENINO NIÑOS

VALORES 30 -37 29 -36 32 - 36

UNIDADES g/dl g/dl g/dl

9. Interpretación del laboratorio: VCM HCM

permite clasificar en anemia microcitica, macrocítica o normocítica. posibilita sospechar en una anemia hipocrómica.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento:

CODIGO: POE-FA-HEM015

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE COAGULACION

Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 19 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

CHCM se intraeritrocitario.

eleva

si

se

e97 97

incrementa

el

contenido

hemoglobínico



La macrocitosis puede deberse a deficiencia de ácido fólico, de vitamina B12, enfermedades hepáticas, alcoholismo, etc.

 

La microcitosis puede deberse a anemia ferropriva o a talasemias. La hipocromia suele coincidir con la microcitosis observada en deficiencia de hierro o en las talasemias. La hipercromia asociada a microcitosis es secundaria a deficiencia de ácido fólico, de vitamina B12, enfermedades hepáticas, alcoholismo, etc. El VCM refleja el tamaño medio de los hematíes y se incrementa en anemias megaloblásticas. En anemias ferropénicas o talasemias los hematíes son más pequeños y puede haber microcitosis. La HCM es la proporción real que corresponde a cada glóbulo rojo, siendo baja si el valor es inferior a 27 picogramos (micromicrogramos) en anemias hipocrómicas ferropénicas y se observan cifras superiores a 32 pg en anemias megaloblásticas como la perniciosa. También puede determinarse la concentración de hemoglobina en cada eritrocito, en relación con la concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM) con un promedio de 35 g/dL y límites entre 32 a 36 g/dL. En anemias hipocrómicas, el valor es inferior a 32 g/dL y en las hipercrómicas con cifras superiores a 36 g/dL.

   

 

10. Precauciones de seguridad: Se debe seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y de Bioseguridad. 11. Fuentes potenciales de variabilidad. -

Tamaño anómalo de los eritrocitos. Las células grandes pueden elevar los valores de VCM. La presencia de crioaglutininas.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 20 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

V.

e97 97

RECUENTO DE RETICULOCITOS

1. Propósito del análisis: Determinar el número de reticulocitos presentes en sangre periférica, como reflejo del grado de actividad eritropoyética.

2. Principio del procedimiento: Los reticulocitos son hematíes que contiene restos de ARN (ribosomas) , que es un compuesto que precipita en presencia de colorantes vitales, tales como el azul de cresil brillante (ACB) o el nuevo azul de metileno (AMN) y da lugar a imágenes filamentosas fácilmente visibles mediante el microscopio óptico. No todos los reticulocitos presentan un mismo grado de madurez; así los más inmaduros poseen abundante precipitado citoplasmático, mientras que los mas maduros, por el contrario poseen un fino y escaso precipitado, que muchas veces suele pasar inadvertido. En condiciones normales, los reticulocitos permanecen en la médula ósea durante 2 a 3 días y terminan su maduración en 24 horas aproximadamente, una vez ya en sangre periférica. El recuento de reticulocitos debe realizarse a partir de la sangre total con anticoagulante y de ser posible, dentro de las dos primeras horas de la extracción. Debe recordarse que los reticulocitos maduros se hallan in vitro por lo que el recuento será realizado con la mayor prontitud posible, luego de su tinción con los colorantes mencionados.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 21 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

3. Sistema de muestra primaria: Sangre total que contiene EDTA K3. 4. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo de hemólisis y colorante. 5. Equipo y reactivos requeridos:   

Microscopio, Colorante azul brillante de cresil ó Nuevo azul de metileno

6. Pasos del procedimiento: Mediante una pipeta de Pasteur se añade a un tubo de hemólisis 3 gotas de solución colorante y 3 gotas de sangre total bien homogenizada. En caso de valores muy bajos de hematocrito, debe colocarse doble cantidad de sangre total en relación a solución colorante. 1. La suspensión (sangre I colorante) se agita suavemente y se deja a 37°C durante 15 minutos. Transcurrido este tiempo, se toma una pequeña gota de la suspensión y se extiende sobre un portaobjetos. Luego se procede a la contra-tinción, por lo que, una vez seca, la extensión puede ser observada al microscopio. 2. Mediante el objetivo de inmersión se busca en primer lugar, el área más adecuada para realizar el recuento y que corresponde a la zona de extensión, donde los hematíes se hallan bien individualizados y regularmente distribuidos. Debido a que la reproductividad de este método de recuento presenta coeficientes de variación relativamente elevados, es importante que se realice con el mayor número posible de hematíes. En general se considera la cifra de 1.000 hematíes como aceptable para deducir a partir de ella el porcentaje correspondiente a reticulocitos observados. CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento:

CODIGO: POE-FA-HEM015

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE COAGULACION

Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 22 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

7. Procedimientos de control de calidad: Realizar el recuento por duplicado. 8. Interferencias y reacciones cruzadas:  

Eritrocitos con cuerpos de Howell-Jolly. Embarazo, por incremento fisiológico en los valores de reticulocitos.

9. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre: Cálculo de resultados: Reticulocitos (%) = Nº de reticulocitos contados X 100 N° de hematíes observados 10. Intervalos biológicos de referencia:

Recién nacido Adultos y niños

VALORES 2.0 – 6 0.2 - 2

UNIDADES % %

11. Valores de alerta o críticos: Recuento obtenido mayor a 2%. 12. Interpretación del laboratorio: 1.- Disminución de la cifra de reticulocitos. (reticulocitopenia) 

Aplasia medular CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento:

CODIGO: POE-FA-HEM015

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE COAGULACION

Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 23 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

 

e97 97

Anemias carenciales (megaloblástica y ferropénica) Anemias diseritropoyéticas ( adquiridas y congénitas)

2.- Aumento de la cifra de reticulocitos (reticulocitosis)   

Anemias hemolíticas Anemias post-hemorrágicas Anemias carenciales en convalescencia.

13. Precauciones de seguridad: Se debe seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y de Bioseguridad. 14. Fuentes potenciales de variabilidad: o o o o

Empleo de una relación sangre-colorante insuficiente. Realizar el recuento en un extendido grueso. Confundir el precipitado del colorante con los reticulocitos. Embarazo donde se incrementan los valores de reticulocitos. VI.

DETERMINACION DE HIERRO SÉRICO Y TIBC

1. Propósito del análisis: Determinar la concentración sérica de hierro para definir el tipo de anemia o hipersideremia que pueda tener el paciente. 2. Principio del procedimiento: El hierro es un metal fundamental en el metabolismo celular, ya que forma parte de la estructura de gran número de proteínas con importantes funciones biológicas (hemoglobina, mioglobina, citocromos y ciertas enzimas tales como la catalasa y las peroxidasas). CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 24 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

Estas proteínas dejan de sintetizarse o carecen de acción biológica si no es en presencia de niveles adecuados de hierro. El hierro contenido en los alimentos se absorbe a nivel del duodeno, para lo cual es necesario que se halle en forma reducida (Fe ++); este hierro rara vez se encuentra en forma libre siendo necesaria la digestión de los mismos para que deje de formar complejos con otros compuestos. Una vez libre el hierro es reducido por otras substancias también ingeridas con los alimentos, entre las que destaca la vitamina C. El intestino absorbe el 5 a 10 % del total de hierro ingerido, siendo eliminado el resto por las heces. 3. Especificaciones de desempeño: Repitiendo la misma muestra diez días después se obtuvo un coeficiente de variación de 4.2%. Linealidad: Hierro sérico hasta 1000 µg/dl. Capacidad total de combinación de hierro hasta 500 µg/dl. 4. Sistema de muestra primaria: Suero 5. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo Vacutainer, tapa roja sin ningún aditivo. 6. Equipo y reactivos requeridos: Espectrofotómetro Kit para la determinación de hierro sérico. 7. Procedimiento de calibración: Trabajar con un estándar de concentración conocida.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 25 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

8. Pasos del procedimiento: HIERRO: BLANCO Agua destilada

500 µl

Suero del paciente

-

Estándar

-

Buffer

2 ml

   

ESTANDAR 500 µl 2 ml

MUESTRA (D) 500 µl 2 ml

Leer en el espectrofotómetro a 560 nm, llevando a cero con agua destilada. Luego agregar una gota del reactivo PBTS a los 3 tubos. Mezclar. Incubar 10 minutos a temperatura ambiente. Volver a leer en el espectrofotómetro a 560 nm llevando la lectura a cero con agua destilada.

TIBC:     

En un tubo poner 500 microlitos del suero del paciente, luego añadir 500 microlitros de Ia solución saturante. Incubar 5 minutos a 37° C, añadir el polvo hasta enrasar (agitar fuerte y constantemente) durante 5 minutos. Centrifugar por 15 minutos a 4000 rpm. Trabajar con el sobrenadante siguiendo el mismo procedimiento anterior del hierro total. Las lecturas se realizan dos veces, la primera es el blanco y la segunda después de la reacción.

9. Procedimientos de control de calidad: Trabajar con dos sueros control (nivel bajo y alto) procesando en forma paralela a las muestras desconocidas. 10. Interferencias y reacciones cruzadas: CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento:

CODIGO: POE-FA-HEM015

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE COAGULACION

Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 26 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

o Suero con restos de eritrocitos. o Muestras hemolizadas.Material reutilizado. o Micropipetas descalibradas. 11. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre: Corregir las lecturas de S y D restándoles los blancos correspondientes. S –B = S corregida. D – (B + BS)= D corregida Fe (µg/dl) = D corregida X f Donde: f = 100 µg/dl S corregida Porcentaje de saturación de la transferrina, que se calcula de la siguiente manera: Saturación % = Hierro sérico(µg/dL) x100 Transferrina (µg/dL) 12. Intervalos biológicos de referencia: HIERRO SERICO SEXO MASCULINO FEMENINO NIÑOS

VALORES 65 – 170 50 – 170 50 – 120

UNIDADES µg I dl µg I dl µg I dl

TIBC SEXO MASCULINO FEMENINO NIÑOS

VALORES 250 – 450 250 – 450 250 – 400

UNIDADES µg I dl µg I dl µg I dl

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 27 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

Saturación de transferrina = 20 – 55%.

13. Interpretación del laboratorio: Ferropenia

Tipo

Causas

Mecanismos

-Embarazo -Crecimiento

-Hiperconsumo -Hiperconsumo

-Menstruación

-Pérdida

Fisiológica

Patológica -Hernia de hiato várices esofágicas -Ingesta de aspirinas -Neoplasia digestiva Hemólisis intravascular crónica.

y- Pérdida crónica por micro sangrado digestivo - Pérdida crónica por micro sangrado digestivo - Pérdida crónica por la Orina (hemosiderinuria)

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 28 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

Cuando el resultado es menor a lo normal se denomina ferropenia y puede deberse a embarazo, hemorragia, anemia ferropénica, deficiencia de hierro o directamente a que exista una mala absorción en la dieta. Cuando el resultado es mayor a lo normal puede deberse a: poliglobulia, desórdenes en la síntesis de hemoglobina, fenómenos hemolíticos o en casos de terapias transfusionales.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 29 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

14. Precaución de seguridad: Se debe seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y de Bioseguridad. 15. Fuentes potenciales de variabilidad: Las transfusiones recientes de sangre pueden alterar los resultados de la prueba. La ingesta reciente de alimentos con contenido elevado de hierro. Las enfermedades hemolíticas pueden asociarse con niveles de hierro artificialmente elevados. -

Errores de extracción

-

Empleo de anticoagulante no recomendado.

-

Coagulación parcial de la sangre.

-

Empleo de pipetas volumétricas mal calibradas

-

No eliminación del exceso de sangre adherida a las paredes externas del micro-capilar antes de introducir el reactivo.

-

Dilución incompleta de la sangre en el reactivo.

-

Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o caducado.

-

Lectura antes de tiempo necesario para la completa transformación de la hemoglobina en cianometa-Hb.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 30 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

VII.

e97 97

RECUENTO DE LEUCOCITOS ó GLOBULOS BLANCOS

1. Propósito del análisis: Los leucocitos son una de las defensas celulares del organismo, frente a la invasión de agentes infecciosos y tóxicos. Existen dos grupos de glóbulos blancos: la serie granulocitica (polimorfonucleares) y la serie agranulocitica (mononucleares). Por medio de los leucocitos podemos diagnosticar una serie de enfermedades; además el porcentaje leucocitario nos ofrece información para muchos diagnósticos. 2. Principio del procedimiento: El recuento de los leucocitos puede realizarse mediante métodos ópticos con cámara cuenta glóbulos y a través de métodos electrónicos. Se realiza en tubos normales, en los cuales se coloca el reactivo para glóbulos blancos, y luego la muestra; esto para obtener mayor precisión y reducir el error. 3. Sistema de muestra primaria: La muestra debe ser sangre total 4. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo tapa lila con anticoagulante EDTA K3. 5. Equipo y reactivos requeridos: Microscopio, micropipeta, reactivo de Tuerk. 5. -

Pasos del procedimiento: Colocar en un tubo pequeño 0.5 ml del líquido de Tuerk, luego añadir 20 µl de la muestra (sangre total bien homogenizada). CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 31 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

-

Luego proceder al cargado a la cámara de Neubauer.

-

Realizar el conteo de los cuatro cuadrantes externos de la cámara que es para glóbulos blancos.

-

Se cuentan los leucocitos en cada uno de los cuadrados secundarios de los cuatro mas grandes de las esquinas, empezando en el extremo izquierdo de la fila superior y siguiendo hacia la derecha, luego se pasa a la segunda fila hacia la izquierda por sus cuatro cuadrados secundarios, luego a la tercera pasando hacia la derecha por sus cuadrados, y finalmente se pasa a la cuarta que se recorre desde la derecha hacia la izquierda hasta contar todos los leucocitos en los 16 cuadrados secundarios. Solo se incluyen las células que toquen las líneas divisorias de la izquierda y arriba; las que toquen las líneas de la derecha y abajo se omiten.

-

La suma de los leucocitos encontrados en los 16 cuadrados secundarios da el número de ellos por un milímetro cuadrado. Se suman los números encontrados en los cuatro cuadrados de las esquinas de cada cámara. Número de leucocitos por mm3 =recuento de leucocitos X 65 (factor de dilución)

7. Procedimientos de control de calidad: Realizar un doble recuento para verificar la repetibilidad. 8. Interferencias y reacciones cruzadas:      

Muestras con hilos de fibrina. Diluciones erradas de la sangreó del anticoagulante. Imprecisión en el pipeteo del reactivo de Tuerk. Imprecisión en el pipeteo de la muestra sanguínea. Diluciones inexactas. Falta de agitación de la muestra.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento:

CODIGO: POE-FA-HEM015

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE COAGULACION

Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 32 de 97

Norma NB ISO 15189:2004



e97 97

Micropipeta descalibrada.

9. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre: Recuento con objetivo de 10x , de los cuatro cuadrados laterales de la cámara de Neubauer. El número contado de leucocitos multiplicar por 65 (factor de dilución).

10. Intervalos biológicos de referencia: LEUCOCITOS SEXO MASCULINO FEMENINO NIÑOS

VALORES 5 – 10 5 – 10 6.2 – 12

UNIDADES *103/ mm3 *103/ mm3 *103/ mm3

11. Valores de alerta o críticos: Leucocitos contados con un valor menor a 2.500 o mayor a 30.000/mm 3. 12. Interpretación del laboratorio: Leucocitosis: El número de glóbulos blancos excede de 10.000 por mm3. Puede ser de carácter fisiológico, como por ejemplo, después de una intensa actividad física o mental ó también, en los primeros meses de vida o durante el embarazo. Leucopenia: Es el descenso de la cifra de leucocitos por debajo de 5.000 por mm 3. En CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 33 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

general la reducción se realiza a expensas de los granulocitos neutrófilos segmentados, de lo cual resulta, una linfocitosis relativa. Producen leucopenia el paludismo, ciertas anemias graves (aplasia, anemia perniciosa), el sarampión, influenza, tuberculosis ganglionar, los estados graves de desnutrición, las intoxicaciones crónicas (éter, arsénico mercurio, saturnismo), la fiebre ondulante, etc. 13. Precauciones de seguridad: Se deben seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y de Bioseguridad. 14. Fuentes potenciales de variabilidad: -

El embarazo y el parto. La actividad física y el estrés. La ingesta de fármacos. VIII.

DETERMINACION DE LA FORMULA LEUCOCITARIA

1. Propósito del análisis La práctica del frotis sanguíneo es de gran importancia en Hematología, ya que el diagnóstico de muchas enfermedades hematológicas puede realizarse con solo observar las características morfológicas de las células sanguíneas. Debido a ello la técnica de realización del frotis debe ser impecable procurando que este no sea muy fino ni excesivamente grueso. Con ellos se conseguirá una distribución adecuada de las células en diferentes áreas del frotis cuyo conocimiento es fundamental tanto para la observación de la morfología eritrocitaria como para la realización de la fórmula leucocitaria ó recuento diferencial de leucocitos. La fórmula leucocitaria es el recuento diferencial de cada uno de los leucocitos presentes en la sangre periférica. Los leucocitos se clasifican en dos grandes grupos: CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 34 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

POLIMORFONUCLEARES:   

Neutrófilos Eosinófilos Basófilos

MONONUCLEARES:  

Linfocitos Monocitos

La formula leucocitaria junto con la determinación de los restantes parámetros hematológicos básicos, continúan siendo un procedimiento diagnóstico de gran valor. Esto es así porque la formula leucocitaria suministra a la clínica la información sobre el estado de las células de la sangre, así como la eventual presencia de células que normalmente no deben circular en sangre, tales como: blastos, mielocitos, células plasmáticas, linfocitos reactivos, eritroblastos y otros). 2. Principio del procedimiento: Existen tres procedimientos para realizar el frotis sanguíneo: a) método de los dos portaobjetos b) método de los dos cubreobjetos c) método automático mediante extensor de frotis por centrifugación (Spinner). En cualquiera de estos métodos deberá tenerse siempre en cuenta las siguientes precauciones: 1. Todo material a emplearse (portaobjetos y cubreobjetos) debe estar escrupulosamente limpio y desengrasado.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 35 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

2. Si se parte de punción digital, no deberá emplearse nunca la primera gota. 3. Si se parte de punción venosa, el frotis deberá hacerse con la máxima rapidez posible con sangre no tratada con anticoagulante. La imposibilidad técnica en muchos casos de realizar los frotis en la misma cabecera del enfermo, debido al empleo cada vez más extendido de sistemas automáticos para la realización del mismo, obliga a utilizar sangre tratada con anticoagulante. En este caso el anticoagulante de elección es el EDTA-K 3, debido a su escasa acción sobe la morfología de las células sanguíneas. El frotis siempre debe ser realizado dentro de las dos primeras horas de practicada la extracción, ya que si no es así el efecto del anticoagulante sobre los leucocitos produce hinchamiento nuclear con falso aumento de número de neutrófilos no segmentados (bandas) vacuolización citoplasmatica y aparición de diversos artefactos. 3. Sistema de muestra primaria:    

sangre venosa sangre de pulpejo del dedo sangre con anticoagulante EDTA-K3 sangre sin anticoagulante.

4. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo capilar con o sin heparina. Tubo Vacutainer con tapa lila que contiene anticoagulante EDTA K3. 5. Equipo y reactivos requeridos:   

Microscopio Colorante Wright, Giemsa , May Grunwald, Camco Quick. Aceite de inmersión

6. Pasos del procedimiento:

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 36 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

I. Consiste en la extensión de una gota de sangre sobre un portaobjetos, empleando para ello el canto esmerilado de otro portaobjetos, formando un ángulo de 45° y desplazarlo suavemente hacia atrás hasta que alcance la gota de sangre. II. Esperar a que por capilaridad toda la sangre se distribuya uniformemente. Es recomendable que la sangre no llegue a los lados del portaobjetos sobre el que se realizará el extendido. III. Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjetos inclinado sobre el otro en sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede bien extendida sobre la superficie del primer portaobjetos. El grosor del frotis sanguíneo puede variar según sea el ángulo que formen entre si ambos porta-objetos. Así, si es superior a 45° la extensión obtenida será gruesa y corta; por lo contrario, si es inferior a 45° será larga y fina. Secado del frotis a temperatura ambiente y en posición horizontal. IV.

Realizar la tinción elegida, con el reactivo correspondiente. El frotis sanguíneo, una vez seco, se somete a un proceso de fijación y posteriormente a una tinción mediante un colorante adecuado. En el laboratorio se utiliza Camco Quick Satín II. 1.- Colorante Camco Quick Satín II: introducir la placa tres minutos en la cubeta del colorante, otros tres minutos en la cubeta con agua destilada y luego lavar en agua corriente. Metanol CAS Colorante Wright-Giemsa Alcohol soluble Buffers Agente solubilizante Agente estabilizante.

89% >>>). El valor WOC muestra linealidad hasta 250 K/µl. Si se selecciona el valor WOC para el informe y este excede de la linealidad, el valor leucocitario se notificará fuera de rango (>>>). PRECISION: Las lecturas de fondo deben estar: WIC < 0.30 WOC < 0.30 RBC < 0.030 HGB < 0.20 PLT < 10.0 4. Sistema de muestra primaria: Sangre total. 5. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo lila con EDTA K3.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 64 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

6. Equipo y reactivos requeridos: Cell-Dyn, diluyente, detergente, hemolizante, reactivo envolvente (seheat). 6.1. DILUYENTE: - Actúa como diluyente para los leucocitos (únicamente para el recuento por impedancia), los eritrocitos, las plaquetas y la hemoglobina. - Mantiene estable el volumen celular diluído de cada eritrocito y plaqueta durante el recuento y la fase de clasificación volumétrica del ciclo de medición. - Proporciona una lectura de fondo admisible. 6.2. DETERGENTE: - Proporciona una solución óptimamente clara y necesaria para obtener el valor cero de referencia durante el ciclo de medición de la hemoglobina. - Facilita la formación del menisco apropiado en los tubos volumétricos WIC y RBC/PLT y lo mantiene durante cada ciclo de procesado. - Lava la cámara de recuento WIC, el tubo volumétrico WIC, la cámara de recuento RBC/PLT, el tubo volumétrico RBC/PLT y la celda de flujo de HGB, con una mínima de burbujas. 6.3. REACTIVO HEMOLIZANTE WIC/HGB: - Hemoliza rápidamente los eritrocitos y minimiza el estroma resultante. - Desprende el citoplasma de los glóbulos blancos, dejando intacta la membrana nuclear, para poder contar los núcleos leucocitarios. - Transforma la hemoglobina en un complejo modificado de cianuro de hemoglobina, que puede medirse a 540 nm. 6.4. REACTIVO ENVOLVENTE (SEHEAT): - Hemoliza los eritrocitos por un mecanismo osmótico. - Mantiene las propiedades de dispersión de la luz de los leucocitos durante el periodo de medición. - Actúa como líquido envolvente en el proceso de enfoque hidrodinámico. - Proporciona una acción humectante adecuada que impide la acumulación de burbujas de aire en el sistema de flujo WOC. 7. Procedimiento de calibración:

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 65 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

Utilizar calibrador de sangre total para sistemas hematológicos CELL-DYN 3500. - El frasco calibrador atemperar 15 minutos. - Premezclar con movimientos de rotación en la palma de la mano, luego invirtiendo el frasco suavemente, sin agitar el mismo. - Invierta el frasco suavemente 5 veces antes de procesar la muestra. - Aspire una muestra del frasco. - Después de procesar en el CELL-DYN en modo abierto, tapar bien el frasco. - Guardar el frasco refrigerado cuando todos los procedimientos de calibración estén completados. 8. Pasos del procedimiento: -

Iniciar. RUN. Introducir número de código de barra del paciente correspondiente y los datos personales. Introducir la aguja del autoanalizador al tubo. Presionar el sensor y esperar que aspire la cantidad de muestra necesaria para su procesado. Retirar el tubo. Imprimir el resultado.

8.1. ANALISIS DE LOS LEUCOCITOS: Para establecer el valor final de los leucocitos, se incluyen los métodos WOC/WIC porque permiten que el analizador proporcione un recuento mas exacto, el algoritmo de Análisis de los datos selecciona el resultado mas apropiado para el informe. PROCESO DE MEDICIÓN WIC : La dilución WIC/HGB 1:301 es transferida a la cámara de mezcla del transductor del canal WIC en donde se mezcla por burbujeo. Mediante vacío se extrae un volumen de 200 µl de la dilución a través de la abertura de 100 µm. El recuento leucocitario se mide por impedancia eléctrica que se basa en la determinación de los cambios de la corriente eléctrica producidas por partículas, suspendidas en un líquido conductor, que atraviesan una abertura de dimensiones conocidas . Para CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 66 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

ello se sumerge un electrodo dentro del líquido a cada lado de la abertura, con objeto de crear una diferencia de potencial a través de ella. A medida que cada partícula atraviesa la abertura, se produce un cambio transitorio de la resistencia entre los electrodos; este cambio genera un impulso eléctrico mensurable; el número de impulsos generados indica el número de partículas que atraviesan la abertura. La amplitud de cada impulso es proporcional al volumen de la partícula que lo produce. Así los impulsos son clasificados en los distintos canales medidores del tamaño, según su amplitud. Proceso de medición WOC. Se basa en la detección con el sistema óptico y análisis de la formula leucocitaria. Se prepara una dilución 1:51 con el reactivo envolvente. La jeringa volumétrica WOC inyecta un volumen de esta dilución en la corriente del reactivo envolvente; luego se produce el enfoque hidrodinámico de la corriente de la muestra, con objeto de alienar las muestras en una sola hilera, a su paso por la celda de flujo WOC, que es una cámara de cuarzo óptimamente clara; la fuente luminosa es un láser de helio-neón con polarización vertical. La información de las mediciones sirve para separar los leucocitos en cinco subpoblaciones distintas: neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos. En el clitómetro de flujo, la suspensión celular es bombeada desde el recipiente de la muestra, hasta la cámara de flujo que contiene una pequeña abertura en su extremo. Seguidamente se inyecta la suspensión sobre una corriente de líquido en movimiento rápido y exento de células; como los dos líquidos viajan a una velocidad diferente, no se mezclan entre sí y existe un flujo laminar que obliga a las células se dispongan en una sola hilera. A medida que las células penetran en el área de visualización específica los rayos láser hacen que las células se dispersen en ángulos diferentes, que suministran información sobre el tamaño de las células, la estructura interna, la granularidad y la morfología de superficie. 8.2. ANALISIS DE ERITROCITOS Y PLAQUETAS. Para determinar los datos eritrocitarios y plaquetarios se utiliza el canal WIC; la dilución 1:10812 de la muestra se prepara con el diluyente. Las células son contadas y su tamaño es medido a medida que atraviesan la abertura de 60 x 72 µm del transductor del canal RBC/PLT de von Behrens. El volumen de muestra para ser analizada es de 100 µl.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 67 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

8.3. ANALISIS DE LA HEMOGLOBINA. El canal HGB se utiliza para la determinación calorimétrica de la hemoglobina. La dilución 1:301 de la muestra se prepara con el diluyente y el reactivo hemolizante WIC/HGB en la cámara de mezcla del transductor WIC. La fuente luminosa es un diodo emisor de luz filtrada con una longitud de onda de 540 nm; un detector fotométrico mide la luz transmitida. 8.4. LAVADO DEL ANALIZADOR: 1. La sonda de aspiración de muestras abiertas se lava interna y externamente con el diluyente. 2. La aguja utilizada en el modo cerrado de muestreo automático y en el modo manual se lava interna y externamente con el diluyente. 3. La cámara de mezcla WIC y la cámara de mezcla de eritrocitos y plaquetas se lavan con el diluyente. 4. La cámara de mezcla de WOC se lava con el reactivo envolvente. 5. El tubo volumétrico WIC y el tubo volumétrico para muestras de eritrocitos y plaquetas se lavan con el detergente. 6. La celda de flujo HGB se lava con el detergente, 9. Procedimientos de control de calidad: 9.1. CONTROLES COMERCIALES: Introducir los valores predeterminados de los tres niveles de controles de calidad comerciales al equipo, ingresando a la ventana QC e introducir donde corresponda los valores del control : bajo, normal, y alto. Ingresar a “control de calidad” del equipo y procesar como si fuera una muestra cualquiera. 9.2. CONTROL INTERNO: Correr una muestra caracterizada por duplicado. 10. Interferencias y reacciones cruzadas: -

Microcoágulos y coágulos presentes en el tubo. Anticoagulante que no sea EDTA K3. Excedente de anticoagulante. CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento:

CODIGO: POE-FA-HEM015

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE COAGULACION

Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 68 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

-

e97 97

Sangre con burbujas.

11. Principios del procedimiento: cálculos e incertidumbre. El algoritmo WOC/WIC evalúa los recuentos WIC y WOC para determinar si WIC es igual o distinto de WOC; todas las demás decisiones se basan en esta determinación inicial. -

Cuando WIC es igual a WOC, las decisiones posteriores siguen un árbol de decisión.

-

Cuando WIC y WOC difieren, las decisiones siguen un árbol de decisión diferente. Este algoritmo mide la diferencia y selecciona el valor más apropiado de los leucocitos.

-

Cuando WOC y WIC son iguales se selecciona WOC como valor del recuento leucocitario

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 69 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

12. Intervalos biológicos de referencia: HOMBRES

MUJERES

NIÑOS

Eritrocitos

4.7 - 6.4 *1003/L:1

4.3 -5.7 *1003/L:1

3.8 -5.5 *1003/L:1

Hemoglobina

14.0 -19.4 g/ dL

12.5-17.0 g/ dL

11.0-16.0 g/ dL

Hematocrito

43 – 58%

40 – 53%

31 - 43%

VCM

86 – 96 f L

88 – 98 fL

80 – 95 fL

HCM

27 - 34 pg

26 - 33 pg

31 - 37 pg

CHCM

30 - 37 g/dL

29 - 36 g/dL

32 – 36 g/dL

Leucocitos

5 – 10*103/mm3

5 -10*103/mm3

6.2 – 12*103/mm3

Neutrófilos

40 – 70%

40 – 70%

20 – 40%

Eosinófilos

0 – 4%

0 – 4%

0 – 5%

Basófilos

0 – 2%

0 – 2%

0 – 2%

Cayados

0 – 5%

0 - 5%

0 - 5%

Linfocitos

20 – 40%

20 – 40%

45 – 70%

Monocitos

2 – 10%

2 – 10%

2 – 10%

Plaquetas

150 - 400 * 103/mm3 150 - 400 * 103/mm3 100 - 400 * 103/mm3

13. Valores de alerta o críticos: Leucocitos, valores menores de 1.000/µL ó mayores a 50.000/µL. Hematocrito, valores menores de 35% ó mayores a 60%. Hemoglobina, valores menores de 11 g/dL ó mayores a 20 g/dL. CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 70 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

XIV. HEMOSTASIA Y COAGULACION "ACL 9000" GENERALIDADES El ACL 9000 es un analizador que es controlado por microprocesadores los cuales realizan técnicas coagulométricas, colorimétricas e inmunológicas, coagulación y fibrinólisis. Este equipo, ACL 9000 se encuentra totalmente robotizado ya que no es necesaria manipulación alguna. EQUIPO ACL 9000 Presenta una pantalla táctil, con un software, de fácil aprendizaje. Este equipo procesa las muestras en el menor tiempo posible para que no se desestabilice por la temperatura ambiente.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 71 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

IDENTIFICACION DE PACIENTES: El número de identificación es de hasta 15 dígitos y podrá ser cargado en su memoria; esto incluye: - Nombre del paciente. - Número de muestra. - Fecha de nacimiento. - Médico. - Departamento. AREA DE REACTIVOS: Existen hasta 18 viales originales pudiendo ser ubicados en dos áreas. En la zona anterior incluye ocho posiciones y pueden ser viales de distintos tamaños. En el anillo interno dispone una segunda área de reactivos donde se ubican hasta diez viales de reactivos.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 72 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

AREA DE MUESTRAS: Esta área tiene la forma de un plato donde se ponen las muestras, se pueden colocar hasta 40 muestras; el pipeteo de la muestra se realiza desde el tubo primario, con extracción de diferentes volúmenes evitándose así el decantado del plasma. El vial puede trabajar con 0,5 ml o 2,0 ml de plasma. LECTOR INTERNO DE CODIGOS DE BARRA: Este tiene la capacidad de leer automáticamente el código de barras de las etiquetas, para poder identificar con mayor facilidad al paciente NUMERO DE PRUEBAS: La capacidad que tiene el ACL 9000 es de procesar 300 pruebas, de las cuales pueden tener activas hasta 100 pruebas. VELOCIDAD ANALlTICA: TTPA: PT - FIB:

110/ hora 175 I hora.

TEST COAGULOMETRICOS: -

Tiempo de protrombina Tiempo de tromboplastina parcial activada Fibrinógeno, como derivado del TP Tiempo de trombina Proteínas: S y C LAC Creen y LAC Confirm.

TESTS CROMOGÉNICOS - Antitrombina - Inhibidor de la plasmina - Plasminógeno - Heparina TEST INMUNOLOGICOS:

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 73 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

-

e97 97

Dímero D Factor de von Willebrand

XV.

DETERMINACION DE PROTEINAS “C” Y “S"

1. Propósito del análisis: Las proteínas C y S están involucradas en la regulación de la coagulación sanguínea y su deficiencia puede llevar a la formación de coágulos de sangre en venas y arterias. Un inhibidor importante de la coagulación es la llamada proteína C (vitamina K dependiente), que inactiva los factores V y VIII activados y a su vez es inactivada por un inhibidor normalmente presente en el plasma. Los últimos experimentos sugieren que el déficit o pérdida de este inhibidor pudiera ser responsable de los déficits combinados de factores V - VIII , ya que en dichos casos la proteína C estaría permanentemente activada, impidiendo el funcionamiento normal de los factores V y VIII. 1.1. La proteína C Es una glucoproteína sintetizada en el hígado, con efecto de proteasa, dependiente de la vitamina K, que se activa por un cofactor proteíco: la trombomodulina, dependiendo del endotelio vascular y que inhibe los factores V y VIII de la coagulación, actuando como anticoagulante fisiológico en presencia de iones Ca y otro cofactor. Si hay deficiencia hereditaria de proteína C se genera un estado de hipercoagulabilidad con riesgo elevado para trombosis venosa. Su valor se informa como porcentaje de la cantidad esperada en el plasma normal y por definición, el valor promedio es de 100%, con rango entre 70% y 140%. Al nacimiento, los niveles de proteína C son solo de 35% de los correspondientes a adultos normales.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 74 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

1.2. La proteína S Es un cofactor requerido para favorecer la actividad anticoagulante de la proteína C; su deficiencia hereditaria provoca una condición de hipercoagulabilidad con riesgo elevado de trombosis venosa. Su deficiencia puede ser cuantitativa (tipo I) ó cualitativa (tipo II). Existen déficits congénitos y otros adquiridos de este anticoagulante; entre los últimos, los debidos a hepatopatías, coagulación intravascular diseminada, neoplasias. "distrés" respiratorio del adulto y síndrome nefrótico. Se consideran normales los valores entre 76 y 140 en relación aI 100 % de sujetos sanos (por método antigénico). Ese rango es menor en las mujeres que en varones. Al nacimiento, los niveles de proteína S (como antígeno total) son solo del 36% en relación a los adultos. 2. Principio del procedimiento: La proteína C es una proteína dependiente de la vitamina K que está presente en el plasma como zimógeno; la trombina activa la proteína C en presencia de trombomodulina e in Vitro la proteína C puede activarse por la fracción proteíca derivada del veneno de la serpiente Agkistrodon contortrixc. 3. Especificaciones de desempeño: Test cromogénico automatizado para la determinación cuantitativa de la proteína C en plasma humano citratado. 4. Sistema de muestra primaria: Plasma citratado. 5. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo de hemólisis, teniendo como anticoagulante al citrato trisódico. 6. Equipo y reactivos requeridos:

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 75 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

Automatizado ACL 9000, diluyente, activador de proteína C, substrato cromogénico. 7. Procedimiento de calibración: Seguir las instrucciones de la técnica de calibración de acuerdo al manual del operador de los instrumentos, que realizará diluciones del plasma calibrador que ya están determinadas en la memoria del fibrómetro. Al finalizar la calibración el ACL 9000 guardará la curva que servirá para obtener resultados del control de calidad y de los pacientes. Utilizar plasma calibrador que sirve para calibrar los sistemas de coagulación IL para el cálculo del tiempo de protrombina (TP), Fibrinógeno, Factores V y VIII, Factor de von Willebrand, Antitrombina, Plasminógeno, Inhibidor de la plasmina, Proteína C, Proteína S y como plasma de referencia, para el TPTA y TT. 8. Pasos del procedimiento: -

En el ACL 9000 ingresar a “prueba simple”. Introducir los datos del paciente. Realizar lista de trabajo con la prueba correspondiente. Cargar las muestras en el plato y en el orden introducido. Revisar los reactivos que se encuentren en el lugar que corresponda. Digitar: “empezar”. Copiar resultados o imprimir los mismos.

9. Procedimientos de control de calidad: Se recomienda el uso de los controles de plasma, normales y anormales: alto y bajo de IL para realizar un programa completo de control de calidad. -

Colocar los controles en el plato de muestras CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 76 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

-

e97 97

Análisis Sesión de “test simple” Pulsar la casilla: Nº lista de trabajo Colocar el cursor en la posición del plato donde está el control Pulsar: Añadir QC Seleccionar la ID del control y aceptar Pulsar: Grabar lista de trabajo Teclear el Nº de la lista de trabajo y aceptar Pulsar: empezar.

10. Interferencias y reacciones cruzadas: -

Concentraciones de heparina hasta de 2 U/ml , triglicéridos hasta 500 mg/dL y bilirrubinas hasta 5 mg/dL. Un dispositivo intrauterino puede causar resultados falsos positivos de la prueba por el estrés tisular.

11. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre: El ACL 9000 utiliza la curva de calibración para interpolar el valor y obtener el resultado de la prueba. 12. Intervalos biológicos de referencia: Proteína C: De 69.1 a 134% Proteína S: De 60 a 150% 13. Valores de alerta o críticos: Valores obtenidos menores a 68 y mayores a 135 % 14. Interpretación del laboratorio: Existen déficits congénitos y otros adquiridos de este anticoagulante; entre los últimos se incluyen aquellos debido a hepatopatías, coagulación intravascular diseminada, neoplasias. “estrés" respiratorio del adulto y síndrome nefrótico.

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 77 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

15. Precauciones de seguridad: Evitar el contacto con los ojos y la piel, no tirar los residuos por el desagüe, porque el diluyente ázida sódica puede reaccionar con tuberías metálicas. 16. Fuentes potenciales de variabilidad: -

Muestras que han sido sometidas por activación de contacto pueden producir resultados falsos de nivel alto. La atropina inhibe la proteína C activada. Algunos anticoagulantes como la warfarina, disminuyen los niveles de Proteína C y proteína S, razón por la cual las mediciones de estas proteínas pueden ser difíciles de interpretar en pacientes que estén tomando dichos anticoagulantes orales.

XVI.

DETERMINACION DEL DIMERO D

1. Propósito del análisis: Cuantificación de dímero D mediante inmunoensayo en el cual se utiliza plasma humano citratado. Cuando la plasmina queda libre de inhibidores, favorece la fibrina entrelazada generando una gran variedad de derivados solubles cuyos pesos moleculares dependen de la extensión de la digestión. Estos productos solubles de la degradación contienen un neoantígeno (dominio Dímero D) que no está presente en la molécula original de fibrinógeno, y los productos de degradación de la fibrina. La determinación del dímero D es una herramienta cada vez más utilizada para el diagnóstico de trombosis y para la monitorización de terapia trombolítica. 2. Principio del procedimiento: El reactivo Látex Dímero D es una suspensión de partículas látex de tamaño uniforme, de poliesteriano y a los cuales se une un anticuerpo monoclonal CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 78 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

altamente específico contra el dominio dímero D contenido en los derivados solubles de la fibrina. Cuando se mezcla un plasma que contiene dímero D con el reactivo látex y el tampón de reacción, las partículas tienden a aglutinar. 3. Sistema de muestra primaria: Plasma citratado. 4. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo de hemólisis, anticoagulante citrato trisódico. 5. Equipo y reactivos requeridos: ACL 9000, Látex reagent, Buffer, Calibrador DD, diluyente de factor. 6. Procedimiento de calibración: Seguir las instrucciones de la técnica de calibración de acuerdo al manual del operador de los instrumentos, que realizará diluciones del plasma calibrador que ya están determinadas en la memoria del fibrómetro. Al finalizar la calibración el ACL 9000 guardará la curva, que servirá para comparar los resultados de las calibraciones que se realicen por cada corrida de control de calidad y de los pacientes. Por lo tanto este tipo de calibración es muy delicado. 7. Pasos del procedimiento: -

En el ACL 9000 ingresar a test simple. Introducir los datos del paciente. Realizar lista de trabajo con la prueba correspondiente. Cargar las muestras en el plato y en el orden introducido. Revisar los reactivos que se encuentren donde correspondan. Digitar “empezar”. CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 79 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

-

e97 97

Copiar resultados.

8. Procedimientos de control de calidad: Se recomienda el uso de los controles de plasma normales y anormales alto y bajo de IL para realizar un programa completo de control de calidad. -

Colocar los controles en el plato de muestras Análisis Sesión test simple Pulsar la casilla: Número lista de trabajo Colocar el cursor en la posición del plato donde está el control Pulsar: Añadir QC Seleccionar la ID del control y aceptar Pulsar: Grabar lista de trabajo Teclear el número de la lista de trabajo y aceptar Pulsar: empezar.

9. Interferencias y reacciones cruzadas: -

Consumo de ciertos fármacos. Niveles elevados de factor reumatoideo pueden causar resultados falsos positivos.

10. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre: El ACL 9000 utiliza la curva de calibración para comparar el valor aceptar o rechazar el resultado obtenido en la corrida. 11. Intervalos biológicos de referencia: Negativo (no hay fragmentos dímero D presentes). 12. Intervalo reportable de los resultados del paciente:

CONTROL DE DOCUMENTOS

Nombre Fecha

Elaborado por:

Revisado por:

Autorizado por:

Biotec. Teresa Mendoza

Dr. Eduardo Aranda T.

Dra. Elma Rossell Sìmon

15/02/2007

15/03/2007

15/03/2007

Nombre del documento: PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE

CODIGO: POE-FA-HEM015

COAGULACION Revisión: 1

REQUISITO TECNICO

Página 80 de 97

Norma NB ISO 15189:2004

e97 97

250 ng/ml. (